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芹菜素对U937细胞增殖凋亡及SALL4基因和Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的 探讨芹菜素对人U937细胞株增殖和凋亡,以及对该细胞株SALL4基因和Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因c-Myc和CCND1表达的影响.方法 以不同浓度芹菜素处理对数生长期的U937细胞,倒置显微镜观察细胞形态;CCK-8法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;实时荧光定量PCR检测SALL4、c-Myc、和CC-ND1 mRNA表达水平;Western blot检测SALL4、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平.结果 与对照组相比,芹菜素处理组细胞碎片增多;细胞增殖受抑制,呈时间和剂量依赖性(P＜0.05);G2/M期细胞比例增加(P＜0.05);凋亡率增加(P＜0.05).芹菜素处理36 h后,U937细胞的SALL4、c-Myc、和CCND1 mRNA表达下调,SALL4和Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 芹菜素对U937细胞有抑制增殖诱导凋亡的作用,其机制可能与下调SALL4和Bcl-2,活化Caspase-3,阻断Wnt/β-catenin信号通路有关.
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三叶因子3在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞株黏附中的作用机制
目的:探讨沉默三叶因子3(TFF3)表达对甲状腺乳头状癌(PTC) TPC-1细胞黏附作用的影响.方法:稳定敲低TFF3表达的TPC-1细胞株(shRNA-TFF3组)、转染空载体的TPC-1细胞株(shRNAC组)、TPC-1细胞(TPC-1组)分别进行同质黏附实验、异质黏附实验;qPCR检测TFF3 mRNA及WNT/β-catenin信号通路关键分子β-catenin mRNA水平,免疫印迹和免疫细胞化学检测β-catenin、E-cadherin、ALCAM、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平.结果:细胞同质黏附实验显示shRNA-TFF3组黏附细胞数显著高于shRNAC组和TPC-1组.细胞异质实验显示shRNA-TFF3组黏附细胞数显著低于shRNAC组和TPC-1组,shRNAC组和TPC-1组同质和异质黏附数差异无统计学意义.qPCR结果显示shRNA-TFF3组TFF3 mRNA、β-cateninmRNA水平显著低于shRNAC组和TPC-1组,shRNAC组和TPC-1组TFF3 mRNA、β-catenin mRNA水平差异无统计学意义.免疫细胞化学与免疫印迹结果显示沉默TFF3后ALCAM、MMP-9、MMP-2、β-catenin蛋白表达水平显著降低;E-cadherin蛋白表达水平显著升高,shRNAC组和TPC-1组差异无统计学意义.结论:敲低TFF3可能通过WNT/β-catenin信号通路影响PTC细胞TPC-1的黏附能力.
关键词： 甲状腺乳头状癌 黏附 三叶因子3 Wnt/β-catenin信号通路 -
外源性神经生长因子对APP/PS1转基因小鼠Wnt/β-catenin信号通路的调节
目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)对APP/PS1转基因小鼠Wnt/β-catenin信号通路的调节.方法:鼻腔给予小鼠NGF治疗14周,应用免疫组织化学检测小鼠脑内β淀粉样蛋白(Aβ)老年斑的分布,应用免疫印迹检测小鼠脑内糖原合酶激酶3β(GSK3β)、p-GSK3β、β-连环蛋白(β-catenin)和p-β-catenin的表达.结果:Aβ免疫组织化学显色结果显示,与对照组小鼠大脑内的Aβ老年斑相比较,NGF治疗组转基因小鼠大脑内的Aβ老年斑数量减少了30.22％,沉积减少了35.85％,差异有统计学意义.免疫印迹结果显示,外源性NGF减少APP/PS1转基因小鼠脑内GSK3β的表达,增加β-catenin的表达.结论:外源性NGF可能通过抑制GSK3β的活性和增加β-catenin的活性,激活Wnt/β-catenin信号通路,对神经元起保护作用.
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Wnt/β-catenin通路在小鼠肾发育中的作用及差异表达基因
目的:探讨Wnt/β-catenin通路在小鼠肾发育中的作用及差异表达基因.方法:采用基因芯片技术筛选小鼠肾发育过程中的差异表达基因；应用实时定量RT-PCR和免疫印迹观察不同胎龄小鼠肾组织中的β-catenin mRNA和活化的β-catenin蛋白表达水平进行半定量分析.应用免疫组织化学检测不同胚龄小鼠肾组织中活化的β-catenin蛋白表达的定位与定量.结果:β-cateninmRNA的表达在不同胚龄小鼠肾组织中的表达是不同的.活化的β-catenin蛋白的表达量在El4.5 d达到高峰,后逐渐下降.在出生后ld出现小高峰后,逐渐下降并维持在低水平.免疫荧光显示,在小鼠肾发生发育过程中,活化的β-catenin主要表达于输尿管芽及其分支和肾小管,肾小球中表达量较少.结论:Wnt/β-catenin通路的时间和空间表达在肾发育中发挥重要的作用.
关键词： Wnt/β-catenin信号通路 肾 发育 -
姜黄素影响鼻咽癌细胞5-8F增殖凋亡能力及机制研究
探讨姜黄素对鼻咽癌细胞5 8F增殖凋亡的影响及作用机制.以人鼻咽癌细胞为研究对象,分别用0、5、10、20、40μmol/L的姜黄素作用于鼻咽癌细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,并计算半数抑制浓度.用半数抑制浓度的姜黄素作用于鼻咽癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病2(B-cell lymphoma/Leukemia 2,Bcl-2)、β连环蛋白(β-catenin)、c-Myc表达水平.5、10、20、40 μmol/L的姜黄素作用后细胞的存活率明显降低,与0 μmol/L姜黄素作用组相比有明显差异(P＜0.05).计算半数抑制浓度为(17.83±1.25) μmol/L,后续实验中选用18 μmol/L的姜黄素继续研究.18 μmol/L的姜黄素作用后的鼻咽癌细胞凋亡率明显高于0μmol/L姜黄素作用组(P＜0.01).18 μmol/L的姜黄素作用后的鼻咽癌细胞中Bcl-2、β-catenin、c-Myc表达水平均明显低于0 μmol/L姜黄素作用组(P＜ 0.01).由此姜黄素能够抑制人鼻咽癌细胞增殖,促进癌细胞凋亡,作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关.
关键词： 鼻咽癌 增殖 凋亡 Wnt/β-catenin信号通路 -
香烟烟雾激活肺癌细胞Wnt/β-catenin信号途径的机制研究
背景与目的:香烟烟雾诱导的炎性反应可显著促进肺肿瘤的生长,本研究通过体内外实验明确香烟烟雾激活肺癌细胞Wnt/β-catenin信号途径的机制.方法:利用尾静脉注射鼠Lewis肺癌细胞方法建立小鼠肺癌模型,然后采用香烟烟雾对其进行刺激,诱发炎性反应.免疫组化方法检测小鼠和人肺肿瘤组织中CD68、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和无磷酸化β-catenin的表达.采用Transwell(R)插入式细胞培养皿共培养人巨噬细胞和人肺癌细胞株A549细胞.采用蛋白质印迹法(Western blot)检测A549细胞中无磷酸化β-catenin的表达及磷酸化的GSK-3β和Akt蛋白的表达.结果:免疫组化结果显示,香烟烟雾刺激肺肿瘤负荷小鼠后,其肿瘤组织中巨噬细胞CD68+、TNF-α和无磷酸化β-catenin的表达均明显高于对照组.肺癌患者肿瘤组织中,CD68和TNF-α的阳性表达均明显高于正常组织.肺腺癌和鳞癌的无磷酸化β-catenin的染色阳性率分别为68.9％和62.2％,其阳性率与患者吸烟与否及肿瘤分期有关,差异有统计学意义(P均＜0.05),并且CD68+的细胞数在无磷酸化β-catenin染色阳性的标本中显著升高(P＜0.01).Western blot检测结果显示,不同浓度香烟抽提物(cigarette smoke extract,CSE)刺激共培养细胞后,A549细胞中无磷酸化β-catenin的表达随着CSE浓度的增加而显著上升.在加入TNF-α中和抗体后,A549细胞中无磷酸化β-catenin的表达被抑制.用TNF-α处理A549细胞后,磷酸化的GSK-3β和Akt蛋白在2h后表达增加,4h后无磷酸化β-catenin蛋白表达也开始上调.结论:香烟烟雾诱导肺肿瘤组织中巨噬细胞释放炎性反应因子TNF-α,进而通过Akt/GSK-3β途径激活肿瘤细胞中Wnt/β-catenin信号通路.
关键词： 巨噬细胞 肺癌 肿瘤坏死因子α Wnt/β-catenin信号通路 -
WNT/β-catenin信号通路与miRNA在原发性肺癌中的研究进展
WNT/β-catenin信号通路在细胞增殖、分化和器官发育中起着重要作用.WNT/β-catenin信号通路的异常活化及与该信号通路相关的miRNA异常调节与原发性肺癌的发生、发展有着密切联系.因此深入研究肺癌中WNT/β-catenin信号通路的调控机制,阐明miRNA与该通路成分间的相互作用可能为发现新的肺癌药物治疗靶点提供思路.本文就原发性肺癌中的WNT/β-catenin信号通路和miRNA及以两者为靶点的肺癌治疗研究进行综述.
关键词： 肺癌 Wnt/β-catenin信号通路 miRNA -
表没食子儿茶素没食子酸酯对人骨肉瘤细胞143B的抑制作用及其机制探讨
目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人骨肉瘤细胞143B的抑制作用,并初步探讨其可能的分子机制.方法:分别用0～50 μmol/L的EGCG处理骨肉瘤143B细胞,然后采用结晶紫染色法观察细胞增殖能力的变化,Hoechst染色法分析细胞凋亡情况,细胞划痕愈合实验和Transwell小室法分析细胞迁移能力,蛋白质印迹法检测细胞凋亡及迁移相关蛋白的表达水平.同时,采用荧光素酶报告基因系统分析细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活化情况,再用蛋白质印迹法检测Wnt/β-catenin信号通路中关键因子β-catenin及其下游靶分子c-Myc和cyclin D1的表达情况.结果:EGCG处理后,骨肉瘤143B细胞的增殖和迁移能力均受到明显抑制(P值均＜0.05),而晚期凋亡细胞数明显增加(P＜0.05);细胞中凋亡蛋白caspase-3及其剪切体的表达水平均明显上调(P值均＜0.05),而Bcl-2、金属基质蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白表达水平均明显下调(P值均＜0.05).此外,EGCG处理组的荧光素酶活性较未处理组明显下降(P＜0.05).结论:EGCG能抑制骨肉瘤143B细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡;这一作用可能与其阻断Wnt/β-catenin信号通路有关.
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富血小板纤维蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化的研究
目的:研究富血小板纤维蛋白(PRF)通过Wnt/β-catenin信号通路对骨髓基质干细胞(BMSCs)分化的影响.方法:分离、培养原代兔BMSCs,取第三代细胞进行干细胞鉴定,收集同一只兔耳缘静脉血离心制备PRF,将PRF与BMSCs置于Transwell小室中共培养并进行成骨分化.实验分组:A组为单纯BMSCs对照组;B组为PRF与BMSCs共培养组;C组为加入DKK1的PRF与BMSCs共培养组;D组为加入Wnt3a的PRF与BMSCs共培养组.茜素红染色观察各组钙结节形成情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测各组ALP活性,定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测成骨成脂相关基因Runx2、OCN、PPARγ2及LPL的mRNA表达,同时检测Wnt/β-catenin信号通路关键因子CyclinD1及β-catenin的mRNA表达.结果:流式细术检测结果显示,原代培养的BMSCs符合间充质干细胞鉴定标准.茜素红染色结果显示,B组和D组的钙结节数量明显多于A组和C组,A组和C组之间无明显差异.碱性磷酸酶(ALP)活性检测结果显示,B组与D组的ALP活性较A组和C组明显增加(P<0.05),且两组之间差异无明显统计学意义.qRT-PCR结果显示B组与D组中的成骨分化标志基因Runx2、OCN的mRNA表达,较A组和C组显著增加(P<0.05),而成脂分化标志基因PPARγ2、LPL的mRNA表达显著降低(P<0.05).此外,B组和D组中Wnt/β-catenin信号通路关键因子CyclinD1及β-catenin的mRNA表达较A组和C组显著增加(P<0.05).结论:PRF通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化而抑制其成脂分化.
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下调miR-21表达对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响
目的:探讨下调miR-21表达对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响及可能机制.方法:体外培养SCC15和CAL27口腔鳞癌细胞,根据转染不同,分别将细胞分为miR-21抑制物组、miR-阴性对照物组和空白对照组.MTT法检测不同转染组细胞增殖情况,检测不同转染组细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-21、β-catenin、C-myc和Dkk1表达,Western blot法检测细胞中β-catenin、C-myc和Dkk1蛋白表达.结果:SCC15和CAL27细胞中,miR-21抑制物组细胞转染48 h和72 h时,细胞增殖活性均低于miR-阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);SCC15和CAL27细胞中,miR-21抑制物组细胞凋亡率均显著高于miR-阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);SCC15和CAL27细胞中,miR-21抑制物组细胞中miR-21、β-catenin基因和蛋白、C-myc基因和蛋白表达量均低于miR-阴性对照组和空白对照组,而Dkk1基因和蛋白表达量均高于miR-阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:下调miR-21可显著抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖,促使细胞发生凋亡,可能与促进Dkk1基因表达而抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.
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Wnt/β-catenin信号通路在大鼠骨髓间充质干细胞牵张中的表达
目的:了解经典Wnt信号通路在骨髓间充质干细胞(BMSCs)加载牵张中的作用.方法:分离培养大鼠BMSCs,通过自行研制的细胞加载装置,对BMSCs施加机械张应力刺激.用实时荧光定量RT-PCR与Western印迹检测Wnt3A、β-catenin与Lef-1的表达,同时检测BMSCs细胞增殖及骨向分化转录因子Runx2与成骨因子碱性磷酸酶(ALP)的变化情况.所得数据应用SPSS19.0软件包进行配对t检验.结果:在牵张力刺激下,经典Wnt信号通路的3个关键分子Wnt3A、β-catenin与Lef-1基因表达显著增强(P＜0.05).BMSCs的增殖、Runx2表达以及ALP活性也在加力后增强(P＜0.05).结论:张应力加载激活了经典Wnt信号通路,并刺激BMSCs增殖与骨向分化,提示Wnt/β-catenin参与了牵张成骨的分子调控过程.
关键词： 间充质干细胞 机械牵张 Wnt/β-catenin信号通路 -
Wnt/β-catenin信号通路在大鼠牵张成骨中的表达
目的:建立SD大鼠胫骨牵张模型,研究Wnt/β-catenin通路在大鼠胫骨牵张成骨中的作用.方法:建立SD大鼠胫骨牵张模型,以0.15 mm/12 h的速率延长胫骨.实验组大鼠牵张期每天在牵张间隙注射rrDkk1 (recombinant ratDkk1,25 μg/kg),稳定期每3d注射1次.对照组大鼠相同时间接受相同剂量生理盐水注射.于牵张第1、3、6、12天和稳定期第10天获取牵张骨痂标本,进行实时定量荧光PCR、Western印迹和免疫荧光检测.稳定期6周后获取牵张骨痂标本,进行X线检测、双能X线骨密度测定、显微CT和组织学检测.采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析.结果:对照组中,多种Wnt配体、辅因子、受体和抗体在牵张骨痂区广泛表达,并在牵张期表达上调.实验组在rrDkk1作用下,这些因子中大部分mRNA和蛋白质水平表达显著下调(P＜0.05).组织学和显微CT检查显示,rrDkk1组的牵张愈合区无成熟的骨愈合.结论:Wnt/β-catenin通路参与了牵张成骨全过程,临床进行牵张成骨术时应避免Wnt/β-catenin通路受到抑制.
关键词： Wnt/β-catenin信号通路 牵张成骨 成骨细胞 -
氯化锂激活的Wnt/β-catenin信号通路对激素型骨质疏松的防护作用
目的 研究氯化锂(LiCl)激活的Wnt/β-catenin信号通路对糖皮质激素引发的小鼠骨丢失的防护作用.方法 将C57BL6/J小鼠随机分为3组:对照组、骨质疏松模型组和LiCl组.骨质疏松模型组及LiCl组小鼠皮下注射地塞米松(50 mg/kg),对照组小鼠皮下注射同等剂量生理盐水.LiCl组小鼠在注射地塞米松同时通过饮用水给予LiCl(200mg/kg).处理5周后处死小鼠做骨组织切片,用免疫组化染色检测活性β-catenin蛋白的表达,鉴定体内Wnt/β-catenin通路激活情况;用H-E染色鉴定骨组织形态.同时取小鼠股骨进行microCT扫描,测定骨形态计量学参数.用钙黄绿素荧光标记实验鉴定新骨形成能力,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定骨吸收情况.结果 LiCl组小鼠体内活性β-catenin蛋白水平高于骨质疏松模型组,其骨量、骨小梁数量、骨小梁间隙及骨密度均得到改善(P＜0.05),但与对照组相比差异仍有统计学意义(P＜0.05).钙黄绿素荧光标记实验证实LiCl组小鼠新骨形成能力比骨质疏松模型组有所提高,但仍低于对照组.TRAP染色证实各组小鼠骨吸收活性未发生明显改变.结论 口服LiCl能有效激活体内Wnt/β-catenin信号通路,促进新骨形成,对糖皮质激素引发的骨丢失有一定的防护作用.
关键词： Wnt/β-catenin信号通路 氯化锂 糖皮质激素类 骨质疏松 新骨形成 -
COX-2/PGE2激活Wnt/β-catenin信号通路调控人肠癌细胞VEGF表达
目的 探讨环氧化酶2(COX- 2)/前列腺素E2(PGE2)是否通过Wnt/β-catenin信号通路调控人肠癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达.方法 将PGE2或COX-2选择性抑制剂NS-398作用LoVo细胞24 h,采用蛋白质印迹法检测COX-2和β-catenin蛋白表达；将PGE2和(或)β-catenin/tcf抑制剂FH-535作用LoVo细胞24 h,采用ELISA法检测VEGF表达.以常规培养的LoVo细胞为对照.结果 与对照组比较,PGE2能够上调LoVo细胞中COX-2蛋白表达,同时上调β-catenin在细胞总蛋白、细胞浆蛋白和核蛋白中的表达水平(分别是对照组的3.8倍、2.7倍和3.0倍,P均＜0.01)；COX-2抑制剂能够下调COX-2蛋白表达,同时下调β-catenin在细胞总蛋白、细胞浆蛋白和核蛋白中的表达水平(分别是对照组的0.3倍、0.3倍和0.2倍,P均＜0.01).与对照组比较,PGE2能够上调LoVo细胞VEGF表达水平(是对照组的1.6倍,P＜0.01)；β-catenin/tcf抑制剂能够下调VEGF表达(是对照组的0.68倍,P＜0.01)；将PGE2和β-catenin/tcf抑制剂同时作用LoVo细胞后VEGF表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 COX-2/PGE2通过上调β-catenin蛋白表达,从而激活Wnt/β-catenin信号通路,上调VEGF表达,这可能是COX-2/PGE2促进大肠癌血管新生的机制之一.
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Wnt/β-catenin信号通路参与高渗条件下气道上皮细胞黏液高分泌
目的 研究高渗刺激对人气道上皮细胞(16HBE)黏蛋白(MUC)5AC分泌的影响,以及Wnt/β-catenin 信号通路可能的介导作用.方法 使用浓氯化钠配置高渗培养液,用高渗培养液刺激16HBE细胞,细胞分为常规培养(阴性对照组)以及高渗培养液刺激3、6、9、12 h组.ELISA法检测MUC5AC分泌量,Western blotting法检测人气道Wnt家族蛋白Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt7a、Wnt10a、Wnt10b的表达情况.将Wnt4小片段siRNA转染16HBE细胞,再给予高渗培养液刺激.采用ELISA法检测培养上清的MUC5AC分泌量,采用Western blotting法检测细胞内经典Wnt/β-catenin通路相关信号分子的表达量,细胞免疫荧光法检测核因子(NF)-κB p65核转位情况.结果 高渗培养的16HBE细胞上清及胞质中检测到的MUC5AC分泌量显著高于阴性对照组,且MUC5AC分泌量在一定范围内呈时间依赖性(均P＜0.05).高渗刺激组Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt5a、Wnt7a、Wnt10a和Wnt10b表达量较阴性对照组无明显变化(均P＞0.05),而Wnt4表达量显著升高(P＜0.05).高渗刺激组细胞内β-catenin和Cyclin D1的相对表达量显著高于阴性对照组,细胞免疫荧光法提示NF-κB p65核转位(均P＜0.05);而经转染Wnt4 siRNA后,高渗培养组上清及胞质内MUC5AC分泌量显著低于未转染的高渗培养组(P＜0.05),细胞内β-catenin、CyclinD1水平及NF-κB p65的核转位现象也受到显著抑制(均P ＜0.05).结论 高渗盐水可诱导16HBE细胞MUC5AC高分泌,Wnt/β-catenin信号通路在该效应中有重要的参与作用.
关键词： 高渗透压 黏蛋白5AC Wnt/β-catenin信号通路 核因子κB -
外源性FGF-2对高糖环境下内皮祖细胞功能的影响
目的 观察外源碱性成纤维细胞生长因子-2(basic fibroblast growth factor-2,FGF-2)对高糖环境下内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能的影响.方法 体外分离和培养小鼠EPCs,并采用流式细胞分析和免疫荧光染色进行细胞鉴定,分别在高糖(30 mmol/L)和高糖(30 mol/L) +FGF-2(30、50、100、150、300 ng/mL)条件下干预培养,正常EPCs作为空白对照组,TUNEL检测细胞凋亡,Transwell小室和基质胶在体外观察EPCs的迁移和成管能力;Western印迹法检测活化β-catenin和总β-catenin的表达,构建小鼠后肢缺血模型,分别注射空白组、正常组、高糖组及高糖+FGF2(150 ng/mL)组EPCs,使用激光多普勒血流仪观察小鼠缺血后肢血流恢复情况.结果 高糖组EPCs比空白对照组凋亡率显著增高(P＜0.01),迁移和血管形成能力显著降低(P＜0.01);高糖+FGF-2组EPCs与高糖组相比,细胞凋亡显著减少(P＜0.05),迁移和血管形成能力显著增强(P＜0.05),且在150 ng/mL FGF-2时效果强(P＜0.01).Western印迹法分析表明,高糖组较空白对照组活化β-catenin/总β-catenin显著下降(P＜0.01),而高糖+FGF-2组与高糖组相比则显著升高(P＜0.05).体内实验显示,高糖组小鼠缺血后肢较正常组血流恢复显著减少,而高糖+FGF-2组较高糖组显著增加.结论 外源性FGF-2处理可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路发挥对高糖下受损EPCs的功能修复作用.
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Wnt/β-catenin信号通路调控人神经干细胞衰老过程的研究
目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路对人神经干细胞(neural stem cells,NSCs)衰老的调控作用.方法 将人胚胎干细胞分化为NSCs,经MPTP(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶)处理后,检测细胞的衰老表型和Wnt/β-catenin相关蛋白表达变化.分别应用AR-A014418、DKK1蛋白激活、抑制Wnt/β-catenin通路后,检测Wnt/β-catenin信号通路改变对细胞衰老表型的影响.检测各实验组和对照组中促炎因子CCL3、CXCL10、CXCL11、TNF-α的表达变化.结果 经MPTP处理后,NSCs显示衰老表型,表现为SA-β-gal阳性细胞明显增多,胞内ROS水平明显升高、细胞增殖活性受到抑制(P＜0.01).同时,Wnt1、β-catenin蛋白表达降低,磷酸化GSK3β表达升高.AR-A014418激活了Wnt/β-catenin通路,缓解了细胞的衰老表型;DKK1蛋白抑制了Wnt/β-catenin通路,加重了细胞的衰老表型.Wnt/β-catenin通路能调控NSCs衰老过程中促炎因子的表达.结论 Wnt/β-catenin信号通路能够调控MPTP诱导的NSCs衰老过程.
关键词： 神经干细胞 衰老 Wnt/β-catenin信号通路 促炎因子 -
补肾解毒散结方通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抗大肠癌侵袭转移
目的:探讨补肾解毒散结方抑制Wnt/β-catenin信号通路抗人结肠癌HCT-116细胞侵袭转移的作用和机制.方法:采用CCK-8法检测以不同浓度补肾解毒散结方(10、20、40、60、80、100、120 μg/ml)对人结肠癌HCT-116细胞增殖的影响;采用划痕实验检测HCT-1 t6细胞转移能力;Transwell实验检测HCT-116细胞侵袭能力;Westem blot检测HCT-116细胞的β-catenin、CyclinD1蛋白表达水平.结果:补肾解毒散结方能够以剂量-时间依赖性方式抑制HCT-116细胞的增殖;补肾解毒散结方能够呈剂量依赖性方式抑制HCT-116细胞的侵袭和转移能力(P＜0.05);补肾解毒散结方能够下调HCT-116细胞核内β-catenin蛋白表达水平,抑制其下游靶基因CyclinD1的蛋白表达水平(P＜0.01).结论:补肾解毒散结方具有抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖、侵袭和转移能力,其机制可能与其通过Wnt/β-catenin信号通路下调β-catenin蛋白表达水平相关.
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β-榄香烯对紫杉醇耐药肺癌细胞的抑制作用及Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的:研究β-榄香烯对紫杉醇耐药肺腺癌细胞A549/Taxol的抑制作用及其对Wnt/β-catenin信号转导通路的影响.方法:采用浓度梯度诱导法制备紫杉醇耐药肺腺癌细胞株A549/Taxol.以不同浓度β-榄香烯作用于A549/Taxol细胞48 h,采用CCK8法检测细胞增殖;实时定量PCR法检测多药耐药基因(MDR1)及β-catenin、Survivin基因的mRNA表达;Western blot法检测A549/Taxol细胞P糖蛋白(P-gp)及β-catenin、Survivin的蛋白表达.结果:与对照组比较,β-榄香烯呈浓度相关性抑制A549/Taxol细胞增殖;β-榄香烯(20、40、80 μg/ml)作用48 h后,A549/Taxol细胞MDR1、β-catenin、Survivin mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P＜0.01).结论:β-榄香烯可能通过下调β-catenin、Survivin mRNA及其蛋白的表达,影响Wnt/β-catenin信号转导通路,发挥抑制A549/Taxol细胞增殖的作用;β-榄香烯对肺腺癌细胞紫杉醇耐药性具有拮抗作用,该作用可能通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路实现.
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单功能烷化剂MNNG对人胃粘膜上皮GES-1细胞的损伤及其对Wnt/β-catenin信号通路的影响
本文旨在从Wnt/β-catenin信号通路的角度探讨单功能烷化剂MNNG诱导人胃粘膜上皮GES-1细胞损伤的机制.用MNNG (2×10-5 mol/L)处理GES-l细胞24 h,处理后第3天用倒置显微镜对GES-1细胞形态进行观察,用MTT法检测GES-1细胞活力,用流式细胞术检测GES-1细胞凋亡和周期变化,用Qpcr检测GES-1细胞中β-catenin、GSK-3β、c-Met和MMP7mRNA表达情况,用Westem blot检测β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β和c-Met蛋白表达情况.结果显示:MNNG能够明显损伤GES-1细胞,细胞形态变为不规则的长梭形;MNNG能够诱导GES-1细胞凋亡,明显阻滞细胞周期进程;MNNG能够上调β-catenin、GSK-3β、c-Met和MMP7 Mrna表达水平,并上调β-catenin、GSK-3β和p-GSK-3β蛋白表达水平.上述结果提示,MNNG对GES-1细胞的损伤可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活相关,这为胃粘膜损伤的细胞模型研究提供了参考.
关键词： Wnt/β-catenin信号通路 胃粘膜上皮细胞 损伤机制
