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香加皮杠柳苷通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导结肠癌细胞SW480凋亡
背景与目的:Wnt/β-catenin信号通路在人类肿瘤尤其在大肠癌的发生发展中起着重要作用.本研究分析了香加皮杠柳苷(periplocin extracted fromcortex periplocae,CPP)对人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用,及对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用.方法:MTT法检测CPP对SW480细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期的变化和凋亡.Western blot法检测CPP处理组与对照组细胞总蛋白、细胞浆蛋白及细胞核蛋白中β-catenin表达变化,电泳迁移率改变法分析cPP作用后SW480细胞核TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力变化.半定量RT-PCR法检测CPP作用后细胞中β-catenin、survivin、c-myc和cyclin D1 mRNA的表达.结果:CPP明显抑制SW480细胞增殖(P<0.01),并呈时间和浓度依赖性;0.5 μg/mL CPP可将SW480细胞阻滞于Go/G1期,并诱导细胞凋亡(P<0.05).CPP作用后SW480细胞总蛋白、胞浆蛋白及细胞核蛋白中的β-catenin表达均明显降低(P<0.01),细胞核中TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力受到抑制,其下游靶基因mRNA表达水平下降(P<0.01),而β-catenin mRNA表达未见明显改变.结论:CPP可明显抑制SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与抑制细胞Wnt/β-catenin信号转导通路有关.
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高铜对于肝细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的 研究高铜对于Wnt/β-catenin信号通路及氧化应激的影响.方法 不同剂量的CuSO4培养BRL-3A细胞;用MTT法检测不同剂量CuSO4作用不同时间点对BRL-3A细胞生长和增殖的影响;用流式细胞仪检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化;用酶标仪检测丙二醛的含量和超氧化物歧化酶的活性;Western Blot法检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达情况.结果 ①MTT实验结果显示CuSO4在一定时间和浓度下对BRL-3A细胞生长和增殖有明显抑制作用(P<0.01);②流式细胞仪检测实验结果显示CuSO4可诱导BRL-3A细胞内产生大量的活性氧和显著降低线粒体膜电位(P<0.01);③酶标仪检测实验结果显示CuSO4可诱导MDA含量上升和SOD活性降低(P<0.05); ④Western Blot法检测实验结果显示CuSO4可显著降低BRL-3A细胞内总蛋白β-catenin、p-Ser 9-GSK-3β的表达(P<0.01),增加细胞内总蛋白GSK-3β、DKK1、Dishevelled3的表达,以及降低细胞核内蛋白p-(S33+S37)-β-catenin、c-Myc的表达(P<0.01). 结论 高铜能诱导肝细胞内线粒体氧化应激并且引起Wnt/β-catenin信号通路失活,从而诱导肝细胞损伤的发生.
关键词： Wilson病 Wnt/β-catenin信号通路 高铜 氧化应激 肝细胞损伤 -
R-脊椎蛋白3对小鼠神经干细胞增殖及Wnt/β-catenin通路的影响
目的 观察R-脊椎蛋白3(Rspo3)对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖的影响及其机制.方法 分离、悬浮培养孕14～15 d的CD1胎鼠大脑侧脑室下区(SVZ)NSCs并通过免疫荧光法鉴定.取第3代处于对数生长期的NSCs分为实验组和对照组,体积各为1 mL.实验组添加储存浓度为50 μg/mL的Rspo3蛋白0.8μL(终浓度40 ng/mL),对照组添加等体积的NSCs培养液.干预后6h通过BrdU细胞渗入实验法检测2组NSCs增殖情况.干预后4h和8h采用Western blotting实验检测β-catenin蛋白的表达. 结果 免疫荧光染色结果显示90％以上细胞呈巢蛋白和SOX2阳性.经过诱导分化后,部分细胞呈神经元核抗原或胶质纤维酸性蛋白阳性,证明实验中提取分离的细胞为NSCs.BrdU细胞渗入实验法显示实验组细胞增殖率为1.56±0.03,明显高于对照组(1.04±0.04),差异有统计学意义(P＜0.05).Western blotting实验显示4h和8h时实验组 β-catenin蛋白相对表达量分别为1.09±0.10、1.20±0.13,对照组分别为0.56±0.05、0.83±0.04,实验组明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 Rspo3蛋白可在体外促进小鼠NSCs增殖,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.
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龟板提取物激活wnt/β-catenin通路促大鼠触须部皮肤创面修复
目的 探讨龟板提取物(Plastrum Testudinis extracts,PTE)对大鼠触须部皮肤创面修复中Wnt/β-catenin通路的调控.方法 分离培养SD乳鼠毛囊干细胞(Hair follicle stem cells,HFSCs),免疫荧光检测细胞表面标志物CD34、CD71表达,CCK-8法检测PTE对HFSCs增殖的影响,Western-blot检测PTE对HFSCs中Gsk-3β、β-catenin蛋白表达的作用;制作SD大鼠触须部皮肤缺损模型,随机分为空白对照组、 实验对照组、 阳性药物对照组、PTE组,测算动物创面面积和愈合率,病理学及免疫荧光检测创面组织.结果 培养的细胞形态饱满,折光性强,呈铺路石样,细胞表面CD34及CD71阳性.CCK-8显示PTE对HFSCs有促增殖作用(P<0.01).PTE作用于HFSCs后,Gsk-3β 蛋白(P<0.05)下降的同时 β-catenin蛋白表达上升(P<0.001).术后7 d各组创面基本愈合,PTE组及阳性药物对照组表皮较其他组薄,毛囊周围有新生表皮参与修复,表皮与真皮结合牢固,真皮无炎性细胞,组织结构排列规则,促修复效果优于其他各组;PTE组修复表皮内Gsk-3β 蛋白下降而 β-catenin蛋白表达上升.结论 PTE可通过激活HFSCs中Wnt/β-catenin通路促进SD大鼠触须部创面修复.
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养肝化瘀颗粒抗肝癌作用及其机制研究
目的 探讨养肝化瘀颗粒抗肝癌作用及其机制.方法 建立小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,随机分为空白对照组,模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU,10 mg· kg-1,ip)组,养肝化瘀颗粒高、中、低(6,3,1.5 g·kg-1,ig)剂量组,连续给药10d.观察各组小鼠的肿瘤生长情况及血清甲胎蛋白(AFP)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)水平;HE染色观察瘤组织的病理改变;Western Blot法检测β-连环蛋白(β-eatenin)、活化型半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspase3)蛋白表达,并进一步通过氯化锂(LiCl)激动Wnt/β-catenin信号通路,研究其抑癌作用机制.结果 养肝化瘀颗粒高、中、低剂量和阳性药5-FU作用后,抑瘤率分别为41.29％、50.03％、48.15％、52.83％;与模型组比较,各给药组血清肿瘤标志物AFP均有所下降(P＜ 0.01,P＜0.05),TSGF也有所下降,其中养肝化瘀颗粒中剂量组与5-FU组为明显(P＜0.01);瘤组织出现不同程度的坏死,与模型组比较,养肝化瘀颗粒中剂量组为明显.养肝化瘀颗粒可以下调HepG2细胞、瘤组织中β-catenin蛋白表达水平,上调Cleaved-Caspase3蛋白表达水平.进一步通过LiCl激动Wnt/β-catenin信号通路,与空白对照组比较,LiCl组β-catenin蛋白表达显著上调(P＜0.05),Cleaved-Caspase3蛋白表达则下调(P＜0.05);与LiCl组比较,LiCl+养肝化瘀颗粒含药血清(10％、20％浓度)组β-catenin蛋白表达显著下调(P＜0.01),Cleaved-Caspase3蛋白表达则显著上调(P＜0.01).结论 养肝化瘀颗粒显著抑制小鼠H22皮下移植瘤的生长,可能是通过抑制β-catenin蛋白表达,下调Wnt/β-catenin信号通路,进而诱导肝癌细胞凋亡发挥抗肿瘤作用.
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人甲状旁腺激素（1-34）在人成骨肉瘤细胞中对基质Gla蛋白及Wnt/β-catenin信号通路的调节作用
目的：观察人甲状旁腺激素（PTH）的N端活性片段PTH（1-34）对人成骨肉瘤细胞MG63基质Gla蛋白（MGP）表达的影响，以及PTH通过Wnt/β-catenin信号通路介导MGP表达调控的作用，探讨PTH（1-34）在防治骨质疏松症作用中可能的分子机制。方法（1）用不同浓度PTH（1-34）（10-9、10-8、10-7 mol/L），单独或联合Wnt/β-catenin信号通路抑制剂DKK-1（200 ng/mL）干预MG63细胞；（2）检测碱性磷酸酶（ALP）染色及活力测定用于判断细胞分化情况；（3）MGP及Wnt/β-catenin信号通路各组分的mRNA及蛋白的表达分别采用实时定量RT-PCR及Western blotting方法。结果（1）PTH（1-34）上调MGP基因的表达， MGP mRNA的表达分别是对照组的2.56倍、4.14倍、7.81倍（P<0.05或P<0.01），且呈剂量依赖性增高；（2）PTH增强MG63细胞ALP活力，Dkk-1抑制ALP活性，Dkk-1与PTH联用部分阻断PTH上调ALP活力（P<0.05）；（3）PTH上调MGP及Wnt/β-catenin信号通路中相关因子LRP5、β-catenin、Runx2 mRNA及蛋白水平，其mRNA分别是对照组的2.65、4.01、3.48倍（P<0.05或<0.01）；DKK-1对PTH（1-34）促MGP表达没有影响，但大部分阻断了Wnt/β-catenin信号通路中相关因子的表达。结论 PTH（1-34）能明显上调MGP及Wnt/β-catenin信号通路中相关因子的表达，Wnt/β-catenin信号通路和MGP在PTH调节骨代谢中起重要作用。
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下调miR-21可以增强食管癌TE-1细胞的放射敏感性
目的 研究miR-21下调对食管癌TE-1细胞的放射敏感性的影响.方法 采用慢病毒介导的方法将含有反义miR21表达基因的载体转染至食管癌TE-1细胞系,嘌呤霉素筛选稳定下调miR21的食管癌细胞亚系,命名为TE-1-miR21-；荧光定量PCR检测TE-1-miR21-中miR21的相对表达量；细胞克隆形成实验测定TE-1和TE-1-miR21-细胞的放射敏感性；RT-PCR和Western-blot法测定TE-1和TE-1-miR21-细胞中β-catenin的变化；流式细胞术检测TE-1和TE-1-miR21-细胞中p75NTR+细胞的比例.结果 成功构建稳定下调miR21的食管癌细胞亚系TE-1-miR21-,荧光定量PCR结果显示miR21表达量明显下调；细胞克隆形成实验提示TE-1-miR21-细胞较TE-1细胞的放射敏感性明显增强；RT-PCR结果分析显示,TE-1-miR21-细胞与TE-1细胞的β-catenin mRNA的表达量无明显差异；Western blot的结果分析显示,TE-1-miR21-细胞在接受高剂量照射(8Gy,10 Gy)时,β-catenin蛋白量明显下降；流式细胞仪分析结果显示,TE-1-miR21-细胞中p75NTR+细胞的比例较TE-1细胞明显降低.结论 下调miR21可以增强食管癌TE-1细胞的放射敏感性；下调miR21增强放射敏感性的机制可能与wnt/β-catenin信号通路的活化程度降低以及食管癌TE-1细胞中p75NTR+细胞比例减少有关.
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Wnt/β-catenin信号通路在肝细胞癌中的促进作用
Wnt/β-catenin信号通路与肿瘤有着密切的关系，此通路的异常活化参与人类多种癌症的发病过程。肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）在全球肿瘤中死亡率位居第3，但其发生发展的分子机制仍不清楚。目前，研究表明Wnt/β-catenin信号通路及其他相互作用信号通路，以及乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒相互作用蛋白等共同在HCC的发生发展过程中起着关键作用，因而，揭示该信号通路在HCC中的作用可为其早期诊断、治疗以及预后提供理论基础。现对Wnt/β-catenin信号通路在HCC中的作用及目前研究状况作一简要综述。
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GSK3对人脑胶质瘤增殖的影响及基因表达谱富集分析
目的 研究GSK3(glycogenkinase3)对胶质瘤分化增殖的影响,并对其进行基因表达相关通路富集分析.方法 利用Wnt/β-catenin信号通路激活剂AZD2858,通过抑制GSK3活性的方式激活β-catenin介导的转录.利用GO(gene ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库对GSK3抑制前后表达差异显著的基因进行功能类别和通路分析.结果 抑制GSK3活性可以引起P53、Wnt等多条信号通路的协同作用,并且通过正向调控细胞死亡相关功能基因Caspase 3、FAS、p21,负向调控细胞周期和细胞分裂相关功能基因CyclinA、Cyclin B、VEGF、Survivin,终抑制人脑恶性胶质瘤U87的增殖.结论 利用小分子化合物AZD2858抑制GSK3活性可激活人脑恶性胶质瘤中的Wnt/β-catenin信号通路,对胶质瘤细胞增殖起到抑制作用.
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龟板提取物调控毛囊干细胞Wnt/BMP信号通路促进大鼠压疮修复
[目的]基于毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSCs)Wnt/BMP信号通路,观察龟板提取物(CPTE)对大鼠压疮皮肤的修复效果.[方法](1)体内实验:将40只SD大鼠随机分为模型对照组、溶剂对照组、CPTE高浓度组、CPTE低浓度组,每组10只.复制SD大鼠压疮模型.测算创面愈合率,采用苏木素—伊红(HE)染色观察大鼠压疮病理变化,采用免疫荧光染色法检测大鼠创面皮肤组织中β-catenin、骨形态发生蛋白4(BMP4)的表达.(2)体外实验:分离培养SD乳鼠HFSCs,采用免疫荧光鉴定细胞表面标志物细胞角蛋白15(CK15)的表达,采用CCK-8法观察CPTE对HFSCs增殖能力的影响,采用Western blot法观察CPTE对HFSCs中β-catenin、BMP4表达的影响.[结果]CPTE 2组大鼠压疮愈合情况优于其他2组.培养的HFSCs细胞表面CK15呈阳性表达;3、10、30μg·mL-1 CPTE对HFSCs有促增殖作用;与空白对照组比较,CPTE 3、10μg·mL-1组HFSCs中β-catenin蛋白表达上升,BMP4蛋白表达下降(P<0.05或P<0.01或P<0.001).[结论]CPTE可能通过调控HFSCs中Wnt/BMP通路促进SD大鼠压疮创面修复.
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从Wnt/β-catenin通路研究滋肾降糖丸对糖尿病大鼠骨质疏松的防治作用
[目的]观察滋肾降糖丸对糖尿病大鼠骨代谢指标、骨密度及骨组织形态的影响及其对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路的调控作用,探讨其对糖尿病介导的骨量减少及骨质疏松形成的防治机制.[方法]采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立糖尿病大鼠模型.将造模成功的大鼠随机分为模型组、中药组、西药组,另设正常组,每组10只.中药组大鼠给予滋肾降糖丸浓缩液(剂量为5.85 g·kg-1·d-1)灌胃,西药组大鼠给予雷奈酸锶浓缩液(剂量为0.9 g·kg-1·d-1)灌胃,正常组与模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃.干预3个月后,观察各组大鼠生化指标的变化;采用苏木素—伊红(HE)染色法观察各组大鼠骨组织形态变化;采用实时定量PCR(qPCR)方法检测骨组织Wnt3α、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)、β-catenin、Runt相关转录因子2(RUNX-2)、Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)、硬化蛋白(SOST)基因表达水平.[结果](1)与模型组比较,中药组大鼠空腹胰岛素(Fins)、血钙(BC)、血磷(BP)、骨特异性碱性磷酸酶(B-ALP)、骨钙素(OC)、骨密度(BMD)水平均升高(P<0.01),空腹血糖(FBG)、β-I型胶原羧基端肽(β-CTX)、1型前胶原酶N端肽(P1NP)、骨保护素(OPG)水平均明显降低(P<0.01),骨组织Wnt3α、LRP-5、β-catenin、RUNX-2基因表达量升高(P<0.01),而DKK-1及SOST基因表达量无显著性差异(P>0.05).(2)中药组骨组织结构紊乱较模型组明显减轻,基本接近正常.[结论]滋肾降糖丸可能通过上调Wnt/β-catenin信号通路中重要分子Wnt3α、LRP-5、β-catenin、RUNX-2的基因表达,促进成骨细胞的分化,抑制骨破坏,改善骨组织形态,增加骨密度,调节骨代谢紊乱,进而发挥对糖尿病大鼠骨量减少和骨质疏松形成的防治作用.
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姜黄素通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进软骨细胞增殖的研究
[目的]探讨姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路对软骨细胞增殖的影响.[方法]取4周龄雌雄新西兰大白兔各1只,采用酶消化法构建体外软骨细胞培养体系;应用形态学观察、甲苯胺蓝染色方法进行细胞形态学鉴定;采用细胞计数试剂盒法(CCK-8法)检测不同浓度姜黄素给药24 h后对软骨细胞增殖的影响;将终浓度为5μmol/L、10 μmol/L的姜黄素分别作用于软骨细胞12h、24 h后,采用Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路中Wnt 2、GSK-3β、β-catenin蛋白表达情况.[结果]当姜黄素的浓度为10 μmol/L时,姜黄素对软骨细胞的促增殖作用为明显.姜黄素能够促进Wnt/β-catenin信号通路中Wnt 2及β-catenin蛋白表达量,且10 μmol/L组较5μmol/L组、24 h组较12 h组的表达量更高,24 h两浓度组与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),但12 h的两浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),而GSK-3β结果则正好与上述2种蛋白表达结果相反.[结论]姜黄素对软骨细胞具有一定的保护作用,是中药姜黄发挥抗骨关节炎作用的有效成分之一.
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Wnt/β-catenin信号通路在肾缺血再灌注大鼠中的表达及ICG-001阻断对慢性肾间质纤维化的作用
目的 观察Wnt/β-catenin信号通路在肾缺血再灌注大鼠模型中不同时间的表达及ICG-001阻断Wnt/β-catenin信号通路对慢性肾间质纤维化的作用.方法 将SD大鼠分为4组,假手术组(Sham)、IRI 7 d组、IRI 14 d组及ICG+ IRI组.假手术组不夹闭左侧肾动脉;IRI 7 d组、IRI 14 d组及ICG+ IRI组用无创血管夹夹闭左侧肾动脉,35 min后去除血管夹;ICG+IRI组于术后第2天开始腹腔注射ICG-001.检测4组大鼠肾功能,Western blot检测肾组织β-链蛋白(β-catenin)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平,免疫组化观察β-catenin表达部位,生化染色测胶原含量,Masson染色观察病理改变.结果 与假手术组相比,IRI7 d组Fibronectin、α-SMA、胶原含量无明显增高,病理无明显肾小管间质纤维化;而IRI 14 d组Fibronectin、α-SMA的蛋白表达水平则明显增高,胶原含量增多,肾功能减退,病理显示肾小管间质纤维化.与假手术组相比,IRI7 d组β-catenin表达增高,IRI 14 d组较IRI7 d组增高更显著.与IRI 14 d组相比,ICG+ IRI组β-catenin、Fibronectin、α-SMA的蛋白表达水平明显降低,胶原含量减少,肾功能好转,病理显示肾小管间质纤维化程度减轻.结论 Wnt/β-catenin信号通路在IRI术后7d已激活,早于肾间质纤维化出现;ICG-001阻断Wnt/β-catenin信号通路可减轻肾缺血再灌注所致慢性肾间质纤维化.
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Survivin基因沉默促进胃癌细胞凋亡及其机制研究
目的 研究凋亡抑制蛋白人生存素(Survivin)基因mRNA、蛋白质在胃癌和癌旁组织的表达量;以及siRNA-Survivin转染人胃癌MKN-45细胞对其增殖、凋亡的影响和机制研究.方法 使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹实验(Western Blot)检测Survivin mRNA和蛋白在胃癌和癌旁组织的表达量;利用脂质体Lipofectamine 2000将siRNA-Survivin(si-Survivin),错配siRNA(si-Control)转入人胃癌MKN-45细胞中,未转染细胞为空白对照(Normal),Western Blot检测Survivin蛋白表达量;CCK8实验法检测细胞的增殖速度;流式细胞术检测凋亡率;Western Blot检测Wnt/β-catenin信号通路中的关键蛋白(β-catenin、Cyclin D1)、Caspase-3蛋白的表达量,对其增殖、凋亡机制进行研究.结果 Survivin mRNA和蛋白质在胃癌组织中的表达量显著高于癌旁组织(P<0.05);siRNA-Survivin转染人胃癌MKN-45细胞可使Survivin蛋白的表达量低于si-Control组和Normal组(P<0.05);转染后si-Survivin组细胞的增殖受到抑制,尤其是72 h抑制效果明显;转染后si-Survivin组细胞凋亡率显著高于si-Control组和Normal组(P<0.05);沉默Survivin基因使Caspase-3蛋白表达量升高,β-catenin、Cyclin D1蛋白表达量降低.结论 Survivin mRNA和蛋白在胃癌中的表达量高于癌旁组织;沉默Survivin基因可通过Wnt/β-catenin信号通路以及Caspase-3蛋白的表达量抑制细胞增殖、促进其凋亡.
关键词： survivin 胃癌 增殖 凋亡 Wnt/β-catenin信号通路 -
DAPT对肺成纤维细胞表型转化中Wnt信号通路的影响
目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路与Notch信号通路之间存在间接或直接的相互作用以及该信号通路在DAPT抑制肺成纤维细胞增殖中的作用表达.方法:通过使用TGF-β1刺激SD大鼠胚肺成纤维细胞发生表型转化为肌成纤维细胞,并采用DAPT抑制Wnt/β-catenin信号通路,体外纯化肺成纤维细胞,使用细胞免疫荧光检测波形蛋白进行鉴定;分别采用5 ng/mL TGF-β1和500 nmol/L的DAPT作用于肺成纤维细胞24 h,观察其形态学改变；分别采用RT-PCR及Western blot检测wnt1、β-catenin在肺成纤维细胞经TGF-β及DAPT作用24 h后的表达情况.结果:与正常组相比较TGF-B1能显著增加肺成纤维细胞中β-catenin的表达(P＜0.05),但加用DAPT后wnt1及β-catenin在肺成纤维细胞中的表达下降(P＜0.05).结论:Wnt/β-catenin信号通路与Notch信号通路之间是存在相互关系的,TGF-β1可使肺成纤维细胞中的β-catenin表达增高；DAPT对于抑制肺成纤维细胞中的wnt/β-catenin信号通路发挥了作用.
关键词： TGF-B1 Wnt/β-catenin信号通路 DAPT 抑制 增殖 -
电针预处理对老年大鼠术后认知功能的影响及机制研究
目的 研究电针预处理对老年大鼠术后认知功能的影响及其机制.方法 健康清洁的老年雄性SD大鼠60只,将大鼠随机分为3组(n=20):对照组(C组)、单纯手术组(S组)、手术+电针刺激组(E组).E组于术前电针刺激百会、内关、曲池及足三里,每天1次,连续刺激7d;S组和E组行肝脏缺血再灌注手术.分别于术前1d和术后1、3、5、7d进行水迷宫实验,记录逃避潜伏期时间和游泳距离.检测脑脊液中Aβ-42和磷酸化tau-181蛋白及海马组织中Wnt、β-连环素(β-catenin)及磷酸化糖原合成激酶-3β(p-GSK-3β)蛋白的表达.结果 与C组比较,S、E组术后第1~7天逃避潜伏期及游泳距离明显延长(P<0.05),S、E组Aβ及p-tau-181蛋白含量增加(P<0.05),S组Wnt蛋白、β-catenin蛋白及p-GSK-3β蛋白含量减少(P<0.05),E组Wnt蛋白、β-catenin蛋白及p-GSK-3β蛋白含量明显增加(P<0.05);与S组比较,E组术后第1~7天逃避潜伏期及游泳距离明显缩短(P<0.05),E组Aβ及p-tau-181蛋白含量减少(P<0.05),E组Wnt蛋白、β-catenin蛋白及p-GSK-3β蛋白含量明显增加(P<0.05).结论 预先给予电针刺激可以明显改善老年大鼠术后认知功能,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关.
关键词： 电针 预处理 认知功能 Wnt/β-catenin信号通路 -
Axin-1在C57BL/6J小鼠肝癌模型发生过程中的表达及意义
目的：检测Wnt/β-catenin信号通路中Axin-1在化学诱导C57BL/6J小鼠肝癌模型发生过程中的表达水平，揭示Wnt/β-catenin通路与肝癌发生的关系。方法95只C57BL/6J小鼠随机分为实验组50只和对照组45只。实验组小鼠以联合二乙基亚硝胺（DEN）/四氯化碳（CCl4）/乙醇诱导建立小鼠肝癌模型，对照组未予任何特殊处理。每2周定期处死两组小鼠各5只，并取肝组织进行病理学观察，以实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术、Western blot法、免疫组化法检测并动态观察Axin-1 mRNA和蛋白水平的表达情况。结果小鼠经化学诱导20周后成功诱发小鼠肝癌并建立小鼠肝癌模型。RT-PCR和Western blot法检测显示，Axin-1 mRNA和蛋白水平的表达在诱导的第4周至第14周，实验组和同期对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）；在诱导的第16周至第20周实验组和同期对照组比较差异有统计学意义（P<0.05），且随着诱癌时间的延长，实验组Axin-1的表达逐渐降低，在诱导的第16周、第18周和第20周Axin-1 mRNA的相对表达量分别为0.421±0.083、0.278±0.042、0.120±0.028（P<0.05）。免疫组化法检测显示Axin-1在对照组各诱导期均为阳性表达，实验组从第16周开始Axin-1的表达减弱，至第20周时Axin-1几乎不表达。结论 Wnt/β-catenin信号通路可能与肝癌的发生、发展有关，其中Axin-1可能起着负性调节的作用。
关键词： 肝肿瘤 Wnt/β-catenin信号通路 Axin-1 化学诱癌 -
Wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌形成中的作用机制
宫颈癌是常见妇科恶性肿瘤之一,发病率居妇科恶性肿瘤前列,严重威胁女性的健康与生命安全.在全球女性中,宫颈癌为第三大常见肿瘤,是导致肿瘤相关死亡的第四大病因.据新统计显示,宫颈癌每年新发生病例约52万,死亡病例约28万,其中86％发生在发展中国家[1].我国每年新发生病例约14万,并逐渐呈年轻化及上升趋势[2].随着分子生物学方法在肿瘤发生发展研究中的应用,越来越多的基因和信号通路被证明与肿瘤的形成相关,其中Wnt/β-catenin 通路便是研究的重要通路之一.研究表明,Wnt/β-catenin信号通路在多种恶性肿瘤中处于激活状态,Larue等[2]认为Wnt/β-catenin的高表达参与宫颈癌肿瘤细胞的增殖、生长,并在促进宫颈癌肿瘤干细胞的增殖、成瘤性、耐药性等方面起着重要作用[3-4].因此,深入了解该信号途径与宫颈癌关系具有重要的意义.本文就Wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌形成中的作用机制综述如下.
关键词： Wnt/β-catenin信号通路 宫颈癌 作用机制 -
葛根素对成骨细胞体外增殖及Wnt/β-catenin信号通路表达的影响
目的:葛根素对成骨细胞体外增殖及Wnt/β-catenin信号通路表达的影响.方法:培养成骨细胞MC3T3-E1并分为对照组及10-6mol/L PUE组、10-7mol/L PUE组、10-8mol/L PUE组,处理24小时后检测成骨细胞标志基因、凋亡基因、Wnt/β-catenin通路基因的mRNA表达量.结果:10-6mol/L PUE组、10-7mol/L PUE组、10-8mol/L PUE组细胞ALP、Runx2、OC.Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin的mRNA表达量均显著高于对照组,caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量均显著低于对照组(P<0.05);且葛根素剂量越大,细胞中ALP、Runx2、OC、Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin的mRNA表达量越高,caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量越低(P<0.05).结论:葛根素能够有效促进成骨细胞的增殖及Wnt/β-catenin通路的活化.
关键词： 葛根素 成骨细胞 增殖 凋亡 Wnt/β-catenin信号通路 -
骨关节炎软骨细胞中骨桥蛋白的表达调控研究
目的：检测骨关节炎(OA)患者骨桥蛋白(OPN)的表达，探讨Wnt/β-catenin信号通路对OPN的表达调控作用。方法分离OA患者(骨关节炎组12例)的软骨细胞，并取非OA患者软骨细胞作为正常对照(8例)，荧光定量PCR检测OPN基因的表达；基因转染双链siRNA干扰β-catenin基因的表达；Western blot实验检测β-catenin和OPN蛋白的表达改变。结果骨关节炎组和正常对照组软骨细胞OPN的mRNA表达量分别为(0.642±0.155)和(0.226±0.077)，两组比较差异有统计学意义(t=6.74，P<0.01)。特异性靶向双链siRNA可以下调β-catenin的表达，Western blot检测显示下调β-catenin蛋白的表达后软骨细胞OPN蛋白的表达也出现了相应的下调。结论骨关节炎患者中存在骨桥蛋白的表达上调，骨桥蛋白的上调受到Wnt/β-catenin通路的调控。
关键词： 骨关节炎 骨桥蛋白 Wnt/β-catenin信号通路
