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Wnt/β-catenin信号通路在低氧促进hBMSCs体外增殖中的作用
目的 探讨持续低氧环境对入骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)体外增殖的影响,并初步探讨Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用.方法 将购自江阴齐氏生物科技有限公司第2代hBMSCs进行传代、纯化,取第4代hBMSCs进行流式细胞仪检测鉴定;根据培养条件不同分为常氧组(20％氧浓度)和低氧组(3％氧浓度);CCK-8法测定各组生长曲线;采用RT-PCR检测Wnt/β-catenin信号通路关键组件β-catenin、cyclinD1 mRNA表达水平;Western blot检测β-catenin、P-β-catenin蛋白表达水平.结果 第4代hBMSCs流式鉴定结果显示:骨髓基质标志CD90表达为98.7％,而造血细胞标志CD19表达为0.3％;与常氧组比较,低氧组增殖速率更快,β-catenin、cyclinD1 mRNA表达升高(P＜0.05),β-catenin蛋白表达升高(P＜0.05),P-β-catenin蛋白表达下降(P＜0.05).结论 持续低氧环境可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路而促进hBMSCs体外增殖.
关键词： Wnt/β-catenin信号通路 低氧 人骨髓间充质干细胞 增殖 -
粒状头样2在肺纤维化上皮间质转化中的作用研究
目的:探讨粒状头样2(grainyheas-like2,GRHL2)在肺纤维化上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用研究.方法:45只大鼠随机分为正常对照组,模型组及丙戊酸钠组,每组15只,模型组及丙戊酸钠组沿着气管注射博来霉素构建大鼠肺纤维化模型,正常对照组采用同样方法给予等量生理盐水.丙戊酸钠组大鼠腹腔注射200 mg·kg-1·d-丙戊酸钠,正常对照组及模型组腹腔注射等量生理盐水,连续给药28 d.HE染色检测肺组织病理情况,Masson染色检测肺组织纤维化情况,碱水解法检测羟脯氨酸(HYP)含量,免疫组化及Western Blot检测GRHL2表达,Western Blot检测EMT相关蛋白E-cadherin,α-平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA),Vimentin,Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肺组织肺泡结构被破坏,大量胶原纤维沉积,胶原染色面积比、Ashcroft评分及HYP含量升高(P＜0.01),GRHL2阳性率及蛋白表达量降低(P＜0.01),E-cadherin表达量下调(P＜0.01),α-SMA,Vimentin,β-catenin,淋巴样增强结合因子(LEF)及基质金属蛋白酶7(MMP7)表达量上调(P＜0.01).与模型组比较,丙戊酸钠组大鼠肺泡组织结构较为完整,胶原纤维沉积程度较轻,胶原染色面积比、Ashcroft评分及HYP含量降低(P＜0.01),GRHL2阳性率及蛋白表达量提高(P＜0.01),E-cadherin表达量上调(P＜0.01),α-SMA,Vimentin,β-catenin,LEF1及MMP7表达量下调(P＜0.01).结论:大鼠肺纤维化过程GRHL2表达量下调,进而激活Wnt/β-catenin信号通路,促进EMT生成,加重大鼠肺纤维化程度,丙戊酸钠能扭转此过程.
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壮骨止痛方对去势大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的:观察壮骨止痛方对去势大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其治疗骨质疏松的机制.方法:60只3月龄SD雌性大鼠,按体重随机分为假手术组、空白组、模型组、壮骨止痛方组,15只/组.模型组、壮骨止痛方组采用双侧去卵巢建立绝经后骨质疏松大鼠模型,假手术组切除卵巢周围相应质量脂肪.术后5d开始药物干预,连续13 w.取股骨,观察病理形态及Wnt7b、TCF3、GSK3β蛋白的表达.结果:与模型组相比,壮骨止痛方组骨小梁密度及梁髓比均提高.与模型组相比,壮骨止痛方组骨组织中Wnt7b、TCF3蛋白表达增高,GSK3β蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:壮骨止痛方可通过上调去势大鼠骨组织中Wnt7b、TCF3蛋白表达,下调GSK3β蛋白表达来调控Wnt/β-catenin信号通路.
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Wnt/β-catenin及p38MAPK信号通路在人胃癌组织中的表达情况与化学治疗预后及多药耐药相关性研究
目的 研究Wnt/β-catenin及p38MAPK信号通路在人胃癌组织中的表达规律及其与患者病理情况、化疗后预后生存期情况、相关多药耐药因子之间相关性.方法 选取2007年11月至2013年7月大连医科大学附属第一医院胃癌根治术后病例共91例,应用免疫组化法,对已行胃癌根治术、相同化疗、随访的91名病例的病理标本进行检测,收集Wnt/β-catenin及p38MAPK表达情况和患者一般及病理情况、多药耐药因子ToPoⅡ和GST-π表达情况、预后生存期情况,并进行相关性分析.结果 Wnt/β-catenin及p38MAPK阳性表达率与年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤分期无相关性;相同化疗后,中位生存时间Wnt/β-catenin阴性表达患者(26.5个月)比阳性表达患者(14.9个月)延长(P<0.05),p38MAPK阳性表达患者(29.1个月)比阴性表达患者(9.2个月)延长(P<0.05),经Log-Rank分析,Wnt/β-catenin阳性表达率与患者预后生存期呈负相关,p38MAPK阳性表达率与患者预后生存期呈正相关(P<0.05);p38MAPK阳性表达率分别与ToPoⅡ及GST-π阳性表达率呈正相关及负相关性(P<0.05),而Wnt/β-catenin阳性表达率与二者均无相关性(P>0.05);Wnt/β-catenin与p38MAPK阳性表达率之间无相关性(P>0.05).结论 Wnt/β-catenin 及p38MAPK 阳性表达率与年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤分期无关;Wnt/β-catenin 阳性低表达及p38MAPK 阳性高表达与胃癌化疗预后生存期成正相关,可能降低了化疗药物的多药耐药性.
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干细胞因子SOX2调控Wnt/β-Catenin信号通路在脑胶质母细胞瘤发生中的机制研究
目的 通过检测脑胶质母细胞瘤(GBM)组织中干细胞因子SOX2及-Catenin蛋白的表达,探讨SOX2及Wnt/β-Catenin信号通路在GBM发生中的作用机制.方法 脑立体定向仪定向注射C6细胞至70只SD大鼠脑尾状核建立GBM动物模型,处死大鼠取脑肿瘤组织分离、鉴定GBM干细胞将其传代培养,20只正常SD大鼠脑组织作为对照,应用SP免疫法检测模型组GBM干细胞组织和正常组脑组织大鼠SOX2、β-Catenin蛋白的表达.结果 GBM干细胞组织中SOX2和β-Catenin的表达均显著高于正常脑组织(P<0.01),二者在GBM干细胞中的表达呈正相关(r=0.372,P＜0.05).结论 干细胞因子SOX2可能通过调控Wnt/β-Catenin信号通路,在GBM的发生发展过程中发挥重要作用,为针对GBM干细胞治疗该病提供了新靶点.
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脉冲电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化和Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的 探讨脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMFs)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、成骨分化以及对Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 将培养的第3代大鼠BMSCs分为3组.3个组均以LG-DMEM完全培养基培养1d,待细胞贴壁后更换新鲜培养基,对照组不做干预处理;PEMFs组进行8 Hz、3.8 mT的PEMFs干预,每天40 min,持续21d;成骨诱导基(OM)组加入成骨诱导剂,不予磁场干预.采用MTT法测定增殖活性;碱性磷酸酶(ALP)、茜素红S染色进行成骨分化鉴定;利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测Wnt邝-catenin信号通路及成骨分化相关基因的表达.结果 相较对照组,成骨诱导剂在干预第7、14、21d可提高BMSCs的增殖活性(P＜0.05);PEMFs促增殖作用不明显.在BMSCs分化方面,PEMFs组及OM组ALP、茜素红S染色阳性强度均高于对照组(P＜0.05).定量RT-PCR结果显示,PEMFs组及OM组Wnt1、Wnt 3a、LRP5、β-catenin、BMP-2、Runx2、ALP、OC mRNA的表达相较于对照组在相应时间点均有所上调(P＜0.05).PEMFs组各检测结果较OM组低,但趋势基本一致.结论 PEMFs在8 Hz、3.8 mT条件下可促进BMSCs的成骨分化,这可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关.
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抑制MS-1细胞Clock基因表达引起DNA甲基化水平降低
目的 探讨Clock基因对MS-1细胞甲基化水平的影响及Clock基因参与调控细胞增殖的机制.方法 采用siRNA干扰MS-1细胞Clock基因表达,检测细胞DNA甲基化水平变化,以及甲基化结合蛋白MECP2,影响细胞生长和增殖的Wnt/β-Catenin信号通路βCatenin基因的表达情况.结果 与对照组相比,抑制Clock基因表达后,MS-1细胞甲基化水平显著降低,且Mecp2和β-Catenin基因的表达均明显减少.抑制Clock基因组(CK)和阴性对照组(NC)甲基化DNA占总DNA比率分别为:(1.067±0.034)％和(1.983±0.154)％.Real-time PCR结果表明,CK组βCatenin基因相对表达量为1.00000±0.09547,NC组为1.62584±0.17167;CK组Mecp2为0.98824±0.12243,NC组为1.80979±0.18520.Western blot结果显示,CK组β-CATENIN/β-TUBLLIN的相对IOD值为1.093368±0.214433,NC组为3.305374±0.260016;CK组MECP2/β-TUBLLIN的相对IOD值为0.289546±0.104738,NC组为0.649544±0.140909.结论 Clock基因能够影响细胞甲基化水平,并且可能通过调控甲基化结合蛋白MECP2表达和Wnt/β-Catenin信号通路影响细胞增殖.
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WNT/β-catenin信号通路与Ems侵袭及预后的相关性
目的 通过比较子宫内膜异位症(EMs)患者异位子宫内膜与非EMs患者正常子宫内膜中β-catenin、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和微血管密度(MVD)的表达情况,同时结合EMs患者手术前后的血清CA125水平,探讨Wnt/β-catenin信号通路在EM s侵袭发生机制中的作用及与EM s复发的相关性.方法 收集2012年7月至2014年12月期间在余姚市人民医院妇产科住院并行手术治疗的EM s患者的异位子宫内膜组织标本100例作为观察组,另取同期因其他妇科良性疾病入院治疗患者的正常子宫内膜组织标本100例作为对照组.以免疫组化法检测β-catenin、VEGF、MMP-9和MVD在组织标本中的表达强度;检测EMs患者手术前后血清CA125的水平,结合EMs分期及术后复发情况,分析β-catenin、VEGF、MMP-9和MVD的蛋白表达强度与复发的相关性.结果 β-catenin、VEGF、MMP-9和MVD在异位子宫内膜组织和正常子宫内膜组织腺上皮细胞和间质细胞中均有表达,以腺上皮细胞表达为主.观察组β-catenin、VEGF、MMP-9和MVD的平均光密度值均显著高于对照组(t值分别为3.254、5.426、2.537、2.091,均P<0.05),各指标的表达情况与EMs分期均呈显著正相关(r值分别为0.834、0.651、0.588、0.742,均P<0.05).EMs患者术后血清CA125水平显著低于术前水平(t=8.375,P<0.05),EMs患者手术前、后血清CA125水平均与EMs分期呈显著正相关(r值分别为0.622、0.781,均P<0.05).手术1年后100例EMs患者复发11例,EMs患者复发例数与EMs分期及β-catenin、VEGF、MMP-9和MVD的表达强度均呈现一定的正相关性,但由于复发例数较少,相关性检验差异未见统计学意义(均P>0.05).结论 β-catenin、VEGF、MMP-9和MVD的高表达与EMs发病相关,表明Wnt/β-catenin信号通路对EM s的迁移和侵袭过程有一定的影响,且影响越大,术后疾病复发的可能性越大.
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人脐静脉内皮细胞通过Wnt/β-catenin信号通路响应低切应力刺激
目的 研究不同切应力对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的影响及其与动脉粥样硬化的关系.方法 采用切应力加载装置对HUVEC分别加载(0、1、15)达因/cm2切应力6、12、18、24h后,采用实时定量PCR检测该信号通路β-catenin和蓬乱蛋白2(Dvl2)的mRNA水平,免疫荧光技术检测β-catenin、Dvl2的表达和细胞定位.结果 低切应力不仅能够促进Dvl2在胞质中的募集,而且能够促进其β-catenin发生核转移.相反,层流切应力能够抑制Dvl2的表达、细胞定位以及β-catenin的核转移.结论 Wnt信号通路参与血管内皮细胞对低切应力的响应.
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过表达kisspeptin抑制MKN-45胃腺癌细胞的增殖和迁移
目的 探讨肿瘤转移抑制因子kisspeptin(KISS-1)在胃腺癌组织中的表达及对胃腺癌细胞增殖、迁移能力的影响.方法 实时定量PCR和Western blot法分别检测50例胃腺癌组织和对应的癌旁组织中kisspeptin的mRNA和蛋白水平.分别将kisspeptin小干扰RNA(kisspeptin-siRNA)和对照小RNA(control-siRNA)、kisspeptin过表达载体(pEGFP-N1-kisspeptin)和对照空载体(pEGFP-N1)转染至MKN-45胃腺癌细胞中,培养48 h后,Western blot法检测细胞中kisspeptin、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、MMP-2、β联蛋白(β-catenin)、C-myc蛋白水平,MTT法检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力.用Wntt/β-catenin信号通路抑制剂FH535作用于胃腺癌细胞后,MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 Kisspeptin在胃腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织.与空载体组相比,过表达kisspeptin后,MKN-45细胞存活率和迁移率、MMP-9、MMP-2、β-catenin、C-myc水平均明显降低;与control-siRNA组细胞相比,敲低kisspeptin水平后,细胞存活率和迁移率、MMP-9、MMP-2、β-catenin、C-myc水平明显增加.FH535处理后的胃腺癌细胞增殖、迁移趋势与过表达kisspeptin细胞一致.结论 Kisspeptin在胃腺癌组织中低表达,kisspeptin通过Wnt/β-catenin信号通各抑制胃腺癌细胞增殖迁移能力.
关键词： 胃腺癌 kisspeptin 迁移 Wnt/β-catenin信号通路 -
抑制Wnt/β-catenin信号通路增加食管癌顺铂化疗敏感性的研究
目的:探讨抑制 Wnt/β-catenin信号通路后食管癌细胞对化疗药物顺铂敏感性的变化.方法:双链SiRNA转染干扰β-catenin基因表达；半定量RT-PCR和Western blot检测基因沉默效果；MTT细胞毒实验检测细胞的生长抑制率.结果:合成的Wnt/β-catenin SiRNA可以显著下调β-catenin mRNA和蛋白的表达水平,对内参对照基因GAPDH没有影响；对照组,SiRNA干扰组,顺铂处理组,SiRNA干扰+顺铂处理组的细胞存活率分别为(100±6.8)％、(87.3±5.2)％、(66.4±4.4)％和(41.8±3.64)％.顺铂处理组与SiRNA干扰+顺铂处理组比较细胞的存活率降低增加了大约30％.结论:干扰β-catenin的表达能显著增强食管癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性,为减少化疗药物顺铂用量和其耐药的克服带来了曙光,也为食管癌等恶性肿瘤的化学治疗开辟新途径提供了理论依据.
关键词： 食管癌 Wnt/β-catenin信号通路 化疗 顺铂 -
shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性的实验研究
目的:研究shRNA靶向沉默E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox,ZEB2)表达对肺癌细胞增殖活性的影响.方法:用shRNA-ZEB2慢病毒和shRNA阴性对照慢病毒感染肺癌细胞,Real time PCR和Western blot检测沉默效果.MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、C-myc蛋白水平.用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理沉默ZEB2的肺癌细胞,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白水平.结果:shRNA-ZEB2慢病毒可以明显沉默肺癌细胞中ZEB2的表达和转录,shRNA阴性对照慢病毒对肺癌细胞中ZEB2的表达没有影响.沉默ZEB2后的肺癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中激活型Caspase-3蛋白水平升高,β-catenin、C-myc蛋白水平降低.Wnt/β-catenin信号通路抑制剂下调沉默ZEB2的肺癌细胞株中Wnt/β-catenin信号通路的激活水平,同时可以降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,促进细胞中激活型Caspase-3的表达.结论:shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性.
关键词： 肺癌 ZEB2 Wnt/β-catenin信号通路 增殖 凋亡 -
沉默ACY-1基因表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响
目的:初步探索氨基酰化酶1(ACY-1)与结直肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭的关系以及作用机制.方法:小干扰RNA(siRNA)技术沉默结直肠癌细胞中ACY-1基因的表达,转染至SW480细胞中,分为对照组、si-NC组、si-ACY-1组,荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹试验(Western Blot)检测转染效果;用四甲基偶氮唑盐微量(MTT)实验检测干扰ACY-1基因表达对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Transwell法检测细胞的侵袭,Western Blot检测Ki-67、Caspase-3、β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的蛋白水平.结果:Western Blot检测结果显示si-ACY-1组细胞中ACY-1蛋白的表达量显著低于对照组(P＜0.05).干扰ACY-1表达显著抑制细胞的增殖(P＜0.05)和Ki-67蛋白水平,促进其凋亡(P＜0.05),增加Caspase-3蛋白水平,降低细胞的侵袭能力(P＜0.05).si-ACY-1组细胞中β-catenin、c-Myc、Cyclin D1的蛋白水平显著降低(P＜0.05).结论:沉默ACY-1抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭,诱导其凋亡,其作用与Wnt/β-catenin信号通路及其下游靶基因的激活有关,为结直肠癌的治疗提供新的治疗靶点.
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WWTR1对结直肠癌细胞凋亡及侵袭能力的影响
目的:探讨含有WW结构域的转录调节子1(WWTR1)对结直肠癌细胞凋亡、侵袭能力的影响及机制.方法:Western blot检测人结直肠癌LOVO、SW480、HCT116细胞中WWTR1的蛋白表达;NC-siRNA和WWTR1-siRNA转染SW480细胞,不做任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后收集细胞,Western blot检测各组细胞中WWTR1的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;BioCoat Matrigel invasion chamber试剂盒检测细胞的侵袭能力;Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved caspase3、侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和Cyclin D1的表达情况.结果:SW480细胞中WWTR1的蛋白表达高,选择作为后续的研究对象;RNAi能显著降低WWTR1的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,WWTR1-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高,细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低(P＜0.01).结论:RNAi沉默WWTR1的表达可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导SW480细胞凋亡,降低细胞的侵袭能力.
关键词： WWTR1 结直肠癌 凋亡 侵袭 Wnt/β-catenin信号通路 -
Wnt/β-catenin信号通路激活诱导食管癌Eca-109细胞miRNA表达谱的研究
目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路对食管鳞癌Eca-109细胞系miRNA表达的影响,为靶向该通路相关miRNA治疗提供实验依据.方法:食管癌Eca-109细胞分别以培养基终浓度10ng/ml、20ng/mlWNT3a处理48小时,细胞免疫荧光、Western-blot、RT-PCR检测β-catenin表达水平；芯片检测WNT3a处理组和对照组miRNA表达谱；qRT-PCR验证miRNAs表达水平.结果:WNT3a可上调食管癌细胞β-catenin mRNA和蛋白水平,增加其细胞核内分布；芯片检测经qRT-PCR验证,WNT3a处理后食管癌Eca-109细胞相对于未处理组miR表达改变,其中miR-21(3.87倍,P=0.002)、miR-638(2.90倍,P=0.016)显著升高；miR-107(0.18倍,P=0.003)、miR-99b(0.33倍,P=0.019)明显降低,差异均具有统计学意义.结论:Wnt/β-catenin信号通路激活影响食管癌Eca-109细胞miRNAs表达,提示Wnt/β-catenin信号通路的功能也可能通过调控相关miRNA表达参与实现.
关键词： Wnt/β-catenin信号通路 食管癌 miRNA Wnt3a -
白藜芦醇对围绝经期抑郁症模型小鼠行为及Wnt/β-catenin信号通路主要蛋白表达的影响
目的:探讨白藜芦醇(RSV)对围绝经期抑郁症模型小鼠行为学影响及相关机制.方法:清洁级昆明小鼠随机分为假手术组、围绝经期抑郁症模型组、氟西汀+雌激素组(3 mg/kg +0.15 mg/kg)、白藜芦醇低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg),每组10只.采用小鼠卵巢切除(Ovx)联合慢性不可预知性温和应激(CUMS)法制备围绝经期抑郁症动物模型.各给药组于每日应激前1h灌胃给药,其余各组给予等体积生理盐水,共计21 d.采用旷场实验(OFT)、悬尾实验(TST)及体质量测试(BWM)观察小鼠行为学变化,采用Western Blot法检测脑组织Wnt1、GSK-3β、β-catenin、CyclinD1蛋白表达.结果:与假手术组比较,围绝经期抑郁症模型组小鼠有抑郁样行为,表现为OFT自发活动及探索行为减少、TST行为绝望时间增加、体质量测试增加缓慢(P＜0.01);脑组织Wnt1、β-catenin、CyclinD1蛋白表达减少,GSK-3β蛋白表达增加(P＜0.01).给予不同剂量白藜芦醇治疗后,均可抑制围绝经期抑郁症模型小鼠抑郁样行为,表现为OFT自发活动及探索行为增加,TST行为绝望时间减少,体质量增加迅速(P＜0.01);脑组织Wnt1、β-catenin、CyclinD1蛋白表达增加,GSK-3β蛋白表达减少(P＜0.01);各剂量组组间比较,以中剂量较为明显(P＜0.05).结论:白藜芦醇可改善围绝经期抑郁症模型小鼠抑郁样行为,其机制与改善脑组织Wnt1、GSK-3β、β-catenin及CyclinD1蛋白表达有关.
关键词： 白藜芦醇 围绝经期抑郁症 雌激素 Wnt/β-catenin信号通路 小鼠 -
甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤模型wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响
目的:研究甲基强的松龙对急性脊髓损伤(SCI)大鼠模型wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响.方法:SD大鼠48只随机分为,甲基强的松龙处理组(Meth)、生理盐水处理组(Salin)和假手术组(Sham,仅进行椎板切除术).Meth(甲基强的松龙,30 mg/kg)和Saline(生理盐水,等量)组通过Allens法建立急性SCI模型后经尾静脉立即注射,并在SCI后的1d和2d相同时间点各注射1次.SCI模型建立后用尼氏染色(Nissl)观察神经细胞变化,用Western Blot检测wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和GSK-3β的表达,用免疫荧光技术观察凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-6表达,进行统计学处理.结果:实验组SCI后7d,尼氏染色观察到Meth组前角运动神经元形态和数量得到明显改善(P＜0.01),同时对损伤区域修复有明显促进作用.SCI后3d和7d,Western Blot显示β-catenin表达水平明显(P＜0.05),而GSK-3β蛋白表达则降低(P＜0.05);免疫荧光观察到,甲基强的松龙处理组凋亡活动被明显抑制,表现为凋亡蛋白caspase-3和caspase-6降低(P＜0.01).结论:结果表明,甲基强的松龙可能通过激活wnt/β-catenin信号通路影响一些相关蛋白表达,从而抑制大鼠急性SCI神经细胞的凋亡和促进运动功能恢复.
关键词： 脊髓损伤 甲基强的松龙 Wnt/β-catenin信号通路 细胞凋亡 SD大鼠 -
毛囊干细胞与组织工程研究进展
毛囊干细胞研究取得突破性进展的标志是由孙同天、Lavker和Cotsarelis等提出了隆突激活假说,明确了其定位的部位,是少数几种成体干细胞首先被明确定位的干细胞之一,并逐步得到了验证.毛囊干细胞不仅可以分化为毛囊上皮细胞,而且可以分化为皮脂腺细胞、表皮角质形成细胞,其分化过程是干细胞分化为短暂倍增细胞,后分化为终末分化细胞.近年来进一步证明了毛囊隆突部也是多种干细胞的居住地,包括黑素干细胞,和毛囊干细胞存在同步化激活的机制.Wnt/β-catenin是毛囊发育、再生循环的基本信号通路,使毛囊在再生过程出现着色一致的毛发.诱导和重建毛囊形成是组织工程皮肤主要的目标之一,毛乳头细胞的凝集性生长特性是诱导毛囊形成的条件,因此,维持毛乳头细胞凝集性生长特性主要有细胞团块法、低黏附性培养板(或高分子材料膜)法、悬滴培养法和胶原凝胶成球法,以实现体外重建毛乳头的目的.毛囊组织工程在体外还不能真正诱导形成,现有的毛囊再生或新生的成功方法还是须移植到动物体内,才能形成完整毛囊并产生毛发.主要方法有移植小室法、混合游离细胞注射法和皮瓣法.诱导毛囊形成比较成功的细胞是啮齿类动物来源的胚胎或新生鼠毛囊细胞和人胚胎毛囊细胞,成年人头皮毛囊来源细胞目前仍未能诱导出毛囊新生或再生.
关键词： 毛囊干细胞 组织工程 毛囊发育 毛囊重建 Wnt/β-catenin信号通路 -
Wnt1在口腔黏膜下纤维性变中的表达
目的:研究wnt1在口腔黏膜下纤维性变(OSF)患者治疗前后的表达并探讨其在OSF发生发展中的作用.方法:40例OSF中期患者采用曲安奈德+丹参局部封闭治疗4周,治疗前及第5周复诊时记录VAS及张口度,取唾液及龈沟液ELISA检测wnt1表达,实时荧光定量PCR检测OSF病变颊黏膜中wnt1 mRNA表达.结果:治疗前OSF组wnt1表达[颊黏膜定量PCR(36.89±10.40)×10-5,唾液浓度(61.61 ±4.45)ng/L,龈沟液浓度(56.20±3.65) ng/L]均高于正常组[颊黏膜定量PCR(4.63±1.53)×10-5,唾液浓度(40.26 ±3.00) ng/L,龈沟液浓度(53.45±1.74) ng/L] (P＜0.01);OSF组经治疗后,唾液与龈沟液中wnt1表达均降低,且与OSF临床严重程度呈正相关(P＜0.05).结论:wnt1可能参与OSF的发生发展,其在唾液与龈沟液中的实时监测有望成为评价OSF诊疗的无创性检控手段之一.
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Wnt1、β-catenin在硝苯地平引起的药物性牙龈增生中的表达
目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin在硝苯地平引起的药物性增生的牙龈组织中的表达.方法:选择正常牙龈对照组、(未服药)高血压牙龈增生组、硝苯地平引起的药物性牙龈增生组各10例,用Western-Blot和RT-PCR检测牙龈组织中Wnt1、β-catenin的表达.结果:药物性牙龈增生组的牙龈组织中Wnt1、β-catenin蛋白及mRNA表达水平显著高于正常牙龈对照组(P＜0.05)和高血压牙龈增生组(P＜0.05).结论:硝苯地平引起的药物性牙龈增生的牙龈组织中Wnt1、β-catenin表达水平增高,可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进牙龈成纤维细胞的增殖导致牙龈纤维化.
