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梅花鹿茸Ⅰ型胶原对骨质疏松大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的 研究梅花鹿茸I型胶原(SDC-I)对骨质疏松大鼠Wnt/β-Catenin信号通路的影响,探索SDC-I对骨质疏松大鼠的保护作用机制.方法 应用去势法建立大鼠骨质疏松模型,随机分成空白组,模型组,SDC-I低、中、高剂量组(0.05、0.1、0.2 g/kg),灌胃给药90 d后取材.应用X线仪及骨骼强度仪检测大鼠股骨密度(BMD)和大载荷量;采用ELISA法检测大鼠血清中血清骨钙素(BGP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)水平;应用Real Time PCR(RT-PCR)技术检测Wnt/β-Catenin信号通路中 β-链蛋白(β-Catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)的mRNA表达水平.结果 与模型组相比,SDC-I作用的各组大鼠BMD、大载荷量显著增高;血清中BGP水平增高而TRACP水平减低;Wnt通路相关 β-Catenin、LRP5的mRNA表达水平显著增高.结论 SDC-I可显著提高骨质疏松大鼠的骨密度,其保护机制与上调骨质疏松大鼠骨中 β-Catenin、LRP5的mRNA表达,激活Wnt/β-Catenin信号通路相关.
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绿茶提取物表没食子儿茶素-3-没食子酸酯对人卵巢癌HO-8910细胞增殖及Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响
目的 研究绿茶提取物表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(Epigallocatechin-3 gallste,EGCG)对人卵巢癌HO-8910细胞增殖及细胞内Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响,探讨EGCG抑制卵巢癌细胞生长的机制.方法 用不同浓度的EGCG(10、20和40 μg/ml)处理体外培养的人卵巢癌HO-8910细胞不同时间(24、48和72 h),采用MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期的变化;RT-PCR和Westem blot分别检测细胞中β-catenin和下游靶基因CyclinD1 mRNA的转录水平和蛋白的表达水平.结果 EGCG可明显抑制HO-8910细胞的增殖活力,且抑制作用呈剂量-时间依赖性(P＜0.05);40μg/mlEGCG干预后,HO-8910细胞主要阻滞于G0/G1期,且在48 h阻滞作用为明显;EGCG可显著降低HO-8910细胞中β-catenin和CyclinD1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,且呈剂量-时间依赖性(P＜0.01).结论 EGCG可抑制HO-8910细胞的增殖,其机制可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有关,提示EGCG可能在卵巢癌的治疗中具有一定的应用前景.
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姜黄素对人骨肉瘤MG63细胞增殖及Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响
目的 观察姜黄素( Curcumin)对人骨肉瘤MG63细胞增殖及细胞内Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响,探讨姜黄素抑制MG63细胞生长的机制.方法 体外培养MG63细胞,用不同浓度的姜黄素处理细胞不同时间,MTT法检测MG63细胞的增殖活力；RT-PCR法检测细胞内β-catenin和CyclinD1基因mRNA的转录水平；Western blot检测β-catenin和CyclinD1蛋白的表达.结果 姜黄素可抑制MG63细胞的增殖,其抑制作用呈剂量-时间依赖性,当姜黄素浓度为20.00 μmol/L时,对细胞增殖的抑制作用明显；姜黄素可显著降低细胞内β-catenin和CyclinD1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,且呈剂量-时间依赖性.结论 姜黄素可抑制MG63细胞增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性实现的,这将为临床治疗骨肉瘤提供新的思路.
关键词： 姜黄素 骨肉瘤 细胞增殖 Wnt/β-catenin信号通路 -
硼替佐米对急性髓性白血病细胞凋亡及SALL4基因和Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的 探讨硼替佐米( Bortezomi,Bor)对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株和急性红白血病TF1细胞株增殖、凋亡及SALL4基因和Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因C-myc、CCDN1表达的影响.方法 分别用10、30、50 nmol/L的Bor处理NB4和TF1细胞12、24、48 h,并设对照组(不加Bor).采用MTT法检测细胞的增殖活力；流式细胞术检测细胞凋亡率；RTPCR和荧光定量PCR法检测细胞中SA LL4、C-myc和CCDN1基因的表达.结果 Bor可抑制两种细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性,NB4和TF1细胞经Bor处理48 h的IC50值分别为23.97和25.36 nmol/L.Bor可诱导两种细胞凋亡,且呈剂量依赖性,经30和50 nmol/L Bor处理24 h的NB4细胞的凋亡率与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05)；经50 nmol/L Bor处理24 h的TF1细胞的凋亡率与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).Bor可显著抑制两种细胞中SA LL4基因及C-myc、CCDN1基因的表达.经50 nmol/L Bor作用24 h后,两种细胞中3种基因的表达与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).SALL4基因与C-myc和CCDN1基因的表达明显相关(rs值分别为0.857和0.929,P均＜0.01).结论 SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因C-myc和CCDN1基因表达的抑制在Bor诱导NB4和TF1细胞凋亡的过程可能起重要作用.
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苦参碱对人急性红白血病细胞株TF-1 SALL4基因及Wnt/ β-catenin信号通路下游靶基因表达的影响
目的 探讨苦参碱对人急性红白血病细胞株TF-1 SALL4基因及Wnt/p-catenin信号通路下游靶基因表达的影响.方法 用不同浓度的苦参碱(0.5、1.0、2.0 g/L)处理TF-1细胞,另设对照组(不加苦参碱).苦参碱作用48 h后,采用实时荧光定量PCR法检测各组TF-1细胞中SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因β-catenin、C-myc、Cyclin DI的表达水平,并分析SALL4基因与β-catenin、C-myc及Cyclin DI表达的相关性;Western blot法检测各组TF-1细胞中SALL4蛋白的表达水平.结果 经不同浓度苦参碱处理48 h后,TF-1细胞中SALL4、β-catenin、C-myc、Cyclin DI基因的表达水平及SALL4蛋白的表达水平与对照组相比,均明显下降,且呈浓度依赖性(P＜0.05);SALL4基因与p-catenin、C-myc、Cyclin DI基因的表达明显相关(rs值分别为0.912、0.818和0.832,P均＜0.o1).结论 苦参碱对TF-1细胞中SALL4基因和蛋白表达及Wnt/p-catenin信号通路下游靶基因β-catenin、C-myc、Cyclin DI的抑制可能在抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡过程中起重要作用.
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恒古骨伤愈合剂对骨质疏松症树鼩Wnt/β-catenin信号通路激活作用的实验研究
目的:探讨恒古骨伤愈合剂(osteoking,OK)通过激活Wnt/β-catenin信号通路增加骨形成缓解OP的作用机制.方法:50只雌性树鼩随机分为5组,正常对照组正常喂养,OP模型组去除双侧卵巢每天进行生理盐水灌胃,OK低、中、高剂量组分别给予OK 0.5、1.5、3.0 mL/d灌胃.10周后,检测骨密度(BMD);处死树鼩,取血清和骨骼,ELISA法测定血清雌二醇(E2)、骨碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OC)、I型原胶原N-端前肽(PINP)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)和I型胶原交联C-末端肽(CTX)的含量;采用RT-qPCR和Western blot法检测骨组织Wnt1和β-catenin的表达水平.结果:与正常对照组比较,模型组树鼩血清E2含量和BMD下降明显(P＜0.05),CTX、TRACP-5b、OC、PINP和BALP的含量均显著上升(P＜0.05),经OK治疗后上述现象均改善明显,且具有剂量依赖性;RT-qPCR与Western Blotting结果显示Wnt1和β-catenin的表达水平经OK治疗后均明显升高.结论:OK能够通过增加E2分泌、抑制骨吸收和促进骨形成增加骨密度缓解OP,其作用机制可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的.
关键词： 骨质疏松症 恒古骨伤愈合剂 Wnt/β-catenin信号通路 树鼩 -
SOX7——一种新型抑癌基因
SOX7属于SOX基因家族,参与调节胚胎发育中的多种生物学过程.近期研究表明,SOX7可能具有一定抑癌作用,但其抑癌活性的潜在机制尚不明确.目前已发现的可能机制主要有3种:一是参与调节靶基因活性;二是负性调控Wnt信号通路;三是由于其启动子甲基化而导致的异常表达.本文将对SOX7基因的结构和生理功能进行介绍,并着重探讨SOX7抑癌作用及其可能的潜在机制.
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AXIN2基因在肿瘤发生中的作用
AXIN2是重要的Wnt/3-catenin信号通路的调控因子,参与调控细胞增殖、细胞变异、细胞迁移、细胞凋亡和其他重要功能.现已证明AXIN2基因与肝癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌等的发展有密切关系.AXIN2在肿瘤发生中的作用主要有三方面:①AXIN2甲基化和miRNA的调节可造成AXIN2的异常表达(沉默或超表达),导致肿瘤发生;②在Wnt通路、泛素依赖蛋白酶体通路和siRNA的调节下,AXIN2通过控制3-catenin降解而参与肿瘤的发生;③AXIN2的变异可导致蛋白质异常表达和Wnt通路的失调,导致肿瘤发生.本文将对AXIN2基因在肿瘤发生中的作用作一介绍.
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二十二碳六烯酸增强MDA-MB-231细胞对5-FU敏感性的研究
目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)对5-FU诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与凋亡的作用及对Wnt/1β-Catenin信号传导通路的影响.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT),测定DHA对5-FU诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖活性的作用；应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率；RT-PCR检测MDA-MB-231细胞β-catenin、GSK-3β基因的表达情况；Western blot检测MDA-MB-231细胞3-catenin、GSK-3β、磷酸化GSK-3β(Ser9)蛋白的表达情况；细胞免疫组化染色观察DHA及DHA联合Licl对3-Catenin蛋白细胞内表达及定位的影响.结果:20 μg/ml、40μg/ml的DHA分别与5-FU联合应用,可增强5-FU对MDA-MB-231细胞增殖抑制作用.DHA(20 μg/ml)能促进5-FU增强MDA-MB-231细胞G0/G1期阻滞作用、降低细胞增殖指数及诱导细胞的凋亡.DHA作用于MDA-MB-231细胞后,β-catenin基因及蛋白表达水平下降(P＜0.05)、GSK-3β的基因及蛋白表达水平无明显变化(P＞0.05),磷酸化GSK-3β(Ser9)蛋白表达水平下降(P＜o.05).结论:DHA能增强5-FU对MDA-MB-231细胞增殖抑制和诱导凋亡,起化疗增敏作用,可能与其通过抑制GSK-3β磷酸化来阻断Wnt/β-Catenin信号通路有关.
关键词： 乳腺癌 二十二碳六烯酸 化疗敏感性 Wnt/β-catenin信号通路 -
不同程度骨关节炎中Wnt/β-catenin信号通路、OPN和MMP-13的相关性的研究
目的:研究不同严重程度骨关节炎模型兔的软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)和基质金属蛋白酶13(Matrix metalloproteinase 13,MMP-13)的相关性.方法:将40只新西兰大耳白兔随机分成4组,通过注射不同浓度木瓜蛋白酶处理,而构建患有不同程度骨关节炎的兔模型.利用Real-Time PCR法和ELISA法分别检测β-catenin、OPN、MMP-13以及Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的mRNA和蛋白的水平.结果:利用不同浓度的木瓜蛋白酶成功建立OA兔模型,通过Mankin评分可分成轻度、中度和重度三级.在不同分级的CA模型兔中,β-catenin、OPN、MMP-13的浓度均高于正常对照组,而Ⅱ型胶原和蛋白聚糖较正常对照组均下降(P＜0.05);且随着OA严重程度增加,结果具有一致性(P＜0.05).结论:Wnt/β-catenin信号通路可调节OPN的表达,进而影响到MMP-13的表达,终对骨关节炎的发生产生影响.
关键词： 骨关节炎 Wnt/β-catenin信号通路 OPN MMP-13 相关性 -
miRNA-26a靶向调控GSK-3β参与Wnt/β-catenin信号通路调节IgA肾病肾纤维化
目的:通过检测IgA肾病不同程度肾间质纤维化患者肾组织miRNA-26a、β-catenin、GSK-3β、α-SMA的表达,探究miRNA-26a通过靶向调控GSK-3β参与Wnt/β-catenin信号通路所致肾间质纤维化.方法:根据肾间质纤维化程度将46例IgA患者分为实验组(轻度组、中度组、重度组),对照组为7例肾脏肿瘤远离肿瘤组织的正常肾组织.采用RT-qPCR方法检测各实验组及正常对照组共53例IgA肾病患者肾组织miRNA-26a的表达水平,分析miRNA-26a与IgA肾病肾纤维化的关系.分别采用RT-qPCR技术及免疫组化技术检测各组肾组织β-catenin、GSK-3β、α-SMAmRNA及蛋白的表达水平,各组之间进行比较,并与miRNA-26a进行相关性分析.结果:(1)与正常对照组相比,IgA肾病患者肾活检组织miRNA-26a呈低表达,且随着肾间质病变程度加重,miRNA-26a表达水平显著降低,各组间差异具有统计学意义(P＜0.05);(2)与正常对照组比较,IgA肾病患者肾组织GSK-3β、β-catenin、α-SMAmRNA和蛋白的表达升高,且表达程度随着肾间质病变程度加重逐渐增强,各组间比较差异具有统计学意义(P＜0.05);(3)相关性分析:肾组织miRNA-26a与肾间质纤维化程度呈负相关(r=-0.943,P＜0.05),肾间质及肾小管GSK-3β、β-catenin、α-SMA的表达强度与肾间质纤维化程度正相关(r=0.917,P＜0.05;r =0.943,P＜0.05;r =0.926,P＜0.05),肾间质GSK-3β与β-catenin蛋白表达正相关(r=0.834,P＜ 0.05).结论:miRNA-26a可通过靶向调控GSK-3β参与Wnt/β-catenin信号通路肾间质纤维化.
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RNA干扰c-maf基因表达对多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响及机制研究
目的:探讨RNA干扰c-maf基因表达对多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响及机制.方法:将人骨髓瘤细胞株NCI-H929分为正常对照组、转染siRNA Control的阴性对照组和转染siRNA c-maf基因的沉默组,转染48 h后,提取细胞中的蛋白,Western blot检测各组细胞中c-maf的蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved caspase3及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和CyclinDl蛋白表达.结果:阴性对照组c-maf的蛋白表达与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),沉默组c-maf的蛋白表达显著低于正常对照组(P＜0.01),而阴性对照组c-maf的蛋白表达与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).与阴性对照组比较,沉默组的细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白显著上调表达,β-catenin和CyclinD1蛋白显著下调表达(P＜0.01).结论:RNA干扰c-maf基因表达可诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.
关键词： c-maf基因 多发性骨髓瘤 凋亡 Wnt/β-catenin信号通路 -
Wnt/β-catenin信号通路关键因子在放射性肺纤维化中的作用
目的:观察直线加速器X射线照射对人肺成纤维细胞(HLFs)Wnt/β-catenin信号通路关键信号因子的影响并探讨其意义.方法:HLFs分别经直线加速器0Gy、5Gy、8GyX线照射后,MTT比色法检测其增殖活性,筛选合适照射剂量.人肺成纤维细胞分为照射组(R组)和正常对照组(C组),R组经直线加速器X射线,5Gy照射24h后,免疫荧光检测成纤维细胞α-SMA表达,Westernblot检测成纤维细胞中GSK-3β、p-GSK-3β表达.结果:X线5Gy照射剂量可使人肺成纤维细胞增殖活力增强,较0Gy、8 Gy增殖曲线明显.照射组人肺成纤维细胞形态较正常组有明显差异.照射组人肺成纤维细胞α-SMA,p-GSK-3β表达水平升高,p-GSK-3β/GSK-3β比值升高,与正常对照组比较均有统计学意义(P＜0.05).结论:Wnt/β-catenin信号通路在放射性肺损伤的发生发展中起调控作用,可能为放射性肺纤维化的治疗提供了新视角.
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黄芩素通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制人胶质母细胞瘤细胞MGMT表达
目的:研究黄芩素在体外对人胶质母细胞瘤T98G细胞和GBM-X细胞MGMT(O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶)表达的作用以及相关的信号通路机制.方法:将T98G细胞和GBM-X细胞在常氧和缺氧条件下分成对照组与处理组,采用Western Blot (蛋白质印迹法)检测黄芩素作用于两种细胞72h后MGMT及其相关信号通路蛋白的表达水平,CCK-8试验检测黄芩素、替莫唑胺以及二者联用对两种细胞的毒性作用,探讨联合用药的可能性.结果:T98G细胞常氧/缺氧条件下黄芩素处理组MGMT蛋白表达水平(0.757± 0.058,0.714±0.049)较对照组(1.000±0.101,1.000±0.072)显著下降(P＜0.05,P＜0.01),GBM-X细胞常氧/缺氧条件下黄芩素处理组MGMT蛋白表达水平(0.843±0.027,0.697±0.052)相比对照组(1.000±0.031,1.000± 0.082)明显降低(P＜0.01,P＜0.01).同对照组相比,T98G、GBM-X细胞黄芩素处理后TCF1/TCF7(T细胞因子)、LEF1(淋巴样增强因子)、Survivin(生存素)蛋白表达水平明显下降,差异有统计学意义.经CCK8试剂检测,T98G、GBM-X细胞药物作用24、48、72h后,替莫唑胺组与对照组相比无明显统计学差异,黄芩素联合替莫唑胺组较对照组吸光度值显著降低,差异有统计学意义.结论:黄芩素可通过调控Wnt/β-catenin(β-连环蛋白)信号通路稳定抑制人胶质母细胞瘤细胞MGMT蛋白表达,黄芩素联合替莫唑胺可降低MGMT阳性胶质母细胞瘤细胞对替莫唑胺的耐药性,增强替莫唑胺细胞毒作用,发挥替莫唑胺化疗效果.
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跑台运动和饮食控制对去卵巢肥胖大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的:观察跑台运动和饮食控制对去卵巢肥胖大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、磷酸化-GSK-3β和GSK-3β蛋白表达的影响.方法:将48只3月龄雌性未孕SD大鼠按体重分层后随机分为假手术组、去卵巢组、去卵巢运动组和去卵巢控食组.去卵巢运动组大鼠在去卵巢手术后的第3周开始进行为期8周的跑台运动训练,去卵巢控食组在去卵巢后的第三周开始进行为期8周的控食干预.干预结束后,腹主动脉取血处死各组大鼠,用电子天平秤量大鼠心肌重量,用Westem blot方法检测心肌β-catenin、磷酸化-GSK-3β和GSK-3β蛋白表达.结果:与假手术组大鼠比较,去卵巢组大鼠体重、心肌重量显著增加,而心肌重量指数、β-catenin、磷酸化GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著降低(P＜0.05);与去卵巢组大鼠比较,去卵巢运动组大鼠在后两周时体重显著降低(P＜0.05),心肌组织β-catenin、p-GSK-3β和p-GSK-3 β/GSK-3β蛋白表达均显著升高,而去卵巢控食组大鼠体重、心肌重量、心肌重量指数和GSK-3β表达差异均无统计学意义(P＞0.05),但心肌组织β-catenin、p-GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著升高(P＜0.05).结论:跑台运动和控食干均预均能激活去卵巢大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路.
关键词： 去卵巢大鼠 跑台运动 心肌 Wnt/β-catenin信号通路 -
强直性脊柱炎新骨形成机制研究进展
强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis,AS)是以骶髂关节和脊柱病变为主的炎性疾病.其特征性病理表现为炎症和新骨形成.近年来使用肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)抑制剂控制AS炎症已卓有成效,却无法阻止影像学进程,其病理性新骨形成可致残,严重影响患者健康生活,但其机制尚不完全清楚.目前研究认为复杂的新骨形成机制与Wnt/[β-catenin信号通路及其调控因子、炎症介质密切相关.本文结合当前国内外的研究就AS新骨形成机制进展展开综述,为深入研究新骨形成机制提供新思想.
关键词： 强直性脊柱炎 Wnt/β-catenin信号通路 新骨形成 炎症 -
Bub1促进胃癌浸润转移及其分子调控机制研究
目的 探讨Bub1促进胃癌浸润转移的作用及其分子调控机制.方法 选取2013年7月—2016年8月间在广东省廉江市人民医院接受胃癌手术治疗的150例原发性胃癌患者为研究对象,取其胃癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法测定其中Bub1阳性表达情况,根据胃癌组织中Bub1阳性表达与否进一步将入组患者分为Bub1阳性组、Bub1阴性组.采用荧光定量PCR法对比不同Bub1表达的胃癌组织中增殖、侵袭基因mRNA表达量差异,采用western-blot法对比不同Bub1表达的胃癌组织中Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达量差异.结果 胃癌组织中Bub1阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05).Bub1阳性组胃癌组织中增殖基因EZH2、PIK3CD的mRNA表达量高于Bub1阴性组,Sema3A、Ndrg2的mRNA表达量低于Bub1阴性组;侵袭基因Ezrin、HPA-1的mRNA表达量高于Bub1阴性组,Syndecan-1的mRNA表达量低于Bub1阴性组(P<0.05).Bub1阳性组胃癌组织中Wnt/β-catenin信号通路蛋白Wnt1、Wnt3、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达量高于Bub1阴性组(P<0.05).结论 Bub1可促进胃癌细胞的增殖侵袭,Wnt/β-catenin信号通路参与其恶性行为发生.
关键词： 胃癌 Bub1 增殖基因 侵袭基因 Wnt/β-catenin信号通路 -
青蒿琥酯诱导人胃癌细胞凋亡的分子机制研究
目的 探讨青蒿琥酯对人胃癌HGC27细胞凋亡的影响及可能的分子机制.方法 将HGC27细胞分为正常对照组、20 mg·L-1青蒿琥酯组、80 mg·L-1青蒿琥酯组、160 mg·L-1青蒿琥酯组,采用CCK8分别检测青蒿琥酯作用24、48和72 h后对HGC27细胞增殖的影响,流式细胞术检测青蒿琥酯对HGC27细胞凋亡的影响,Western blot检测青蒿琥酯对HGC27细胞中β-catenin、GSK-3β、c-Myc以及Caspase-3表达的影响.结果 青蒿琥酯能抑制HGC27细胞增殖,与对照组相比,青蒿琥酯各浓度组的增殖抑制率显著升高(P＜0.05),且具有浓度-时间依赖性.青蒿琥酯能诱导HGC27细胞凋亡,与对照组相比,青蒿琥酯各浓度组的细胞凋亡率显著升高(P＜0.05),且具有浓度依赖性.Western blot检测发现青蒿琥酯能显著上调GSK-3β和Caspase-3的蛋白表达(P＜0.05),抑制β-catenin和c-Myc的蛋白表达(P＜0.05).结论 青蒿琥酯能明显抑制HGC27细胞的增殖,诱导细胞凋亡,这可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关.
关键词： 青蒿琥酯 人胃癌细胞 细胞凋亡 Wnt/β-catenin信号通路 -
祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、 Cyclin D1、 MMP-7的调控作用
目的 观察祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用.方法 将GSK-3β选择性小分子抑制剂作用于正常人滑膜细胞,以激活Wnt/β-catenin信号通路.提取并检测胞核蛋白β-catenin的表达,从而确定佳激活时间点.将对数生长期的滑膜细胞分为正常组、SB-216763激活组、祛痰化瘀利湿方组,分别采取相应的干预措施.Western blot方法检测滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测滑膜细胞培养上清液中Cyclin D1和MMP-7的表达.结果 成功激活正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,SB-216763干预后激活组胞核蛋白β-catenin及其下游基因CyclinD1和MMP-7表达较正常组显著升高(P＜0.05);经中药含药血清干预后,祛痰化瘀利湿方组胞核蛋白β-catenin及其下游基因CyclinD1和MMP-7表达与激活组相比显著下调(P＜0.01).结论 印证了GSK-3β作为选择性小分子抑制剂能够激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;通路激活后,其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达显著升高;祛痰化瘀利湿方能够明显下调β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的表达;提示从单一信号通路方面可阐释祛痰化瘀利湿方治疗骨性关节炎的分子作用机制.
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清肝二十七味丸对酒精性肝损伤小鼠的保护作用
目的 探讨清肝二十七味丸(寒水石、红花、石膏,等)对酒精性肝损伤(ALD)小鼠的保护作用.方法 60只小鼠随机分为正常组,模型组,清肝二十七味丸高、中、低剂量组及联苯双酯组;模型组及各给药组小鼠均以白酒[10 mL/(kg·d)]、吡唑[25 mL/(kg·d)]、玉米油[2 mL/(kg·d)]混合物灌胃,早晚各1次;在2次灌胃间隔期间,灌胃给予清肝二十七味丸[1.6、0.8、0.4 g/(kg·d)]及联苯双酯[0.15 g/(kg· d)],造模周期为12周;检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、羟脯氨酸(Hyp)、层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、Wnt及β-连环蛋白(β-catenin)水平.结果 与模型组比较,清肝二十七味丸高、中、低剂量组的血清ALT、AST、LN、HA水平及高、中剂量组的Hyp水平均显著性降低(P＜0.05).清肝二十七味丸组肝组织MDA水平显著降低,SOD及GSH-Px水平显著升高(P＜0.05),各给药组肝组织Wnt及β-catenin蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.05).结论 清肝二十七味丸对酒精性肝损伤小鼠具有保护作用,该作用与其具有的抗氧化及抑制Wnt/β-catenin信号通路激活作用有关.
