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β-蜕皮激素减轻缺血性心肌损伤的作用及机制
目的:研究B-蜕皮激素(B-ecdysone)减轻缺血性心肌损伤的效应及可能的作用机制.方法:采用冠状动脉左前降支结扎致大鼠心肌缺血性损伤.测定肌酸磷酸激酶(C P K)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(L D H)活性、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化酶(GsH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD).结果:EDS组血清C P K、GOT、L D H含量明显降低,血清和心肌MDA明显减少,全血和心肌GSH-Px明显增加,红细胞和心肌SOD亦明显增加.结论:B-蜕皮激素能减少缺血心肌酶谱的释放,表现出减轻缺血性心肌损伤的效应,机理在于B-蜕皮激素的抗氧化作用.
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杀虫隆对末龄幼虫家蝇表皮成分及体内激素滴度的影响
用不同剂量的几丁质合成抑制剂杀虫隆(Triflumuron)饲喂家蝇(Musca domestica)幼虫后,对末龄幼虫表皮的化学成分进行定量分析,结果表明表皮中几丁质的含量减少了22.6%～46.3%.杀虫隆对表皮粗脂肪的合成稍有促进作用,但影响不显著.用高浓度(>1mg/L)杀虫隆处理家蝇幼虫后能明显提高表皮中粗蛋白的含量.用高效液相色谱法测定家蝇末龄幼虫不同时龄血淋巴中蜕皮激素和保幼激素的含量变化,结果表明杀虫隆能强烈抑制末龄幼虫血淋巴中蜕皮激素的滴度峰,但对峰期以外时间的滴度没有显著影响.杀虫隆可使末龄幼虫的保幼激素滴度在24时龄前维持在高于正常幼虫的水平,24时龄后,对照组血淋巴中的保幼激素滴度开始上升,在48时龄时上升到一较高值,而处理组却在48时龄时下降到较低水平.
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保幼激素和蜕皮激素对德国小蠊聚集信息素生物合成的影响
目的 研究保幼激素和蜕皮激素对德国小蠊聚集信息素生物合成的影响,为制定德国小蠊的防制措施提供科学依据.方法 提取德国小蠊聚集信息素,用气相色谱检测各组分的相对含量.结果 德国小蠊在5龄前期摘除咽侧体,聚集信息素的2种主要组分二甲基二十九碳烷和甲基二十九碳烷的含量分别降低了10%和21%,注射保幼激素Ⅲ,2种组分的含量分别上升了32%和24%,而在5龄后期影响不明显;德国小蠊在5龄前期摘除前胸腺和注射 20-羟基蜕皮酮(20-E),影响不显著,而在5龄后期摘除前胸腺,2种组分的含量分别降低了18%和12%,注射20-E后,则分别升高了26%和36%.结论 保幼激素和蜕皮激素分别在德国小蠊5龄的前期和后期参与了聚集信息素生物合成的调控.
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白蚁生理活性物质的研究进展
白蚁的生理活性物质(Bioactive substances in termite)包括白蚁的激素、信息素以 及其他生理活性物质。关于昆虫的生理活性物质，据报道早在1878年法国的Fabre就已发现 雌性天蚕蛾能将放飞到几公里以外的150只雄蛾全部诱回。1894年，Bataillon将家蚕结扎而 得 到了半化蛹。德国的Butenandt从1939年开始（由于二战的影响，实际上是从1950年开始） ，用数千 只雌性家蚕蛾做试验，希望能找到性诱活性物质，直到微量化学分析方法和电生理测定方法 出现 后，才于1955年从50万只雌蚕蛾得到了6mg家蚕性信息素，再经过4年的艰苦工作，才鉴定了 化学结构，取名为蚕醇。1954年从500kg蚕蛹中分离得25mg蜕皮素，到1965年才鉴定了化学 结构。此后，昆虫生理活性物质的研究迅速发展，在作用对象上形成了如下三个层次：一是 在个体本身起作用的激素，如脑激素、蜕皮激素和保幼激素；二是在种内起作用的信息素， 如性信息素、聚集信息素和追迹信息素；三是在种间起作用的生态素（ecomone），如利它 素、互利素、互损素。 小小昆虫，其生活如此绚丽多彩，能动用这么多种的化学物质，不免使人惊叹他的多才多艺 。经研究得知，这些化学物质大多是从食物中获取的，有些是靠共生物种的转化而成，有些 是经昆虫自身改造得到。另外，昆虫还能一物多用，例如防卫物可起到报警和聚集信息素的 作用，同一种物质在低浓度时为追迹信息素，浓度高时又成为性信息素，如此等等。 生理活性物质的含量本来就很少，再加上昆虫的个体小，在微量化学分析和电生理测定尚未 发展时，要进行定量研究是不
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受控型蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ转基因载体的构建及其在细胞水平上的有效性检测
目的:构建一种可以在哺乳动物细胞中蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的受控型转基因载体,为制备受控型蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的转基因小鼠奠定基础.方法:利用分子克隆技术构建受控型蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的转基因载体;将其电转至AM1菌中,利用其中的Cre重组酶将载体上两个同向LoxP序列锚定的新霉素(neomycin)基因删除,解除其对蜕皮激素诱导表达系统的阻断作用,利用PCR、酶切和测序鉴定删除情况;将重组后的载体转染至COS7细胞中进行瞬间表达,蜕皮激素诱导后回收培养上清和细胞裂解物进行Western印迹分析,检测hIGF-Ⅰ的表达情况.结果和结论:成功构建大小为13.6 kb的转基因载体pCE-IGF-Ⅰ;转化至AM1中后,PCR、酶切和测序的结果都证明其中的Cre酶能够将载体上neomycin基因删除;重组后的载体转染至COS7细胞中进行诱导表达,Western印迹实验证明截短型hIGF-Ⅰ能够在COS7细胞中顺利表达.上述结果证明该蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的受控型转基因载体能够用于转基因小鼠的制备.
关键词： 蜕皮激素 转基因 Cre/LoxP重组 转染 -
真核细胞诱导表达系统研究进展
在体内外表达外源基因是研究基因功能的一种重要手段.常规表达系统可实现基因的组成型表达,但却不能调控基因的表达时间和表达水平.用常规表达系统研究那些对细胞有毒性作用的基因或在特定组织或特定发育阶段表达的基因,存在一定的局限性.诱导表达系统可以在特定时间以适当的水平表达目的蛋白,这有利于基因功能的研究.目前已经建立了几种较理想的诱导表达系统,它们是研究新基因功能、构建人类疾病动物模型、寻找新的有效药物的有力工具.本文总结了目前常用的几种真核细胞诱导表达系统及其特点.
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RP-HPLC法测定珍珠露水草提取物中蜕皮激素的含量
珍珠露水草提取物是从鸭跖草科植物珍珠露水草Cyanotis arachnoides C.B.Clarke全草中提取的主要活性物质,国内主要用于促使桑蚕龄期缩短,上簇整齐,促进吐丝结茧,国外用于化妆品中防皱.蜕皮激素的测定用紫外分光光度法,误差较大.因此本实验建立了蜕皮激素含量的RP-HPLC测定方法.
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蒸茧液的化学成分研究
蒸茧液是缫丝过程中排出的废液,民间常饮用蒸茧液来治疗多种慢性病,如冠心病、糖尿病、腰腿痛、骨质增生等,从而引起了我们的极大兴趣.本文用柱色谱法从蒸茧液的乙酸乙酯萃取物中分得了β-蜕皮激素;同时,用氨基酸分析仪和原子吸收法测定了蒸茧液中的氨基酸和常微量元素,为开发利用蒸茧液奠定了基础.
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山莨菪碱和蜕皮激素对内毒素致体外内皮细胞能量代谢的保护作用
目的:探讨山莨菪碱(6542)和蜕皮激素(EDS)对内毒素(LPS)致伤培养脐静脉内皮细胞(HUVECs)能量代谢的保护作用.方法:采用反相高效液相色谱分析法测定LPS损伤后培养HUVECs ATP、ADP、AMP及能量负荷(EC)的变化以及6542、EDS的保护作用.结果:LPS与内皮细胞孵育后低浓度、早期内皮细胞被激活,LPS同一浓度刺激后,随刺激时间延长,HUVECs EC降低,与正常比较,12小时后明显降低(P<0.01);而用6542和EDS治疗后,EC、ATP、ADP明显增加,其中EDS治疗后各指标接近正常.结论:LPS在无血清状态下刺激培养HUVECs,能量代谢出现紊乱,EC、ATP、ADP显著降低.EDS治疗后,EC、ATP、ADP均明显升高,且其效果优于6542.
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植物药有效成分β-蜕皮激素抑制血管内皮细胞的凋亡
目的:分析昆虫变态激素β-蜕皮激素是否能抑制血管内皮细胞的凋亡.方法:实验于2003-09/2006-03在南方医科大学病理生理实验室完成.人内皮细胞株ECV-304消化后制成单细胞悬液,接种至无菌培养管(2 mL/管).分为3组:①空白对照组.②模型组:包括40,80,160mmol/L亚砷酸钠3个剂量组.③实验组:包括160 mmol/L亚砷酸钠+50,200,800mg/L β-蜕皮激素3个剂量组.培养24 h后测定相关指标,应用流式细胞术测定内皮细胞的凋亡细胞数及平均通道荧光值,取平均通道荧光值对数,对数值越大,氧化水平越高.结果:①40,80,160 mmol/L亚砷酸钠模型组的血管内皮细胞凋亡率均显著高于对照组(16.70±3.56)%,(26.80±2.48)%,(54.30±11.06)%,(7.67±2.42)%(P＜0.01).②50 mg/L和200 mg/L β-蜕皮激素实验组的血管内皮细胞凋亡率均显著低于160 mmol/L亚砷酸钠模型组(P＜0.01),但800mg/L β-蜕皮激素实验组显著高于160 mmol/L亚砷酸钠模型组(P＜0.05).③40,80,160 mmol/L亚砷酸钠模型组血管内皮细胞的氧化水平均显著低于对照组(P＜0.01),50,200mg/L β-蜕皮激素实验组能便氧化水平有所升高,800mg/L β-蜕皮激素实验组能使氧化水平有所降低,但与亚砷酸钠模型组相比,差异无显著性意义(P＞0.05).结论:亚砷酸钠可剂量依赖地诱导内皮细胞凋亡;β-蜕皮激素能影响亚砷酸钠诱导的内皮细胞凋亡,但具体剂量关系值得进-步分析.
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蜕皮激素对人胚肺二倍体细胞增殖的影响
目的 从细胞水平探讨怀牛膝主要活性成分蜕皮激素抗衰老的作用机制。方法 以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料，分为蜕皮激素组和正常对照组，相同条件下传代培养，以生长曲线、MTT法、3 H-TdR掺入法以及流式细胞仪法观察细胞增殖、细胞周期变化及DNA合成情况。结果 同一代龄，蜕皮激素组细胞增殖数、OD490值、PI值、CPM 掺入量等均明显高于对照组。结论 蜕皮激素有较显著的促细胞增殖能力。
关键词： 怀牛膝 蜕皮激素 人胚肺二倍体成纤维细胞 抗衰老 -
高效液相色谱法测定怀牛膝含药血清中蜕皮激素含量
怀牛膝为苋科草本植物怀牛膝(Achyranthes bidentata BL)的根,具有补肝肾,强筋骨,活血化瘀作用.蜕皮激素(Ecdysterone)是其主要有效成份之一,具有促蛋白质合成,降低胆固醇,降低细胞内过氧化脂质含量,促进人表皮细胞分化及血管内皮细胞分裂增殖等作用[1-6].本实验采取高效液相色谱法,对怀牛膝含药血清中的蜕皮激素含量进行了首次测试报道.
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14种中药提取成分对酪氨酸酶活性的抑制作用
目的寻找更合理的试管内分析方法研究药物对体外酪氨酸酶活性的调节,筛选对酪氨酸酶活性抑制作用显著的中药有效成分.方法采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性,观察14种中药有效成分在试管内对酪氨酸酶系统的调节作用.结果10种中药提取的成分在不同浓度对酪氨酸酶活性、黑素生成量上显示了剂量依赖性抑制.其中丁香酚、姜黄油、没食子酸、丁香酚和姜黄素复合物(1:1)以及前两者与蜕皮激素(ecdysone)的复合物(1:1:1)对酪氨酸酶抑制活性与单体化合物熊果甙比较差异有显著性(P＜0.05);丁香酚、姜黄油对酪氨酸酶呈竞争性抑制,没食子酸呈反竞争性抑制.结论丁香酚、姜黄素、没食子酸和其他中药有效成分对酪氨酸酶具有体外抑制作用.
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基因诱导调控系统研究进展
基因治疗过程中如目的基因过度表达或不适当表达将影响治疗效果,甚至会产生致命的副作用,因此须对目的基因的表达时间和表达水平进行精确调控.
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蜕皮激素减轻心肌缺血再灌注损伤的实验研究
β-蜕皮激素(β-ecdysone EDS)是具有强生理活性的蜕皮激素,促昆虫变态,有许多药理活性.研究表明EDS有抗脂质过氧化作用.本文探讨EDS对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.1 材料和方法1.1 材料
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人重构型caspase-6基因在Hela细胞中的诱导表达
目的: 将重构型caspase-6分子(RCasp-6)克隆入可诱导真核表达载体pIND中, 经蜕皮激素类似物诱导探讨其对细胞凋亡的促进作用.方法: 用PCR扩增RCasp-6基因, 并克隆入真核表达载体pIND中.以重组体转染Hela细胞系, 蜕皮激素类似物诱导. RCasp-6基因的表达产物采用免疫细胞化学染色检测.HE染色观察转染细胞的形态变化, 并计数细胞绘制生存曲线.结果: 成功地构建了RCasp-6基因的可诱导真核表达载体.转染的细胞经蜕皮激素诱导后, 细胞形态异常.转染了RCasp-6基因的细胞固缩同时很多细胞死亡.结论: RCasp-6基因具有促进细胞死亡的作用.
关键词： 人caspase-6 Hela细胞 蜕皮激素
