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全身振动对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓细胞p-GSK3β蛋白表达的调节作用
本文旨在观察全身振动对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响.将36只3月龄雌性SpragueDawley (SD)大鼠,按体重随机分为假手术、去卵巢静止和去卵巢振动组.去卵巢10周后,去卵巢振动组大鼠每天接受2次振动(90 Hz)刺激,每次15 min.振动处理8周后,用双能X线骨密度仪在体检测大鼠体成分和骨密度,用Western blot检测骨髓细胞和骨髓基质细胞β-catenin和p-GSK3β蛋白的表达.结果显示,去卵巢振动组大鼠体脂重量和体脂含量显著低于去卵巢静止组,瘦体含量显著高于去卵巢静止组.去卵巢振动组大鼠胫骨近端骨密度显著高于去卵巢静止组,而全身、股骨远端和腰椎骨密度与去卵巢静止组相比无显著性差异.去卵巢振动组和去卵巢静止组的骨髓基质细胞β-catenin蛋白表达之间无显著性差异.去卵巢振动组骨髓细胞p-GSK3β蛋白的表达水平显著高于去卵巢静止组,而两组的骨髓基质细胞p-GSK3β蛋白表达之间无显著性差异.以上结果提示,全身振动能减缓去卵巢大鼠骨量的丢失,其机制涉及骨髓细胞p-GSK3β蛋白表达的上调.
关键词： 去卵巢大鼠 骨密度 全身振动 体成分 Wnt/β-catenin信号通路 -
Wnt/β-catenin信号通路相关长链非编码RNA在肺结核患者外周血中的表达及其意义
目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路相关长链非编码RNA(lncRNA)在肺结核患者外周血单核细胞(PBMCS)中的表达及其临床意义.方法 选取初治结核患者、结核杆菌感染者、未感染结核杆菌者各50例,采集其外周血、分离单核细胞、提取RNA,采用mRNA芯片检测,通过聚类分析、GO和KEGG pathway分析,筛选肺结核患者差异表达的Wnt/β-catenin信号途径相关lncRNA.以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测相关lncRNA表达的变化情况和各组样本中的Wnt/β-catenin信号通路活化情况.结果 mRNA芯片共检出差异表达的lncRNA 4487个:其中上调2756个,下调1731个.通过GO和KEGG pathway分析筛选Wnt/β-catenin信号通路途径相关差异表达的lncRNA FR255266、NONHSAT006952、TCONS_l2_00020446做进一步分析.REAL TIME PCR检测结果显示,与正常对照组相比,结核杆菌潜伏感染者外周血PBMCS中lncRNA FR255266、TCONS_l2_00020446表达显著升高,且在肺结核患者中进一步上调,而lncRNA NONHSAT006952在肺结核患者中显著降低;结核杆菌潜伏感染者和肺结核患者Wnt/β-catenin信号通路相关mRNA:TCF,GSK-3β和 β-catenin的表达显著上调,以上差异均有统计学意义(P值均<0.05).结论结核菌感染后,机体内Wnt/β-catenin信号通路途径相关的一系列lncRNA表达发生显著变化,须进一步探究其在结核病中的生物学功能及其分子机制,可将其作为结核病的生物预警、诊断及精准治疗提供新的靶点.
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KIAA1456基因过表达对骨肉瘤细胞增殖的影响
目的 探讨人tRNA甲基转移酶9样蛋白(hTRM9L)KIAA1456基因过表达对骨肉瘤细胞株增殖的影响及其分子作用机制.方法 实验分为三组:空白对照组(Ctrl组),骨肉瘤MG63和U2OS细胞不作任何处理;阴性对照组(Scrambled组),骨肉瘤MG63和U2OS细胞转染空载质粒;实验处理组(KIAA1456组),将pT3-myr-KIAA1456过表达质粒转染至骨肉瘤MG63和U2OS细胞.利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot检测骨肉瘤细胞中KIAA1456 mRNA和蛋白表达水平,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)及5-乙炔基-2′ 脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖实验检测KIAA1456过表达对骨肉瘤细胞增殖能力的影响,流式细胞术分析骨肉瘤细胞周期的变化,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白细胞质及细胞核 β 链蛋白(Cytoplasmicβ-catenin、Nucleusβ-catenin)、细胞周期蛋白-1(Cyclin D1)及C-myc的蛋白表达水平.结果 与Ctrl组和Scrambled组比较,(1)KI-AA1456组骨肉瘤MG63和U2OS细胞中KIAA1456 mRNA和蛋白表达水平增高(P均<0.01);(2)CCK-8法检测KIAA1456组在24、48、72、96 h OD值均降低(P<0.01);(3)EdU细胞增殖实验显示,KIAA1456组细胞增殖率降低(P<0.01);(4)流式细胞术显示,在MG63细胞和U2OS细胞中,KIAA1456组G0/G1期细胞数量比例增多,而S期和G2/M期细胞数量减少(P<0.05,P<0.01);(5)Western blot结果显示,KIAA1456组Wnt/β-catenin信号通路中相关蛋白Nucleusβ-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达降低,Cytoplasmicβ-catenin蛋白表达增高(P<0.01).结论 KIAA1456过表达可显著抑制骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖并且使骨肉瘤细胞周期阻滞在G0/G1期,其作用机制可能与抑制 β-catenin核转位以及下调Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因Cyclin D1、C-myc的表达相关.
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Pygopus2过表达与非小细胞肺癌恶性程度的关系
目的 Pygopus2(Pygo2)是经典Wnt/β-catenin信号通路的重要成员,本研究探讨Pygo 2的表达与非小细胞肺癌恶性程度的关系.方法 选择168例原发性肺鳞癌、腺癌标本,应用SP免疫组化染色及Western Blot方法,检测肺癌组织中Pygo2蛋白的表达情况及其与临床病理因素的关系;体外培养人正常支气管上皮细胞系HBE、人肺癌细胞系,RT-PCR检测各细胞系Pygo2 mRNA表达.结果 免疫组化染色结果显示:在正常支气管上皮细胞的胞核中Pygo2蛋白几乎不表达,而在非小细胞肺癌胞核中存在Pygo2蛋白的异常表达,表达率为68.45％.分期晚、分化差的癌组织更易出现Pygo2蛋白过表达(P均＜0.05).Pygo2蛋白过表达患者的平均生存时间和5年生存率明显低于Pygo2正常表达的患者(P均＜0.05).Western Blot结果显示,在癌旁正常肺组织可见Pygo2蛋白的弱表达,而在肺癌组织中Pygo2蛋白的表达明显高于正常肺组织(P＜0.01).RT-PCR检测细胞系Pygo2 mRNA发现,与正常支气管上皮细胞系HBE相比,肺癌细胞系中均显示出Pygo2 mRNA不同程度的表达增强(P均＜0.05).结论 Pygo2的过表达可能与非小细胞肺癌的恶性程度有关.
关键词： Pygopus2基因 非小细胞肺癌 鳞癌 腺癌 肺肿瘤 Wnt/β-catenin信号通路 预后 临床病理因素 恶性程度 -
结直肠癌侵袭转移过程中HOXB7介导Wnt/β-Catenin信号通路作用及机制研究
目的 研究同源异型盒基因B7(HOXB7)介导Wnt/β-Catenin信号通路在结直肠癌侵袭转移中的作用与机制.方法 构建慢病毒转染重组体质粒HOXB7/psin,包装质粒PIK和阴性对照质粒psin,通过转染技术获得稳定过表达HOXB7的结直肠癌细胞株(SW480/HOXB7,293 FT/HOXB7)及对照细胞株(SW480/vector,293 FT/Vector).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测HOXB7 mRNA和蛋白的表达,采用免疫荧光染色技术评估HOXB7对结直肠癌细胞株β-Catenin的调控作用,采用qRT-PCR和Western blot法检测Wnt信号通路下游靶基因及蛋白的表达,采用小室试验评价各组细胞转移侵袭能力.结果 SW480/HOXB7,293FT/HOXB7细胞株的HOXB7mRNA和蛋白表达水平较SW480/vector,293 FT/Vector细胞株显著提高(P均＜0.05).HOXB7过表达后,细胞核中β-Catenin表达水平显著升高,并可见明显的入核现象,而在细胞浆中β-Catenin表达水平无明显变化.随着HOXB7的过表达,293FT、SW480细胞株中DKK1、cyclinD1、LEF1等Wnt信号通路下游基因及蛋白的表达均出现不同程度的上调现象.SW480/HOXB7细胞株穿过滤膜的细胞数显著高于SW480/vector细胞株(P＜0.05).结论 HOXB7介导Wnt/β-Catenin信号通路的激活能够通过调控下游基因,提高结直肠癌细胞侵袭能力,增加肿瘤转移的风险.
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不同代次大鼠骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路表达分析
目的 观察不同代次大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖能力及其纤维分化倾向,为临床治疗及组织工程种子细胞的选择提供依据.方法 采用贴壁培养法分离培养大鼠MSCs,流式细胞术鉴定细胞表面标记;MTT法检测不同代次MSCs的增殖情况;蛋白质印迹法(Western Blot)检测MSCs Wnt通路相关蛋白的表达情况;实时聚合酶链式反应(Realtime-PCR)法检测不同代次MSCs中成纤维细胞分子标记表达.结果 流式细胞术鉴定结果证实我们培养的大鼠MSCs符合间充质干细胞的特征,且纯度高;MTT法检测显示P3代之后细胞的增殖能力明显高于P1、P2代,Western Blot检测显示细胞内Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达随培养代次增强,Real-time-PCR法检测结果证实P9代细胞开始出现成纤维分化倾向.结论 MSCs作为种子细胞不宜超过P9代,P3 ～ P7代具有纯度高、倍增快等优点,是能够满足组织工程细胞植入的种子细胞.
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氯化锂对老龄大鼠术后认知功能的影响及与Wnt/β-catenin信号通路的关系
目的 观察氯化锂预先给药对老龄大鼠术后认知功能的影响,探讨其可能的作用机制.方法 雄性SD大鼠36只,18月龄,随机分为三组,其中C组和S组腹腔注射生理盐水,L组给予氯化锂2 mmol/kg；每天1次,连续5d.S组和L组行肝脏缺血-再灌注手术.术后第3～6天行Morris水迷宫实验,记录逃逸潜伏期和游泳距离.测定大鼠海马组织中糖原合成激酶3β(GSK-3β)、低密度脂蛋白受体6(LRP6)、β-连环素(β-catenin)及其相应磷酸化蛋白的表达水平.结果 与C组比较,S组第4～6天和L组第3,4天逃逸潜伏期和游泳距离明显延长(P＜0.05)；S组p-GSK-3β、p-LRP6蛋白表达明显降低(P＜0.05),p-β-catenin蛋白表达明显增加(P＜0.05)；而L组p-GSK-3β、p-LRP6蛋白表达明显增加(P＜0.05),p-β-catenin蛋白表达明显降低(P＜0.05).与S组比较,L组第3～6天逃逸潜伏期和游泳距离明显缩短(P＜0.05),而p-GSK-3β、p-LRP6蛋白表达明显增加(P＜0.05),p-β-catenin蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论术前预先腹腔注射氯化锂可改善大鼠术后认知功能,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关.
关键词： 氯化锂 认知功能 Wnt/β-catenin信号通路 -
吡格列酮通过Wnt/β-catenin信号通路减轻大鼠血管平滑肌细胞钙化
目的:探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂吡格列酮(PIO)对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的作用及其相关机制. 方法:利用10 mmol/L β甘油磷酸(β-GP)诱导大鼠VSMC钙化,建立钙化模型(即钙化组);同时以完全培养基培养大鼠VSMC为正常对照组,并分别以不同浓度(5 μmoL／L、10μmoL／L、15 μmol/L、20 μmol/L)PIO干预,观察培养12d,用茜素红染色法检测细胞钙沉积并检测细胞外基质钙离子浓度来观察VSMC钙化程度.Western Blot检测大鼠VSMC的α平滑肌动蛋白(α-SMA)、Runx2、BMP2、Wnt/β-catenin通路相关蛋白(β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β)及核蛋白cyclin-D1的表达情况.选择合适的PIO浓度(20μmol/L)并以PPARγ拮抗剂GW9662(20 μmol/L)干预,观察以上指标的变化. 结果:(1)钙化组钙离子浓度较正常对照组明显增高(P＜0.05),而不同浓度PIO均可减轻VSMC细胞外基质的钙离子浓度(P＜0.05),同时钙化组茜素红染色较正常对照组明显,而20μmol/L PlO干预组茜素红染色较钙化组减轻为明显;(2)钙化组大鼠VSMC表达Runx2、β-catenin、p-GSK-3β、BMP2、cyclin-D1较正常对照组升高;20μmol/L PIO可显著下调钙化大鼠VSMC表达Runx2、β-eatenin、p-GSK-3β、BMP2和cyclin-D1,并上调α-SMA的表达;(3)PPARγ拮抗剂GW9662可部分阻断PIO对钙化大鼠VSMC的干预作用. 结论:PPARy激动剂PIO可减轻β-GP诱导的大鼠VSMC的钙化,其作用机制与下调Wnt/β-catenin信号通路活性有关.
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炎症微环境中经典Wnt信号通路对牙周膜干细胞成骨分化的调控作用
目的:探讨炎症微环境中经典Wnt信号通路对牙周膜干细胞(periodontai iigament stem ceiis,PDLSCs)成骨分化的调控作用. 方法:通过有限稀释法获得健康个体和慢性牙周炎患者的牙周膜干细胞( H-PDLSCs和P-PDLSCs ) ,比较两组PDLSCs成骨分化能力. 成骨诱导后Western Biot 检测经典Wnt信号通路关键分子GSK3β/p-GSK3β和β-catenin在两种细胞中的表达;TOPFiash/FOPFiash荧光素酶检测β-catenin/TCF转录活性;加入GSK3β抑制剂后,茜素红染色观察PDLSCs成骨能力的变化;小分子RNA下调β-catenin, ALP染色观察 PDLSCs 成骨分化. 结果:P-PDLSCs 的成骨分化能力低于 H-PDLSCs;在 P-PDLSCs中p-GSK3β和β-catenin的蛋白表达水平较H-PDLSCs明显增高;小分子RNA干扰下调β-catenin可减弱TNF-α引起的成骨能力下降;LiCi或Wnt3a抑制GSK3β活性后,PDLSCs成骨分化受到抑制. 结论:GSK3β的磷酸化和Wnt/β-catenin信号通路的激活是炎症环境中TNF-α抑制PDLSCs成骨分化的关键步骤.
关键词： 牙周膜干细胞 炎症微环境 Wnt/β-catenin信号通路 成骨分化 -
CAY10404靶向干预Wnt/β-catenin信号通路对多发性骨髓瘤干细胞清除作用的研究
Wnt信号被认为是多发性骨髓瘤(MM)致癌作用的一个重要角色.为了观察Wnt/β-catenin信号通路在多发性骨髓瘤特别是多发性骨髓瘤干细胞中的表达及Wnt/β-catenin信号通路抑制剂CAY10404对多发性骨髓瘤的治疗作用,对13个多发性骨髓瘤患者的骨髓样本和多发性骨髓瘤细胞株中的Wnt/β-catenin相关基因的表达情况进行分析和运用Western-blot方法分析β-catenin蛋白在多发性骨髓瘤不同细胞亚群中的表达及COX2抑制剂CAY10404对β-catenin蛋白表达的抑制,通过体内外试验观察CAY1040对多发性骨髓瘤不同细胞亚群的增殖抑制作用.结果显示Wnt/β-catenin信号通路在多发性骨髓瘤病人样本CD138-/CD19+干细胞亚群中比CD138+细胞亚群表达显著增高(P＜0.05)；体内外试验显示CAY10404明显抑制多发性骨髓瘤干细胞亚群的增殖(P＜0.05).该研究通过靶向干预Wnt/β-catenin信号通路,对治疗多发性骨髓瘤尤其是多发性骨髓瘤干细胞进行了探索.
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Wnt信号通路与肿瘤干细胞耐药
肿瘤细胞对化疗药物产生交叉耐药性,是造成肿瘤患者化疗失败的主要原因之一.肿瘤细胞具有异质性,即在同一肿瘤细胞中存在不同基因型或亚型的细胞.在化疗过程中,药物杀死对药物敏感的肿瘤细胞,而有一部分肿瘤细胞则表现出较强的耐药性,不能被化疗药物杀伤.肿瘤干细胞(Cancer stem cells,CSCs)的发现,为肿瘤耐药现象的研究提供了新的思路.CSCs是指肿瘤中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞,其具有自我更新,多向分化,DNA修复以及耐药等特征.Wnt信号通路是调控肿瘤干细胞自我更新和分化的关键信号途径,该通路的激活在多种肿瘤的发生、发展和耐药过程中发挥重要作用.对Wnt信号通路的研究有助于揭示肿瘤干细胞耐药的机制,并有望成为治疗恶性肿瘤的一个新靶点.该综述重点阐述了Wnt信号通路在肿瘤干细胞介导的耐药过程中的研究进展.
关键词： 多药耐药性 肿瘤干细胞 Wnt/β-catenin信号通路 -
舒林酸对人胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响及机制探讨
目的：以人胰腺癌细胞系PANC-1为研究对象，利用不同浓度舒林酸处理PANC-1细胞，观察其对PANC-1细胞增殖、凋亡影响，并探讨舒林酸通过抑制Wnt/β-catenin信号通路杀伤PANC-1细胞的可能机制。方法实验分为阴性对照组（加入不含舒林酸的DMSO）和实验组（分别加入舒林酸浓度为0.25、0.5、1、1.5、2 mM的培养液，分别为：阴性对照组、0.25 mM组、0.5 mM组、1.0 mM组、1.5 mM组、2.0 mM组，总计6组）。MTT法检测PANC-1细胞生长抑制率；流式细胞术检测细胞凋亡率；RT-PCR和免疫细胞化学技术检测细胞内β-Catenin的表达。结果 MTT结果显示：PANC-1细胞经舒林酸干预后生长均受到不同程度抑制，且随着舒林酸浓度增加，抑制作用越强。流式细胞术检测凋亡结果显示PANC-1细胞早期凋亡率干预后均有不同程度增加，与对照组相比，0.5、1.0 mM组早期凋亡率差异无统计学意义，而1.5、2.0 mM组差异均有统计学意义（P＜0.05）。RT-PCR结果显示可见各组β-catenin mRNA表达量随着舒林酸浓度增加而降低，0.5、1.0 mM组与对照组相比差异无统计学意义，而1.5及2.0 mM组差异有统计学意义（P＜0.05）；应用2.0 mM的舒林酸处理PANC-1细胞0、12、24、48、72 h，随着处理时间延长，β-catenin mRNA表达量逐渐降低，各处理组与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。ICC结果证实干预后PANC-1细胞内β-catenin表达量及核聚集降低，与对照组相比，0.25、0.5 mM组差异无统计学意义，而1.0、1.5、2.0 mM组差异有统计学意义（P＜0.05）。结论舒林酸对PANC-1细胞具有生长抑制及促凋亡作用，这种作用具有浓度-时间依赖性，舒林酸抑制Wnt/β-catenin信号通路可能是其杀伤PANC-1细胞的可能机制之一。
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CD36在糖尿病肾病患者肾组织中的表达及调控W nt/β-catenin信号通路对人肾小管上皮细胞增殖凋亡的实验研究
目的:探讨CD36在糖尿病肾病患者肾组织中的表达及调控Wnt/β-catenin信号通路对人肾小管上皮细胞增殖凋亡的影响.方法:Western blot检测CD36在糖尿病肾病中的表达;CD36小干扰RNA(CD36-siR-NA)和阴性对照(siRNA-NC)转染人肾小管上皮细胞HKC,以空脂质体转染的细胞作为对照组,Western blot检测转染48 h后各组细胞中CD36蛋白表达;将后续实验分为低糖组、高糖组、siRNA-NC+高糖组、CD36-siRNA+高糖组,各实验组细胞培养48 h后,CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl2-Associated X的蛋白质(Bax)、p53、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(CyclinD1)蛋白表达.结果:CD36在糖尿病肾病的表达显著高于正常肾组织(P<0.01);CD36-siRNA组CD36蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.01);高糖组细胞存活率及Bcl-2、β-catenin、Cy-clinD1蛋白表达显著低于低糖组,细胞凋亡率及Bax、p53蛋白表达显著高于低糖组(P<0.01),siRNA-NC+高糖组细胞存活率、细胞凋亡率及Bcl-2、Bax、p53、β-catenin、CyclinD1蛋白表达与高糖组比较差异无统计学意义(P>0.05);CD36-siRNA组细胞存活率及Bcl-2、β-catenin、CyclinD1蛋白表达显著高于高糖组,细胞凋亡率及Bax、p53蛋白表达显著低于高糖组(P<0.01).结论:CD36在糖尿病肾病中高表达,高糖能抑制人肾小管上皮细胞HKC的增殖,促进细胞凋亡,而沉默CD36基因的表达能减弱这种效果,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关.
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Wnt/β-catenin及TGF-β信号通路与肝癌的靶向治疗
原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全世界常见的第五大恶性肿瘤,其发病率仍在升高,并且是肿瘤相关死亡的第三大原因[1].尽管人类在肿瘤治疗上取得了很大的进步,但目前的治疗手段对根治肿瘤和预防其转移、复发作用有限,手术、化疗和放疗只能消除部分肿瘤组织或细胞,大多数患者在这些治疗后,肿瘤再生长和复发[2-5],预后很差,其中位生存期为6～16个月[6].肝癌的发病机制复杂,是多因素、多基因、多阶段共同参与的结果,其中细胞信号转导通路对其发生、发展起着至关重要的作用.目前已知Wnt/β-catenin信号通路主要通过激活其下游靶基因而导致肝癌的发生与发展,TGF-β信号通路调节黏附复合物的解离诱导上皮间质转化(EMT),在肝癌细胞的浸润、转移方面起重要作用,理解这两个信号通路的生物学行为有利于将来针对肝癌细胞进行基因靶向治疗.
关键词： 肝癌 Wnt/β-catenin信号通路 TGF-β信号通路 转移浸润 -
miR-200c通过wnt/β-catenin信号途径抑制SW480结肠癌细胞的侵袭和转移
目的 研究miR-200c通过wnt/B-catenin信号通路对结肠癌SW480细胞侵袭、迁移的影响.方法 将SW480细胞分为类似物转染(A)组、抑制物转染(B)组、类似物阴性对照(C)组、抑制物阴性对照组(D)和空白(E)组.荧光定量PCR检测12h和24h转染效率,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测转染后β-catenin和E-cadherin的表达.结果 细胞划痕实验显示,A组12 h和24h后伤痕宽度分别为(589.61±17.28) μm和(523.83±57.13) μm,C组分别为(465.33±16.60) μm和(393.99±7.53)μm,A组高于C组(P＜0.05).B组12h和24h后分别为(430.93±20.76) μm和(221.38±44.37) μm,D组分别为(485.64±16.65) μm和(441.22±22.40) μm,B组低于D组(P＜0.05).Transwe11实验显示,与C组和D组相比,A组24h和48 h通过8μm孔径的细胞数明显减少,B组明显增多(P＜0.05).A组β-catenin和E-cadherin的表达均升高,B组各蛋白表达下降(P＜0.05).结论 miR-200c可能通过wnt/β-catenin信号通路抑制SW480结肠癌细胞的侵袭和迁移.
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Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌拉帕替尼耐药中的作用
目的 建立乳腺癌拉帕替尼耐药细胞系,探讨Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌拉帕替尼耐药中的作用.方法 使用拉帕替尼逐步增加剂量法诱导入乳腺癌BT474细胞,建立其多药耐药细胞株rBT474; MTT细胞毒实验检测拉帕替尼对BT474和rBT474细胞的生长抑制作用；基因转染小分子双链siRNA干扰rBT474细胞β-eatenin基因的表达;Westernblot检测目的蛋白的表达；PI和Annexin V-FITC双染流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果 成功建立了人乳腺癌BT474拉帕替尼耐药细胞株rBT474.拉帕替尼对BT474和rBT474细胞的IC50值分别为(5.41±0.42)μmol/L和(38.57±2.86) μmol/L(P＜0.01).rBT474细胞中β-catenin蛋白的表达显著高于BT474细胞.靶向小分子双链siRNA特异性的下调了rBT474细胞中β-catenin的表达.I0μmol/L拉帕替尼作用rBT474细胞48h后,特异性RNA干扰组细胞凋亡率明显高于对照组和阴性RNA干扰对照组[(28.84±4.37)％ vs.(11.02±2.26)％和(12.45±2.64) ％](P＜0.01).结论 拉帕替尼耐药细胞rBT474出现了Wnt/β-catenin信号通路的激活,小分子干扰RNA下调β-catenin基因表达可显著提高拉帕替尼对rBT474细胞的致凋亡作用.
关键词： 乳腺癌 拉帕替尼 多药耐药 Wnt/β-catenin信号通路 -
抑制Wnt/β-catenin信号通路对百草枯致肺纤维化影响的研究
目的 百草枯能够导致肺纤维化发生发展,但其发生机制尚不明确.文中探讨Wnt/β-catenin信号通路在百草枯致肺纤维化发生发展中的作用.方法 SD雄性大鼠48只,随机数字表法分为对照组和百草枯中毒组,每组24只.百草枯中毒组大鼠腹腔注射百草枯30 mg/kg建立肺纤维化模型,对照组腹腔注射等量等渗盐水.于百草枯中毒后14 d和28 d断颈处死各组大鼠,剪取肺组织,HE染色和马松染色检测肺纤维化程度,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin的表达水平.培养人肺上皮细胞,实验分为3组,空白对照组:不作任何处理;百草枯组:给予50μmol/L的百草枯处理3 d;抑制剂组:给予50μmol/L的百草枯处理,同时给予Wnt/β-catenin信号通路抑制剂DKK-120 ng/mL处理3 d.采用免疫荧光和Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin的表达水平,qRT-PCR检测肺上皮细胞标记E-Cadherin、Occludin和成纤维细胞标记蛋白α-SMA、Vimentin表达水平.结果 大鼠百草枯中毒后,HE染色和马松染色结果显示,肺泡壁增厚,肺泡结构紊乱,胶原蛋白沉积,肺纤维化发生;Western blot检测结果表明,与对照组大鼠相比,百草枯中毒组大鼠中毒14 dβ-catenin的表达水平显著升高[(0.38±0.04)vs(0.67±0.06),P<0.01],中毒28 d时高达(1.05±0.08),升高更为明显(P<0.01).与空白对照组相比,百草枯组E-Cadherin、Occludin表达水平显著下降(P<0.01),成纤维细胞标记α-SMA、Vimentin表达水平显著升高(P<0.01);而百草枯组相比,抑制剂组α-SMA和Vimentin表达水平显著下降,E-cadherin和Occludin的表达水平显著上升(P<0.01).结论 百草枯染毒导致大鼠肺纤维化发生,并导致肺组织Wnt/β-catenin信号通路激活,而阻断Wnt/β-catenin信号通路能够抑制百草枯诱导的上皮-间质发生,证实Wnt/β-catenin信号通路在百草枯致肺纤维化发生发展中起着重要的调控作用.
关键词： 百草枯 肺纤维化 Wnt/β-catenin信号通路 上皮-间质转化 -
姜黄素对转化生长因子-β诱导的A549细胞上皮间质转化的影响
目的 研究姜黄素对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的肺腺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)作用及可能机制.方法 选取体外培养肺腺癌A549细胞采用MTT法检测姜黄素细胞抑制率.实验分对照组、TGF-β组(TGF-β 5ng/mL)、TGF-β+姜黄素组(TGF-β 5ng/mL+姜黄素10μmol/L)、姜黄素组(姜黄素10μmol/L).采用Transwell细胞迁移及浸润实验检测各组的运动迁移和侵袭浸润的能力,免疫荧光和Western印迹法实验检测各组EMT相关标记物E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平与Wnt/β-catenin信号通路相关P-GSK3β、GSK3β、β-catenin、c-Myc蛋白以及Snail蛋白表达水平,同时检测Wnt/β-catenin抑制剂XAV939(1、2、4μmol/L)作用后EMT表达情况.结果 MTT实验表明,10μmol/L姜黄素作用A549细胞24h和48h时,细胞增殖抑制率分别为(12.21±2.60)％和(21.33±3.25)％(P＜0.05);TGF-β能显著促进细胞的运动迁移和侵袭浸润,下调E-钙黏蛋白的表达,上调波形蛋白及N-钙黏蛋白的表达,伴有P-GSK3β、β-catemn和c-Myc的表达增加以及Snail蛋白表达增加,GSK3β表达无明显变化,而姜黄素可以抑制TGF-β的作用(P＜0.05).同时,XAV939对TGF-β诱导的EMT也有抑制作用.结论 姜黄素可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来抑制TGF-β诱导的A549细胞上皮间质转化.
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姜黄素通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞上皮间质转化
[目的]探讨姜黄素对结肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用机制.[方法]通过MTS检测姜黄素对HCT116细胞活性的影响;运用Western-blot、Real-time qPCR检测不同浓度姜黄素对HCT116细胞Wnt相关基因(β-catenin、TCF4)及EMT相关基因(E-cadherin和Vimentin)的表达情况.[结果]姜黄素能明显抑制HCT116细胞的增殖活性,在12h、24h和48h的IC50分别是61.98±2.68μmol/L,19.64±1.29μmol/L和17.84± 1.25 μmol/L.姜黄素能下调HCT116细胞内β-catenin和TCF4的表达水平;同时显著性上调E-cadherin及下调Vimentin表达水平,且呈剂量依赖性.Wnt信号通路活化剂能上调姜黄素处理后细胞内的β-catenin表达和下调E-cadherin表达水平.[结论]姜黄素通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制肿瘤细胞上皮间质转化.
关键词： 姜黄素 Wnt/β-catenin信号通路 上皮间质转化 -
Wnt/β-catenin信号通路在去睾丸小鼠骨质疏松发病中的作用
目的:研究Wnt/β-catenin信号通路在去睾丸小鼠骨质疏松发病中的作用.方法:11月龄雄性健康ICR小鼠30只,随机分为3组,睾丸切除组、睾丸切除+雄激素替代组和假手术组,每组10只.睾丸切除组和睾丸切除+雄激素替代组摘除小鼠双侧睾丸,假手术组仅切开皮肤,分离睾丸包膜.手术后睾丸切除+雄激素替代组丙酸睾酮肌注每次10μg,每隔3 d注射1次;睾丸切除组和假手术组0.9%氯化钠溶液肌注每次10μg,每隔3 d注射1次.饲养14周后,检测3组小鼠骨密度(BMD).处死后心脏采血,ELISA法检测雌、雄激素含量.取小鼠骨组织,部分提取RNA并翻转成为cDNA,再通过实时荧光定量PCR法检测β-catenin和Runx2的mRNA表达;部分提取总蛋白,通过Western blot法检测β-catenin和Runx2蛋白的表达.结果:与假手术组比,睾丸切除+雄激素替代组和睾丸切除组BMD值均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);睾丸切除+雄激素替代组与睾丸切除组比较BMD值升高,差异有统计学意义(P<0.05).与假手术组比,睾丸切除组小鼠β-catenin和Runx2的mRNA和蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05);使用雄激素替代治疗后,β-catenin和Runx2的mRNA及蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P<0.05).结论:去睾丸骨质疏松小鼠Wnt/β-catenin信号通路受到抑制,可能是其骨质疏松发生发展的重要分子生物学机制之一.
关键词： 睾丸切除 小鼠 骨质疏松 Wnt/β-catenin信号通路
