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新型核苷衍生物十八烷氧乙基替诺福韦酯的体内外抗乙型肝炎病毒作用研究
目的 评价新型核苷衍生物十八烷氧乙基替诺福韦酯(ODE-TFV)在体外及体内的抗乙型肝炎病毒的活性并研究其改善肝脏病理的作用.方法 分别以乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌2.2.15细胞和DHBV感染的1日龄北京鸭为体外和体内模型,评价ODE-TFV抑制乙型肝炎病毒复制的活性.结果 2.2.15细胞培养法实验结果显示,ODE-TFV抑制HBV DNA复制的IC50值为(0.38±0.18)μmol/L,抑制活性较阳性药TFV-DF和3TC分别强约18倍和13倍；ODE-TFV 100 mg/kg和200 mg/kg组,在给药7d和停药3d显示有显著性的DHBV-DNA抑制活性(P＜ 0.01、P＜0.05)；在鸭体内模型中,ODE-TFV 100 mg/kg和200 mg/kg能够明显改善DHBV引起的肝细胞坏死和炎细胞浸润,有一定量效关系.结论 ODE-TFV不仅在2.2.15细胞内对HBV-DNA有抑制活性,而且能有效地抑制鸭体内DHBV-DNA的复制,并具有改善肝脏病理的作用.
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自体树突状细胞联合抗病毒药治疗 HBeAg阳性慢性乙型肝炎临床效果研究
目的探讨体外诱导自体树突状细胞（DC）对 HBeAg阳性慢性乙型肝炎的治疗效果。方法选择 HBeAg阳性的慢性乙型肝炎病例126例，随机分成治疗组（75例）和对照组（51例），治疗组采用自体 DC联合恩替卡韦治疗，对照组仅采用恩替卡韦治疗。抽取患者静脉血50 ml，密度梯度离心法获得单个核细胞，加入含 GM-CSF和 rhIL-4的培养基，隔日换液，培养至第6天加入 HBsAg，4 h后加入 TNF，继续培养1 d收获 DC。取 DC 2 ml，皮下注射和静脉输注各1 ml，连续3个月。两组患者于治疗前和治疗后6个月检测肝功、HBV-DNA 定量及血清乙型肝炎标志物，并将两组各项检测指标进行对比。结果治疗6个月后检测患者 HBeAg/抗-HBe血清转换率，治疗组和对照组分别为30.62%（23/75）和21.4%（11/51），自体 DC联合恩替卡韦治疗 HBeAg阳性的慢性乙型肝炎的效果优于单纯恩替卡韦的治疗。HBV-DNA 滴度检测治疗组为500拷贝/ml，对照组为1400拷贝/ml。两组差异有统计学意义。结论自体 DC联合恩替卡韦治疗 HBeAg阳性的慢性乙型肝炎的效果优于单纯恩替卡韦的治疗。
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西多福韦对人宫颈癌细胞CaSki内人乳头瘤病毒16抑制作用研究
目的从抗病毒角度探讨西多福韦对宫颈癌细胞 CaSki内人乳头瘤病毒16（HPV16）的抑制作用及对细胞周期的影响。方法用 MTT法检测西多福韦对细胞的毒性；用实时定量 PCR法检测其对病毒 E6、E7 mRNA水平的影响；用 Western blot方法检测其对病毒蛋白 E6、E7和细胞抑癌蛋白 p53、pRb表达水平的影响；用流式细胞法检测其对宫颈癌细胞周期的影响。结果西多福韦对宫颈癌细胞毒性较正常细胞大。可使HPV16阳性宫颈癌细胞 CaSki内 E6、E7 mRNA和蛋白水平降低，大抑制率分别为（33.38±8.00）%、（28.32±2.73）%和98.92%、97.46%；可以使 p53、pRb蛋白水平升高，大浓度时可以上调12.06和3.53倍；对 HPV16阴性宫颈癌细胞 C-33A p53蛋白表达无影响，但可提高 pRb蛋白水平；可导致 CaSki和 C-33A细胞发生 S期阻滞，高浓度组细胞相对对照组 S期分别增加22.83%和67.64%。结论西多福韦可以在对细胞无毒的浓度下，抑制宫颈癌细胞内的 HPV16，诱导宫颈癌细胞发生 S期阻滞。
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抗病毒药物治疗慢性乙型肝炎的效果及对预后的影响
目的 分析北京地区抗病毒药物对慢性乙肝患者治疗的现状、疗效及对预后的影响.方法 采用回顾性前瞻研究的方法.结果 干扰素、拉米夫定抗病毒治疗覆盖率约40%.疗程结束时HBV DNA阴转率拉米夫定组高,但停药随访时180/220例出现反跳.干扰素组HBeAg血清转换率(22.9%)高于其他组,有统计学意义.干扰素及拉米夫定治疗者病情进展较慢且肝硬化、肝癌发生率明显低于非抗病毒组(P＜0.001).E系统转换组的并发症和死亡率明显低于非转换组(P＜0.05).结论 北京地区干扰素和拉米夫定抗病毒治疗覆盖率高于其他地区,效果优于其他药物组,但总体疗效仍较低.干扰素等抗病毒治疗能减缓病情进展和减少肝硬化、肝癌的发生率.
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新型重组人IFN-λ2的高效表达、纯化与抗病毒活性研究
目的在大肠埃希菌中高效表达重组人干扰素-λ2(rhIFN-λ2),并对其抗病毒活性进行初步研究.方法根据大肠埃希菌的偏爱密码子人工设计合成人干扰素-λ2(hIFN-λ2)的高表达基因,将其克隆到原核表达载体pBV220,在大肠埃希菌中进行表达,表达产物经变性、复性、阳离子交换层析及分子筛层析纯化,测定其抗病毒活性、种属特异性及抗HBV活性.结果在大肠埃希菌表达的目的蛋白占细胞总蛋白量的15%左右,纯化后的纯度达到90%以上,在WISH细胞上抗VSV活性约为1.5×106 IU/mg.与rhIFN-α2b比较,表达产物在非灵长类细胞上的抗病毒活性较在灵长类细胞上弱,目的蛋白在HepG2.2.15细胞上表现有与rhIFN-α2b相似的抗HBV活性.结论hIFN-λ2可以在大肠埃希菌内实现高效表达,表达产物具有抗病毒活性,有与rhIFN-α2b相似的抗HBV活性,本型IFN有较严格的种属特异性.
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拉米夫定耐药后的抗乙型肝炎病毒治疗
目的探讨拉米夫定耐药后慢性乙型肝炎患者采用α-2b干扰素或α-2b干扰素加α1胸腺肽进行后续抗病毒的疗效.方法共66例拉米夫定耐药患者,分治疗组A、治疗组B和对照组.治疗组A 26例,单用α-2b干扰素治疗1个月后停用拉米夫定,然后继续单用α-2b干扰素治疗5个月;治疗组B 10例,α-2b干扰素和α1胸腺肽联合治疗1个月后停用拉米夫定,然后继续两药联合治疗5个月;对照组30例,直接停用拉米夫定,不用其他任何抗病毒药.定期进行血清肝功和病毒学指标检测.结果治疗组A和治疗组B的HBV DNA阴转率和HBeAg/HBeAb转换率均明显高于对照组.结论慢性乙型肝炎患者拉米夫定耐药后采用α-2b干扰素或α-2b干扰素加α1胸腺肽进行后续抗病毒治疗可能是有益的.
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不同抗病毒治疗方案对慢乙肝患者IL-32表达水平的影响
目的 探讨不同抗病毒治疗的慢乙肝患者外周血中IL-32表达水平及意义.方法 180例慢乙肝患者随机分为两组,一组92例,给予拉米夫定0.1g+阿德福韦酯10 mg口服,1次/d;另一组88例,给予IFN-αt2a皮下注射,180 U/次,1次/周;疗程48周.ELISA检测外周血中IL-32表达水平,统计学方法比较两组患者IL-32表达的差异,并分析IL-32表达水平与ALT、AST、TBIL、HBVDNA的相关性.结果 抗病毒治疗后所有患者外周血中IL-32表达水平逐渐下降,但至48周时两组患者之间的IL-32表达水平差异无统计学意义.外周血中IL-32表达水平与ALT、AST、HBV DNA呈正相关,与TBIL无显著相关性.结论 慢乙肝患者抗病毒治疗后IL-32表达水平逐渐下降,IL-32可能参与慢乙肝的发病.
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丙型肝炎病毒血清型对慢性丙型肝炎干扰素抗病毒疗效影响的研究
目的 研究丙型肝炎病毒血清型对慢性丙型肝炎干扰素抗病毒疗效的影响.方法 对慢性丙型肝炎患者的血清进行ALT检测,采用Cobas amplicor monitor test,version 2.0(v2.0)试剂进行HCV RNA定量和Abbott公司的Murex HCV Serotyping 1-6 Assay试剂进行HCV血清学分型检测.对慢性丙型肝炎患者进行聚乙二醇干扰素α-2a(派罗欣)与罗荛愫(Roferon-A)治疗24周和24周随访结束的生化指标和病毒学应答进行观察,分析不同HCV血清型患者在抗病毒治疗后生化和病毒学应答的差异.结果 98例患者共检出血清6型2例、5型1例、4型1例、3型10例、2型23例和1型44例,仍有17例未能分出血清型.派罗欣治疗组24周治疗结束时各血清型和未分型组之间的ALT复常率和病毒应答率无差异,而48周随访结束血清非1型的ALT复常率(76.2%)和持续病毒应答率(66.7%)高于血清1型,血清1型ALT复常率和持续病毒应答率分别为27.3%和27.3%,差异有统计学意义(P=0.035).罗荛愫组未分型组、血清1型和非1型之间24周治疗结束时和随访结束时的ALT复常率和病毒学应答率均无差异.结论 在6个月的IFN抗病毒疗程时,HCV血清型仅在派罗欣治疗组影响慢性丙型肝炎抗病毒治疗的持续病毒应答率.
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人树突状细胞体外经HBsAg刺激后的抗病毒作用
目的观察人树突状细胞(DCs )经表面抗原(HBsAg)刺激、体外诱导自身特异性T淋巴细胞增殖后,对2.2.15细胞中HBeAg和HBsAg的特异性免疫抑制作用.方法用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM- CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤坏死因子(TNF-a)分化、诱导人外周血PBMC中的DCs,在DCs成熟前加入纯的HBsAg刺激,将成熟后的DCs体外与自身T淋巴细胞共培养,同时不加HBsAg刺激的DCs与T细胞共培养、T细胞加纯的HBsAg 共培养以及单纯T细胞作对照,5 d后收集T细胞,分组加入2.2.15细胞培养液中,分别收集第1天、3天、5天和7天的培养上清液,检测其HBeAg和HBsAg的分泌情况.结果经抗原刺激后的DCs可以有效提呈病毒抗原,正常人与慢性乙肝患者负载抗原后的DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力[cpm分别为(46 700±7 850)和(38 628±5 427)]明显高于未负载抗原的DCs[cpm分别为(40 450±4 645和33 924±4 498)]及对照组PBMC[cpm分别为(5 947±476)和(5 089±233)],P<0.01.负载抗原的DCs有强烈的免疫应答活性,并且其免疫刺激能力似乎与负载的抗原量成正比;经抗原刺激激活的T细胞可以有效地抑制HBeAg的表达,但对HBsAg未发现有明显的抑制作用.结论体外经HBsAg刺激后的DCs可有效地提呈病毒抗原,并可进一步激活T细胞产生,同时能显著地抑制2.2.15细胞上清中HBeAg的表达,可望为DC疫苗的制备打下基础.
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受血和有偿供血HIV感染患者HAART效果的比较
目的 研究受血和有偿供血HIV感染患者的高效抗病毒治疗(HAART)效果.方法 病例来自河北省本籍的受血和有偿供血感染的患者.受血感染病例为1995年前后一次性输血感染发病的189例,其中105例接受HAART作为观察组,84例未接受HAART作为对照组.有偿供血感染病例为1995年有偿供血普查发现感染的患者120例,其中63例接受HAART作为观察组,57例未接受HAART作为对照组.发病日期作为进入队列日期,死于AIDS作为结局事件.进入观察组和对照组的对象定期接受跟踪调查,观察终点2010年12月31日.结果 受血和有偿供血感染患者接受HAART组的病死强度分别为4.42/100人年和6.13/100人年,生存期分别为110个月生存80％和90个月生存72％；而未接受HAART的病死强度分别为182.05/100人年和250.66/100人年,平均生存分别为4个月和3个月.结论 受血和有偿供血感染患者的HAART效果没有区别,治疗后可降低病死强度并延长存活期.
关键词： 供血者 获得性免疫缺陷综合征 抗病毒药 -
慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗前后HBV特异性T细胞反应
目的观察慢性乙型肝炎(CHB)患者拉米夫定抗病毒治疗前后外周血HBV特异性T辅助细胞频率的变化及与血清HBV DNA的关系.方法用重组人HBcAg作为刺激抗原,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测25例CHB轻、中度患者外周血抗病毒治疗前后分泌IFN-γ的HBV特异性T辅助细胞的频率.用即时定量荧光PCR仪定量检测患者血清HBV DNA水平.结果CHB轻、中度患者治疗前外周血HBV特异性T辅助细胞频率均值为(47.30±25.50)SFCs/1×106 PBMC,拉米夫定抗病毒治疗3个月后显著降低(23.10±18.45 SFCs/1×106 PBMC,P＜0.05).动态观察的8例CHB轻、中度患者抗病毒治疗前HBV特异性T辅助细胞频率均高于治疗后;6例患者抗病毒治疗后血清HBV DNA水平显著降低,2例患者血清HBV DNA水平没有下降,血清HBV DNA水平下降的患者(除1例外)治疗前HBV特异性T辅助细胞频率高于血清HBV DNA水平没有下降的患者.结论炎症期CHB轻、中度患者HBV特异性T辅助细胞反应高于炎症缓解期.
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河南省长期接受抗病毒治疗的艾滋病患者耐药横断面分析
目的 阐明河南省长期接受艾滋病抗病毒治疗患者的耐药情况,为这类患者继续有效的治疗提供参考依据.方法 抽取河南省两个艾滋病重点县中2004年左右开始接受一线抗病毒治疗的艾滋病患者,进行CD4+T淋巴细胞、病毒载量和基因型耐药检测.结果 两个县共抽取164例艾滋病患者,这些患者的CD4+T淋巴细胞计数的中位数(四分位数)为398.00(242.00 ～489.50)个/μl,有32.32％的患者体内检测不到病毒.有95例患者的病毒载量大于1000拷贝/ml,其中的77例患者完成了耐药检测.在这77例患者中,有耐药突变(任意一种)发生的患者占到68.83％,其中NNRTIs类突变较高为64.94％,NRTIs类突变为55.84％,无PIs类突变发生.NNRTIs类耐药突变中发生多的是K103N/S(44.16％),其次为G190A/S(19.48％)和Y181C/V(14.29％).NRTIs类耐药突变中发生多的是胸苷类似物突变(thymidine analogue mutations,TAMs),≥1TAM占46.75％,TAM-1/TAM-2占24.68％,M184V/I为24.68％.77例患者中,对NRTIs类药物ddI、3TC、AZT、D4T和TDF产生耐药的患者分别占50.65％、33.77％、48.05％、50.65％和46.75％.对NNRTIs类药物EFV、NVP和DLV产生耐药的患者分别占64.94％、64.94％和62.34％.结论 河南省长期接受抗病毒治疗的艾滋病患者的耐药情况严峻,需要对这部分患者重点关注并及时调整治疗方案.
关键词： 获得性免疫缺陷综合征 药物耐受 病毒 抗病毒药 横断面研究 -
蚯蚓体腔液体外抗呼吸道合胞病毒的实验研究
目的 研究蚯蚓体腔液(Earthworm coelomic fluid,ECF)体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法 以Hep-2细胞为宿主细胞,利巴韦林作为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应(CPE)和MTT染色法来研究蚯蚓体腔液体外抗RSV的作用.结果 ECF和利巴韦林对Hep-2细胞的CC50分别为3.11 mg/ml和1.35 mg/ml.在直接杀灭作用实验中,IC50为184.1 μs/ml,SI值为16.87;在抑制病毒复制实验中,IC50为1555.8 μg/ml,SI值为1.99;在阻断病毒侵入实验中,没有观察到抗病毒的作用.结论 蚯蚓体腔液具有直接杀灭和抑制RSV复制的作用,其中直接杀灭作用的抗病毒效果较明显,但不具有阻断RSV入侵的作用.
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硫代反义寡核苷酸在鸭体内外对鸭乙型肝炎病毒DNA复制的影响
目的研究在转录起始区域设计硫代反义寡核苷酸抑制鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV DNA)复制的可行性.方法设计合成分别基于DHBV PreS1、PreS2、S抗原启动基因的硫代反义寡核苷酸,应用Southern blot实验和cpm计数测定其对原代鸭肝细胞中及雏鸭中感染DHBV的DHBV DNA的作用.结果在1.5 μmol/L浓度下,体外抑制率分别是61.5%,69.3%和62.4%.选取PreS1抗原基因起始区段的硫代反义寡核苷酸进行整体动物实验.每只动物每天按10 μg/g体重静脉注射一次,共给药6 d.对动物肝脏进行取样分析表明,在此剂量下,对DHBV DNA的抑制率可达87.9%.结论本实验所设计的针对转录起始区的硫代反义寡核苷酸在体内外对DHBV DNA复制均有明显抑制作用,说明了在这一区域设计硫代反义寡核苷酸的可行性.
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抗病毒治疗对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者短期生存率的影响
目的 探讨抗病毒治疗对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者短期转归的影响.方法 348例乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者,分为常规治疗组及抗病毒治疗组,抗病毒组在常规内科治疗基础上加用抗病毒药物治疗(拉米夫定、恩替卡韦、替比夫定),比较两组患者临床特征、生存率及抗病毒治疗短期疗效差异.其中低病毒载量组173例(HBV DNA<105拷贝/ml)、高病毒载量组175例(HBV DNA≥105拷贝/ml).结果 多因素Cox回归分析表明抗病毒治疗是影响预后的有利因素.观察24周,抗病毒治疗的乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者生存率高于常规治疗者(X~2=32.865,P=0.000).在治疗4周存活患者中,抗病毒治疗组的血清总胆红素水平(Tbil)及HBV DNA降幅就高于常规治疗组,比较差异有统计学意义(P<0.05).治疗24周,低病毒载量及高病毒载量患者抗病毒治疗组的生存率均高于常规治疗组,比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 抗病毒治疗可提高乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者的生存率,低病毒载量患者也需抗病毒治疗.
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难治性慢性丙型肝炎强化治疗疗效研究
目的 探讨难治性慢性丙型肝炎强化治疗疗效,通过优化治疗剂量和疗程来提高慢性丙型肝炎患者对干扰素联合利巴韦林治疗的持续病毒应答率.方法 对常规治疗的干扰素剂量(聚乙二醇干扰素α每周皮下注射1次)和利巴韦林(每天10.5 mg/kg)经治的无应答和部分患者,根据患者的意愿进行标准干扰素α10 MU隔日注射1次或聚乙二醇干扰素α-2a(PEG-IFN α-2a)360 μg每周注射1次,并根据体重每天给予15 mg/kg的利巴韦林的强化剂量治疗,在治疗的0、4、12周和以后的每间隔12周、治疗结束后的24周进行HCV RNA含量检测,根据患者治疗过程中的病毒应答情况给予72 ～96周的疗程,以持续病毒应答(sustained viral response,SVR)作为疗效的评判指标.结果 18例患者完成全程治疗和观察,12例获得持续病毒学应答,5例治疗无效,1例复发.3例患者获得RVR,RVR获得者的cEVR和SVR均为3/3,RVR组治疗前的病毒载量显著低于未获得RVR组(t=4.687,P＜0.001).15例无快速病毒应答者,8例获得完全早期病毒应答,9例获得SVR.聚乙二醇干扰素α-2a 360 μg每周注射1次的SVR为4/5.11例获得cEVR患者均获得SVR,7例无cEVR的患者,仅1例获得SVR.结论 强化剂量的干扰素和RBV可以使较高比例的既往规范抗病毒治疗无应答、部分应答获得SVR.在强化治疗过程中根据病毒的应答情况及时调整和延长HCV RNA阴性的疗程是提高难治性慢性丙型肝炎持续病毒应答率的重要措施.
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乙型肝炎病毒大蛋白检测在拉米夫定抗病毒治疗中的应用研究
目的 通过检测拉米夫定治疗患者血清中的乙型肝炎病毒大蛋白(HBV-LP),同时检测乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)载量,探讨拉米夫定治疗过程中HBV-LP与HBV-DNA的关系,观察乙型肝炎病毒大蛋白用于评估拉米夫定抗病毒治疗的应用效果.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法对HBV-LP进行检测;采用荧光定量PCR方法对HBV-DNA进行检测.结果抗病毒治疗有效的患者HBV-DNA和HBV-LP下降趋势一致,HBV-LP出现阴转的时间要晚3个月于HBV-DNA阴转;抗病毒治疗无效的患者HBV-DNA和HBV-LP都是始终没有出现阴转;抗病毒治疗效果反复组中患者HBV-LP始终没有出现阴转,HBV-DNA则暂时阴转.结论拉米夫定抗病毒治疗过程中动态检测乙型肝炎病毒大蛋白可用于评估抗病毒治疗效果.
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慢性乙型肝炎外周血HBV-LHBs反式激活功能与抗病毒疗效关系的研究
目的 探究慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋白分子(HBV-LHBs)反式激活功能与慢性乙型肝炎抗病毒治疗疗效关系.方法 对60例抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者采取每3个月进行HBV DNA、HBV-LHBs以及乙肝免疫标志物检测观察各指标间的变化.结果 入组时60例抗病毒组HBV DNA与HBV-LHBs检出率有较高的一致性检出结果,无统计学意义(P＞0.05),HBV-LHBs阳性率与HBeAg阳性率存在差异(X2=4.08,P＜0.05).经过24个月抗病毒治疗HBV-LHBs始终表达者29例,其中HBV DNA在24个月里出现转阴后反弹的20例、HBV DNA持续阳性未转阴者7例.60例患者24个月里未发现HBsAg血清转换,4例出现HBeAg血清转换.结论 (1)血清HBV-LHBs检测能够反映出乙肝病毒的复制情况与HBVDNA具有较好的相关性.(2)抗病毒治疗过程中动态观察HBV-LHBs的表达能够预测抗病毒治疗的有效性.
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替比夫定治疗慢性乙型肝炎早期病毒学应答对104周疗效的预测价值
目的 评价替比夫定抗病毒治疗的疗效并分析早期应答对104周疗效预测价值.方法 75例慢性乙型肝炎患者接受替比夫定抗病毒治疗104周,分别于基线、12、24、52和104周检测患者ALT、HBV血清标志物、HBV DNA定量、CK及乳酸.结果 67例CHB患者坚持随访至少104周.治疗104周时ALT复常率为82.1％,HBV DNA不可测率67.2％,HBeAg血清转换率34.8％.104周时的病毒学突破率为13.4％ (9/67),耐药率为6.0％(4/67).104周时完全病毒学应答率与第12及24周时HBV DNA载量有显著相关性,且12周时的风险比高于24周.结论 替比夫定抗病毒安全有效;治疗12周时HBV DNA载量对104周疗效的预测价值优于24周HBV DNA载量.
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拉米夫定、干扰素α-2b、黄芪注射液三联叠加治疗慢性乙型肝炎的初步评价
用抗病毒药拉米夫定、干扰素α-2b和免疫调节剂黄芪注射液叠加,治疗慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,从临床综合疗效、肝功能、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制指标三方面进行分析,并与单用拉米夫定、干扰素α-2b、黄芪注射液及基础保肝治疗比较,初步评价联合用药方案的疗效.
