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上海市静安区性病门诊50岁以上男性就诊者HSV-2感染率及其影响因素研究
目的 调查研究上海市静安区50岁及以上男性性病门诊患者2型单纯疱疹病毒(HSV-2)感染率及其影响因素.方法 连续入选2011年3--9月首次到华山医院及其分院静安区中心医院性病门诊50岁及以上男性就诊者作为研究对象,在其知情同意的情况下进行问卷调查,并采集血液标本进行HSV-2 IgG抗体和人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体检测.结果 共157人首次前来就诊并知情同意接受本调查,平均年龄(60.1±7.7)岁.HIV阳性1人(0.6％),HSV-2阳性52人(33.1％).多因素Logistic回归分析显示:婚姻状况(OR=0.27,95％CI:0.10 ～0.73)、文化程度(小学及以下OR=0.23,95％CI:0.07～0.77；初中OR =0.47,95％ CI:0.21 ～1.04)、是否退休(OR=2.68,95％ CI:1.23 ～ 5.85)以及有无子女(OR=0.08,95％CI:0.01～0.88)是50岁及以上男性HSV-2感染的影响因素.结论 上海市静安区50岁及以上性病门诊男性就诊者中HSV-2感染率高,有必要加强该人群HSV-2防治工作.
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2型单纯疱疹病毒感染后HaCaT细胞分泌细胞因子的变化研究
目的 探讨2型单纯疱疹病毒(HSV-2)感染后人角质形成细胞分泌细胞因子的状况.方法 采用非洲绿猴肾细胞株VERO细胞进行HSV-2病毒扩增,再以HSV-2感染HaCaT细胞,采用ELISA和荧光实时定量PCR检测感染后24h、48h和72h时IL-10、IFN-γ、TGF-β的分泌和表达情况.结果 经HSV-2感染后HaCaT细胞分泌和表达的IL-10、IFN-γ、TGF-β与对照组相比有统计学差异,并呈时间相关性.结论 在HSV-2感染早期KC参与了免疫反应,其分泌和表达的细胞因子的偏移可能参与了HSV-2的病理机制.
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短发夹RNA表达载体对2型单纯疱疹病毒UL54基因的干扰效应
目的 研究短发夹核糖核酸(shRNA)表达载体对2型单纯疱疹病毒(HSV-2) UL54基因的干扰效应.方法 针对HSV-2 UL54基因,构建5个靶向HSV-2 UL54基因的短发夹RNA重组表达载体(sh-RNA1081、shRNA1092、shRNA1276、shRNA1407、shRNA1508),同时设计不针对任何基因的序列为阴性对照组(阴性对照组)及不加任何重组表达载体的空白对照(空白对照组).重组表达载体通过脂质体转染人胚胎肾细胞(HEK293)后接种HSV-2,48 h后利用荧光定量RT-PCR检测各组细胞UL54 mRNA的表达水平,终点滴定法测定HSV-2子代病毒滴度.结果 荧光定量RT-PCR结果示,与空白对照组相比,shRNA 1081、shRNA1407和shRNA1508能够降低HSV-2 UL54 mRNA的表达水平(P均＜0.01);对UL54基因的抑制率在阴性对照组(加shRNA NC)、shRNA1081组、shRNA1407组、shRNA1508组分别为7％、69％、56％及55％,以shRNA 1081组为高.终点滴定法结果示,与空白对照组比较,shRNA 1081组、shRNA 1407组、shRNA 1508组病毒滴度不同程度下降(P均＜0.01).结论 成功构建UL54 shRNA重组表达载体,shRNA1081、shRNA1407、shRNA1508能在体外细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL54基因表达,从而抑制HSV-2在HEK293细胞中的复制.
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KDEL修饰的HSV-2CD8+T细胞表位促进CTL效应的研究
目的:研究赖氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-亮氨酸(Lys-Asp-Glu-Leu,KDEL)修饰的2型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 2,HSV-2)CD8+T细胞表位促进细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicity T lymphocyte,CTL)效应.方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组5只,用各抗原肽免疫C57BL/6小鼠,采用3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应、标准4 h51Cr释放试验检测CD8+T细胞特异性CTL效应,观察HSV-2CD8+T细胞表位(SSIEFARL,S1)、KDEL修饰的HSV-2CD8+T细胞表位(SSIEFARL-KDEL,S1-KDEL)、4拷贝串联的CTL表位[(SSIEFARL)4,S4]及KDEL修饰的串联CTL表位[(SSIEFARL)4-KDEL,S4-KDEL]的特异性细胞免疫应答.结果:3H-TdR掺入试验中,S4组和S4-KDEL组cpm值显著高于对照组和S1组、S1-KDEL组(P＜0.05);S4-KDEL组的cpm值显著高于S4组(P＜0.05);S1组和S1-KDEL组与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05);S1组与S1-KDEL组比较,cmp值亦无显著性差异(P＞0.05).以S1致敏的EL4细胞为靶细胞的杀伤实验中,S4和S4-KDEL组诱导的CTL活性明显高于对照组、S1组及S1-KDEL组(P＜0.05);S4-KDEL组诱导的CTL活性明显高于S4组(P＜0.05),S1组和S1-KDEL组与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05);S1组与S1-KDEL组比较,差异亦无显著性(P＞0.05);以EL4细胞为靶细胞的实验中,实验组的杀伤率均在10%以下,与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05).结论:KDEL修饰的串联HSV-2CD8+T细胞表位能有效促进CTL效应.
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2型单纯疱疹病毒对HaCaT细胞分泌I型干扰素的影响
目的: 评价2型单纯疱疹病毒(HSV-2)对人永生化角质形成细胞(HaCaT)分泌I型干扰素(IFN-α、IFN-β)的影响,探讨角质形成细胞(KC)对HSV-2 感染的免疫防御机制.方法: 以HSV-2感染HaCaT细胞,采用荧光实时定量PCR检测感染后24 h、48 h、72 h IFN-α1、α2、β1 mRNA的表达.结果: HaCaT细胞静息状态存在IFN-α1、α2、β1三种细胞因子的mRNA表达,但HSV-2感染HaCaT细胞后IFN-α1、α2、β1 mRNA的表达较对照组明显升高(P<0.05),且在72 h内随时间的递增而逐渐升高.结论: 在HSV-2感染KC的初期,KC分泌的I型干扰素参与HSV-2感染的免疫防御反应,对清除HSV-2及防止其扩散有积极作用.
关键词： 2型单纯疱疹病毒 角质形成细胞 人永生化角质形成细胞 免疫防御 I型干扰素 -
2型单纯疱疹病毒对 HaCaT 细胞分泌IL－17和IL－23 mRNA的影响
目的：：检测2型单纯疱疹病毒( HSV－2)感染后HaCaT细胞分泌IL－17、IL－23 mRNA的水平变化,明确IL－17和IL－23与角质形成细胞( KC)是否参与了HSV－2病毒感染初期的免疫防御机制。方法：用 HSV－2病毒感染HaCaT细胞,采用荧光实时定量PCR检测感染后24 h、48 h、72 h及空白对照组IL－17、IL－23 mRNA的表达。结果： HSV－2病毒感染后72 h HaCaT细胞分泌IL－17 mR-NA的表达量低于对照组,而IL－23 mRNA表达量高于对照组( P<0.05)。结论：在HSV－2感染KC初期,IL－17和IL－23可能参与早期免疫防御反应。
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感染2型单纯疱疹病毒对人宫颈上皮细胞自噬活性及IFN-β、IL-6表达的影响
目的 探讨2型单纯疱疹病毒(HSV-2)对人宫颈上皮细胞HCE自噬及干扰素β(IFN-β)、IL-6表达的影响.方法 将体外培养的人宫颈上皮细胞HCE分为观察组和对照组,观察组用Vero细胞病毒接种HSV-2,对照组正常培养不进行处理.收集对照组和观察组感染HSV-2后1、4、11、18、22 h的细胞,采用免疫荧光法(FITC)检测各组细胞荧光强度,采用Western blotting法检测各组细胞LC3Ⅱ表达量;收集对照组和观察组感染HSV-2后1、4、11、18、22 h的细胞,采用ELISA法检测上清液IFN-β、IL-6.结果 感染HSV-2后观察组细胞荧光强度、LC3Ⅱ表达量及上清液IL-6、IFN-β水平迅速升高,与对照组相比,P均<0.05.至感染后4 h观察组细胞荧光强度、LC3Ⅱ表达量及上清液IL-6、IFN-β水平均达到峰值,然后缓慢下降.结论 感染HSV-2可以提高人宫颈上皮细胞自噬活性及IFN-β、IL-6表达,且感染早期效果较强.
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衡阳地区性乱人群中HSV2感染的研究
目的了解性乱人群典型皮损及无皮损的生殖道分泌物中2型单纯疱疹病毒(HSV2 )的感染情况.方法用PCR法对衡阳地区310例性乱者作HSV2-DNA检测.结果 187例典型皮损的性乱人群中,115例检出HSV2-DNA,阳性率为61.5%,其中男性阳性率为54.9%, 女性阳性率为77.8%,男女之间差异显著(P<0.05).123例无皮损性乱人群中,28例检出HSV2-DNA,HSV2-D NA检出率为22.8%,其中男性阳性率为20.9%,女性阳性率为27.0%.结论衡阳地区性乱人群中HSV2有较高的感染率,典型皮损区HSV2-DNA检出率高于无皮损的生殖道分泌物.
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性乱人群中2型单纯疱疹病毒感染的分析
目的为了解性乱人群不典型皮损中及无皮损的生殖道分泌物中2型单纯疱疹病毒(HSV2)的感染情况.方法在HSV2高度保守的基因区设计一对引物,利用聚合酶链反应,对合肥地区620例性乱者作HSV2-DNA检测.结果375例不典型皮损的性乱人群中,141例检出HSV2-DNA,阳性率为37.6%,其中男性占33.6%,女性占47.7%.男女之间差异显著(P＜0.05).无皮损性乱人群245例,60例检出HSV2-DNA,占24.5%,其中男性占22.2%,女性占29.7%.结论本地区性乱人群中HSV2有较高的感染率,不典型皮损区HSV2-DNA阳性检出率高于无皮损的生殖道分泌物,女性感染率高于男性.
