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细胞凋亡与子宫肌瘤发生和发展的相关性研究
子宫肌瘤是妇科常见的良性肿瘤,在育龄期妇女中的发病率呈逐年上升趋势,但对其发病机制尚不清楚.本文从肿瘤细胞凋亡受抑制这个角度,详尽阐述了Bcl-2/Bax 、Fas/Fas-L 、P53基因的表达与子宫肌瘤细胞凋亡异常的关系和机理,并阐述了中医药的治疗机理,旨在应用药物来诱导肿瘤细胞凋亡,开拓多种非手术方法治疗子宫肌瘤的手段.
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二鳖汤对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡相关因子Fas/Fas-L的影响
目的:观察二鳖汤对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡相关因子Fas/Fas-L的影响,探讨其抗纤维化的作用机制.方法:以腹腔注射猪血清建立大鼠免疫性肝纤维化模型,将48只大鼠随机分成正常组、模型组、干预治疗组[二鳖汤高、中、低剂量组及复方鳖甲软肝片组(阳性对照组)].适应性喂养1周后,除正常组外,其余各组腹腔注射猪血清,每只每次注射0.5ml,每周2次.从造模第1周开始,除正常组、模型组不给药,其他各组每天灌胃1次.干预治疗9周后,免疫组织化学法观察转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、Fas/Fas-L的表达.结果:模型组TGF-β_1及凋亡相关因子Fas/Fas-L较正常组表达明显升高(P<0.05),各干预治疗组TGF-β_1、Fas/Fas-L的表达较模型组均有不同程度下调(P<0.05).结论:二鳖汤抗大鼠肝纤维化的机制可能是通过调节促细胞凋亡因子TGF-β_1的水平,进而下调Fas/Fas-L的表达,抑制肝细胞的过度凋亡.
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人脑胶质瘤干细胞Fas/Fas-L mRNA表达的研究
目的:检测脑胶质瘤干细胞中Fas/Fas-L的mRNA表达水平,探讨其在脑胶质瘤凋亡以及免疫治疗中的意义.方法:从8例临床标本中培养出脑胶质瘤干细胞,并通过生物学特性和免疫细胞化学方法予以鉴定.然后提取脑胶质瘤干细胞以及相对应的原代脑胶质瘤细胞中的RNA,进行Real Time RT-PCR检测,测定Fas/Fas-L的mR-NA表达水平,并予统计学分析.结果:成功从8例临床标本中培养出脑胶质瘤干细胞并通过鉴定.定量检测mRNA表达显示,在脑胶质瘤干细胞中,Fas和Fas-L的mRNA表达均显著低于相应的原代培养的脑胶质瘤细胞,配对t检验显示,差异有统计学意义,P值均＜0.001.结论:脑胶质瘤干细胞中Fas/Fas-L的mRNA表达水平低,可能会使以Fas为靶点的免疫治疗失败,从而导致肿瘤的复发.对Fas/Fas-L系统在脑胶质瘤治疗中的前景提出了疑问,但仍需进一步研究以明确判断.
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Fas/Fas-L在乳腺癌与转移淋巴结中的表达及其相互关系
目的 探讨Fas/Fas-L在乳腺癌中的表达及其与淋巴结转移的关系.方法 采用S-P免疫组化方法对100例乳腺癌组织进行Fas/Fas-L的检测.结果 共检测100例乳腺癌,在50例有转移的的乳腺癌中,25例Fas抗体呈阳性反应(50.0%),其中强阳性4例;40例Fas-L抗体呈阳性反应(80.0%),其中强阳性7例.50例中有浸润性导管癌46例,23例Fas抗体呈阳性反应(50.0%),其中强阳性4例;37例Fas-L抗体呈阳性反应(80.4%),其中强阳性6例;有浸润性小叶癌4例,2例Fas抗体呈阳性反应(50.0%),无强阳性,3例Fas-L抗体呈阳性反应(75.0%),其中强阳性1例.在50例无转移的乳腺癌中,22例Fas抗体呈阳性反应(44.0%),其中强阳性2例;22例Fas-L抗体呈阳性反应(44.0%),其中强阳性4例.无转移病例中浸润性导管癌45例,20例Fas抗体呈阳性反应(44.4%),其中强阳性3例,20例Fas-L抗体呈阳性反应(44.4%),其中强阳性4例;有浸润性小叶癌5例,Fas抗体2例呈阳性反应(40.0%),无强阳性,Fas-L抗体2例呈阳性反应(40.0%),无强阳性.乳腺癌的Fas表达与有无淋巴结转移无显著相关(P＞0.05),与乳腺癌组织学分类无关(P＞0.05);乳腺癌的Fas-L表达与有无淋巴结转移有显著相关性(P＜0.05),亦与乳腺癌组织学分类无关(P＞0.05).结论 乳腺癌中Fas-L的表达可能与肿瘤逃避免疫监视有关.
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苯并(a)芘对小鼠肝细胞凋亡的影响
目的 探讨苯并(a)芘(BaP)对小鼠肝细胞Fas/Fas-L凋亡信号通路的影响.方法 ICR小鼠灌胃染毒,染毒剂量分别为0,5,10,20,40mg/kg,采用免疫组织化学法检测肝细胞Fas、Fas-L、caspase-3基因表达情况,应用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染法检测肝细胞凋亡情况.结果 BaP各剂量染毒组肝细胞凋亡发生率及Fas、Fas-L、caspase-3基因表达阳性率与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 BaP可诱发小鼠肝细胞发生凋亡,Fas/Fas-L信号通路改变是引起肝细胞凋亡发生的重要途径之一.
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益气化瘀法对体外培养子宫肌瘤细胞增殖凋亡相关蛋白表达影响的研究
目的:研究具有益气化瘀功效的中药复方化瘤方对体外培养子宫肌瘤细胞增殖相关蛋白(PCNA)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Fas/Fas-L)表达的影响.方法:制备化瘤方、宫瘤宁、米非司酮药物血清,采用免疫细胞化学方法检测药物作用后增殖细胞核抗原(PCNA),凋亡相关基因(Bcl-2)蛋白、Fas及其配体Fas-L变化.结果:3种药物血清均能明显下调PCNA、Bcl-2、Fas及其配体Fas-L蛋白在肌瘤细胞中的表达(P＜0.001).结论:中药复方化瘤方通过降低PCNA蛋白表达,直接抑制子宫肌瘤细胞增殖;调节Bcl-2、Fas-L蛋白表达诱导子宫肌瘤细胞凋亡.
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葛根素对人胰腺癌PANC-1细胞增殖凋亡的影响
目的 探讨葛根素对人胰腺癌细胞株PANC-1的作用及其机制.方法 取对数生长期的PANC-1细胞,分别用不同浓度的葛根素(0、50、100、200 μmol/L)干预48 h后,利用CCK-8检测PANC-1细胞增殖水平;Annexinv-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Fas、Fas-L、Bax、Bcl-2、Caspase-7表达水平.结果 葛根素对胰腺癌PANC-1细胞增殖的抑制呈浓度依赖性;不同浓度的葛根素干预PANC-1细胞48 h后,细胞凋亡率分别为2.47％±0.64％、6.37％±0.71％、8.33％±0.90％、12.40％±1.01％,实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(P ＜0.01);Western blot实验表明,葛根素对胰腺癌PANC-1细胞干预48 h后,随着葛根素浓度的增加,细胞中Fas、Fas-L、Caspase-7、Bax蛋白的表达量上调,Bcl-2的表达量下调,实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 葛根素可通过激活Fas/Fas-L信号通路诱导PANC-1细胞增殖抑制和凋亡.
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1类多巴胺受体活性变化对细胞凋亡Fas/Fas-L通路的影响
目的 以细胞凋亡的死亡受体(Fas/Fas-L)途径为切入点,探讨1类多巴胺受体(dopamine receptor-1,DR1)活性变化对缺血-再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡的影响及可能机制.方法 乳鼠心肌细胞以模拟缺血溶液培养2 h后再正常培养24 h的方法建立心肌细胞缺血-再灌注损伤模型.心肌细胞随机分为4组:正常对照组,缺血-再灌注组(I/R 组),10 μmol/L SKF-38393(DR1激动剂)组(SKF 干预组),10 μmol/L SCH-23390 (DR1抑制剂)组(SCH 干预组).RT-PCR和Western blot分别检测Fas、Fas-L、Caspase-8、Caspase-3 mRNA和蛋白质的表达;TUNEL染色和流式细胞仪技术观察心肌细胞的凋亡情况;紫外分光光度计检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;透射电镜观察心肌细胞形态变化.结果 与正常对照组比较,I/R组中Fas、Fas-L、caspase-8、caspase-3表达均上调,LDH 活性和MDA含量增加,而SOD活性降低,心肌细胞损伤加重;与I/R组比较,10 μmol/L SKF-38393使上述指标进一步增加,而10 μmol/L SCH-23390对上述指标影响不显著.结论 DR1激活能够促进缺血-再灌注损伤诱导的细胞凋亡,其机制与上调Fas/Fas-L死亡途径有关.
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辛伐他汀对单肾切除糖尿病老龄鼠肾组织Fas/Fas-L基因表达的影响
目的:探讨辛伐他汀对单肾切除糖尿病老龄SD大鼠肾脏凋亡相关基因Fas/Fas-L表达的影响.方法:单肾切除老龄SD大鼠分为肾切除对照组(C组)、糖尿病模型组(D组)、糖尿病辛伐他汀治疗组(S组).12周后采用原位末端标记法检测各组肾组织细胞凋亡指数,使用实时荧光定量PCR和免疫荧光法,从转录和翻译水平观察各组大鼠肾皮质中凋亡相关基因Fas及Fas-L的变化规律.结果:D组相对C组细胞凋亡指数、Fas及Fas-L的蛋白表达水平和相对应的mRNA拷贝数均明显增高,S组相对D组减弱(P<0.05),Fas、Fas-L蛋白主要在肾小管表达.结论:Fas及Fas-L系统与DN发生发展相关,辛伐他汀可在分子水平调控Fas及Fas-L基因的转录和翻译,抑制细胞凋亡,发挥肾脏保护作用.
关键词： 糖尿病肾病 Fas/Fas-L 实时荧光定量聚合酶链反应 辛伐他汀 -
南瓜多糖对糖尿病大鼠胰岛Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax表达的影响
目的 观察南瓜多糖(PP)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠胰腺组织中Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax表达的影响.方法 建立链脲佐菌素性糖尿病模型,PP(150、300、600mg·kg-1)灌胃进行治疗.3 wk后检测大鼠空腹血糖值;采用免疫组化的方法探讨PP对链脲佐菌素性糖尿病大鼠Fas和Fas-L蛋白表达的影响;采用RT-PCR的方法观察PP对实验性糖尿病大鼠胰岛凋亡调控基因Bax和Bcl-2表达的影响.结果 PP(300、600 mg·kg-1)能明显降低STZ诱导的糖尿病大鼠的空腹血糖值;PP(150、300、600 mg·kg-1)治疗后大鼠胰腺组织中Fas/Fas-L蛋白的表达率明显低于STZ模型组;PP(150、300、600 mg·kg-1)给药3 wk后,大鼠Bcl-2基因的表达明显增加,PP(300、600 mg·kg-1)治疗后大鼠Bax基因的表达明显下降,Bcl-2与Bax的比值明显增加.结论 PP对实验性糖尿病大鼠有降血糖作用,其作用与降低大鼠胰腺组织中Fas、Fas-L蛋白的表达、调节Bcl-2与Bax基因的表达有关.
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LIGHT/INF-γ基因配比转染HepG2细胞对其凋亡及Fas/FasL系统表达的影响
目的:观察脂质体介导的LIGHT和IFN-γ配比转染HepG2细胞后对其凋亡及Fas和FasL表达的影响.方法:将HepG2细胞分为LIGHT单独转染组、LIGHT和IFN-γ联合转染组和空白对照组,以脂质体为中介转染HepG2细胞;分别于转染后12、24和48 h收集HepG2细胞,流式细胞术检测转染后HepG2细胞的凋亡率及Fas和FasL的表达.结果:LIGHT基因转染HepG2细胞能明显促进其凋亡,随时间延长凋亡率增加;Fas和FasL在HepG2细胞高表达,以Fas升高程度显著.结论:LIGHT和IFN-γ联合转染HepG2,其凋亡效果优于LIGHT单独转染,主要是通过上调Fas的表达来促进HepG2细胞凋亡.
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Fas凋亡相关基因在双酚A诱导成年雄性大鼠生殖毒性中的作用
目的 探讨Fas凋亡途径相关基因在双酚A(BPA)诱导成年雄性大鼠生殖毒性中的作用.方法 40只成年Wistar雄性大鼠随机等分为4组:溶媒对照组(玉米油)和低、中、高剂量BPA喂养组(10、50、250μg/kg·bw/d).大鼠在喂养35周后处死,称量睾丸、附睾、肝、肾及心脏重量并计算脏器系数;观察精子形态及计算精子畸形率.采用荧光实时定量PCR(RT-PCR)测定睾丸组织中自杀相关因子(Fas/Fas-L)、天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3) mRNA含量.结果 高剂量BPA喂养大鼠精子畸形率以及睾丸组织中Fas-L mRNA及Caspase-3 mRNA含量高于对照组,差异均有显著性(P＜0.05).结论 在BPA的人体每日容许摄入量水平下(TDI=50μg/kg·bw/d),未观察到生殖细胞损伤的效应;但长期经膳食暴露高剂量BPA(250μg/kg·bw/d)可致成年雄性大鼠生殖细胞损伤,其机制可能与BPA上调Fas-L mRNA和Caspase-3的表达有关.
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脑挫伤早期细胞凋亡相关基因表达的实验性研究
目的探讨脑挫伤早期细胞凋亡相关基因Bcl-2、Fas/Fas-L的表达变化规律及神经细胞凋亡的调控机制.方法用光镜观察脑挫伤后脑组织的形态学变化,同时应用免疫组织化学SABC法结合图像分析检测脑挫伤早期不同时程Bcl-2、Fas/Fas-L的表达变化规律.结果伤后8h在脑挫伤周围可见典型的凋亡神经细胞;伤后30min损伤灶周围神经细胞出现Bcl-2、Fas/Fas-L阳性表达,以后呈逐渐上升趋势且表达范围亦逐渐扩大,其中Bcl-2蛋白表达在伤后4h达高峰,随后呈下降的趋势,至伤后10-12h其表达程度与伤后1h相比无明显差异.结论神经细胞凋亡参与脑挫伤后病理形态学改变,神经细胞凋亡的形成可能与促凋亡调控基因和抑凋亡调控基因的表达不平衡有关.
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瓜蒌薤白汤对心肌细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响
目的:观察瓜蒌薤白汤对异丙肾上腺素(ISO)所致乳鼠心肌细胞凋亡及凋亡调控基因Fas/Fas-L表达的影响.方法:在培养的新生大鼠心肌细胞上建立ISO损伤模型,观察不同浓度瓜蒌薤白汤正丁醇部位(100、20μg/mL)对细胞凋亡及凋亡调控基因Fas/Fas-L水平的影响.结果:与正常对照组比较,模型组心肌细胞凋亡率增加,凋亡调控基因Fas/Fas-L的阳性表达指数(positive expression index,PEI％)显著增加,瓜蒌薤白汤的正丁醇萃取部位能显著降低ISO所致心肌细胞的凋亡率(P＜0.01),并显著降低PEI％(P＜0.05或P＜0.01).结论:瓜蒌薤白汤的正丁醇部位对ISO所致乳鼠心肌细胞损伤有一定的保护作用,可对抗ISO诱导的心肌细胞凋亡；且发挥这种作用的通道之一是下调Fas/Fas-L的表达.
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缬沙坦对FAS/FAS-L在甲状腺素诱导的心脏病大鼠心肌组织表达的干预作用
目的 研究缬沙坦对FAS、FAS-L在甲状腺功能亢进(甲亢)性心脏病大鼠心肌组织表达的影响.方法 Sprage-Dawley (SD)大鼠40只,按随机数字表法分为对照组、L-甲状腺素组、缬沙坦小剂量组(L-甲状腺素+ 10 mg/kg缬沙坦)、缬沙坦大剂量组(L-甲状腺素+30 mg/kg缬沙坦).L-甲状腺素组和缬沙坦干预组予L-甲状腺素0.5 mg/(kg·d)腹腔注射28 d建立甲亢模型,缬沙坦小剂量组在建模同时予缬沙坦10 mg/(kg·d)灌胃治疗,缬沙坦大剂量组每天灌服缬沙坦30 mg/(kg·d).造模前后分别采取大鼠静脉血,用化学发光法检测血清TT3、TT4浓度;第28天解剖动物,测定各组大鼠心脏质量指数；收集左心室心肌组织分别行苏木素伊红染色和Masson染色观察左心室心肌组织形态结构、测定左心室细胞直径和胶原容积分数及免疫组化观察FAS、FAS-L的表达情况.结果 与对照组相比,L-甲状腺素组大鼠心脏质量指数、心肌细胞直径、胶原容积分数增大,FAS、FAS-L蛋白表达明显增强,差异有统计学意义(P＜0.05)；而缬沙坦干预组上述心室重构指标明显改善,FAS、FAS-L蛋白表达下降,差异有统计学意义(P＜0.05)；而缬沙坦大、小剂量组之间上述指标比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 缬沙坦可通过调节FAS/FAS-L的表达,抑制心肌重构,具有保护心脏功能的作用.
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人参皂甙Rb1对阿霉素致心力衰竭大鼠心脏凋亡相关蛋白和mRNA表达的影响
目的 探讨人参皂甙Rb1(Gs-Rb1)是否改善慢性心力衰竭(CHF)大鼠的心功能以及是否通过改善心脏凋亡相关蛋白和mRNA介导其效应.方法 在构建阿霉素CHF大鼠模型成功后,将其随机分为Gs-Rb1组[70 mg/(kg·d),n=17]和CHF组 (n=15),另外选取同龄健康大鼠作为对照组(n=10).第4周评估心脏功能和采用Western blot、RT-PCR等方法检测Bax、Bcl-2、Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白和mRNA的表达.结果 (1)与CHF组相比,Gs-Rb1组左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS)显著改善(P值分别为0.015,0.022);(2)对照组不表达Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L、Caspase-3蛋白,但微量表达相应mRNA;与CHF组相比,Gs-Rb1组Bcl-2蛋白和mRNA表达显著增加,而Bax、Fas、Fas L、Caspase-3蛋白和mRNA表达均显著下降(P<0.05);(3)LVEF与Bcl-2/Bax蛋白(r=0.451,P=0.017)及mRNA(r=0.411,P=0.021)呈显著正相关,而与Fas(r=-0.324,P=0.027;r=-0.507,P=0.022)、Fas-L(r=-0.417,P=0.031;r=-0.309,P=0.022)、Caspase-3(r=-0.351,P=0.029;r=-0.508,P=0.031)蛋白及mRNA均呈显著负相关.结论 在GS-Rb1改善CHF大鼠心功能的效应中,GS-Rb1既可通过调高Bcl-2蛋白和mRNA,又可通过降低Bax、Fas-L、Fas、Caspase-3蛋白和mRNA等介导其保护作用.
