首页 > 文献资料
-
抗人CD40人-鼠嵌合抗体的构建及其表达
目的: 通过基因工程抗体改造技术构建并表达抗人CD40人-鼠嵌合抗体.方法: 从分泌鼠抗人CD40单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株(5C11)中提取总RNA, 用一对特异性引物通过RT-PCR扩增mAb VH和VL的DNA编码区基因.根据序列分析的结果, 设计引物扩增VH和VL基因相应的信号肽序列.利用基因重组技术, 将mAb 5C11的VH、 VL基因及其相应信号肽序列与人IgG1的CH基因、 Cκ链基因进行拼接, 构建人-鼠嵌合抗体基因的表达质粒pIRES/h5C11.用脂质体法将其导入293T细胞株中进行瞬时表达.利用流式细胞术对表达产物进行鉴定.结果: NCBI基因数据库Blast的结果显示, 克隆的基因序列符合小鼠VH、 VL基因及其信号肽序列的特征.表达质粒pIRES/h5C11的构建正确, 并在293T细胞株中获得瞬时表达.表达的抗人CD40的人-鼠嵌合抗体和mAb 5C11具有相同的抗原结合位点.结论: 成功地克隆了鼠抗人CD40 mAb V区编码基因, 并实现了可溶性抗人CD40的人-鼠嵌合抗体在293T细胞中的瞬时表达.
-
CD40/CD40L系统对B淋巴细胞的作用研究进展
B细胞的CD40/CD40配体(CD40/CD40L)系统在机体体液免疫中发挥重要作用,主要是通过影响B细胞的存活、增殖、分化、免疫球蛋白类别转换等B细胞的功能,进而影响体液免疫的平衡.B细胞CD40信号的活化能加强B细胞存活并促进B细胞增殖,CD40/CD40L系统亦能影响B细胞向浆细胞分化,CD40L缺陷导致的CD40/CD40L系统异常,使B细胞不能发生正常的免疫球蛋白类别转换而积累大量IgM.本文总结了CD40/CD40L系统对B细胞功能的影响.
-
CD40-CD40L共刺激途径在体液免疫和细胞免疫中的作用
CD40与CD40配体(CD40L)是体内炎症和免疫反应系统的一对共同刺激分子,参与机体的体液免疫和细胞免疫反应.CD40-CD40L共刺激途径能促进T细胞活化并放大T淋巴细胞依赖的免疫应答,是产生记忆性CD8+T细胞的基础,能够促进CD8+T细胞的扩增和多能性,在CD4+T细胞分化的过程中起重要作用,介导更强的抗肿瘤效应和杀伤靶细胞的能力.CD40-CD40L共刺激途径参与T淋巴细胞依赖的B淋巴细胞应答过程、生发中心的形成、长期记忆性R细胞的产生、抗体的产生及抗体类别转换,并可诱导和扩增CD4+ CD25+ Treg细胞.CD40-CD40L共刺激途径在多种疾病的发生、发展中起作用,有广阔的临床应用前景.
-
CD40L(CD154)及CD40研究进展
CD40L-CD40为体内特异性免疫反应系统重要的一对共刺激分子, 参与机体的体液免疫和细胞免疫反应.在B细胞的活化与增殖分化、抗体产生及同种类型转换中起关键作用, 在T细胞活化以及效应性细胞因子的分泌过程中也起重要调节作用.CD40L-CD40信号转导途径的异常可导致机体产生免疫病理反应, 应用抗CD40L的单抗(mAb)则可调控疾病的进程.我们就CD40L-CD40的研究进展进行了综述.
-
小鼠CD40分子胞外段基因的克隆、原核表达及活性鉴定
目的 构建含小鼠CD40(mCD40)分子胞外段序列的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对mCD40/GST融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定.方法 从小鼠DC2.4细胞系中扩增目的基因mCD40并克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达载体pGEX-6P-1-mCD40,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达mCD40/GST融合蛋白,并采用GST琼脂糖凝胶纯化重组蛋白.纯化后的重组蛋白经Western blot法、间接ELISA鉴定其抗原活性.结果 PCR扩增产物经测序分析与GenBank公布的小鼠CD40胞外段序列一致；重组表达载体经酶切鉴定正确；IPTG诱导后经SDS-PAGE分析证实得到了相对分子质量(Mr)为45 000的重组蛋白；Western blot法和ELISA检测证实纯化的mCD40/GST蛋白能够与特异性抗体发生反应.结论 成功构建了原核表达载体pGEX-6P-1-mCD40,利用原核表达系统实现了mCD40/GST融合蛋白的可溶性表达并证明其具有较高的抗原活性.
-
反义CD40RNA对EB病毒转化的B细胞CD40分子表达和增殖能力的影响
目的:探讨瞬时表达的反义CD40 RNA,对EB病毒转化的健康人B细胞膜表面CD40分子表达和增殖能力的影响. 方法:应用T-A克隆技术和亚克隆技术,构建人反义CD40 RNA的真核表达载体pcDNA3/CD40,并以其转染本室建立的EB病毒转化的健康人B细胞.应用流式细胞仪(FACS),检测B细胞膜上CD40分子表达的变化.应用MTT比色法检测反义CD40 RNA对B细胞增殖能力的影响.结果:与转染空载体pcDNA3组相比,转染pcDNA3/CD40细胞上CD40分子的表达降低(P<0.01),其增殖能力明显降低(P<0.01).结论:反义CD40 RNA技术,可作为有效的免疫调控手段.CD40基因本身在细胞的生长代谢中也起着重要作用.
-
CD40-1C/T基因多态性与系统性红斑狼疮的相关性研究
目的 研究CD40基因5’非翻译区(5'UTR)-1位点C/T单核苷酸多态性(SNP)在该地区系统性红斑狼疮(SLE)人群中的分布,探讨其与SLE的易感相关性.方法 采用病例-对照研究方法,以107例门诊和住院SLE患者为研究对象,与109例正常对照组进行研究.应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)测定CD40基因-1位点C/T单核苷酸多态性,计算基因型及等位基因频率;同时将CD40基因-1C/T位点的三种基因型与SLE患者各种自身抗体检测结果进行比较.结果 CD40基因-1C/T位点的基因型频率在SLE组和对照组中的分布差异有统计学显著性意义(P=0.035),其中SLE组的CC基因型频率明显高于对照组(OR值=2.020,P=0.016),CT基因型频率明显低于对照组(OR值=0.528,P=0.020);而等位基因频率分布差异无统计学意义(P=0.114).SLE患者的抗RNP,抗SSA,抗SSB,抗dsDNA和抗组蛋白抗体在CC基因型中的阳性率高.结论 CD40基因5’非翻译区-1位点CC基因型可能与该地区SLE的发生有关.
-
高血压并发症与患者血清可溶性CD40及CD40L水平的关系
目的探讨原发性高血压患者可溶性CD40/CD40L水平变化.方法根据WHO关于高血压器官损伤并发症的分类,将研究对象分为无并发症组、中度器官损伤及重度器官损伤组.应用酶联免疫反应法测定328名研究对象血清可溶性CD40(sCD40)及可溶性CD40L(sCD40L)水平.结果①与无并发症组(n=180)相比,sCD40水平在重度器官损伤组(n=50)显著升高(39.9±2.6 vs 30.0±1.0)ng/ml,P＜0.01;与中度器官损伤组(29.4±1.4)ng/ml,(n=98)比较,重度器官损伤组sCD40水平也显著升高(P＜0.01);②与无并发症组相比,重度器官损伤组中血清sCD40水平仅在中风组上调;③sCD40L在各组均无显著变化.结论血清sCD40/sCD40L水平与高血压并发症的严重程度有关.
-
同型半胱氨酸对内皮细胞CD40表达的影响
目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞CD40表达的影响.方法:体外培养ECV304细胞,然后分组实验:①对照组;② 20 μmol/L Hcy 组;③ 50 μmol/L Hcy组;④ 100 μmol/L Hcy组;⑤吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)预处理组;⑥普伐他汀预处理组.Hcy的作用时间均为24 h.运用流式细胞仪检测细胞CD40的表达;用分光光度计测定细胞培养上清液中H2O2的含量.结果:① Hcy呈浓度依赖关系(0～100 μmol/L)增加内皮细胞CD40的表达.②在Hcy作用下,培养上清液中H2O2的含量较对照组显著增加(P<0.01).③ PDTC和普伐他汀预处理组与100 μmol/L Hcy组比较,CD40表达及H2O2水平均降低.④内皮细胞CD40的表达与上清液中H2O2含量呈正相关(r=0.702,P<0.01).结论:Hcy能促进内皮细胞 CD40的表达,其中有氧化应激作用的参与.CD40高表达所引起的炎症激活可能是Hcy致动脉粥样硬化的重要机制之一.
-
CD40-CD40L与急性冠脉综合征的研究进展
本文介绍了CD40与CD40L的生物学特性,包括其分布、来源、信号转导机制.综述了CD40-CD40L与慢性炎症、免疫调节、血栓形成、斑块不稳定的相关性,提示抗CD40L治疗是未来防治急性冠脉综合征的一个方向.
-
CD40分子在肾癌组织中的表达研究
目的 探讨肾癌组织中CD40分子的表达与癌发生浸润转移的关系.方法 用免疫组织化学二步(Envision法)对甲醛固定石蜡包埋的肾细胞癌组织(32例)和癌旁组织(10例)中CD40的表达情况进行研究,并分析CD40分子表达水平与肾癌临床分期、病理分级和发生淋巴结转移的相关性.结果 CD40在肾细胞癌组织中表达的阳性率为87.5%,与肾癌癌旁组织组相比,具有显著性差异(P＜0.01);CD40的阳性过度表达与肿瘤临床分期、病理组织学分级和淋巴结转移显著相关(P＜0.05).结论 CD40分子在肾癌中的异常表达可为肾癌的诊断、治疗及指导预后提供实验依据,并为进一步研究肾癌的生物学,尤其是为抑制Fas和TNFR介导的细胞凋亡与基因治疗肾细胞癌打下基础.
-
炎症与良性前列腺增生及CD40/CD40L信号通路的研究进展
良性前列腺增生(BPH)是引起老年男性排尿障碍中为常见的一种良性疾病.公认老龄和有功能的睾丸是其发病的两个重要因素,但其确切病因仍不明确.研究证实组织炎症与其关系密切,并且CD40/CD40L免疫学信号通路可能在前列腺增生疾病中发挥了一定作用.本文就组织炎症与BPH及CD40/CD40L信号通路的研究进展进行综述.
-
CD40和 Id4在前列腺癌中的表达及意义
目的：探讨 CD40和 Id4在前列腺癌中的表达及意义。方法：应用免疫组化技术，选取71例前列腺癌、40例高级别前列腺内瘤病（HGPIN）及30例前列腺增生症（BPH）标本，检测 CD40和 Id4在上述组织中的表达差异。结果：71例前列腺癌标本中，CD40总体阳性表达率达67．6％，且以阳性和强阳性表达为主，阳性表达率显著高于其它两组，差异有统计学意义（P ＜0．05）。前列腺癌组，CD40蛋白阳性表达率随病理组织学分级的升高而升高，在高分化、中分化及低分化期依次是28．6％、68．0％、74．4％，高分化组与其他两组比较差异有统计学意义（P 均＜0．05）；三组中 Id4因子阳性表达率呈逐渐下降趋势，前列腺癌组 Id4阳性表达率与 HGPIN 组、BPH 组两组间分别比较，均有显著差异（P ＜0．05）。在前列腺癌病理分级中，Id4因子阳性表达率随肿瘤病理分级的增高而增加，分别为高分化57．1％、中分化68．0％、低分化76．9％，但三组间进行统计学比较无显著差异（P ＞0．05）。结论：CD40、Id4二者的异常表达在前列腺癌生物学行为中可能起着重要作用，可为将来前列腺癌的生物免疫治疗及基因治疗研究提供新的选择。
-
寻常疣和跖疣患者外周血T淋巴细胞亚群及共刺激分子CD28,CD40的检测
目的 探讨寻常疣和跖疣患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及共刺激分子CD28,CD40的表达情况.方法 采用流式细胞仪检测实验组60例(寻常疣、跖疣患者各30例)和健康对照组30例的外周血T淋巴细胞亚群和CD28,CD40分子在淋巴细胞上的表达水平.结果 寻常疣组、跖疣组与健康对照组相比:外周血CD4+T淋巴细胞(34.57％,35.39％,42.02％)明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01)；CD4+/CD8+比值(1.38,144,1.72)降低,差异有统计学意义(P＜0.05)；淋巴细胞上CD28的表达(52.80％,51.87％,37.41％)明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01),CD40的表达(12.88％,11.94％,15.82％)减少,差异有统计学意义(P＜0.05).而寻常疣和跖疣两组间,外周血T淋巴细胞亚群及共刺激分子CD28,CD40的表达,差异无统计学意义(P＞0.05).实验组患者的疣体数量和外周血T淋巴细胞亚群及共刺激分子CD28,CD40的变化均无相关性(P＞0.05).结论 寻常疣和跖疣患者体内存在T淋巴细胞亚群改变和共刺激分子CD28,CD40表达异常,可能与其免疫功能紊乱和病程慢性化有关.
-
尖锐湿疣患者外周血单一核细胞共刺激分子CD28,CD40的检测
目的 探讨免疫共刺激分子CD28/CD152-CD80/CD86,CD40-CD40L 在尖锐湿疣患者外周血单一核细胞(PBMC)中的表达情况.方法 采用流式细胞仪(FCM)检测60例CA患者(初发组30例、复发组30例)和30例健康对照者外周血CD28,CD152,CD40L在CD4+,CD8+T细胞上CD80,CD86,CD40在CD19+B细胞上的表达水平.结果 CA患者CD28,CD40L在CD4+,CD8+T细胞的表达,与对照组(42.36%,13.85%,5.08%,2.58%)相比,复发组(37.10,11.66%,2.57%,1.25%)较初发组(39.69%,12.76%,3.93%,1.96%)明显降低(P<0.01);CD80,CD86,CD40在CD19+B细胞上的表达与对照组(1.59%,3.83%,14.25%)相比,复发组(0.65%,3.05%,10.24%)较初发组(1.04%,3.45%.12.21%)显著降低(P<0.01),而CD152在CD4+,CD8+T细胞上的表达与对照组(1.71%,9.62%)相比,复发组(39.2%,12.15%)较初发组(2.64%,10.90%)显著增高(P<0.01).结论 尖锐湿疣患者外周血淋巴细胞CD28/CD152-CD80/CD86,CD40-CIMOL共刺激分子的异常表达可能与其免疫功能紊乱及复发机制有一定关系.
-
卡介菌多糖核酸对尖锐湿疣患者外周血单一核细胞表达CD40和CD40L的影响
目的探讨卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对尖锐湿疣(CA)患者外周血单一核细胞(PBMC)表达CD40和CD40L的影响.方法利用流式细胞仪对CA患者BCG-PSN组和对照组治疗前后及正常人PBMC中CD40和CD40L进行检测.结果治疗前CA患者PBMC中CD40和CD40L阳性细胞数较正常人显著降低(t=5.385,P＜0.05;t=3.418,P＜0.05);BCG-PSN组治疗后PBMC中CD40和CD40L的阳性细胞百分数较治疗前显著升高(t=7.764,P＜0.05;t=17.24,P＜0.05);而对照组治疗前后CD40和CD40L水平差异无显著性,且复发率高于BCG-PSN组.结论BCG-PSN对CA患者PBMC的CD40和CD40L表达可能有调节作用.
-
CD40-CD40L与甲状腺相关眼病
甲状腺相关眼病是一种器官特异性自身免疫性疾病,确切的发病机制尚不清楚.近年来研究表明CD40和其配体CD40 ligand(CD40L)与自身免疫性疾病的发病关系密切.CD40-CD40L作为一种重要的共刺激信号,通过诱导细胞活化和细胞因子的产生,调节细胞、体液免疫并参与介导细胞内信号转导.本文就CD40-CD40L的结构和分布、对免疫反应的调节及其在甲状腺相关眼病发病中的作用作一综述.
-
CD40在人球后成纤维细胞的表达
目的:探讨rhIFN-γ作用下,正常人和TAO患者球后成纤维细胞(RF)CD40 mRNA的表达情况.方法:用RT-PCR法,对rhIFN-γ诱导正常人和TAO患者RF CD40的mRNA进行半定量分析.结果:经100,200,400,1 000kU/L rhIFN-γ作用48h后,正常人和TAO患者RF CD40的吸光度比值分别为0.483±0.095和0.476±0.051,0.647±0.034和0.659±0.083,0.849±0.017和0.852±0.024,0.891±0.082和0.894±0.041与各自对照组0.203±0.032和0.213±0.020相比,差异有统计学意义(P≤0.01);两者同一浓度相比差异无统计学意义(P＞0.05).经400kU/L rhIFN-γ作用12,24,48,72h后,正常人和TAO患者RF CD40的吸光度比值分别为0.331±0.047和0.329±0.025,0.668±0.067和0.683±0.104,0.849±0.017和0.852±0.024,0.865±0.021和0.876±0.014与各自对照组0.203±0.032和0.213±0.020相比,差异有统计学意义(P＜0.05),两者同一时间相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:rhIFN-γ可上调正常人和TAO患者RF CD40mRNA的水平,呈浓度和时间依赖.
-
芪丹通脉片对动脉粥样硬化大鼠主动脉及单个核细胞CD40表达的影响
目的: 探讨芪丹通脉片对动脉粥样硬化大鼠主动脉和单个核细胞CD40的影响. 方法: 将72只SD雄性大鼠随机分为6个实验组:阴性对照组(n=12)给以普通饮食,模型组(n=12)给予高脂、高胆固醇饮食,其余4组在给予高脂、高胆固醇饮食建立动脉粥样硬化大鼠模型同时分为芪丹通脉片低剂量组[0.36 g/(kg·d)]、中剂量组[1.08 g/(kg·d)]、高剂量组[3.24 g/(kg·d)]和阳性对照辛伐他丁组[4 mg/(kg·d)]. 16 wk后通过RT-PCR检测大鼠主动脉及单个核细胞上CD40表达. 结果: 模型组CD40表达明显高于对照组(P<0.05) ;给予芪丹通脉片大鼠CD40表达显著降低,高浓度组结果接近辛伐他丁组. 结论: 动脉粥样硬化大鼠主动脉及单个核细胞CD40表达增强,使用芪丹通脉片可降低CD40表达,其低、中、高浓度组CD40表达依次减少(P<0.05).
-
异常蛋白负荷诱导鼠肾小管上皮细胞CD40表达变化
用IgG(10mg/m1)、不同浓度的牛血清白蛋白(BSA)(1,15,30mg/m1)和低密度脂蛋白(LDL 100μg/m1)作用于体外培养的鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E),采用流式细胞仪测定细胞表面CD40的平均荧光强度的变化.结果显示,BSA和IgG均不能引起细胞表面CD40表达的上调,与正常组相比,LDL100μg/ml可以刺激肾小管上皮细胞表达CD40的上调(P＜0.05),提示CD40可能并不直接介导IgG和BSA造成的肾脏损害.低密度脂蛋白可以引起CD40的上调,提示异常蛋白负荷可能是造成病肾组织CD40上调的一个局部因素,异常蛋白负荷可能在CD40相关性肾炎中起一个促进的作用.
