MGMT和XRCC1在胃癌中表达的基础研究

目的:本实验通过应用免疫组织化学方法对不同阶段、不同病理类型的胃癌组织中DNA损伤修复酶MGMT及XRCC1的表达情况进行检测,旨在探讨胃癌组织中MGMT及XRCC1的表达和意义,从而为胃癌的诊治提供新的理论基础.方法:免疫组织化学方法检测胃癌组织、癌旁粘膜及非癌患者胃粘膜中损伤直接逆转修复基因MGMT及碱基切除修复基XRCC1蛋白的表达情况,并分析它们与胃癌发生的关系.结果:胃癌组织XRCC1蛋白阳性表达率为89％(89/100),明显高于癌旁的45％(45/100)和非癌患者胃粘膜的30％(9/30) (P＜0.05),后两者间无显著性差异(P＞0.05).胃癌组织MGMT蛋白阳性表达率为43％ (43/100),癌旁粘膜为38％(38/100),非癌患者胃粘膜的13.3％(430),前两者间无显著性差异(P＞0.05),前两者与非癌胃粘膜之间均有显著性差异(P＜0.05).结论:1.XRCC1蛋白在胃癌组织中高表达,MGMT蛋白在胃癌组织中高表达,说明胃癌中存在多种形式的DNA损伤.检测它们的表达有助于诊断胃癌.2.XRCC1蛋白在胃癌中的阳性表达率与淋巴结转移和浸润深度相关,MGMT蛋白在胃癌中的阳性表达率与淋巴结转移和浸润深度相关,MGMT与XRCC1蛋白的表达在胃癌浸润和转移中起重要作用.

叶酸在MNNG致哈萨克族食管上皮APE1、MGMT基因表达改变中的作用

目的 探讨叶酸在N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)致哈萨克族食管上皮细胞APE1、MGMT基因mRNA及蛋白表达中的作用.方法 采用3×3析因设计将体外培养的哈萨克族食管上皮细胞暴露于不同浓度叶酸(0.00、0.40和0.80 μg/ml)和MNNG(0.00、0.75和1.501Lg/ml)的培养液中作用48、72和96 h后,采用RT-PCR法检测APE1、MGMT基因mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测APE1、MGMT基因蛋白表达水平.结果 随着叶酸浓度降低和MNNG浓度增加,APE1基因的mRNA及蛋白表达水平随着损伤的增加而增加,差异有统计学意义(P＜0.01);MGMT基因的mRNA及蛋白表达水平则随损伤的增加而下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 叶酸浓度降低对MNNG致哈萨克族食管上皮细胞损伤有一定的促进作用,而保持充足的叶酸则对MNNG的损害起到一定的保护作用.

微流控蛋白印迹杂交与传统Western blot对目的蛋白的检测效果比较

目的 借助微流控蛋白印迹实验实现对目的蛋白省时、省力和省试剂的定性以及相对定量分析.方法 选取O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白为目的蛋白,选用高表达MGMT蛋白的MCF7细胞为细胞模型,用传统蛋白印迹杂交和纸芯片蛋白印迹杂交实验法对经过药物MGMT阻断剂(lomeguatrib)处理后MCF7细胞的MGMT蛋白表达量做定性以及相对定量分析.结果 纸芯片蛋白印迹杂交可以成功进行MGMT的定性、相对定量分析,而且上样检测量可低至10~25 pg.这相比于传统Western blot的上样检测蛋白检测限1~5 ng,提高了3个数量级.整个操作流程只需要1h,所用试剂量少,实验成本更低.而且,纸芯片的多通道构造可以实现如同反向蛋白杂交分析(RPPA)一样的,对组织蛋白表达量进行高通量的系统检测.结论 微流控蛋白印迹杂交相较于传统Western blot可以检测到更微量级的蛋白,节省试剂和样品,省时和省力,并可进行高通量的定性以及相对定量分析.

PTEN与MGMT蛋白在男性乳房发育症中的表达

目的 观察抑癌基因PTEN和DNA直接修复酶MGMT在男性乳房发育症(GM)乳腺中的表达.方法 采用免疫组化SP法检测68例GM乳腺(实验组)和24例正常男性乳腺(对照组)中PTEN与MGMT的表达状况.将所选实验组分别按年龄及组织学类型分组并分别研究.结果 PTEN与MGMT表达均位于乳腺导管上皮细胞核.GM乳腺中PTEN与MGMT表达水平较正常男性乳腺显著降低(P＜0.01).二者在GM不同年龄组间的表达有差异(P＜0.05),且PTEN表达水平在中年组、老年组、青年组依次降低;MGMT表达水平在老年组、中年组、青年组依次降低.二者在GM不同组织学类型间的表达亦有差异(P＜0.05),且二者表达水平在硬化型、过渡型、旺炽型均依次降低.PTEN与MGMT表达之间没有相关性.结论 GM乳腺组织中PTEN与MGMT表达的异常可能与GM的发生有关.

MGMT及P53在脑胶质瘤组织中的表达及其生物学意义

目的探讨MGMT及P53蛋白在人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤发生和恶性度的关系.方法对39例人脑胶质瘤标本用免疫组化法检测MGMT和P53蛋白的表达,观察两者的相互关系及其和肿瘤恶性度间的关系.结果不同恶性程度胶质瘤间MGMT的阳性表达率无明显区别(p＝0.496745),但表达强度却明显不同(p＝0.018781),两者呈明显的负相关(r＝-0.629,p<0.05).P53蛋白的阳性表达率(p=0.027648)和表达强度(p=3.5×10-118)在不同恶性程度肿瘤间都有明显差异,与肿瘤的恶性程度呈正相关(r＝0.575,p<0.05).MGMT的阳性表达强度和P53蛋白的阳性表达强度呈明显的负相(r=-0.750,p<0.05).结论 MGMT表达减弱和P53表达增强与脑胶质瘤的发生及其恶性程度有一定关系.

MGMT基因启动子甲基化与乳头状甲状腺癌预后的关系

目的 检测乳头状甲状腺癌(PTC)组织和良性甲状腺肿瘤组织中MGMT基因启动子区甲基化状态,分析MGMT基因甲基化与PTC预后的关联,旨在为探索PTC预后提供依据.方法 采用甲基化特异PCR法检测60例PTC及60例良性甲状腺肿瘤组织的MGMT基因启动子区甲基化状态,比较两组的不同病理参数间MGMT基因甲基化状态,并分析其与PTC预后的关系.结果 病例组MGMT甲基化阳性率(51.7％)明显高于对照组(26.7％);病例组MGMT甲基化阳性率在有/无吸烟、有/无饮酒间差异显著(P＜0.05);年龄越大、肿瘤直径越大、有淋巴结转移、临床分期越高、有MGMT基因甲基化是PTC较差预后的独立影响因素(P＜0.05).结论 MGMT基因启动子区甲基化是PTC重要的早期事件,良性甲状腺肿瘤组织中虽然也可发生,但频率远低于PTC;MGMT基因启动子区甲基化对预后具有提示作用.

男性乳房发育症患者PTEN、MGMT及DNA-PKcs表达情况及意义

目的 观察抑癌基因第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)、DNA直接修复酶(MGMT)和DNA蛋白激酶(DNA-PKcs)在男性乳房发育症(GYN)乳腺中的表达情况及意义.方法 采用免疫组化SP法检测56例GYN乳腺(GYN组)与22例正常男性乳腺(对照组)中PTEN、MGMT和DNA-PKcs的表达状况.按腺体增生情况将GYN组分为Ⅰ度、Ⅱ度、Ⅲ度,按X线影像表现将GYN组分为弥漫状、团块状和结节状组.分析不同腺体增生情况和X线影像表现的GYN患者乳腺组织中PTEN、MGMT和DNA-PKcs表达情况.并分析PTEN、MGMT和DNA-PKcs的表达的相关性.结果 PTEN、MGMT和DNA-PKcs表达位于乳腺导管上皮细胞核,该3项指标均在GYN组与对照组乳腺中表达,但在GYN组乳腺中表达均低于对照组乳腺中阳性表达率,差异均有显著性(P<0.01);腺体增生情况中PTEN、MGMT和DNA-PKcs阳性表达率:Ⅲ度>Ⅱ度>Ⅰ度.PTEN阳性表达率:团块状>结节状>弥漫状,MGMT和DNA-PKcs阳性表达率:结节状>团块状>弥漫状;PTEN、MGMT和DNA-PKcs的表达两两之间比较均无相关性.结论 PTEN、MGMT和DNA-PKcs在GYN乳腺中低表达,GM的发生可能与乳腺组织中PTEN、MGMT和DNA-PKcs表达的异常有关.

IDH1、ERCC1和MGMT在脑胶质瘤组织中的表达及意义

目的 研究IDH1、ERCC1和MGMT在脑胶质瘤组织中的表达及其相关性.方法 运用免疫组织化学法观察84例胶质瘤IDH1、ERCC1和MGMT的表达.结果 IDH1和ERCC1在胶质瘤细胞中表达随病理级别增加而升高,差异有统计学意义,IDH1在胶质瘤样本中的表达分别与ERCC1和MGMT有相关性,而ERCC1和MGMT之间无相关性.结论 IDH1、ERCC1的检测可判断胶质瘤恶性程度,并可以将其作为判断预后的重要指标,检测ERCC1和MGMT可针对性选用化疗药物,对制定个性化化疗方案有重要参考价值.

巢式MSP法检测胃癌患者血浆p16、MGMT基因甲基化

目的:探讨胃癌患者血p16和MGMT基因启动子区甲基化状态.方法:采用巢式甲基化特异性PCR法(nestedmethylation-specific PCR,nMSP)对6例胃癌患者血浆中p16和MGMT基因启动子区甲基化状态进行研究.同时以16例健康体检作为对照.结果:在受检的69例胃癌患者中,p15、MGMT基因启动子区甲基化率分别为30.4%(21/69)、17.4%(12/69).对照组未见p16、MGMT基因启动子区甲基化.胃癌患者血浆中存在p16和MGMT基因启动子区甲基化,其中p16基因启动子区甲基化与对照组相比差异显著,具有统计学意义.结论:检测血浆循环DNA中p16、MGMT基因启动子区的甲基化状态,可为胃癌的早期分子诊断提供了有用信息.

肺癌患者血浆MGMT基因异常甲基化检测方法的初步研究和临床意义

目的 探讨MGMT(O6-methylguanine-DNA methyltransferase)基因异常甲基化的血浆检测方法和临床意义.方法 首先对SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法进行改良设计研究,寻求佳的实验方法和条件,然后利用改良的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法分别对肺癌患者和正常人的血浆进行异常甲基化MGMT基因检测.结果 在反应体系中增加75℃ 30s这一步骤可有效消除非特异性扩增产物,使测量定量结果更加精确.18例肺癌患者中,鳞癌1例为阳性,占20%;小细胞肺癌1例阳性,占33.33%;腺癌4例阳性,占40%.结论 利用改良的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法可以检测到肺癌患者血浆异常甲基化MGMT的存在;肺腺癌阳性率高,提示不同肿瘤细胞基因表达存在很大差异;同时也为无创伤性诊断肺癌提供了一种具有临床实用价值的方法.

XRCC1和MGMT基因多态性与东北地区汉族人群胶质瘤易感相关性研究

目的:研究XRCC1和MGMT基因多态性与东北地区汉族人群胶质瘤易感性的关系.方法:采用病例-对照研究方法,收集东北地区汉族人群胶质瘤患者,同时随机选取同性别、民族、年龄相差±5岁、同期住院的非肿瘤门诊患者作为对照.其中XRCC1 Arg399Gln多态性,采集366例胶质瘤患者和377例对照;MGMT Leu84Phe多态性,采集543例胶质瘤患者和495例对照;MGMT Ile143Val多态性,采集369例胶质瘤患者和441例对照.采用PCR-RFLP方法分析XRCC1基因Arg399Gln位点和MGMT基因Leu84Phe、Ile143Val位点的多态性,比较不同基因型与胶质瘤易感性的关系.结果:胶质瘤组中XRCC1 399Gln等位基因频率为0.35,明显高于对照组0.27,差异有统计学意义,x2=7.485,P=0.006.与Arg/Arg基因型比较,携带基因型Arg/Gln的个体胶质瘤患病风险增加,OR =1.36,95％CI为1.01～1.85,P=0.045;携带Gln/Gln的个体胶质瘤患病风险增加,OR=1.83,95％CI为1.10～3.05,P=0.019;携带Arg/Gln+Gln/Gln的个体胶质瘤患病风险增加,OR=1.44,95％CI为1.08～1.93,P=0.013;携带等位基因Gln的个体胶质瘤患病风险增加,OR =1.36,95％CI为1.09～1.69,P=0.006.胶质瘤组中MGMT 84Phe等位基因频率为0.16,明显高于对照组0.10,差异有统计学意义,x2=20.253,P＜0.001.与Leu/Leu基因型比较,携带基因型Leu/Phe的个体胶质瘤患病风险增加,OR =1.61,95％CI为1.18～2.19,P=0.002;携带Phe/Phe的个体胶质瘤患病风险增加,OR=4.16,95％CI为1.68～10.30,P=0.001;携带Leu/Phe+ Phe/Phe的个体胶质瘤患病风险增加,OR=1.78,95％CI为1.33～2.39,P＜0.001;携带等位基因Phe的个体胶质瘤患病风险增加,OR=1.83,95％CI为1.40～2.38,P＜0.001.胶质瘤组中MGMT 143Val等位基因频率为0.11,高于对照组0.10,但差异无统计学意义,x2 =0.242,P=0.623.与Ile/Ile基因型比较,携带基因型Ile/Val或Val/Val或Ile/Val+ Val/Val以及等位基因Val的个体胶质瘤患病风险未增加,P＞0.05.结论:XRCC1 Arg399Gln和MGMT Leu84Phe基因多态性可增加东北地区汉族人群患胶质瘤的风险,MGMT基因Ile143Val位点基因多态性与胶质瘤易感性无关.

结直肠锯齿状病变的形态学与免疫表型特征及其癌变风险研究

目的 观察结直肠锯齿状病变的形态学特点并分析其免疫表型特征,为诊断、鉴别诊断及其癌变风险评估提供依据.方法 观察95例结直肠息肉状病变的形态学特征,并对其进行DNA错配修复蛋白(MLH1、MSH2和MSH6)、DNA修复酶(MGMT)、p53蛋白和BRAF蛋白的免疫组化染色,与传统腺瘤(包括管状腺瘤、绒毛状腺瘤和绒毛状管状腺瘤)进行比较.结果 MLH1在非结直肠腺癌组增生性息肉中均呈阳性,而在结直肠腺癌组的增生性息肉中23.1％为阴性.MSH2、MSH6和MGMT在增生性息肉中的阴性率均明显高于传统腺瘤.BRAF蛋白在结直肠腺癌组增生性息肉的阳性率为46.2％,而在非结直肠腺癌的增生性息肉仅为11.8％.MLH1、MSH2和MSH6的表达具有显著相关性.各抗体在各组各型息肉和(或)腺瘤中的表达情况,与患者年龄、病变部位无关.结论 MLH1、MSH12、MSH6、MGMT和BRAF基因主要参与了结直肠锯齿状病变的癌变过程.MLH1阴性、BRAF蛋白阳性的锯齿状病变可能具有较高的癌变风险.

胶质瘤干细胞对替莫唑胺敏感性的研究

目的 探讨胶质瘤干细胞(GSC)对替莫唑胺(TMZ)的敏感性及耐药机制.方法 新鲜多形性胶质母细胞瘤(GBM)标本培养后获得GSC.免疫荧光技术榆测未分化GSC的CD133及分化生长GSC的GFAP的表达,MTS法检测对替莫唑胺的敏感性,流式细胞技术对CD133阳性细胞的比例进行定量,荧光标记的甲基化特异性PCR分析MGMT启动子区域的甲基化状态,Western blot检测抑癌基因PTEN的表达.结果 (1)5例GBM标本中成功获得GSC,符合肿瘤下细胞定义.(2)5个GSC细胞株多数对TMZ不敏感.其中,T509的半数抑制浓度(IC50)为22.3 μmol/L(敏感),T411的IC50为286.3 μmol/L(中度敏感),其余3个细胞株T402,T405及T509的IC50皆大于1000μmol/L(不敏感).(3)CD133阳性细胞比例大于10%的GSC细胞株对TMZ不敏感.(4)MGMT启动子区域呈去甲基化状态的GSC对TMZ不敏感或仅为中度敏感.(5)5个GSC细胞株中,PTEN表达水平差异大,与GSC对TMZ的敏感性无明显关联.结论 GSC对TMZ普遍耐药,与MGMT启动子区域甲基化状态及CD133阳性细胞有关,而与PTEN蛋白表达水平无明显关联.

MGMT与恶性肿瘤

O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)是细胞中一种重要的DNA损伤修复酶,它在抵御烷化剂所致的细胞突变和死亡中起重要作用.本文综述了近年来关于MGMT的新研究,内容包括MGMT的基因结构与功能,MGMT的分布及其影响因素,MGMT与肿瘤发生、发展及治疗的关系.

MGMT与脑胶质瘤相关性的实验研究

目的：通过分析探讨O6－甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（ MGMT）基因启动子甲基化与MGMT蛋白表达的情况，以期为脑胶质瘤的临床个体化治疗提供一定的理论基础。方法：收集45例脑胶质瘤和11例正常脑组织石蜡标本，采用免疫组化方法分别检测MGMT在56例标本中的表达情况，采用甲基化特异性PCR（ MSP）方法检测45例脑胶质瘤中MGMT基因启动子甲基化情况。结果：脑胶质瘤组织与正常脑组织中MGMT的表达差异有统计学意义。不同级别胶质瘤之间的MGMT表达差异无统计学意义。胶质瘤中MGMT的表达与患者的性别及年龄之间的差异无统计学意义。胶质瘤中MGMT蛋白表达与MGMT基因启动子甲基化存在负相关。不同级别脑胶质瘤中MGMT基因启动子甲基化的表达差异无统计学意义。结论：MGMT的表达与肿瘤的恶性程度无相关性，但与烷化剂耐药有关。临床上为患者制订个性化治疗方案时，不能单独考虑性别、年龄的因素。使用烷化剂化疗前测定肿瘤细胞的MGMT活性具有一定的指导意义。

胶质瘤中MGMT和hMLH1甲基化与表达水平的变化及意义

目的 探讨胶质瘤组织中,O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine DNA methyltransferase,MGMT)和错配修复基因mutL homolog 1(Homo sapiens,hMLH1)的甲基化及蛋白水平的变化,及其在胶质瘤发生中的作用.方法应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP) 方法检测了78例胶质瘤患者组织中MGMT和hMLH1的启动子区甲基化状态;应用免疫组织化学方法检测其蛋白表达水平.结果 MGMT启动子区甲基化43例(55.1%),hMLH1启动子区甲基化32例(41.0%).MGMT与hMLH1在胶质瘤中表达的阳性细胞百分比的中位数分别为15.9%和84.6%.两种基因的启动子区甲基化状态与蛋白表达的阳性率没有明显的相关性,且均与年龄、性别、病理类型无关.结论胶质瘤细胞中同属于DNA修复系统的MGMT蛋白表达率远低于hMLH1表达率,这提示胶质瘤发生发展过程中可能存在着与DNA修复系统紊乱有关的一些独特的路径.

脑胶质瘤MGMT启动区甲基化PCR检测方法的对比分析

胶质瘤组织MGMT和Ki-67表达对患者预后的影响

目的 研究胶质瘤组织MGMT和Ki-67的表达,探讨其对患者预后的影响.方法 总结79 例脑胶质瘤患者的性别、年龄、术前Karnofsky评分、无进展生存期和生存期等; 将患者手术切除标本石蜡切片进行Ki-67和MGMT 的免疫组化染色,计算染色阳性率;多元逐步回归分析法判断Ki-67和MGMT的表达与患者无进展生存时间及生存时间的关系.MGMF表达情况与患者无进展生存期及生存期的关系用Kaplan-meier生存曲线表示,并采用log-rank方法 分析.结果 患者性别、年龄、术前Karnofsky评分及Ki-67阳性率与无进展生存期和生存期无相关性(P＞0.05).MGMT阳性率与无进展生存期呈负相关(r=0.074,P<0.05),与生存期呈负相关(r=-0.127,P＜0.001).将所有患者分为MGMT指数≤15%和MGMT指数＞15% 2组,无进展生存期对比,差异有统计学意义(P＜0.05),生存期对比差异有统计学意义(P=0.001).结论 胶质瘤中Ki-67表达与肿瘤预后无关,MGMT表达与肿瘤预后有关,MGMT检测对胶质瘤预后判断可能有指导意义.

MGMT和galectin-3异常调控在结肠腺癌中的研究进展

MGMT作为一种DNA修复酶能够修复DNA烷化剂诱导的损伤,其基因异常甲基化与恶性肿瘤的发生关系密切;MGMT在结肠组织中高度表达,在结肠腺癌中MGMT表达的缺失.Galectin-3是一种细胞内和细胞外的凝集素,其主要参与调节细胞增殖、粘附、侵袭和凋亡,其在正常结肠组织中低表达,在结肠腺癌组织中高度表达.近年来研究发现,MGMT和Galectin-3与结肠腺癌的发生、发展、治疗预后有关,其异常调控与肿瘤发生的相关性成为肿瘤分子流行病学的新热点.

MGMT在胃癌中的研究进展

MGMT是DNA修复蛋白O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶的简称,是一种独特的DNA修复蛋白,对于保护细胞免受环境中的致癌物质和(或)化疗药物引起的基因毒性起着关键作用.因此在细胞对环境致癌物的易感性与肿瘤对化学药物的耐药性等研究领域,MGMT正受到越来越多研究者的关注.MGMT作为一种重要的DNA修复酶起着保护细胞免受基因毒性的重要作用,利用这一性质,通过检测组织中MGMT的活性水平可以帮助预测正常细胞的突变性与肿瘤细胞的耐药性,为肿瘤的早期预防和确定化疗方案提供依据.