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CDX2基因甲基化状态在结直肠锯齿状病变中的研究进展
目的：观察分析CDX2基因甲基化状态在结直肠锯齿状病变中的状态。方法选取该院在2011年3月—2015年7月期间收治的450例结直肠锯齿状病变患者(136例TSA,122例SSA/P,192例HP),并选取82例正常组织作为对照组,采用METHYLIGHT方法分析结直肠锯齿轮病变中CDX2基因甲基化状态,并采用免疫分析法分析CDX2基因的表达情况,收集相关的临床资料,分析CDX2基因甲基化状态在结直肠锯齿状病变中的状态和相关因素情况。结果正常对照组CDX2基因甲基化率53.38%(44/84),SSA/P组75.41%(92/122),HP组72.97%(140/192),TSA组80.88%(110/136)；HP组与正常对照组相比,差异有统计学意义(P=0.009)；TSA组与与正常对照组相比,差异有统计学意义(P=0.005)；SSA/P组与正常对照组相比,差异有统计学意义(P=0.002)。结论结直肠锯齿状病变中CDX2基因启动子CpG岛中上游区域基化程度高,蛋白表达阳性率高,两者相关性不强,极少部分甲基化状态有可能有诱导CDX2蛋白表达下调的作用。
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CDX2基因在胃癌癌前病变不同中医证型中的表达
目的 通过检测胃癌癌前病变(PLGC)不同中医证型患者胃黏膜组织CDX2基因的表达,探讨不同中医证型与CDX2基因表达之间的相关性及CDX2表达与不同病理类型之间的关系.方法 将24例健康人及120例PLGC患者分为健康对照组、脾虚气滞证组、阴虚有热证组、胃络瘀阻证组,每例取新鲜胃黏膜6块,包括胃体、胃角和胃窦各2块,经免疫组织化学染色观察CDX2基因的表达.结果 CDX2基因阳性表达在脾虚气滞证中为16.67%(6/36),阴虚有热证中为52.17%(24/46),胃络瘀阻证中为63.16%(24/38),健康对照组无表达;其在Ⅰ型肠化生表达为33.33%(18/54),Ⅱ型肠化生表达为25.93%(14/54),Ⅲ型肠化生表达为27.78%(15/54),异型增生表达为12.96%(7/54).结论 CDX2基因的表达与病理类型有关,在不同中医证型的表达有统计学意义,可为PLGC的中医证型客观化提供依据.
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CDX2基因甲基化在结直肠锯齿状病变中的研究进展
结直肠锯齿状癌变通路被认为是仅次于传统“腺瘤一癌”成瘤途径的第二条重要癌变通路.目前迫切需要更多分子水平的指标成为发现结直肠锯齿状病变早期癌前病变的依据,提高结直肠癌的诊断和治疗水平.在结直肠锯齿状病变中可以检测到CDX2基因甲基化,因此,正确认识CDX2基因甲基化与结直肠锯齿状病变的关系对早期预防和诊断、治疗结直肠癌有重要意义.
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尾型同源盒基因在成人急性淋巴细胞白血病中表达及临床意义
本研究旨在探讨同源盒基因CDX1,CDX2和CDX4在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其临床意义.急性淋巴细胞白血病骨髓或外周血标本51份,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CDX1,CDX2和CDX4在成人急性淋巴细胞白血病患者和14例正常对照组中的表达情况.结果表明,在14例健康成人中未见CDX1,CDX2和CDX4表达,15例缓解期急性淋巴细胞白血病患者中未见CDX1,CDX2和CDX4表达,在初治ALL患者中CDX2的表达率为60.8%,而在治疗缓解后其表达率明显下降(p<0.05);在复发组患者中CDX2表达率又升高(81.8%);CDX2表达与疾病危险分组相关,高危组CDX2阳性率为91.7%,高于标危组45.7%(p<0.05);CDX1和CDX4在初治及复发成人ALL中皆无表达.在初治和复发的成人ALL患者中CDX2表达阳性患者的完全缓解率(CR)低于表达阴性的患者(p<0.05);CDX2表达阳性患者的中位生存时间短于阴性表达的患者.结论:CDX2表达和成人ALL的发病、复发相关,CDX1和CDX4表达与成人ALL发病及复发无相关性;CDX2表达阳性的患者完全缓解率低,预后不良;CDX2可作为成人急性淋巴细胞白血病的发病、复发及预后判断的指标之一.
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锯齿状病变患者组织中CDX2基因启动子中上游区域的甲基化
目的:观察锯齿状病变组织中CDX2基因甲基化状态和CDX2蛋白表达,探讨临床病理意义和在癌变通路中的作用,同时探讨CDX2基因在不同年龄层段甲基化状况.方法:应用Taqman探针qPCR(MethyLight)方法检测实验组225例锯齿状病变(包括96例增生性息肉(hyperplastic polyp,HP)、61例广基(无蒂)锯齿状腺瘤/息肉(sessile serrated adenoma/polyp,SSA/P)和68例传统型锯齿状腺瘤(traditional serrated adenoma,TSA)、对照组54例管状腺瘤(tubular adenoma,TA)、69例结直肠癌(colorectal cancer,CRC)和42例正常组织中CDX2基因CpG岛甲基化状态,并通过测序法验证扩增序列,同时应用免疫组织化学方法检测实验组116例锯齿状病变(包括52例HP、41例SSA/P、23例TSA)、对照组20例TA、24例CRC和24例正常组织中CDX2蛋白的表达情况.结果:CDX2基因启动子甲基化率在对照组正常组织与实验组HP(P=0.019)、SSA/P(P=0.015)和TSA(P=0.002),对照组CRC与实验组HP(P=0.000)、SSA/P(P=0.000)和TSA(P=0.000),对照组TA与实验组TSA(P=0.027)均有显著性差异;CDX2蛋白阳性率在对照组CRC与实验组HP(P=0.001),对照组TA与实验组HP(P=0.005),实验组HP和TSA(P=0.038)均有显著性差异;CDX2基因启动子甲基化率和CDX2蛋白阳性率的相关性比较中,实验组HP、SSA/P和TSA中P=0.652,r=-0.064(极弱相关);P=0.238,r=-0.182(极弱相关);P=0.519,r=-0.142(极弱相关),但两者有负相关趋势;CDX2基因启动子甲基化频率和不同年龄层段相关性比较实验组HP、SSA/P和TSA中P=0.002,r=0.312(弱相关);P=0.000,r=0.473(中等程度相关);P=0.001,r=0.392(弱相关),对照组TA中P=0.001,r=0.440(中等程度相关).结论:组织中CDX2基因启动子中上游区域甲基化状态比较复杂,极少部分甲基化状态可能有诱导CDX2蛋白表达下调,在锯齿状通路的发生发展中影响作用也甚微;大部分甲基化可能随着年龄增加而逐渐增加.
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斑贞1号联合TMP、5-FU对人胃癌细胞CDX2基因表达影响
目的 探讨斑贞1号联合TMP、5-FU逆转人胃癌细胞系SGC-7901/ADR与CDX2相关性.方法 从2015年6—12月在包头医学院第一附属医院中心实验室进行SGC7-901/ADR细胞培养,设①空白对照组、②5-FU组、③斑贞1号组、 ④5-FU+斑贞1号组、 ⑤5-FU+斑贞1号+TMP组观察细胞毒性,选取各个药物组作用浓度分别提取总mRNA,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)监测人胃癌细胞SGC-7901/ADR细胞在不同药物组的尾型同源基因2(caudal-re lated hom e-odom aintranscription factor 2,CdX2)mRNA的表达情况.结果 对照组CDX2 mRNA表达量为(2.01±0.26),5-FU组CDX2mRNA表达量为(1.94±0.24),5-FU组与阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),而5-FU联合斑贞1号及TMP处理组CDX2 mRNA表达量为(0.44±0.07),与其他组明显降低比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 斑贞1号联合TMP及5-FU逆转人胃癌SGC-7901/ADR细胞耐药性可能与CDX2基因相关.
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5HRE增强子和hTERT启动子联合调控CDX2基因对人结肠癌细胞系LoVo增殖的抑制
目的:检测已构建的缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)和人端粒酶催化亚单位(human telomerasere-verse transcriptase,hTERT)启动子调控CDX2基因表达的载体pLVX-5 HRE-hTERTp-CDX2-3 FLAG(5 HhC)对人结肠癌细胞系LoVo增殖的影响.方法:复苏前期筛选的转染pLVX-hTERTp-CDX2-3 FLAG(hC)的LoVo细胞(hC/LoVo)、转染pLVX-5HRE-hTERTp-3 FLAG(5 Hh)的LoVo细胞(5Hh/LoVo)、转染pLVX-5 HRE-hTERTp-CDX2-3 FLAG(5 HhC)的LoVo细胞(5HhC/LoVo)及空白LoVo细胞,各组细胞均在常氧条件和缺氧条件(加入缺氧模拟剂CoGl2)展开实验.MTT检测细胞增殖情况,平板克隆实验观察细胞集落形成,流式细胞术分析细胞周期.结果:成功复苏转染5HhC的LoVo细胞及各组对照LoVo细胞.hC/LoVo、5HhC/LoVo细胞增殖显著低于LoVo及5Hh/LoVo,且缺氧微环境下的5HhC对于LoVo细胞的增殖速度抑制更为明显[细胞增殖率,第5天,常氧vs缺氧:(48.62±3.32)％vs (36.81±2.83)％,P＜0.05;第7天,常氧vs缺氧:(56.44±2.28)％vs(38.51±3.21)％,P＜0.05].hC/LoVo、5HhC/LoVo组的平板克隆数显著低于LoVo及5Hh/LoVo组,且缺氧微环境下的5HhC对LoVo细胞集落形成能力的抑制较常氧环境下更为显著[集落数:(44.2±3.5)个vs (90.8 ±9.3)个,P＜0.05];hC/LoVo、5HhC/LoVo组G1期细胞比例较LoVo细胞及5Hh/LoVo组明显提高[(63.59±0.55)％、(64.82±2.22)％ vs (51.38±0.70)％、(51.59±0.38)％,P＜0.05],且在缺氧微环境下,5HhC/LoVo组G1期细胞比例提高更加显著[(71.38±3.02)％vs(64.82±2.22)％,P＜0.05].结论:治疗载体5HhC可使人结肠癌细胞系LoVo发生G1期阻滞,增殖及集落形成能力受到抑制,且在缺氧诱导下5HhC的抑制能力更为显著.
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过表达CDX2抑制裸鼠结肠癌移植瘤的生长
目的:探讨过表达CDX2对结肠癌LoVo细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,为结肠癌生物治疗提供实验依据.方法:脂质体法介导pEGFP-C1-CDX2真核表达载体转染入结肠癌LoVo细胞,G418筛选出稳定表达CDX2的LoVo细胞(LoVo-CDX2细胞)；接种LoVo-CDX2细胞制备裸鼠皮下移植瘤模型,观察CDX2过表达对LoVo细胞移植瘤生长的影响.结果:Western blotting结果显示,转染pEGFP-C1-CDX2组LoVo细胞中CDX2蛋白表达量高于pEGFP-C1组及未转染组.LoVo-CDX2、LoVo-C1和LoVo细胞接种裸鼠的第20天,LoVo-CDX2组移植瘤质量较LoVo组和LoVo-C1组移植瘤质量显著减轻[(0.62±0.22) vs(2.10 ±0.78)、(2.56±0.76)g,分别P＜0.05和P＜0.01].结论:CDX2过表达可以抑制结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤的生长.
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胃黏膜异型增生微观辨证分型CdX2基因表达及随访研究
[目的]探讨胃脘痛胃黏膜异型增生患者中医微观辨证分型与CdX2基因蛋白表达的意义及与临床随访结果的关系.[方法]应用中医脏腑辨证理论与ABC免疫组化方法对120例胃脘痛胃黏膜异型增生患者进行胃镜下微观辨证分型与CdX2基因蛋白表达的免疫组化分析,同时进行临床随访研究.[结果]胃络瘀滞型与胃络灼伤型患者胃黏膜CdX2基因蛋白表达阳性率(37.5%、66.7%)较胃寒型与胃热型(6.7%、12.5%)明显增高(P＜0.01),其中具有完整随访结果者63例,随访时间6～72个月(平均24个月),其癌变者中胃络瘀滞型(76.7%)明显高于未癌变者(27.3%)(P＜0.01).[结论]中医微观辨证分型与CdX2基因蛋白表达有关,对辨别胃黏膜异型增生的癌变性质具有重要意义,胃络瘀滞型胃黏膜异型增生与癌变关系密切,在辨证施治中应给予重视.
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循环型microRNA-92a在先天性巨结肠中的表达及上调CDX2基因的研究
目的 探讨循环型microRNA-92a(miR-92a)在先天性巨结肠(HD)中的表达,以及通过上调尾侧型同源转录因子-2(CDX2)基因抑制肠神经干细胞(ENSCs)增殖的可能机制.方法 选取2013年1月-2015年12月在山东省临沂市沂水中心医院行先天性巨结肠根治术16例HD患儿的术前血清标本.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清miR-92a mRNA的表达.提取孕15d胎鼠肠管ENSCs,通过免疫学方法鉴定ENSCs;免疫磁珠法分选Nestin+ENSCs,脂质体转染使Nestin+ENSCs内过表达miR-92a,噻唑蓝法检测细胞的增殖活性,qRT-PCR、Westem blot检测CDX2基因的表达.结果 HD患儿血清中miR-92a mRNA的相对表达量为(23.5±4.66),高于对照组(t=12.661,P=0.000);ENSCs细胞培养早期Nestin染色阳性,具有向Tuj-1阳性、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞分化的潜能;ENSCs过表达miR-92a后,CDX2 mRNA的相对表达为(13.024±3.882),高于对照组(F=47.212,P=0.000),CDX2蛋白表达为(0.436±0.0828),高于对照组(F=48.793,P=0.000),细胞的增殖活性在转染后24、48和72 h明显受抑制.结论 miR-92a通过上调CDX2基因的表达,抑制ENSCs的增殖,可能促进HD发生、发展.
关键词： 先天性巨结肠 循环型miR-92a CDX2基因 肠神经干细胞 -
急性白血病CDX2基因启动子甲基化状态与其mRNA表达关系
目的 研究急性白血病尾型同源盒-2(CDX2)基因启动子甲基化与其mRNA表达的关系,探讨CDX2基因表达上调机制.方法 分别用甲基化特异性PCR(MSP)、实时定量PCR方法检测55例初诊急性髓细胞白血病(AML)、18例初诊急性淋巴细胞白血病(ALL)、17例对照CDX2基因启动子甲基化状态和CDX2 mRNA表达.结果 AML、ALL及对照组甲基化率均为100.0％,各组间差异无统计学意义(P＞0.05).AML、ALL组CDX2 mRNA表达显著高于对照组,差异有统计学意义(Z=-5.437、-3.862,P均=0.000),AML、ALL两组间差异无统计学意义(Z=-0.794,P=0.427).结论 急性白血病患者CDX2 mRNA表达上调与其启动子甲基化状态无明显相关性.
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胃癌组织CDX2和E-钙粘蛋白表达与临床病理的关系
目的:探讨胃癌组织尾侧型同源转录因子-2(CDX2)和E-钙粘蛋白(E-cad)的表达与浸润、转移及预后的关系.方法:胃癌患者86例,以正常胃黏膜15例为对照,应用SABC免疫组化方法检测CDX2和E-cad的表达. 结果:正常胃黏膜上皮中E-cad完全表达,而CDX2不表达. 胃癌Ⅰ～Ⅱ期CDX2与E-cad的异常表达率分别为51.2%和54.9%,Ⅲ～Ⅳ期的CDX2异常表达率下降,而E-cad的则提高,分别为25.1%和78.8%,各分期间的差异有统计学意义(P<0.05). 伴有淋巴结转移的55例患者中,CDX2异常表达率为67.1%, 而E-cad异常表达率为86.8%,均分别与相应的无淋巴结转移组存在统计学差异(P<0.01). 此外,CDX2和E-cad的表达还与细胞分化程度、肿瘤生长方式、癌细胞浸润深度及患者5 a生存率有关(P<0.05). 结论:CDX2和E-cad与胃癌的发生、浸润、转移有关,可联合判断预后.
