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Mbd2基因在子宫内膜异位症中的表达
目的：探讨Mbd2在EMs患者发病过程中的可能作用。方法：Trizol法提取病变组织的总RNA，反转录生成cDNA，Blast-primer设计Mbd2 mRNA引物，Real-time PCR方法检测各组间Mbd2 mRNA表达变化。结果：EMs患者异位内膜、在位内膜中Mbd2 mRNA表达显著高于子宫肌瘤患者在位内膜(P＜0.01)；且EMs患者异位内膜中Mbd2 mRNA的表达显著高于在位内膜(P＜0.01)。结论：Mbd2基因参与子宫内膜异位症的发生，还可能为子宫内膜异位症的早期发现做出贡献。
关键词： Mbd2 子宫内膜异位症 Real-time PCR -
基于表观遗传学探讨消异方对子宫内膜异位症大鼠内膜细胞的防护机制
目的:研究消异方对大鼠子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)在位及异位内膜组织中DNMT1、DNMT3a、Mbd2等表达水平的影响,基于表观遗传学探讨消异方对子宫内膜细胞的保护作用.方法:制作病证结合气滞血瘀证EMs大鼠动物模型,造模成功后随机分为模型对照组、散结镇痛胶囊组、中药高剂量组、中药低剂量组,另设空白对照组,每组24只.散结镇痛胶囊组灌胃给予散结镇痛胶囊(0.05 g/mL),中药低剂量组(1 g/mL)、中药高剂量组(4 g/mL)给予消异方水煎剂,空白对照组及模型对照组大鼠均给予生理盐水,以上各组给药容积均为10 μL/g,2次/d,连续28 d.采用RT-PCR检测EMs大鼠在位及异位内膜组织中DNMT1、DNMT3a、Mbd2等的表达水平.结果:与空白对照组正常内膜对比,模型对照组DNMT1、DNMT3a呈低表达,Mbd2呈高表达,差别均有统计学意义(P＜0.01);DNMT1、DNMT3a在模型对照组异位与在位内膜的表达对比,差别均无统计学意义(P＞0.05).与模型对照组对比,中药低、高剂量组和散结镇痛胶囊组的DNMT1、DNMT3a呈高表达,Mbd2呈低表达,差别有统计学意义(P＜0.01).与中药低剂量组对比,DNMT1、DNMT3a在中药高剂量组呈高表达(P＜0.05),Mbd2呈低表达(P＜0.05).结论:消异方可以通过提高EMs大鼠异位内膜组织中DNMT1和DNMT3a的表达、降低Mbd2的表达来治疗EMs.
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MBD2靶向RNA干扰重组体的构建及序列分析
目的本研究利用RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术,以MBD2(methyl CpG-binding domain 2)为靶基因,设计构建重组体,并进行序列分析,为下一步探索肿瘤基因治疗的新途径打好基础.方法设计有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pTZU6+1中构建重组体,转化JM109菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析.结果将合成的DNA序列退火后克隆到载体上,经测序鉴定确实为所需序列.结论 MBD2靶向RNA干扰重组体的成功构建和序列分析,为下一步利用该重组体干扰肿瘤细胞中MBD2的mRNA转录,探索肿瘤基因治疗的新途径打下基础.
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鼠β-防御素2(mBD2)真核表达质粒的构建及稳定表达株的鉴定
目的:对小鼠β防御素-2(mBD2)基因进行克隆, 构建其真核表达载体, 筛选出稳定表达细胞株, 并研究mBD2的生物学特性及其抗肿瘤机制.方法:通过向BALB/c小鼠腹腔注射内毒素(LPS), 建立小鼠急性时相反应, 取其肺组织提取总RNA, 采用RT-PCR方法扩增小鼠mBD2基因, 经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入相同酶切的pcDNA3.1(+)真核表达载体, 对其进行酶切和测序鉴定.将构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2转染SiHa细胞, 采用G418进行稳定表达株的筛选, 用免疫荧光染色和RT-PCR鉴定细胞内mBD2蛋白表达情况.结果:提取小鼠肺组织总RNA, 采用RT-PCR方法扩增了250 bp左右的产物, 通过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切, 构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2.SiHa被该质粒转染后, 在100 mg/L G418浓度下筛选20 d, 得到了稳定表达mBD2的细胞株, 用免疫荧光染色显示mBD2蛋白在胞质中有大量表达, RT-PCR反应扩增到了mBD2的mRNA.结论:成功地构建了pcDNA3.1(+)/mBD2真核表达质粒, mBD2蛋白在SiHa细胞中能稳定表达, 这些结果为进一步深入研究mBD2的生物学特性及其抗肿瘤的作用奠定了基础.
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鼠β-防御素2抗宫颈癌的实验研究
目的:建立BALB/c小鼠U14宫颈癌移植瘤模型,观察肿瘤生长情况,探讨mBD2对小鼠机体免疫功能的影响.方法:采用无内毒素质粒大抽试剂盒抽提pcDNA3.1(+)/mBD2、pcDNA3.1(+)/rmBD2和pcDNA3.1(+)质粒DNA.将荷瘤小鼠随机分为5组,分别采用pcDNA3.1(+)/mBD2、pcDNA3.1(+)/rmBD2质粒治疗,同时设立pcDNA3.1(+)、顺铂和PBS组对照;观察肿瘤生长状况、荷瘤小鼠存活时间,绘制小鼠生存曲线.结果:成功建立了BALB/c小鼠U14移植瘤模型.采用pcDNA3.1(+)/mBD2、pcDNA3.1(+)/rmBD2、pcDNA3.1(+)治疗造模成功的荷瘤小鼠, 结果显示:pcDNA组及PBS组肿瘤生长迅速,出现大范围出血、坏死,并于治疗后7 d全部死亡;mBD2组与rmBD2组小鼠肿瘤生长相对缓慢,出现局部出血坏死等现象,至治疗2周,出现死亡,至治疗结束时,每组仍有3只小鼠存活,而Pt组小鼠肿瘤生长慢,小鼠生长较为活跃,至治疗21 d,开始出现死亡,pcDNA和PBS组与mBD2组和rmBD2组及Pt组与mBD2组和rmBD2组生存时间比较,结果有统计学意义(P<0.05),mBD2组和rmBD2生存时间比较,也具有统计学意义(P<0.05).结论:mBD2能够抑制移植瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存时间.在抑瘤效果上,mBD2优于外加信号肽重组mBD2作用.
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SLE患者GATA-3、MBD2对IL- 4表达水平的调控作用
目的 分析SLE患者GATA-3、MBD2与IL- 4表达的相关性,探讨GATA-3和MBD2对IL-v4表达的调控作用.方法 应用实时定量 PCR法检测35例SLE患者和20例正常人外周血单核细胞(PBMC)中IL- 4、GATA-3、MBD2的mRNA表达水平,并分析它们之间的相关性.结果 SLE患者外周血单核细胞中IL- 4、GATA-3和MBD2的表达水平均明显高于正常对照组(t=3.37,3.55,9.68,P均<0.05);IL- 4与GATA-3、IL- 4与MBD2的表达水平均呈正相关(r＝0.39,0.97,P均<0.05).结论 SLE患者中IL- 4表达水平升高可能是由于MBD2对IL- 4基因阻遏作用降低,及大量GATA- 3对IL- 4基因的过度激活共同作用所导致.
