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不同方法检验腹泻患者粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的价值
目的 探讨不同方法检验腹泻患者粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的价值.方法 选择2016年12月至2017年12月接受检验的50例腹泻患者粪便样本为研究对象,将其随机分为对照组和试验组,每组25例,对照组使用培养法,试验组则应用RT-PCR法,对比两组小肠结肠炎耶尔森菌检验阳性率.结果 试验组耶尔森菌检验阳性率60.00％,高于对照组的20.00％,差异有统计学意义(P<0.05).结论 腹泻患者粪便中小肠结肠炎耶尔森菌检验采用RT-PCR法与培养法比较,准确率更高,更加有利于病情判断.
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中药牛膝提取物抗肿瘤活性的初步研究
目的探讨中药牛膝提取物的抗肿瘤活性及其作用机制. 方法 MTT法检测细胞抑制率;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况;分别用生物化学法和ELISA法检测巨噬细胞因子TNF-α和IL-6的表达;用RT-PCR法检测巨噬细胞因子IL-6 mRNA表达. 结果牛膝提取物在体外对两种肿瘤细胞株的增殖具有明显抑制作用,量效、时效关系显著(P＜0.01),细胞周期停滞于G0/G1期,诱导细胞凋亡可能是其发生作用的机制之一;牛膝提取物虽然在体外不能促进小鼠脾细胞的生长增殖,但对巨噬细胞的吞噬功能却有较强的刺激作用(P＜0.01),并可促进细胞因子TNF-α和IL-6的产生以及IL-6 mRNA的表达. 结论该提取物具有抗肿瘤作用,不仅对免疫功能没有抑制作用,而且可以通过延缓肿瘤细胞周期、诱导凋亡、增强巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤作用及分泌细胞因子如TNF-α、IL-6等参与其抗肿瘤机制.
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自然早产胎盘中细胞凋亡抑制因子survivin表达水平的定量检测及其临床研究
目的 分析自然早产胎盘中细胞凋亡抑制因子生存素(survivin)表达水平及其定量检测在自然早产中的诊断价值.方法 选择2015年12月-2016年12月福田医院住院部分娩的60例胎盘,其中自然早产30例(观察组),足月产30例(对照组).采集胎盘,对两组分别采用细胞凋亡抑制因子survivin免疫检测和survivin mRNA定量测定逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法并进行比较.结果 观察组胎盘survivin因子阳性表达率为26.67％(8/30),survivin-mRNA基因阳性表达率为16.67％(5/30),对照组分别为53.33％(16/30)、50.00％(15/30),差异具有统计学意义(P＜0.05).观察组胎盘survivin因子阳性细胞百分比为(57.10±4.82)％,survivin-mRNA相对表达量(0.68±0.23),对照组分别为(72.06±7.59)％、(2.09±0.47),差异具有统计学意义(t分别为11.102、4.910,P＜0.05).结论 适时监测诱发孕妇早产的survivin因子,及早治疗干预,有助于避免早产的发生,提高新生儿的生存质量.
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真空泵法与离心法提取病毒RNA的效果比较
在应对某些重大传染病如SARS、手足口病、甲型H1N1流感时,由于实时荧光RT-PCR法具有快速、灵敏的特点,在中国CDC系统内被广泛运用,为及时检测诊断提供了帮助[1-2].
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RT-PCR法检测血浆HIV RNA浓度的临床意义
目的 评价RT-PCR法(国产试剂)检测血浆HIVRNA病毒载量(VL)的临床意义及应用.方法 应用国产HIV载量试剂盒(RT-PCR法,深圳匹基公司)及LightCycler PCR检测仪(Roche公司)对95例患者的248人份血浆标本进行VL检测;选送18份血浆标本到中国CDC性病艾滋病参比实验室作对比试验.结果 95例标本中低于试剂盒检测下限(阴性)的标本有6例(6%);能被定量的标本有89例(94%),其结果在1.31×103～5.22×107 copies/ml之间,其中1例13个月龄的婴儿血浆VL为1.79×106 copies/ml.25例接受HAART治疗的AIDS患者中,1个月后23例血浆VL低于检测下限,3个月后25例全部低于检测下限;2例中途停药的患者血浆VL先下降后升高;2例中药治疗患者血浆VL始终不下降.国产试剂和进口试剂对比有较好的相关性.结论 使用RT-PCR法(国产试剂)检测血浆HIV VL具有衡量疾病进展、监测抗病毒治疗效果及新生儿HIV感染的早期诊断等重要意义,并且价格上具有很大优势,符合我国国情,有利于临床推广.
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胶体金免疫层析法快速检测甲型流感病毒的可行性
我们应用胶体金免疫层析(GICA)法检测甲型流感病毒核心抗原,并用病毒分离培养法、RT-PCR法与对照进行验证,现将结果报道如下.
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出入境人群HIV感染/AIDS患者病毒载量检测结果分析
目的 了解出入境人群HIV感染/AIDS患者血浆病毒载量(VL)状况,为临床用药提供科学依据.方法 应用LightCycler PCR(Roche 2.0)检测仪对血浆标本进行VL检测.结果 33例HIV感染者在未服用抗病毒药物治疗前,其血浆的VL值<500 copies/ml 1例(3.03%),103～104 copics/ml1例(3.03%),104～105 copies/ml 10例(30.30%),105～106copies/ml 12例(36.36%),106～107copies/ml9例(27.27%).男性血浆VL6.96×102～2.79×106copies/ml(1gVL=5.009±0.949),女性血浆VL1.7104～2.5106copies/ml(lgVL=5.289±0.791),男女性VL值取对数后进行比较,两者无统计学意义(t=6824,P=0.5001).12例接受HAART治疗3个月后有9例(75.00%)血浆VL低于检测下限:有1例(8.33%)VL值为696copies/ml;有2例(16.67%)、VL大于1.0×104copies/ml.结论 检测HIV感染/AIDS患者血浆HIV VL有助于了解患者VL状况和疗效.
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RT-PCR法检测MUC-1 mRNA评判非小细胞肺癌临床病情演变及预后的应用
目的研究MUC-1基因表达与肺癌患者术后复发的关系,探讨RT-PCR法评判临床病情演变及预后的可能性.方法运用RT-PCR方法,检测与肿瘤发生和转移密切相关的MUC-1基因在46例非小细胞肺癌(NSCLC)患者手术切除的病理标本中的异常表达,结合临床及病理分型和5年随访结果进行实验研究.结果 MUC-1基因在肺癌组织和纵隔组织过量表达与肺癌患者术后复发及5年生存率密切相关.结论RT-PCR法用于检测NSCLC患者淋巴结微转移具有临床可行性,检测结果对于肺癌的准确分型、分期,合理选择治疗方案,提高疗效,减少复发和改善预后有重要指导意义.
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TNF-α、IL-1β诱导人角质形成细胞β防御素-2的表达
目的 观察TNF-α、IL-1β诱导人角质形成细胞(Hacat细胞)表达β防御素-2(hBD-2)的情况,阐明不同诱导因素在不同时间点诱导hBD-2的规律及差异性. 方法 将培养的Hacat细胞分为四组:对照组、TNF-α组、IL-1β组、TMF-αa+IL-1β组.对照组不加任何药物干预,其余各组分别于6h,18 h,24 h加入药物后用RT-RCR方法检测h13E-2mRNA的表达.结果 TNF-α和IL-1β干预组Hacat细胞hBD-2 mRNA表达均高于对照组(P<0.05),各组干预18 h的表达量均明显高于干预6 h,24 h时的表达量.TNF-α与IL-1β联合干预Hacat细胞时有协同作用,18 h时hBD-2 mRNA表达量高. 结论 TND-α、IL-1β二者联合时有协同作用,Hacat细胞产生hBD-2 mRNA的表达量随时间变化而变化.
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蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血SD大鼠AQP-4、MMP-9、TIMP-1mRNA表达影响随机平行对照研究
[目的]观测蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达影响.[方法]使用随机平行对照方法,45只SD大鼠常规饲料喂养3d,称重后随机数字表法分为5组,假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀低、中、高剂量组(简称“ZL低、中、高剂量组”),9只/组.按指标检测时间分为12h、48h、72h三个亚组,3只/组.自体尾部血注入法复制脑出血大鼠模型.灌胃干预:蛭龙活血通瘀胶囊按人体用量(3.6g/d)5倍、10倍、20倍定为低、中、高剂量.RT-PCR法检测AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达.[结果]AQP-4 mRNA:假手术组有微量表达,12h、48h及72h表达无明显差异(P＞0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P＜0.01);模型组呈进行性升高,72h为显著;ZL各剂量组表达均低于模型组(P＜0.01);各时间点低、中剂量组均高于ZL高剂量组(P＜0.01).MP-9 mRNA:假手术组有少量表达,术后12h、48h及72h表达无明显差异(P＞0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P＜0.01);模型组术后48h上升明显并达到高峰,72h略有下降,ZL各剂量组均低于模型组(P＜0.01);ZL低、中剂量组在各时点均明显高于高剂量组(P＜0.01).TIMP-1 mRNA:假手术组仅有微量表达,术后12h、48h及72h无明显差异(P＞0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P＜0.01);模型组48h上升明显并达到高峰,72h略有下降;ZL各剂量组各时点均高于模型组(P＜0.01);ZL低、中剂量组各时点均明显高于高剂量组(P＜0.01).[结论]蛭龙活血通瘀胶囊可明显降低脑出血大鼠脑组织AQP-4、MMP-9 mRNA,升高TIMP-1 mRNA,呈量效关系,ZL高剂量组作用为明显.
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当归/黄芪多糖对腹腔注射环磷酰胺小鼠骨髓造血影响随机平行对照研究
[目的]观察当归/黄芪多糖对腹腔注射环磷酰胺小鼠骨髓造血影响.[方法]使用随机平行对照方法,将60只清洁级C57BL/6小鼠编号按随机数字表法随机分为6组,空白组、模型组、促红细胞生成素组(EPO组)、当归多糖组(当归组)、黄芪多糖组(黄芪组)、当归加黄芪多糖组(当归+黄芪组),10只/组.实验第1d,各组小鼠称体重,模型组、EPO组、当归组、黄芪组、当归+黄芪组,腹腔注射环磷酰胺380mg/kg·d-1,连续3d,空白组注射等量生理盐水.实验第4d(造模第4d),颈椎脱臼处死小鼠,无菌取股骨和胫骨,置入培养基中,调整细胞浓度为1×105/mL,然后将混合液加入96孔板(200uL)/孔和24孔板(1L/孔)中,每组设3个复孔,周围孔分别加入相应量的无菌超纯水,将细胞板置于5％CO2,37℃孵育箱中培养.实验第4d(造模第4d),各组分别干预.观测外周血象、细胞增殖率-(MTT法),EPO、IL-3(免疫蛋白法),细胞内转录因子JAK2、STAT5(RT-PCR法).[结果]细胞培养24h、48h和72h,细胞增殖率EPO组、当归组、黄芪组、当归+黄芪组均高于空白组(P＜0.05,P＜0.01),组间无显著差异(P＞0.05);模型组低于空白组(P＜0.05,P＜0.01).细胞培养7d,IL-3、EPO表达模型组低于空白组(P＜0.01),各干预组均高于模型组(P＜0.01),当归+黄芪组高于EPO组(P＜0.01),EPO组高于当归组(P＜0.01),当归组高于黄芪组(P＜0.01).细胞培养7d,单核细胞STAT5、JAK2mRNA模型组低于空白组(P＜0.01),各干预组高于模型组(P＜0.05或P＜0.01),当归+黄芪组高于EPO组(P＜0.01),EPO组与当归组无显著差异(P＜0.05),当归组高于黄芪组(P＜0.01).[结论]当归/黄芪多糖、促红细胞生成素干预腹腔注射环磷酰胺小鼠,均可升高骨髓细胞增殖率、IL-3、EPO表达及单核细胞STAT5、JAK2mRNA,当归多糖与黄芪多糖联合应用更明显.
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血管紧张素Ⅱ-1型受体拮抗剂在脑出血大鼠治疗中的作用
目的探讨血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)拮抗剂在大鼠脑出血治疗中的神经保护作用及机制.方法 以胶原酶诱导法建立大鼠脑出血模型48只,随机选取24只应用AT1R拮抗剂奥米沙坦干预治疗为治疗组,24只为未治组.分别在造模成功后的24 h、48 h及72 h处死大鼠,取脑组织.用HE染色观察脑组织病理学变化;用免疫组化及RT-PCR检测两组大鼠各时间点脑组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、AT1R和白细胞抗原CD40配体(CD40L)的表达,并分别采用平均光密度及灰度比值对各指标表达做定量比较.用RT-PCR检测并比较两组大鼠在各时间点脑组织RNA浓度.结果 治疗组脑内AngⅡ、AT1R和CD40L在各时间点蛋白和基因表达及RNA浓度值均较未治组低,脑水肿减轻,差异有显著性意义(P<0.05).结论 AT1R拮抗剂可使脑出血大鼠的炎症因子含量减低,对神经有保护作用.
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柯萨奇B组病毒3种检测方法的比较
目的 探讨限制性内切酶分析法检测柯萨奇B组病毒的特异性和重现性.方法 收集500例疑似病毒性心肌炎的患者血清,分别采用限制性内切酶分析法、ELISA法、RT-PCR法3种检测方法进行检测,每种方法在相同条件下连续重复3次,然后将其结果进行比较.结果 ELISA法的3次检测的结果差别较大,阳性率分别为55.4%、58.4%、60.6%;RT-PCR法的3次检测的结果差别相对较小,阳性率分别为51.1%、51.6%、52.8%;限制性内切酶分析法的3次检测结果完全一致.结论 限制性内切酶分析法是一种特异性强、重现性好,明显优于ELISA法和RT-PCR法的新的病毒检测方法.
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RT-PCR法应用于50例小肠结肠炎耶尔森菌(腹泻粪便中)检验的临床价值
[背景]探讨RT-PCR法应用于小肠结肠炎耶尔森菌(腹泻粪便中)检验的临床价值.[病例报告]采用随机的原则选取行小肠结肠炎耶尔森菌检验的腹泻患者100例(2017年4月-2018年4月),按照随机等量原则分为培养法组和RT-PCR法组,每组各为50例.两组分别应用相应方法进行检验,比较两组腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的检查率.RT-PCR法组腹泻粪便中耶尔森菌的检查率显著高于培养法组(P＜0.05).[讨论] RT-PCR法检验小肠结肠炎耶尔森菌(腹泻粪便中)的临床价值较高,效果满意.
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rt-pcr法检测前哨淋巴结ck19在甲状腺癌治疗中的应用研究
目的:探讨研究rt-pcr法检测前哨淋巴结细胞角蛋白ck19 (cytokeratin19)在甲状腺癌治疗中的应用价值.方法:选取2011-01 ～2012-10在我院普外科住院的甲状腺癌患者为研究对象,共22例.同时选取10例胃肠道良性病变的患者淋巴结作为对照组.所有患者均进行rt-pcr法检测前哨淋巴结ck19,对比观察检测结果.结果:胃肠道良性病变组ck19含量明显低于甲状腺癌患者,组间比较差异明显,p ＜0.05,差异有统计学意义；22例甲状腺癌患者在手术中共取出淋巴结101枚,前哨淋巴结62枚,使用常规HE染色发现2枚前哨淋巴结转移,rt-pcr法检测前哨淋巴结ck19阳性22枚,两种方法比较有显著差异,组间对比p ＜0.05,差异有统计学意义.结论:前哨淋巴结ck19在甲状腺癌淋巴转移中的价值较高,其中rt-pcr法能够更好地对前哨淋巴结ck19进行检查,具有较高的敏感性.
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大鼠局灶性缺血再灌注后大脑皮质ADM及其mRNA的表达
目的探讨肾上腺髓质素(ADM)与脑缺血再灌注损伤的关系 .方法采用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,阻断血流2 h进行再灌注.应用免疫组织化学法和RT-PCR法检测不同时间段大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮质ADM及其 mRNA的表达,并进行动态观察. 结果正常大鼠大脑皮质有ADM及其 mRNA的表达,假手术组ADM及其mRNA表达略高于正常组,P>0.05;大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质ADM及其 mRNA过表达,与正常对照组及假手术组相比差异显著,P<0.05.动态观察发现,脑缺血2 h再灌注2 h,大脑皮质 ADM及其 mRNA即表达,再灌注22 h达高峰,至1 w仍明显多于正常对照组,P<0.05. 结论脑缺血再灌注后ADM及其 mRNA呈现规律性过表达.
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Wnt5a在慢性根尖周炎病损中的表达及临床意义
目的:检测慢性根尖周炎根尖病损区Wnt5a的水平与细胞定位,探讨Wnt5a与炎症细胞浸润程度的关系,以及Wnt5a在慢性根尖周炎发展中的作用及意义.方法:选取10例慢性根尖周炎牙作为实验组,根据根尖区组织的H-E染色,依炎症细胞浸润程度将病例组分为轻中度组、重度组.5例因正畸需要而拔除的健康牙作为对照组.采用实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)从mRNA水平检测样本Wnt5a的表达;免疫组织化学法检测样本中Wnt5a蛋白的表达,应用图像分析软件检测Wnt5a蛋白表达水平,分析Wnt5a表达高低与炎症程度的关系.采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:Wnt5a在实验组与对照组均有表达,实验组中Wnt5a mRNA表达水平显著高于对照组(P＜0.05).免疫组织化学结果显示,重度炎症组Wnt5a的表达水平显著高于对照组(P＜0.01);轻中度组Wnt5a的表达水平显著高于对照组(P＜0.05);重度炎症组中Wnt5a的表达水平显著高于轻中度炎症组(P＜0.05).结论:Wnt5a与慢性根尖周炎的炎症程度相关,可能参与了病变的始动过程,推测Wnt5a在慢性根尖周炎的发生、发展中起着一定作用.
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MAGE-A1、MAGE-A3基因在人舌鳞癌中的表达及其临床意义
目的从mRNA水平观察肿瘤特异性抗原MAGE(黑色素瘤抗原基因)-A1及MAGE-A3基因在人舌鳞癌组织中的表达情况,以评价MAGE-A1、MAGE-A3基因作为舌鳞癌的免疫学检测、免疫和基因治疗的分子标志物的可行性.方法提取38例舌鳞癌、10例牙龈瘤病变组织和10例癌旁口腔正常组织标本中的总RNA,逆转录合成cDNA,而后应用RT-PCR法扩增其中的MAGE-A1,MAGE-A3目的基因片段,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(G3PDH)基因作为内对照,经琼脂糖电泳确认.分别采用Mann-Whitney Test检验和Fisher's Exact Test检验对舌鳞癌不同病理分型、淋巴结转移与否的MAGE-A1,MAGE-A3的表达差异进行统计学分析.结果在38例舌鳞癌中MAGE-A1基因表达23例(60.5%);MAGE-A3基因表达26例(68.4%);两者均有表达13例(34.2%).MAGE-A1和/或MAGE-A3基因表达共36例(94.7%),MAGE-A1、MAGE-A3基因均不表达2例(5.3%).低分化鳞癌患者两种基因同时表达的阳性率(53.3%)明显高于高分化者(9.1%).在10例牙龈瘤和10例癌旁正常组织中未见MAGE-A1、MAGE-A3基因表达.结论舌鳞癌组织中MAGE-A1,MAGE-A3基因均有较高表达.提示MAGE基因可以作为检测舌鳞癌的分子标志物,且具有免疫、基因治疗特异性靶位的潜在价值.
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液相芯片和RT-PCR法在转移性肺癌EGFR突变检测中的比较
目的 通过液相芯片法和RT-PCR法检测EGFR基因突变的一致性,探讨适用于临床转移性肺癌患者EGFR基因的突变检测法.方法 收集47例转移性肺癌患者锁骨上肿物细针穿刺吸取物,经反复离心后取沉淀细胞行石蜡包埋,常规HE染色和免疫组化Multimer染色,利用液相芯片法和RT-PCR法检测EGFR基因19和21外显子的热点突变并进行分析.结果 47例转移性肺癌患者中15例检测到EGFR基因突变,突变率为31.9％,其中6例为外显子19缺失突变,9例为外显子21点突变.两种方法对EGFR外显子19和21的基因突变检测结果完全一致.结论 锁骨上吸取肿物可作为转移性肺腺癌患者EGFR基因突变的检测标本,且突变类型主要为外显子21点突变.液相芯片法和RT-PCR法均可作为转移性肺癌患者EGFR基因突变的检测法.
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32例重症甲型H1N1流感护理体会
目的 通过对32例重症甲型H1N1流感患者的临床护理分析,积累临床护理经验.方法 对我院从2009年4月至2010年1月共收治负压病区32例重症甲型H1N1流感患者的病情、护理进行回顾性分析.结果 32例患者都有不同程度的发热、咳嗽等流感样症状,咽拭子甲型H1N1流感病毒核酸检测阳性(RT-PCR法),合并不同程度的并发症、基础疾病及特殊因素,符合确诊甲型H1N1流感重症病例诊断标准.32例患者经过抗病毒、抗感染、止咳化痰平喘、吸氧、对症、中药等治疗和护理后25例治愈出院,7例5天后咽拭子甲型H1N1流感病毒核酸检测阴性(RT-PCR法)症状好转.结论 甲型H1N1流感是可防可控可治的.
