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NO供体/前体介入给药对MCAO大鼠脑缺血 保护作用的实验研究
目的 探讨NO供体/前体介入给药对MCAO大鼠脑缺血保护作用的实验研究.方法 于2013年3月-2014年3月在大连大学附属中山医院实验中心制作MCAO大鼠模型78只,随机分为5组,NG组18只、L-ARG组18只、GBE组18只、MCAO模型组18只、sham组6只.给药组按照处死时间分为两个亚组,每组6只.采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型,缺血2 h后再通并局部介入给药,分别于再灌注3 h及24 h经行为学评价后处死动物,采用特异性抗体GFAP标记不同时间点星形胶质细胞的激活情况并检测血清NO、MDA含量.结果 给药组24 h Longa评分情况[(1.63±0.21)分、(1.66±0.19)分、(1.87±0.22)分]明显优于MCAO大鼠模型组[(2.89±0.29)分],差异有统计学意义(P<0.05).各组再灌注3 h及24 h血清NO及MDA含量,MCAO模型组、L-ARG组及GBE组明显高于Sham组(P<0.05).结论 局部介入给予NO供体NG、前体ARG可以有效抑制星形胶质细胞活化,对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用.
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滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠脑组织脑源性神经营养因子蛋白含量的影响
目的 观察滋肾通络方对MCAO大鼠脑组织脑源性神经营养因子(brain derived neurophic factor,BDNF)蛋白含量的变化,以探讨BDNF在脑缺血中的意义及滋肾通络方对缺血周围区神经细胞损伤修复的作用.方法 制作MCAO大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组.灌胃20天后,取大鼠脑组织,用免疫组织化学法检测各组BDNF的蛋白表达.结果 假手术组海马区几乎见不到BDNF阳性细胞表达;模型组切片染色增强,阳性细胞略有表达;西药组、中药低剂量组及高剂量组均见到切片染色强,BDNF阳性细胞强表达,尤以中药高剂量组阳性细胞表达强.结论 BDNF与损伤后神经元的修复作用有关.滋肾通络方可通过调节BDNF的合成,促进神经细胞的存活和损伤修复,从而减轻缺血性脑损伤.
关键词： 滋肾通络方 MCAO大鼠 脑源性神经营养因子基因表达 -
电针运动区对MCAO大鼠大脑皮质及血清内NGF和VEGF表达的影响
目的 动态观察电针运动区对大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)大鼠大脑皮质及血清内神经生长因子β(NGFβ)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨头针治疗缺血性脑中风的机制.方法用线栓法制作大鼠MCAO模型,随机分为假手术组、模型组和电针组.每组各于第3天、7天和14天取材检测指标.神经功能评分检测神经功能障碍的改变;酶免法检测大脑皮质及血清内NGF和VEGF的含量.结果连续针刺14d后,电针组大鼠的神经功能评分明显低于模型组(P＜0.01);模型组从术后第3天开始大脑皮质NGF表达升高,第7天达到高峰,接近假手术组水平,到第14天表达下降(P＜0.001).不同时间点电针组大脑皮质和血清中NGF表达与模型组比较有显著提高(P＜0.01, P＜0.001);模型组大脑皮质和血清中VEGF的表达都逐渐呈现下降趋势且显著低于假手术组(P＜0.001),电针组虽然仍低于假手术组,但与模型组相比,大脑皮质和血清中VEGF表达呈上升趋势,且在针刺第14天时有较显著差异(P＜0.05, 0.01).结论电针运动区能促进脑缺血后血管生成和恢复神经功能障碍,其机制可能与上调NGF及VEGF蛋白表达有关.
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首乌仙海片干预MCAO大鼠脑内MMP-2、MMP-9的表达对胶质瘢痕形成的影响
目的 研究补益肝肾中药首乌仙海片干预局灶性脑缺血(MCAO)大鼠脑内MMP-2和MMP-9的表达,探讨首乌仙海片对缺血性卒中胶质瘢痕形成的影响.方法 用Tamura法进行右侧近端大脑中动脉电凝术制成MCAO大鼠模型.35只大鼠分为给药组、模型组、假手术组.于造模成功后第6天药物组按9g生药/kg·d灌胃给予首乌仙海片,余二组分别灌胃给予同等量生理盐水,均日1次.用酶联免疫吸附法检测大鼠脑内MMP-2、MMP-9的表达.结果 模型组在给药1、2、3周后组内比较无显著性差异;药物组在治疗2周和3周后均较同组前期有显著性差异,与同期模型组比较亦有显著性差异.结论 酋乌仙海片治疗缺血性卒中的机制与后期上调MMP-2、MMP-9的表达,抑制胶质瘢痕的过度形成有关.
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滋肾通络方对MCAO大鼠神经行为及颅脑CT的影响
目的:观察滋肾通络方对MCAO大鼠颅脑CT的影响.方法:制作MCAO大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组.灌胃前后,分别行颅脑CT扫描并观察大鼠神经行为评分的变化,比较药物对其影响.结果:中药高、低剂量组、西药组大鼠颅脑CT缺血程度及神经行为评分均好于模型组;中药高、低剂量组缺血程度及神经行为评分好于西药组.结论:滋肾通络方可改善MCAO大鼠脑缺血程度及神经行为评分,从而对脑缺血损伤具有保护作用.
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针刺水沟穴抑制MCAO大鼠海马区神经细胞坏死的作用研究
目的:对比针刺水沟穴与水沟旁非穴对MCAO大鼠海马区坏死神经元作用.方法:将72只健康雄性Wistar大鼠按照随机数字表分为正常组、假手术组、模型对照组、非针刺组、水沟旁组、水沟组6组,每组12只.模型对照组、水沟旁组、水沟组参照Zea-Longa线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO).水沟旁组、水沟组以频率180次/min、持续5s进行针刺干预.观察大鼠神经行为学,血流量,脑梗死面积比率,以及海马区神经细胞坏死率.结果:水沟组分别与非针刺组和水沟旁组比较差异都具有显著差异性P＜0.05,而增加血流量方面水沟组也明显优于水沟旁组P＜0.01.水沟旁组与非针刺组无显著性差异(P＞0.05).结论:针刺水沟穴抑制MACO大鼠神经细胞坏死,增加血流量从而降低梗死面积,而水沟旁无此作用.
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内关穴捻转手法干预MCAo大鼠的针刺时间和频率的正交优化研究
目的:筛选针刺内关穴并采用捻转手法改善大脑中动脉阻塞模型(MCAo) Wistar大鼠脑血流量的针刺频率和时间优化方案.方法:参照Zea-Longa线拴法复制Wistar大鼠MCAo模型,按正交设计分9组并分别施以频率1、2、3次/s,时间5、60、180s不同组合下的针刺干预,以大鼠梗塞侧脑血流量为评价效应指标.结果:内关穴的针刺时间和频率均是改善MCAo模型Wistar大鼠脑血流量显著因素(P＜0.05),针刺频率与时间的优搭配是3次/s,60s.结论:内关穴针刺时间和频率均是改善MCAo模型大鼠脑血流量的显著因素,且针刺频率和时间存在优搭配方案.
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电针对脑缺血再灌注大鼠行为学影响实验研究
目的:建立大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠脑缺血模型,通过观察电针对脑缺血再灌注模型大鼠行为学指标的影响,探讨电针治疗脑缺血的作用机制.方法:将SD大鼠30只随机分为3组:假手术组、缺血组、电针组.缺血组和电针组大鼠参照Longa的线栓法复制MCAO大鼠模型.根据Longa的评分标准对大鼠行为体征进行评分.造模成功后电针组电针百会、水沟、双侧足三里穴,假手术组和缺血组不予干预.连续电针干预2周后,采用梯形平衡木实验、Morris水迷宫实验和旷场实验,对大鼠行为学相关指标进行检测,并进行统计分析.结果:(1)电针组大鼠在梯形平衡木实验中的协调与整和能力及抓握、平衡、行走能力优于其他两组(P＜0.05).(2)电针组大鼠在Morris水迷宫实验中的学习记忆能力明显优于其他两组(P＜0.05).(3)电针组大鼠在旷场实验中的自主运动能力优于其他两组(P＜0.05).结论:电针能有效改善脑缺血再灌注大鼠的协调整和能力及抓握、平衡、行走能力、学习记忆能力、自主运动能力,为针灸疗法在临床治疗脑缺血提供了理论依据.
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滋肾通络方对MCAO大鼠血清(血浆)NO/ET-1含量的影响
目的:观察滋肾通络方对MCAO大鼠血清(血浆)NO/ET-1含量的影响.方法:制作MCAO大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组.灌胃20天后,大鼠腹主静脉取血,分别以化学法和放射免疫法测定血清NO、血浆ET-1值,并计算NO/ET-1比值.结果:滋肾通络方可明显升高模型大鼠血清NO含量,降低大鼠血浆ET-1含量,提高NO/ET-1的比值.结论:滋肾通络方通过改善受损内皮的功能,调节血管活性物质的分泌和释放,以调节血管紧张度、增加局部血流量,恢复血管的自稳态.
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缺氧预处理对缺血性脑卒中大鼠的脑保护作用及H3R17me2表达的影响
目的 探讨短期间断低压缺氧预处理对MCAO手术后大鼠的神经保护作用及损伤侧皮质、海马CA1区H3R17me2的表达.方法 实验大鼠分为正常对照组(NC组,12只)、假手术组(SC组,12只)、单纯缺氧预处理组(HPC组,12只)、单纯梗死组(MCAO组,12只)、缺氧预处理后梗死组(HM组,12只).采用改良Longa线栓法建立大脑中动脉梗死病理模型;Z-Longa 评分及尼氏染色观察神经损伤程度;免疫组织化学方法观察H3R17me2蛋白在梗死侧皮质及海马CA1区表达;Western blot法测定H3R17me2在梗死侧皮质的表达.结果 在损伤侧皮质及海马CA1区,与MCAO组相比,HM组大鼠神经功能评分降低(P<0.05,P<0.05),神经元损伤较轻,残存神经元增多,H3R17me2表达下调(P<0.05).结论 短期间断低压缺氧预处理可减少MCAO手术后局灶性缺血带来的神经损伤,H3R17me2蛋白可能参与了HPC介导的神经保护作用.
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间断低压缺氧预处理对MCAO大鼠脑保护作用及对TLR4表达影响
目的 探讨间断低压缺氧预处理对MCAO大鼠的神经保护作用及对脑组织TLR4、NF-κB表达的影响.方法 实验大鼠分为:正常对照(C)组30只、假手术(S)组26只、单纯低氧处理(H)组35只,低压氧仓内间断低压处理、单纯大脑中动脉缺血(M)组43只,行单侧大脑中动脉栓塞处理 、预处理后脑梗死(HM)组37只;Longa评分,TTC染色及尼氏染色观察神经损伤程度,免疫组织化学法观察TLR4的细胞表达情况,Western blot法测定TLR4表达量,ELISA法测定TLR4及NF-κB表达变化.结果 HM组大鼠神经功能评分及梗死体积低于M组(P<0.05),残存神经元增多,TLR4表达下调(P<0.05),NF-κB表达下调(P<0.05).结论 低压缺氧预处理可有效减轻神经损伤,降低TLR4及NF-κB的表达.
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近十年来MCAO大鼠模型制备方法优缺点探讨分析
随着经济增长,环境的污染、不健康的生活方式等使脑血管病的发病率日益增高,其中缺血性占大多数.研究人员依据需要制造出不同的脑缺血动物模型,并不断地进行改良.笔者为了方便研究者制造更好的动物模型以应用在不同领域,将近十年来的各种改良方法进行比较,就现在为实行的大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型制造方法的优劣综述和探讨.
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脑健胶囊对MCAO大鼠脑水肿、梗死面积及体质量的影响
目的:探讨脑健胶囊对MCAO大鼠脑水肿、脑梗死面积比及体质量恢复趋势的影响,筛选佳剂量.方法:将大鼠随机分成假手术组(无菌蒸馏水),模型组(无菌蒸馏水),补阳还五汤组(干浸膏3.15 g·kg-1),脑健胶囊高剂量组(相当于干浸膏3.44 g · kg-1)、中剂量组(干浸膏2.4t g· kg-1)、低剂量组(干浸膏1.68 g·kg-1),灌服剂量为0.05 mL· kg-1,每组各10只.大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血模型,于手术醒后2h和7d处死前1h评价其神经功能,每日称体质量,每组随机取5只计算梗死面积比,5只计算大脑含水量比.结果:脑缺血后大鼠均有神经功能障碍,治疗7d后,脑健胶囊中剂量能显著改善其神经功能缺失症状,恢复体质量,减小梗死面积,减轻脑组织水肿,与模型组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:脑健胶囊以中剂量(干浸膏2.41 g· kg-1)疗效佳.
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参芎滴丸对MCAO大鼠血浆t-PA及PAI-1的影响
目的：观察参芎滴丸对MCAO大鼠血浆t-PA及PAI-1的影响。方法线栓法制备MCAO模型，在MCAO造模前，7d连续灌胃参芎滴丸（预处理），造模后观察神经缺损评分，检测血浆t-PA及PAI-1的表达。结果与MCAO组比较，参芎滴丸预处理可以调节PAI-1和t-PA平衡作用。结论参芎滴丸可以减轻MCAO大鼠神经缺损症状，与调高纤溶活性有关。
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中风Ⅱ号对局灶性脑缺血大鼠NF-κB表达的影响
目的 观察中风Ⅱ号对局灶性脑缺血大鼠脑组织核因子-κB (NF-κB))蛋白表达的影响.方法 线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,予中风Ⅱ号口服液(10 mg·kg-1)连续灌胃1d、3d、7d,并设正常对照组、模型组.Longa法进行神经功能缺损评分,TTC染色检测脑组织缺血面积,Western blot检测大鼠脑组织NF-κB p65蛋白表达.结果 模型组大鼠脑组织NF-κB蛋白表达较对照组显著升高,而中风Ⅱ号能明显改善MCAO大鼠神经功能缺损评分,减少脑组织缺血面积,降低脑组织NF-κB蛋白表达.结论 中风Ⅱ号可通过抑制NF-κB的过高表达,调控炎症级联反应,减轻局灶性脑缺血大鼠的炎症损伤.
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清脑益髓调督法对MCAO大鼠脑组织中ephrinB2 mRNA表达的影响
目的 探讨清脑益髓调督法电针治疗脑梗死的作用途径,丰富脑梗死病机研究及针刺干预机制.方法 选用健康SD大鼠96只,随机分为正常空白组(假手术组)、阴性对照组(模型组)、电针Ⅰ组(清脑益髓调督组)和电针Ⅱ组(普通电针组).相应实验处理后,采用RT-PCR检测ephrinB2 mRNA的表达率.结果 各组大鼠ephrinB2 mRNA表达率的比较:假手术组各时相上呈弱阳性表达,无显著性差异(P＞0.05);模型组表达率随着时间的延长而增高,3d、7d组优于1d组(P＜0.05),14d组明显优于1d组及假手术组(P＜0.01),7d组表达高于3d组,但无显著性差异(P＞0.05);普通电针组,3d、7d、14d组明显优于1d组(P＜0.05),以7d组为显著(P＜0.01),7d组与14d组无显著性差异(P＞0.05);清脑益髓调督组,7d、14d组优于1d组(P＜0.05),治疗3d组明显优于其他三个时相,并且优于普通电针组(P＜0.01),7d组与14d组比较,无显著性差异(P＞0.05).结论 针刺疗法能够促进血管新生,早期采用清脑益髓调督法治疗急性脑梗死疗效更优,其作用机制可能是通过上调ephrinB2 mRNA的表达,从而促进毛细血管新生、缺血区周围组织灌流和神经功能恢复.
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不同频率针刺内关穴对MCAo模型大鼠脑血流量的影响
目的:研究不同频率针刺内关穴对大脑中动脉阻塞模型(middle cerebral artery obstruction,MCAo)大鼠脑血流量的作用及机制.方法:参照Zea-longa线栓法复制MCAo模型.成年雄性Wistar大鼠144只随机分为正常组、非针刺组、非穴组、内关组,后两者又按60次/分钟、120次/分钟、180次/分钟各分3组.针刺每次行针5秒钟,每天2次,共3天.观察指标为脑血流量、软脑膜微循环管径和脑组织微血管数.结果:针刺内关穴比非穴能明显提高MCAo模型大鼠脑血流量,扩张软脑膜微循环管径,增加脑组织微血管数,差异有统计学意义(P＜0.01),且内关120次/分钟组、180次/分钟组与60次/分钟组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:针刺内关穴能提高MCAo大鼠局部脑血流量且其提高脑血流量作用可能与扩张软脑膜微循管径,增加脑组织微血管数有关.与非穴相比,针刺内关对MCAo大鼠脑血流量的影响作用具有特异性且与不同针刺频率有关,在行针时间为5秒前提下,120次/分钟、180次/分钟比60次/分钟频率针刺更能提高其脑血流量.
