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分支DNA技术在胃癌患者血清游离DNA检测中的应用
目的:建立一种基于Alu序列定量检测游离DNA (cell-free DNA,CFD)的分支DNA技术(branched DNA assay,bDNA),并探讨血清CFD检测在胃癌早期筛查和病程监控中的应用价值.方法:采集40例胃癌患者的血清标本,同期匹配健康体检者60例和胃良性肿瘤患者32例的血清标本进行对比分析,采用bDNA技术定量检测各组血清CFD含量,并用化学发光方法检测相关肿瘤标志物:癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)、糖链抗原72-4(carbohydrate antigen 72-4,CA72-4),糖链抗原50(carbohydrate antigen 50,CA50)的水平.结果:bDNA方法线性范围为0～400 ng/mL.胃癌患者血清CFD含量2 570.2(815.7～4 554.0) ng/mL显著高于健康对照组196.5(112.8～328.5) ng/mL和胃良性肿瘤组423.1(256.3～513.6) ng/mL(P＜0.000 1);血清CFD与血清肿瘤标志物CEA 、CA72-4、CA50比较发现,无明显相关性,胃癌患者血清CFD水平与疾病发生、发展和肿瘤负荷有一定的相关性.以774.2 ng/mL为临界值(Cut off值),其诊断的灵敏性为77.5％,特异性为95.7％,受试者工作特征曲线下面积为0.921.结论:bDNA技术是一种新型、灵敏的定量检测外周血CFD含量的方法;血清CFD对胃癌患者的早期筛查、辅助诊断和病程监控有一定的临床应用价值.
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结直肠癌患者血清游离DNA的表达及意义
目的：建立基于ALU序列的实时荧光定量PCR（ALU-qPCR）检测游离DNA浓度的方法，并探讨结直肠癌患者血清游离DNA定量检测的临床意义。方法：随机采集结直肠癌104例、结直肠息肉63例和正常人110例血清标本，采用ALU-qPCR方法定量检测血清ALU115表达水平；用化学发光方法检测肿瘤标志物CEA的水平。结果：（1）结直肠癌患者血清ALU115浓度中位数为1046.0 ng/mL，显著高于结直肠息肉组423.3 ng/mL和对照组385.4 ng/mL，差异有统计学意义（P均<0.001），结直肠息肉组和对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。（2）结直肠癌血清ALU115和CEA联合检测灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别是82.69%、99.09%、91.12%、98.85%和85.82%，两者联合检测提高结直肠癌诊断率。结论：基于ALU序列的实时荧光定量PCR是一种快速简便、灵敏度高及特异性好的检测方法。血清cf-DNA浓度对结直肠癌辅助诊断有一定的价值。
关键词： 结直肠癌 游离DNA Alu序列 实时荧光定量聚合酶链反应 癌胚抗原 -
两种游离DNA检测方法的比较研究
目的：对比评价人血清游离DNA的分支DNA（bDNA）检测和实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测方法。方法：收集44例人血清标本，分别运用bDNA技术和荧光定量PCR检测其游离DNA浓度，对2种方法检测结果做分析比较。同时采用bDNA技术分别检测其中10例血清和血浆游离DNA含量。结果：bDNA技术的检测结果和荧光定量PCR具有较高的相关性（r=0.7077，P<0.0001）；血清较血浆具有较高的游离DNA的水平。结论：bDNA操作简便且结果可信，适用于人群大规模筛查游离DNA水平。
关键词： 游离DNA 分支DNA 实时荧光定量聚合酶链反应 化学发光免疫分析仪 -
血清游离DNA检测在卵巢癌的诊断价值
目的：探讨检测血清游离DNA （cf‐DNA ）在卵巢癌的诊断价值。方法采用分支DNA（bDNA）技术检测36例卵巢癌患者（A组）、22例卵巢良性肿瘤患者（B组）和29例健康妇女（C组）血清cf‐DNA含量，用化学发光法检测 A 组血清中糖链抗原125（CA125）和人附睾蛋白4（HE‐4）含量，绘制受试者工作特征（ROC）曲线，评价上述三项指标的诊断效能。结果 A组cf‐DNA含量高于B、C组（P＜0．01），B、C组cf‐DNA含量相仿（P＞0．05）。cf‐DNA与CA125、HE‐4均无明显相关性（r＝0．06、0.04，P＞0．05）。A组血清cf‐DNA的ROC曲线下面积为0.92，高于CA125的0.72和HE‐4的0.74。A组诊断卵巢癌的敏感度和特异度分别为88.9％和89.5％，高于CA125的75.0％和52.6％以及HE‐4的80.6％和68.4％（P＜0．01）。cf‐DNA、CA125和HE‐4联合检测的敏感度和特异度分别为91.67％和86.21％。结论卵巢癌患者血清cf‐D N A诊断卵巢癌敏感度和特异度较高，有一定辅助诊断价值。
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基于Alu序列的分支DNA技术定量检测血游离DNA方法的建立
目的 建立一种操作简便、灵敏性较高的定量检测血游离DNA(CFD)的方法.方法 运用基于Alu序列的分支DNA技术定量检测血清CFD.结果 该检测的标准曲线相关系数R2=0.9916,线性范围0-400 ng/ml,低检出限0.86ng/ml,回收率93.35％-115.76％,重复性良好.正常人血清CFD水平为181.9(109.5,328.7)ng/ml,男性和女性的CFD水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 基于Alu序列的分支DNA技术定量检测血清CFD线性较好,灵敏度较高,结果较为准确且重复性较好,易于标准化,适于临床开展大样本检测.
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血清游离DNA检测在系统性红斑狼疮患者的应用
目的 探讨检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清游离DNA的临床意义.方法 采用分支DNA(bDNA)技术检测69例SLE患者(SLE组)、26例RA患者(RA组)和41例健康人(C组)血清游离DNA浓度,分析SLE患者抗dsDNA抗体、抗SmD1抗体、补体、24-h尿蛋白定量、C反应蛋白、血沉和SLE疾病活动指数(SLEDAI)与血清游离DNA浓度的相关性.结果 与C组和RA组相比,SLE组患者血清游离DNA水平增高(P＜0.01).SLE组抗SmD1抗体阳性患者的血清游离DNA水平高于抗SmD1抗体阴性者(P＜0.05).SLE患者血清游离DNA浓度与血清抗dsDNA抗体、SLEDAI、血沉呈负相关(P＜0.05),而与24-h尿蛋白定量、补体、C反应蛋白无明显相关性(P＞0.05).结论 血清游离DNA检测可用于评估SLE病情进展.
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机采血小板中游离DNA含量的测定及影响因素分析
目的 测定机采血小板(AP-PCs)中游离DNA的含量,并分析其影响因素.方法 从53例合格献血者各采集AP-PCs 1个治疗剂量后,尽快从其中留取标本,并将其分成5份.其中1份用于血液分析仪检测,另外4份于采集后4 h内、24、48和72 h时,分别在过滤前后、离心前后等不同状态下进行DNA抽提,用实时定量PCR方法(RQ-PCR)对其中的人类白蛋白基因进行检测,并将结果换算成白细胞当量(WBCs/μl).结果 AP-PCs在采集后的4 h内、24、48和72 h时,其过滤前游离DNA的含量(WBCs/μl)分别为13.3±6.1,24.7±10.7,47.5±20.1和146.3±63.2;过滤后其相应值(WBCs/μl)则为8.1±3.7,22.2±9.4,44.7±18.7和125.8±57.9.过滤前后游离DNA含量差异无统计学意义(F=2.922,P＞0.05),不同保存时间组之间游离DNA含量差异具有统计学意义(F=512.734,P＜0.01).ABO血型不同的AP-PCs经过相同保存时间后,其过滤前游离DNA含量差异无统计学意义(F=0.662,P＞0.05).结论 AP-PCs中游离DNA的含量随着保存时间的延长而上升,但与过滤与否及供者血型无关.
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血中游离DNA与肿瘤
血中游离DNA指血中游离于细胞之外的一类DNA,简称循环核酸,于1947年由Mandel和Metais发现.肿瘤患者外周血DNA水平高于正常人且血中游离DNA具有肿瘤细胞DNA的特征,如肿瘤相关基因的突变、微卫星改变、甲基化异常和线粒体DNA突变等.随着肿瘤分子生物学的深入研究,血中游离DNA定性定量分析已开始应用于肿瘤的早期诊断、个体化治疗和预后判断等.血中游离DNA结合各类分子生物学检测技术,有望成为具有一定敏感性及高特异性的临床诊断方法.此外,血中游离DNA还有可能成为非细胞形式的肿瘤转移的新途径.
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体液游离寄生虫DNA在寄生虫病诊断中的研究进展
目前在多种寄生虫感染患者的血清、血浆、尿液、唾液等体液中检测到相应的游离寄生虫DNA分子(Cell-FreeParasite DNA,CFPD),由于其高度的特异性和灵敏性,在寄生虫病无创诊断和连续监测等方面展示出较强优势.本文即对近年来国内外学者对寄生虫感染者体液中CFPD的研究现状作一综述,以期为今后寄生虫病诊断的发展方向提供新思路,并对当前存在的相关问题进行探讨.
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Vangenes Cell-Free DNA采血管与Streck Cell-Free DNA采血管在无创产前检测应用中的效果比较
目的:比较Vangenes ? Cell-Free DNA采血管和Streck ? Cell-Free DNA 采血管对血液样品的运输保存效果.方法:通过静脉抽血, 18名志愿者分别使用Vangenes ? Cell-Free DNA 采血管与Streck ? Cell-Free DNA采血管各采集一管10mL血液.经过约50h运输样本回到实验室,进行血浆分离、游离DNA提取、构建文库、上机测序并进行建库浓度、测序数据的unique read counts、 GC%以及duplication值等分析.结果:经比较, Vangenes ?Cell-Free DNA采血管保存样品在血浆颜色、建库浓度以及测序数据的unique read counts、 GC%以及duplication值等达到了Streck ? Cell-Free DNA 采血管保存样品相似的结果,二者不存在显著性差异.结论:在血液样品运输保存过程中, Vangenes ? Cell-Free DNA采血管可有效阻止有核细胞破裂导致的基因组DNA对于游离DNA的污染,对于利用胎儿游离DNA进行的无创产前检测技术具有重要意义.
关键词： 游离DNA Cell-Free DNA采血管 无创产前检测 -
孕妇外周血胎儿游离DNA的检测及应用研究
从1997年首次在孕妇外周血中发现胎儿DNA以来,众多学者致力于将其应用于无创性的产前诊断.荧光定量PCR实现了胎儿游离DNA浓度的检测,目前研究发现,正常孕妇血浆胎儿DNA浓度稳定于某一水平,有望成为产前诊断和孕期检测的一项新指标.有学者认为,子痫前期母循环中胎儿DNA可有异常增高,而且子痫前期的孕妇在有临床症状前,孕妇血浆胎儿DNA水平异常增高,这与较多胎儿DNA释放到母血中,和肝肾功能异常导致胎儿DNA在母血中清除紊乱有关.此外许多妊娠合并症和并发症都伴有母外周血DNA水平的异常增高,例如:性连锁疾病、Rh血型不合、父系遗传性疾病、染色体非整倍体胎儿、早产等.现就孕妇外周血胎儿游离DNA的检测及临床应用作一综述.
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血浆游离DNA水平检测在胃癌诊断、转移中的应用价值
目的 观察胃癌患者血浆游离DNA(cf-DNA)水平变化,并探讨其在胃癌诊断、转移中的价值.方法 原发性胃癌初诊患者81例(胃癌组),并选取同期门诊体检健康者43例作为对照组.比较两组血浆cf-DNA及CEA、CA724、CA199水平,比较cf-DNA、CEA、CA724、CA199对胃癌的诊断效能,观察cf-DNA与胃癌临床病理参数的关系,采用Logistic回归分析胃癌发生远处转移的危险因素.结果 与对照组相比,胃癌组血浆cf-DNA水平升高(P<0.05).CEA、CA724、CA199、cf-DNA诊断胃癌的ROC曲线下面积分别为0.575、0.531、0.524、0.857.胃癌组无转移、仅近端淋巴结转移、远端脏器转移三者cf-DNA比较差异有统计学意义(P均<0.05).cf-DNA水平(OR=4.178,95％CI:1.309～13.332,P=0.016)是胃癌发生远处转移的独立危险因素.结论 胃癌患者血浆cf-DNA水平升高,检测血浆cf-DNA有助于胃癌的诊断、转移判断.
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晚期非小细胞肺癌血清游离DNA水平变化及意义
目的 探讨ⅢB/Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清游离DNA的水平变化及其临床意义.方法 采用荧光定量PCR方法检测60例NSCLC患者和30例健康人外周血清中游离DNA水平,并结合其临床特征统计分析.结果 ⅢB期/Ⅳ期NSCLC患者和健康人群血清游离DNA值分别为(218.67±95.73) ng/mL与(11.30±3.80) ng/mL(P ＜0.001).ⅢB期与Ⅳ期NSCLC患者血清游离DNA水平分别为(157.10±53.50) ng/mL与(255.88 ±93.28) ng/mL(P ＜0.05).腺癌患者血清游离DNA水平明显高于鳞癌患者(P＜0.05).结论 ⅢB/Ⅳ期NSCLC患者血清游离DNA水平升高,且以Ⅳ期患者为著.血清游离DNA水平可能成为NSCLC早期诊断和临床分期的重要指标.
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宫颈癌患者血浆游离DNA的含量变化研究
目的:检测宫颈癌患者血浆游离DNA含量并探讨其与临床病理特征之间的关系.方法:收集42例宫颈癌、20例宫颈鳞状上皮内瘤样病变Ⅲ患者和20例健康妇女的外周血.用微量基因组提取试剂盒提取血浆DNA,用双链DNA高敏试剂盒和荧光仪测定血浆DNA含量.结果:宫颈癌患者的血浆DNA水平(15.14±7.10)ng/mL明显高于宫颈鳞状上皮内瘤样病变Ⅲ(8.10±3.06)ng/mL和正常对照组(7.60±3.87)ng/mL(P<0.05),宫颈鳞状上皮内瘤样病变Ⅲ和正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05). Ⅰ期宫颈癌患者的血浆DNA水平(12.78±5.58)ng/mL明显高于正常和宫颈鳞状上皮内瘤样病变Ⅲ组(P<0.05),Ⅱ～Ⅲ期患者的血浆DNA水平(17.99±7.81)ng/mL明显高于Ⅰ期组(P<0.05).Ⅰ～ⅡA期患者中,肿块直径>4 cm者的血浆DNA水平(15.60±6.13)ng/mL明显高于肿块直径<4cm者(9.68±2.84)ng/mL(P<0.05).以正常对照者血浆DNA水平的95%可信区间上限15.70 ng/mL为界值,其诊断的敏感性为38.10%,特异性为92.50%,阳性预测值为84.21%,阴性预测值为58.73%.结论:宫颈癌患者的血浆DNA水平与疾病的发生、发展和预后密切相关,血浆DNA水平可能有助于宫颈癌的鉴别诊断.
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血液游离DNA表达量在胃癌及肺癌诊断中的价值初探
目的 评判肿瘤患者血液游离DNA(cell-free DNA)对肿瘤诊断意义.方法 采集胃癌及肺癌患者血液,提取cell-free DNA并定量,与肿瘤相关生长因子(TSGF)、甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)进行检验效能对比.结果 早期胃癌、中晚期胃癌、早期肺癌、中晚期肺癌分别与健康对照比较,cell-free DNA均有差别(P值均＜0.05).cell-free DNA的AUC为0.78,Z值为5.80,cut-off值8.05 ng/μl,特异性和灵敏度性优于AFP和CEA.结论 结合AFP和CEA,cell-free DNA表达量检测可能是一种筛查肺癌和胃癌的诊断指标.
关键词： 游离DNA 恶性肿瘤特异性生长因子 甲胎蛋白 癌胚抗原 -
循环游离DNA EGFR突变检测在非小细胞肺癌药物反应性中的临床应用
肺癌是发病率和致死率都很高的恶性肿瘤.据新数据统计,2002年全球接近135万人诊断为肺癌,其中118万死亡[1].非小细胞肺癌(Nonsmall-Cell Lung Cancer,NSCLC)约占肺癌的80%,是目前肿瘤导致死亡的一种主要病因.对这种恶性程度很高的疾病临床治疗措施有限,早、中期以手术治疗为首选,晚期无法手术或拒绝手术的患者,可采取放疗或化疗综合治疗.
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直接荧光定量法检测肺癌患者血浆游离DNA含量临床意义
目的 探讨荧光染料直接染色法检测血浆游离DNA含量在肺癌诊断和预后判断中的意义.方法 用picogreen 荧光染料直接染色法测定不同浓度的人基因组DNA之吸光度,并依此制作标准曲线;收集27例肺癌患者(小细胞肺癌9例,非小细胞肺癌18例)和37例健康体检者新鲜血浆,用picogreen荧光染料直接染色法对血浆游离DNA进行染色,与标准曲线对比得出其含量.结果 正常对照组血浆DNA水平(14.1±3.8) μg/L,肺癌组血浆DNA水平15.3 μg/L～1771.2 μg/L; 18例非小细胞肺癌血浆DNA水平15.3 μg/L ～ 219.7μg/L,9例小细胞肺癌为68.5μg/L～1771.2 μg/L.秩和检验显示:肺癌组明显高于正常对照组(P＜0.05);小细胞肺癌组和非小细胞肺癌组之间也有显著性差异(P＜0.05);小细胞肺癌伴转移组高于非转移组(P＜0.05).结论 肺癌患者血浆游离DNA水平与疾病的发生、发展和预后密切相关,检测血浆DNA水平有助于肺癌的诊断和预后判断.
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结直肠癌患者血浆游离DNA含量与临床特征的相关性
目的 探讨结肠癌及其早期病变不同分期之间血浆游离DNA水平的差异及结直肠癌病变特性与血浆游离DNA水平的关系.方法 收集2016年5月-2016年10月郑州大学人民医院收治的结肠息肉、结肠癌、直肠癌患者血浆样本共72例.采用磁珠法提取患者血浆游离DNA,采用Qubit 3.0荧光计定量血浆游离DNA的浓度,分析血浆游离DNA含量与患者临床特征的相关性.结果 结肠癌患者血浆游离DNA(439.4±218.8)ng/ml水平显著高于结肠息肉组(307.6±215.4)ng/ml(P<0.05),也显著高于直肠癌组(256.7±123.2)ng/ml(P<0.01),结肠息肉患者血浆游离DNA水平与患者年龄、性别、息肉病理类型、数量、大小无显著相关性,结直肠癌患者血浆游离DNA水平与患者年龄、性别、肿瘤分期、大体类型无显著相关性,与肿瘤体积的对数呈正相关(r=0.477,P<0.01).结论 血浆游离DNA水平可有助于诊断结肠癌,并可间接反映结直肠癌患者体内的肿瘤负荷.
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卵泡液中游离DNA含量与卵母细胞成熟度及胚胎质量的关系
目的:探讨卵泡液中游离DNA含量与卵母细胞成熟度及胚胎质量的关系.方法:共收集了87位患者的成熟与未成熟卵泡液.以年龄30岁为界,定义年龄＜30岁的为A组,年龄≥30岁的为B组.使用DNA手工提取法(改良酚-氯仿-异丙醇法)进行卵泡液中游离DNA的提取并检测.结果:成熟卵泡液组中游离DNA含量[(1 168.4±81.1) μg/L]低于未成熟卵泡液组[(1 875.6±95.7)μg/L],差异有统计学意义(P ＜0.001).A组可移植胚胎数目[(5.6±2.7)个]、优质胚胎数目[(3.9±1.8)个]高于B组[(4.1 ±2.5)和(2.5±1.6)个],A组成熟卵泡液中游离DNA含量[(1 129.4±78.6)μg/L]低于B组[(1 214.2±56.8) μg/L],差异均有统计学意义(P＜0.001).结论:游离DNA含量可能是评价卵泡细胞成熟度以及预测胚胎质量的指标.
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游离DNA(cfDNA)在膀胱癌中的研究进展
游离DNA(cell-free DNA,cfDNA),又称循环DNA,是存在于血液、尿液中游离于细胞外的DNA.作为一种新型的诊断标志物,其应用价值在多种实体肿瘤中得以证实.在膀胱癌的研究中,游离DNA具备独特的优势,尤其在早期诊断膀胱癌方面具有巨大的潜能.
