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"干燥失重"项下测定温度对鬼臼毒素有关检测结果影响的研究
目的:通过改变干燥失重的测定方法消除检测中的干扰因素.方法:将"干燥失重"测定温度由70℃真空减压干燥至恒重改为120℃电热恒温干燥至恒重.结果:该品于120℃干燥至恒重性质稳定,消除了挥发物残留的影响.结论:改变干燥失重的测定条件,对其他检测项目的测定无干扰且有利.
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新型鬼臼毒素衍生物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制研究
目的 探讨新型鬼臼毒素衍生物10Ⅲg诱导人肺腺癌细胞A549细胞凋亡及其调控机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术测定细胞周期细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳和微管蛋白组化染色,Western 印迹法检测凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达.结果 新型鬼臼毒素衍生物10Ⅲg对A549细胞增殖具有明显的剂量和时间依赖性抑制作用,细胞周期分析显示S期细胞数明显增多,出现G2/M期阻滞;10Ⅲg作用48 h后DNA电泳可见明显的梯状条带;10Ⅲg能破坏A549细胞的细胞骨架,与依托泊苷相比有明显促进微管解聚现象;10Ⅲg浓度为10-6 mol/L时能显著促进Bax、Caspase-3蛋白的表达.结论 新型鬼臼毒素衍生物10Ⅲg通过诱导A549细胞发生G2/M期阻滞而抑制其增殖,其机制可能与抑制细胞微管解聚及诱导细胞凋亡有关.
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鬼臼酰肼哌啶腙氮氧自由基诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的研究
目的:研究鬼臼酰肼哌啶腙氮氧自由基(GP1)诱导人肝癌细胞凋亡的作用及其机制.方法:将GP1与体外培养的人肝癌细胞共同孵育后,以MTT法检测细胞生长和增殖情况.电镜、流式细胞仪、原位末端标记法检测细胞凋亡,免疫组化法检测凋亡相关基因及其表达.结果:GP1能明显抑制SMMC-7721细胞生长与增殖,2.5μg/ml CP1诱导细胞出现凋亡特征形态改变,凋亡率在11.4%～16.8%.凋亡相关基因fas和p53表达增加,而bcl-2和TF-1表达下降.结论:GP1具有诱导人肝癌细胞凋亡的作用,其机制可能与调控细胞凋亡相关基因的表达有关.
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鬼臼毒素纳米制剂对人胶质瘤U251细胞的研究
目的 探讨鬼臼毒素纳米制剂的理化性质,通过实验评价其抗人胶质瘤U251细胞的作用.方法 通过透析法制备鬼臼毒素载药聚合物胶团,应用细胞毒性实验、肿瘤细胞摄取实验、6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞凋亡效应评价其疗效.结果 鬼臼毒素聚合物胶团的半数抑制浓度(IC50)值在24、48、72 h时分别为(7.18±0.82)、(5.71±0.18)、(2.57±0.12) μg/ml,明显低于游离鬼臼毒素,细胞摄取率约为游离鬼臼毒素的2倍,鬼臼毒素聚合物胶团作用后的U251细胞有明显的细胞凋亡的形态学改变.结论 鬼臼毒素纳米制剂能够有效抑制人胶质瘤U251细胞的增殖.
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高效液相色谱法测定鬼臼毒素固体脂质纳米粒的含量
目的 建立鬼臼毒素固体脂质纳米粒含量的高效液相色谱测定方法.方法 以ODS-C18(4.6 mm×250mm,5μm)为分析柱,以甲醇-水-冰醋酸(59:41:0.6)为流动相,流速0.8 mL·min-1,检测波长为285 nm,进样量20μL,柱温26℃.结果 当鬼臼毒素浓度在1.6～80.0μg·mL-1范围内时,峰面积与浓度之间呈良好的线性关系(r=0.999 9,n=5),高、重、低3个剂量的平均回收率分别为99.09%,99.88%,100.92%.日内和日间精密度RSD分别为0.39%,0.42%,3批鬼臼毒素固体脂质体中鬼臼毒素的含量分别为94.89%,94.76%,97.24%.结论 该方法准确,简便,灵敏,重现性好,适合测定鬼臼毒素的含量.
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鬼臼毒素纳米靶向制剂的制备与理化性质评价
目的 探讨鬼臼毒素纳米靶向制剂的制备方法及评价其质量.方法 采用碳二亚胺为耦联剂,合成硬脂酸-壳寡糖嫁接物,采用三硝基苯磺酸法测定载体中氨基取代度,以透析法制备鬼臼毒素载药聚合物胶团,考察载药胶团的粒径、表面电位、药物含量、包封率,释药行为以评价其质量.结果 鬼臼毒素纳米靶向胶团粒径为30.8～48.3 nm,随着胶团载药量的增大,粒径逐渐增大,并且随着投药量的增加表面电荷逐渐升高,具有较高的包封率和载药量,鬼臼毒素的投药量为10％时,包封率达69.31％,可明显延缓药物的释放,释放速度随投药量减少而加快.结论 鬼臼毒素纳米靶向制剂制备工艺简单,质量较理想.
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4种综合疗法治疗尖锐湿疣的效果比较
目的 观察4种综合治疗方法对不同特点的尖锐湿疣(CA)的疗效.方法 对155例经临床和(或)醋酸白试验和(或)病理确诊的CA患者根据临床损害特点随机分为4组,分别采用不同的综合治疗方案[=氧化碳(CO2)激光、干扰素α-2b、氟尿嘧啶、鬼臼毒素酊等]进行治疗,每2,4,8,12周观察复发情况,所有复发者,不论其复发次数多少均记1次复发.结果 155例患者中复发16例,总体复发率为10.3%.结论 对CA患者应针对不同的临床损害特点采用不同的综合治疗方案,这种方法可以降低复发率.
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UPLC法测定八角莲药材中鬼臼毒素的含量
目的:建立超高效液相色谱法测定八角莲中鬼臼毒素的含量.方法:WATERS ACQUITY UPLC色谱系统,WatersACQUITY UPLC@BEHC色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),流动相为甲醇-0.1 moL·L-1磷酸二氢钾水溶液(50∶50),流速为1.0 ml·min-1,检测波长为290 nm.结果:鬼臼毒素在0.4～8.0 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为100.60％,RSD=1.57％.结论:该方法高效、快速、灵敏,为八角莲的质量控制提供了新方法.
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鬼臼类植物的栽培学研究进展
鬼臼毒素( podophyllotoxin,C22 H22 O8)主要存在于小檗科鬼臼亚科八角莲属(Dysosma Woodson)、桃儿七属(Sinopodophyllum Ying)、山荷叶属(Diphylleia Michx)及足叶草属(Podophyllum L.)植物中.这些植物由于都具有盾状着生的叶,茎中具有多数散生微管束,花不具蜜腺,浆果,含鬼臼毒素等一些共同特征而被看作一个自然而相对独立的类群,习惯上称为鬼臼类植物[1].目前鬼臼毒素的主要来源是植物提取,提取的主要植物为鬼臼类植物,其次还有柏科刺柏属、亚麻科亚麻属、唇形科山香属、崖柏属等[2～4].由于鬼臼毒素在医药上的显著疗效和价值[5],药农为了商业上的利益而疯狂采挖,致使野生资源逐渐枯竭、物种濒危,更不用说满足鬼臼毒素生产的需求,因此人工规范化种植势在必行.
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南方山荷叶的含量测定及其与混淆品八角莲的指纹图谱研究
目的:建立南方山荷叶及其八角莲的指纹图谱并确定特征峰.方法:对南方山荷叶及其混淆品进行薄层鉴别及含量测定并建立指纹图谱.结果:10批药材中湖北产南方山荷叶含量高;通过指纹图谱确定了6个特征峰分别为:苦鬼臼毒素、苦鬼臼毒素葡萄糖苷、槲皮素、鬼臼毒素、3-O-甲基槲皮素、山奈酚.结论:该方法简便、专属性强、重现性好,可用于南方山荷叶的质量控制.
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高效液相色谱法测定疣克酊中鬼臼毒素的含量
目的:建立疣克酊中鬼臼毒素含量的高效液相色谱测定方法.方法:以Discovery C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)为分析柱,以甲醇-水(50∶50)为流动相,检测波长285 nm,流速为0.8 mL*min-1.结果:当鬼臼毒素的浓度在24.8～99.2 mg*L-1范围内时,面积与浓度间呈良好的线性关系(r=0.9999,n=6),方法的平均回收率为98.5%,日内和日间精密度分别为3.8%和4.1%.3批疣克酊剂中鬼臼毒素的百分含量分别为102.00%,101.46%,100.39%.结论:本方法具有准确,简便,灵敏且重现性好的特点,可适用于复方制剂中鬼臼毒素含量的测定.
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足叶乙苷(VP-16)致过敏性休克2例
足叶乙苷(VP-16)是一种鬼臼毒素类的衍生物,一般用于肿瘤患者的化学治疗.以前曾见有鬼臼毒素引起发热的报道,但未见有过敏性休克的报道.现将我院应用中出现2例报告如下.
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脂质体鬼臼毒素混悬液的制备及包封率测定
目的:制备脂质体鬼臼毒素混悬液,观察脂质体鬼臼毒素在电镜下的形态及粒径范围,观察脂质体鬼臼毒素混悬液的稳定性,测定混悬液中脂质体鬼臼毒素的包封率,并观察脂质体鬼臼毒素包封率的稳定性.方法:采用逆向薄膜蒸发法制备脂质体鬼臼毒素混悬液,观察透射电镜下脂质体鬼臼毒素的形态,混悬液低温离心后采用紫外分光光度法测定脂质体鬼臼毒素的包封率.结果:制备的脂质体鬼臼毒素混悬液稳定性较理想,脂质体包封率为71.1%,1,3,6个月的脂质体包封率分别为:70.9%,60.8%,54.9%.结论:制备的脂质体鬼臼毒素混悬液稳定性较理想,脂质体包封率较高,但包封率的稳定性有待进一步提高.
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高效液相色谱法测定小八角莲中鬼臼毒素含量
目的:建立小八角莲药材中鬼臼毒素高效液相色谱法(HPLC)含量测定方法.方法:以C18为固定相,甲醇:0.1%磷酸水(60:40)为流动相,检测波长为292nm,进样量10μl.结果:鬼臼毒素进样量在0.20～2.00μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999,n=5),平均加样回收率为100.57%,RSD为1.92%(n=6).结论:该方法简便、快速、准确,能有效测定小八角莲药材中鬼臼毒素含量.
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不同产地窝儿七中黄酮和木质素的含量测定
目的:研究不同产地窝儿七中槲皮素、鬼臼毒素、山柰素、总木质素、总黄酮的含量变化,为窝儿七质量评价提供科学的依据.方法:采用HPLC法,色谱柱:Diamonsil(钻石)C18(4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相:甲醇-4 mL·L-1冰醋酸;检测波长:290 nm,进样量:25 μL;柱温:30 ℃.以槲皮素作为对照品,在硝酸铝-亚硝酸钠显色后,采用分光光度法在500 nm测定总黄酮含量.以鬼臼毒素作为对照品,在变色酸-浓硫酸显色后,采用分光光度法在570 nm测定总木质素含量.结果:窝儿七中槲皮素、鬼臼毒素、山柰素、总木质素、总黄酮的含量分别是0.32%-1.15%,5.60%-10.67%,0.41%-0.84%,13.81%-20.55%和2.55%-5.33%.结论:产地对窝儿七槲皮素、鬼臼毒素、山柰素、总木质素和总黄酮的含量有一定的影响.
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窝儿七中3种木脂素的定性定量研究
目的:建立测定窝儿七中3种木脂素含量的方法.方法:采用HPLC法,色谱柱为Cosmosil-C18(4.6 mm×250mm,5μm),柱温为25℃,甲醇-0.4％磷酸溶液梯度洗脱,流速为1 mL· min-1,检测波长为330 nm.结果:4'-去甲基鬼臼毒素、鬼臼毒素和山荷叶素分别在4.5～224.0 μgmL·L-1(r=0.9992)、20.0～1000.0 μg·mL-1(r=0.9994)和5.1～256.2 μg· mL-1(r=0.9994)线性关系良好,平均回收率分别为99.80％(RSD％=1.44％)、99.82％(RSD％=1.67％)和99.28％(RSD％=2.30％).结论:所建立的方法灵敏、准确、重复性好,为窝儿七的质量控制提供参考依据.
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桃儿七质量标准研究
目的 对不同产地或批次桃儿七药材进行分析研究,建立桃儿七药材质量标准.方法 鉴别桃儿七的植物形态、药材性状、显微特征;采用TLC法进行定性鉴别;采用HPLC法测定鬼臼毒素、4'-去甲鬼臼毒素和山柰酚的含量.结果 对桃儿七的植物形态、药材性状、显微特征进行了描述;建立了桃儿七的TLC鉴别方法,斑点清晰,分离度好,具有较好的专属性;根据10批次桃儿七含量测定结果,鬼臼毒素、4'-去甲鬼臼毒素、山柰酚分别在11.39～91.14、1.29～10.36、1.44～11.52μg与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率均大于97％,RSD均小于2％(n=6).结论 所建立的方法操作简便、重现性好、专属性强,可用于桃儿七药材的质量评价.
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高效液相色谱法测定窝儿七中鬼臼毒素和4’-去甲基鬼臼毒素的含量
目的 建立高效液相色谱法测定窝儿七中鬼臼毒素和4’-去甲基鬼臼毒素的含量.方法 色谱柱为COSMOSIL-C18(4.6 mm× 250 mm,5 μm),柱温25℃;以甲醇为流动相A,0.4％磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱;流速1 mL·min-1;检测波长330 nm.结果 4’-去甲基鬼臼毒素、鬼臼毒素的线性范围分别为4.5～224.0 μg·mL-1 (r=0.9992)和20.0～1 000.0 μg·mL-1 (r=0.9994),平均回收率分别为99.8％(RSD=1.5％)和99.8％(RSD=1.7％).结论 本方法灵敏、准确、重复性好,为窝儿七的质量控制提供参考依据.
关键词： 窝儿七 高效液相色谱法 鬼臼毒素 4’-去甲基鬼臼毒素 含量测定 -
鬼臼毒素抗胃癌细胞株SGC 7901作用的实验研究
目的:研究鬼臼毒素抗胃癌SGC 7901细胞株的作用,为鬼臼毒素用于临床治疗胃癌提供依据.方法:不同浓度的鬼臼毒素(0,5,10,20和50mg/L)处理SGC 7901细胞后,采用MTT比色法和平板克隆形成实验检测细胞的增殖;采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡;裸鼠成瘤实验检测鬼臼毒素对SGC 7901细胞体内致瘤能力的影响.结果:鬼臼毒素呈时间与剂量依赖性抑制SGC 7901细胞生长,明显降低SGC 7901细胞平板克隆,显著诱导SGC 7901细胞凋亡,并使SGC 7901细胞阻滞于G2/M期,还能显著降低SGC 7901细胞裸鼠移植瘤的体积及质量.结论:鬼臼毒素能抑制胃癌SGC 7901细胞的生长,诱导SGC 7901细胞凋亡,并能抑制GC7901细胞的体内致瘤能力,此为鬼臼毒素临床治疗胃癌提供了科学依据.
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紫外分光光度法测定鬼臼毒素壳聚糖膜剂中鬼臼毒素的含量
目的准确测定鬼臼毒素壳聚糖膜剂中的鬼臼毒素含量.方法采用紫外分光光度法测定膜剂中鬼臼毒素含量,检测波长为292nm.结果鬼臼毒素在5～30μg/mL范围内线性关系良好(r=0.99989),平均回收率为99.7%(n=5),RSD=1.11,膜剂中鬼臼毒素平均含量为25.68%(n=3),RSD=0.91%.结论该方法快捷、准确,膜剂中鬼臼毒素的含量基本符合25.9%的预定含量要求,且鬼臼毒素在膜剂中的分布较为均一.
