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丙泊酚对培养的大鼠缺氧/复氧心肌细胞内游离钙的影响
目的建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,测定细胞内游离钙([Ca2+]i)观察丙泊酚对缺氧]复氧心肌细胞的保护作用.方法大鼠心肌细胞正常培养6-8天后分为4组.Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为单纯缺氧组,Ⅲ、Ⅳ组为缺氧/复氧加丙泊酚组.比较对照组(Ⅰ组)和实验组(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组)的细胞内游离钙([Ca2+]i)的变化.结果心肌细胞[Ca2+]f:Ⅱ组(781.64士298.20nmol/L)与Ⅰ组(188.99±30.78nmol/L)相比较有显著性差异(P<0.05),Ⅲ组(279.11±106.14nmol/L)与Ⅰ组无显著性差异(P<0.05),Ⅱ组与Ⅳ组(469.41±145.35nmol/L)有显著性差异(P<0.05),Ⅲ组与Ⅳ组有显著性差异(P<0.05).结论临床剂量丙泊酚和超临床剂量丙泊酚均可抑制钙超载,但使用临床剂量效果优于超临床剂量.静脉麻醉药丙泊酚可以通过抑制钙超载对抗缺氧所致的心肌细胞损伤.丙泊酚尚可认为具有钙拮抗剂作用.
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血红素加氧酶1对人脊髓星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的 探讨血红素加氧酶1(heme oxygenase,HO-1)过表达对人脊髓星形胶质细胞(human astrocytes of spinal cord,HA-sp)缺氧/复氧损伤的保护作用.方法 通过给予HA-sp氯化钴(250μl/L CoCl2)刺激模拟缺氧,然后再去除CoCl2刺激,建立细胞缺氧/复氧损伤模型.采用免疫印迹(western blot,WB)方法,从蛋白水平上检测不同刺激条件下HA-sp中HO-1的表达.采用四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)方法,分析单纯给予缺氧/复氧刺激后以及上调HO-1表达的同时给予缺氧/复氧刺激后HA-sp的存活率变化.结果 缺氧/复氧刺激条件下,HA-sp中HO-1蛋白过表达.利用锌原卟啉(ZnPPIX)抑制缺氧/复氧刺激条件下HO-1过表达后,HA-sp在缺氧/复氧刺激条件下存活率明显降低(P<0.01);与单纯给予缺氧/复氧刺激后HA-sp的存活率相比,用钴原卟啉(CoPP)上调HA-sp中HO-1表达的同时给予缺氧/复氧刺激,细胞存活率明显升高(P<0.01).结论 利用CoPP上调HA-sp中HO-1的表达,具有抗细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.
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九龙藤总黄酮对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的：研究九龙藤总黄酮（ BCF）对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法分离出生1~3 d的大鼠乳鼠心肌细胞，培养72 h后随机分为空白对照组、缺氧/复氧模型组、九龙藤总黄酮（60、120和240μg/ml）干预组和舒血宁注射液（SXN，100μg/ml）阳性对照组，每组设8个复孔。药物干预6 h后，观察各组细胞形态学变化，通过MTT比色法测定细胞存活率；测定各组细胞培养液中谷草氨酸氨基转移酶（ AST）、磷酸肌酸激酶（ CPK）、乳酸脱氢酶（ LDH）释放量；测定各组细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）活性以及丙二醛（MDA）含量；通过流式细胞术测定细胞凋亡率。结果与空白对照组相比，缺氧/复氧模型组心肌细胞形态明显异常、细胞存活数明显减少，培养液中AST、CPK、LDH释放量显著升高，细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性显著降低且MDA含量显著升高，差异均具有统计学意义（P﹤0.05，P﹤0.01）。与缺氧/复氧模型组比较，九龙藤总黄酮120、240μg/ml干预组心肌细胞形态明显好转，存活细胞数明显增加，培养液中AST、CPK释放量显著减少，细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低，细胞凋亡率显著降低，并且九龙藤总黄酮240μg/ml干预组培养液中LDH释放量显著降低及细胞中GSH-Px活性显著升高，差异均具有统计学意义（P﹤0.05，P﹤0.01）。结论九龙藤总黄酮能够有效改善缺氧/复氧损伤心肌细胞形态、提高细胞存活率、改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤、并降低细胞凋亡率，提示九龙藤总黄酮对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有剂量依赖性的保护作用。
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风轮菜总黄酮不同极性部位的抗氧化作用研究
目的：探讨风轮菜总黄酮的不同极性部位对缺氧／复氧诱导的 H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法：建立缺氧／复氧 H9c2心肌细胞损伤模型，对风轮菜总黄酮10％甲醇部位（2＃）、20％甲醇部位（3＃）、30％甲醇部位（5＃）进行药物浓度筛选，采用 MTT 法测定细胞存活率。收集培养细胞及其上清液测定乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）及过氧化氢酶（CAT）的活性和丙二醛（MDA）的含量。结果：与正常对照组比，模型组 H9c2心肌细胞经过缺氧4h 复氧24h 造模后，细胞活力显著降低。与模型组比较，2＃、3＃、5＃给药组显著增加 H9c2心肌细胞活力。与正常对照组比较，模型组的 SOD、GSH-Px 及 CAT 的活性均显著降低，而 LDH 活性、MDA 含量均升高，2＃、3＃、5＃给药组可呈浓度依赖性显著增加 SOD、GSH-Px 及 CAT 活性，降低 LDH 活性及 MDA 含量。结论：2＃、3＃、5＃对缺氧／复氧诱导的 H9c2心肌细胞损伤具有保护作用，其与增强细胞清除氧自由基能力、降低脂质过氧化物的产生有关。
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马齿苋总黄酮对缺氧/复氧致心肌细胞损伤的影响及机制研究
目的:研究马齿苋总黄酮(PTF)对缺氧/复氧致心肌细胞损伤的影响及机制.方法:利用体外培养的H9c2心肌细胞建立缺氧/复氧模型.将培养的心肌细胞分为5组:正常对照组、缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤加10 mg·L-1 PTF组、缺氧/复氧损伤加20 mg·L-PTF组、缺氧/复氧损伤加40 mg·L-1PTF组.MTT法检测心肌细胞存活率,荧光分光光度法 测定心肌细胞内钙离子浓度,比色法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率、RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因Caspase-3 mRNA的表达.结果:与A/R组比较,PTF组(终质量浓度为10,20,40 mg·L-1)均可明显提高缺氧/复氧损伤的心肌细胞存活率,降低NO浓度、细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率[(18.25 ±2.64,P＜0.05),(13.83±1.52,11.21 ±1.76,P＜0.01)],PTF组可有效减少缺氧/复氧损伤心肌细胞内Caspase-3 mRNA的表达.结论:PTF可通过抑制心肌细胞内钙超载、减轻过量NO的细胞毒性作用、下调Caspase-3表达,从而保护心肌细胞.
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气血并治方有效组分干预H/R损伤心肌细胞AMPK相关糖脂代谢通路的分析
目的:观察气血并治方有效组分对缺氧/复氧(H/R)损伤心肌细胞一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)相关糖脂代谢通路的作用机制.方法:分离、提取、培养出生1 ～2dSD乳鼠原代心肌细胞,于常规倒置相差显微镜下观察原代心肌细胞形态及生长状态,经α-横纹肌辅肌动蛋白(α-actinin)免疫荧光染色鉴定为心肌细胞后,进行缺氧3h复氧2h处理制作H/R损伤模型,随机分为正常组(正常氧),模型组(缺氧/复氧),曲美他嗪组(缺氧/复氧+100 μmol·L-1盐酸曲美他嗪,TMZ),气血并治方有效组分组(缺氧/复氧+1 mmol·L-1气血并治方有效组分,CWQB).采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)测定AMPK代表性亚基心肌一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα),及其糖代谢通路中葡萄糖转运体4(GLUT4),磷酸果糖激酶2(PFK2),脂肪酸代谢通路中乙酰辅酶A羧化酶(ACC2),脂肪酸移位酶(FAT/CD36)的基因及蛋白表达情况.结果:与正常组比较,模型组,TMZ组,CWQB组的AMPKα,GLUT4,PFK2基因和蛋白表达上调,ACC2,FAT/CD36基因和蛋白表达下调(P＜0.05);与模型组比较,TMZ组,CWQB组AMPKα,GLUT4,PFK2,ACC2,FAT/CD36基因和蛋白表达均上调(P＜0.05),其中TMZ组上调AMPKα,FAT/CD36基因和蛋白,上调GLUT4,PFK2基因表达的效果更为显著(P＜0.05).结论:气血并治方有效组分可以激活H/R损伤心肌细胞的AMPK信号通路,增强GLUT4介导的葡萄糖转送,PFK2参与的糖酵解,同时促进FAT/CD36调控的脂肪酸转运,上调ACC2抑制脂肪酸氧化过程,进而提高缺氧/复氧条件下心肌细胞对葡萄糖、脂肪酸等产能底物的利用能力,改善H/R损伤心肌细胞的能量代谢.
关键词： 气血并治方 缺氧/复氧 心肌细胞 糖脂代谢 一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶 -
四逆汤类方提取物对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的:探讨四逆汤类方提取物对离体培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法:培养的乳鼠心肌细胞经终浓度分别为1、5、25μg/mL的四逆汤类方提取物预处理,进行缺氧/复氧损伤后,比色法测定细胞内线粒体脱氢酶活性、丙二醛(MDA)含量及培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:与对照组比较,附子、干姜配葱白提取物(EAGO),附子、干姜配甘草提取物(EAGL),附子、干姜配胆汁提取物(EAGB),附子、干姜配人参提取物(EAGG)可以提高细胞内线粒体脱氢酶活性,与附子配干姜提取物(EAG)组比较无显著差异.EAGO、EAGL、EAGB、EAGG可以降低上清液中乳酸脱氢酶活性,与EAG组比较差异显著.EAGL、EAGG可以降低细胞内MDA含量,与FAG组比较差异显著.结论:四逆汤类方均可以提高缺氧/复氧损伤的乳鼠心肌细胞内线粒体脱氢酶活性,降低上清液中乳酸脱氢酶活性.四逆汤和人参四逆汤提取物有降低细胞内MDA的作用.提示四逆汤类方对缺氧/复氧损伤的心肌细胞均有保护作用.
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颐脑解郁方对海马神经元缺氧/复氧损伤突触素表达的影响
目的:探讨颐脑解郁方对缺氧/复氧条件下离体海马神经元突触素表达的影响.方法:以正常大鼠、经颐脑解郁方及尼莫地平灌胃大鼠血清为媒介,制备正常及缺氧/复氧损伤后海马组织星形胶质细胞条件培养液.提取乳鼠海马神经元并进行体外培养,根据所应用干预条件培养液的不同随机将神经元分为正常组、模型组、中药组、西药组4组.采用MTT法观察缺氧3h(is-3h)及复氧24h(rp-24h)时点海马神经元活性并计算细胞存活率,同时应用免疫细胞化学方法测定海马神经元突触素的表达.结果:is-3h时点模型组神经元活性、存活率及突触素表达均较正常组明显降低(P＜0.01).与中药组比较无明显差异;rp-24h时点中药组上述指标均较模型组明显升高(P＜0.01).结论:颐脑解郁方可明显促进缺氧/复氧损伤后海马神经元突触素表达的增强,该方可能通过有效增加神经元突触密度而对缺血/再灌注损伤神经功能恢复发挥明显改善作用.
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扶芳藤对缺氧/复氧损伤后人心内膜微血管内皮细胞内皮素-1和一氧化氮水平的影响
目的:观察扶芳藤对缺氧/复氧(H/R)损伤后人心内膜微血管内皮细胞(HUMCE)内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)的影响.方法:制备扶芳藤粗提取物;将试验用大鼠分为扶芳藤组、卡托普利组和空白组,采用中药药物血清法,制备含药大鼠血清干预实验细胞;建立HUMCE的H/R模型;实验随机分为:正常对照组、扶芳藤组、阳性对照组、模型对照组.通过Western blot法检测ET-1蛋白表达,硝酸还原酶法测定NO浓度.结果:与模型对照组比较,扶芳藤组、卡托普利组、正常组ET-1的蛋白水平显著降低(P＜0.05),NO分泌显著增加(P＜0.05);与扶芳藤组比较,卡托普利组ET-1蛋白水平显著升高(P＜0.05),NO分泌显著减少(P＜0.05).结论扶芳藤可以上调H/R损伤后HUMCE的NO水平,下调ET-1蛋白表达,维持ET/NO平衡,从而保护HUMCE内皮功能.
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活血通络汤对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤CD54表达及中性粒细胞粘附率的影响
目的 研究活血通络汤对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧/复氧损伤CD54表达及中性粒细胞(PMN)粘附率的影响.方法 制备兔含药血清;HUVEC复苏和培养后,建立缺氧/复氧损伤模型;将模型细胞分为5组,即正常对照组、模型组及活血通络汤高、中、低剂量组.上述分组处理后,倒置显微镜下观察其形态学变化,测定CD54表达及PMN粘附率.结果 活血通络汤低、中、高剂量组能够抑制HUVEC CD54表达、降低PMN与HUVEC的粘附率,且作用呈剂量依赖性改变,其中活血通络汤中、高剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 活血通络汤能够抑制CD54的表达增多、改善血管内皮细胞在缺氧条件下的细胞粘附性,从而对血管内皮细胞起到保护作用,这可能是该方防治下肢深静脉血栓的作用机制之一.
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黄连解毒汤有效成分对缺氧/复氧时脑微血管内皮细胞核因子-κB的影响
目的:研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对缺氧/复氧损伤时大鼠脑微血管内皮细胞的保护机制.方法:建立离体大鼠脑微血管内皮细胞缺氧4 h复氧12 h损伤模型.用0.128,0.064,0.032 μmol·mL-1栀子苷,0.028,0.014,0.007 μmol.mL-1黄芩苷和0.024,0.012,0.006 μmol.mL-1小檗碱分别作用于损伤的细胞,采用免疫细胞化学方法和图象定量分析技术检测核因子-κB(NF-κB)亚单位p65的表达,计算平均吸光度和平均面积,比较NF-κB蛋白表达的变化,计算核移位百分率和细胞核与细胞浆的透光度比值比较NF-κB核移位的变化.结果:模型组NF-κB蛋白表达和核移位显著高于正常组(P＜0.01).所有给药组的平均吸光度值低于模型组,但差异无统计学意义.所有给药组的平均面积均低于模型组(P＜0.01).所有给药组的核移位百分率低于模型组且高于正常组(P＜0.01,P＜0.01).所有给药组细胞核与细胞浆的透光度比值高于模型组(P＜0.01).结论:栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄连解毒汤有效成分能够保护缺氧/复氧损伤的大鼠脑微血管内皮细胞,其保护机制之一是抑制NF-κB蛋白表达和核移位.
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黄连解毒汤有效成分对缺氧/复氧时脑微血管内皮细胞的保护作用
目的:研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用.方法:建立离体大鼠脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤模型,用1.024,0.512,0.256,0.128,0.064,0.032,0.016,0.008 μmol·mL-1栀子苷,0.224,0.112,0.056,0.028,0.014,0.007,0.003 μnol·mL-1黄芩苷和0.192,0.096,0.048,0.024,0.012,0.006,0.003 μmol·mL-1小檗碱分别作用于正常组和模型组细胞.细胞活性用MTT比色法检测.结果:0.128,0.064,0.032 μmol·mL-1栀子苷,0.028,0.014,0.007 μmol·mL-1黄芩苷和0.024,0.012,0.006 μmol·mL-1小檗碱能够比较理想的保护缺氧4 h复氧12 h损伤的大鼠脑微血管内皮细胞.结论:适当浓度的栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄连解毒汤主要成分可以保护脑微血管内皮细胞.
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丹皮酚、芍药苷及二者配伍对体外培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响
目的 观察丹皮酚、芍药苷及二者配伍对体外培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法 用体外细胞培养方法,培养乳鼠心肌细胞,复制心肌细胞缺氧/复氧损伤模型.分别在缺氧和复氧阶段将细胞培养液换成含药培养液以进行药物干预,研究丹皮酚和芍药苷的作用时,各设100、75、50和25 mg/L4个剂量组,研究二者配伍作用时设芍药苷40 mg/L和20mg/L组、丹皮酚40mg/L和20 mg/L组、以及芍药苷20 mg/L+丹皮酚20 mg/L5个剂量组,模型组只造模不进行药物干预,而正常对照组则不造模.分别测定缺氧2.5～5 h后及复氧2h后细胞培养上清液中的肌酸肌酶(creatine kinase,CK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和丙二醛( malondialdehyde,MDA)漏出量,计算缺氧/复氧过程中各指标总漏出量及漏出抑制率.结果 与正常对照组比较,模型组缺氧2.5h后MDA漏出量增加,缺氧3、5h后、复氧2h后CK、LDH和MDA漏出量、漏出总量均增加,各指标漏出抑制率均降低,差异均有统计学意义(P ＜0.01,P＜0.05).与模型组比较,丹皮酚高剂量组及芍药苷高、中剂量组缺氧后LDH、MDA漏出量及复氧2h后各指标漏出量、漏出总量均减少(P＜0.01,P＜0.05),各指标漏出抑制率均升高(P ＜0.01,P＜0.05)；而丹皮酚低、极低剂量组仅复氧2h后CK漏出量及漏出总量减少(P＜0.01,P＜0.05),CK漏出抑制率升高(P＜0.01).芍药苷极低剂量组仅复氧2h后LDH漏出量及漏出总量均减少(P＜0.01),LDH漏出抑制率升高(P＜0.01).配伍组各指标与丹皮酚、芍药苷各组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 丹皮酚、芍药苷及二者配伍对体外培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤均具有保护作用,二者配伍作用强度与同剂量单味药物作用强度相当,未见显著配伍增效作用.
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黄芩茎叶总黄酮对缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡的影响
目的 探讨黄芩茎叶总黄酮( Scuttellaria baicalensis steams-leaf total flavonoids,SSTF)对纯化培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 选用出生1-2 天的SD大鼠60只,雌雄不拘,培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧模型.将培养的心肌细胞分为5组:正常对照组、缺氧/复氧损伤模型组(模型组:缺氧2 h 再复氧4 h)、缺氧/复氧损伤加50 mg/L SSTF组(低剂量组)、缺氧/复氧损伤加100 mg/L SSTF组(中剂量组)、缺氧/复氧损伤加200 mg/L SSTF组(高剂量组).四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞存活率,原位末端标记法检测心肌细胞凋亡并计算凋亡率,免疫组织化学法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 与正常对照组比较,模型组细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2蛋白降低,Bax蛋白升高,Bcl-2/Bax蛋白降低,差异均有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,SSTF各剂量组细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白升高,Bax降低,Bcl-2/Bax升高,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).SSTF高剂量组各项指标,与低剂量组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 SSTF对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡有保护作用,可能是通过上调Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达而发挥作用.
关键词： 黄芩茎叶总黄酮 缺氧/复氧 心肌细胞 凋亡 Bcl-2/Bax蛋白 -
瘦素对血管内皮细胞ECV-304缺氧/复氧损伤的保护作用
探讨外源性瘦素(Leptin)对血管内皮细胞ECV-304缺氧/复氧(H/R)损伤保护作用及其作用机制.建立人脐静脉(ECV-304)内皮细胞缺氧/复氧损伤模型,观察不同的缺氧和复氧时间对内皮细胞的损伤作用.设立正常对照组、损伤组、干预组,每组6例;利用试剂盒测定乳酸脱氢酶、丙二醛和超氧化物歧化酶的释放量;四唑盐比色法(MTT)测定血管内皮细胞的存活率.结果显示,单纯缺氧组和缺氧/复氧组均可见细胞变圆、收缩、脱落;细胞死亡率较正常组增加;细胞上清中丙二醛(MDA)与乳酸脱氢酶(LDH)含量增加,超氧化物歧化酶(SOD)含量降低;缺氧/复氧组较单纯缺氧组损伤更加明显,与正常培养组相比具有显著意义(P＜0.05).Leptin晚期预处理后,细胞形态基本上保持正常,上述检测指标与缺氧/复氧组相比有显著意义(P＜0.05).并且50μg/L Leptin的保护作用为明显.表明Leptin对ECV-304细胞缺氧/复氧损伤的保护作用具有剂量依赖性.
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羟基红花黄色素A减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤
目的 观察羟基红花黄色素A(HSYA)对乳鼠原代心肌细胞缺氧复氧(A/R)损伤的保护作用及其与磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(PI3K/Akt/GSK3β)信号通路的关系.方法 分离大鼠的乳鼠心肌细胞,孵育48 h,待细胞贴壁后,分为:对照组(Con组)、缺氧复氧组(A/R组)、HSYA处理组(A/R+H组)、PI3K抑制剂(LY294002)处理组(A/R+L组)和HSYA+ LY294002处理组(A/R+H+L).测培养基上清液LDH;流式细胞仪检测凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax、Akt、p-Akt(Ser473)、GSK3β和p-GSK3β(Ser9)的蛋白表达水平.结果 与对照组比较,A/R后LDH释放量和凋亡率增加(P<0.001),促凋亡蛋白 Bax表达增加(P<0.001),而抗凋亡蛋白Bcl-2、p-Akt(Ser473)、p-GSK3β(Ser9)蛋白表达减少(P<0.001);HSYA 处理后 LDH 释放量和凋亡率降低(P<0.001),Bax表达减少(P<0.001),而Bcl-2、p-Akt(Ser473)和p-GSK3β(Ser9)蛋白表达增加(P<0.001);与A/R+H组比较,A/R+H+L 组 Bax 表达增加(P<0.001),而 Bcl-2、p-Akt(Ser473)和 p-GSK3β(Ser9)蛋白表达减少(P<0.001).结论 HSYA可以通过调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路保护大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤.
关键词： 缺氧/复氧 HSYA 心肌细胞 凋亡 PI3K/Akt/GSK3β信号通路 -
异氟烷减轻人心肌细胞缺氧／复氧损伤的研究
目的：探讨异氟烷对缺氧／复氧（ AR）损伤人心肌细胞的作用及其机制。方法人心肌细胞株HCM分为对照组（con）、AR组和异氟烷（0．5％、1％、1．5％和2％）组（n＝5）。酶标仪检测细胞活力，化学比色法检测LDH活性， Annexin V－FITC／PI双染法检测细胞凋亡，RT－PCR和Western blot检测低氧诱导因子（ HIF）－1α表达水平。结果与对照组比较，AR组细胞活力降低，LDH活性和凋亡细胞升高，HIF－1α表达水平显著上调（P＜0．05）；异氟烷可缓解AR导致的心肌细胞活力降低、LDH活性和凋亡细胞数增加以及HIF－1α表达水平回降（ P＜0．05）。 siRNA转染组HIF－1α表达水平显著低于AR组（ P＜0．05）；2％异氟烷显著缓解siRNA转染组心肌细胞活力的升高，LDH活性和凋亡细胞数的降低（ P＜0．05）。结论异氟烷可通过上调HIF－1α的表达部分减轻AR损伤人心肌细胞。
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肝细胞生长因子减轻皮质神经元的缺氧/复氧损伤
目的 研究肝细胞生长因子(HGF)对缺氧/复氧诱导大鼠皮质神经元凋亡的保护.方法 分离培养SD大鼠皮质神经元,经HGF(15、30和60μg/L)预处理后经缺氧/复氧诱导凋亡,用MTT比色法检测细胞存活率;用Hoechst 33258染色法和流式细胞仪检测神经元的凋亡;用比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)和caspase-3活性变化.结果 与正常对照组相比,缺氧/复氧组神经元的细胞存活率显著下降,细胞凋亡率和caspase-3活性升高(均P<0.05);而HGF预处理12 h可显著逆转缺氧/复氧所致的细胞存活率降低、凋亡率增加、LDH活性上升、caspase-3活性升高的改变(均P<0.05),且这些效应与HGF剂量正相关.此外,HGF的抗凋亡效应可被PDK/Akt通路抑制剂LY2941XE阻断.结论 HGF减轻缺g/复氧所诱导的神经元凋亡可能与其激活神经元的PI3K/Akt信号通路、减少caspase-3表达有关.
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缺氧/复氧对小鼠骨髓树突状细胞表型及生物学活性的影响
目的 探讨缺氧/复氧对小鼠骨髓树突状细胞(DC)表型及生物学活性的影响.方法 培养小鼠骨髓源性DC,分为对照组及缺氧/复氧组,对照组在正常培养条件下培养,缺氧/复氧组给予缺氧气体培养4 h,然后在正常培养条件下继续培养1 d.应用流式细胞仪检测DC表面CD80、CD86、MHC Ⅱ分子的变化,ELISA法检测DC分泌TNF-α、IFN-γ和IL-12的浓度,混合淋巴细胞培养检测T细胞增殖能力,免疫细胞化学检测Dc核因子-κB(NF-κB)的表达.结果 缺氧/复氧可促进DC高表达CD80、CD86、MHC Ⅱ分子,促进Th1型细胞因子释放、NF-κB高表达及核移位,并诱导T细胞增殖.结论 缺氧/复氧可刺激DC高表达表面分子,具有明显的免疫刺激活性.
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胰岛素对新生大鼠缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡的影响
目的探讨胰岛素对缺氧/复氧所诱导心肌细胞凋亡的影响及其机制.方法通过给原代培养乳鼠心室肌细胞行缺氧2 h/复氧4 h,建立缺氧/复氧(anoxia/reoxygenation)心肌细胞损伤模型.于复氧期开始随机给予0.9%生理盐水(VC组)、胰岛素(INS组)、LY294002(LY组)、胰岛素+LY294002(INS+LY组)干预.于复氧4h后,利用2,4二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸显色法检测丙二醛(MDA)含量,原位末端标记法(TUNEL)和DNA梯带法(DNA Ladder)标测细胞凋亡,免疫印迹法(Western blotting)检测磷酸化Akt表达,并比较各组间差异.结果与VC组相比,INS组中LDH活性、MDA含量、凋亡指数(AI)显著降低(P＜0.01),磷酸化Akt表达明显增加(P＜0.01);但上述指标变化可被LY294002(PI3K抑制剂)所抑制.结论在复氧早期给予胰岛素干预可显著地减少缺氧/复氧所诱导的心肌细胞凋亡,其保护机制与PI3K/Akt所介导的抗细胞凋亡作用有关.
