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叶酸受体在鼻咽癌组织及细胞中的表达与意义
目的 研究人鼻咽癌组织和细胞株中叶酸受体表达情况,探讨其与肿瘤临床和病理特征的关系,为进一步研发叶酸受体靶向抗鼻咽癌药物载体奠定基础.方法 分别以免疫组织化学法和免疫细胞荧光法观察20例鼻咽癌组织和体外培养的HNE1、HNE2,CNE1,CNE2,SUNE1,5-8F等6株鼻咽癌细胞株表达叶酸受体的情况,分析鼻咽癌组织叶酸受体表达与临床病理特征的关系.结果 鼻咽癌组织叶酸受体阳性表达率为85%(17/20),正常鼻咽黏膜组织中无叶酸受体表达(0/8).鼻咽癌叶酸受体表达与患者性别、年龄等因素无相关性,在非角化鳞癌和鼻咽未分化癌两种病理类型中无明显差异,但临床分期Ⅲ～Ⅳ期的病例阳性表达高于Ⅱ期以下的病例.HNE1细胞株叶酸受体表达阳性,其余5株细胞为阴性.结论 鼻咽癌组织广泛高表达叶酸受体,这为开发针对鼻咽癌的叶酸受体靶向药物奠定了基础.
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量子点在叶酸偶联白蛋白纳米粒靶向肿瘤细胞研究中的应用
目的 制备荧光量子点标记的叶酸偶联白蛋白纳米粒,并研究该纳米粒对人结肠癌HT-29细胞的靶向性.方法 先通过缩合荆将量子点与白蛋白纳米粒相结合,再利用叶酸活性酯在碱性条件下与白蛋白表面上的氨基反应,制得叶酸修饰的白蛋白/量子点纳米粒,通过量子点荧光标记的方法对结肠癌HT-29肿瘤细胞摄取Folate-HAS/QDs纳米粒进行相关研究.结果 成功制备了具有良好粒径分布和荧光性能的Fo-late-HAS/QDs纳米粒,并证实该纳米粒对HT-29细胞有较强的靶向性.结论 通过量子点作为荧光标记物,简单直观的证实了叶酸修饰的白蛋白/量子点纳米粒能通过细胞膜上的叶酸受体介导内吞入细胞,可显著靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞.
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叶酸受体α表达量与大肠癌分化程度的相关性
目的 探讨叶酸受体d(folate receptor Alpha,FRα)在大肠癌组织中的表达及其与肿瘤分化程度的相关性.方法 收集35例大肠癌患者的癌组织、癌旁及外周正常组织标本,采用免疫组织化学法及流式细胞仪技术检测大肠癌组织FRα表达情况,分析大肠癌组织FRα表达与临床病理特征的关系.结果 35例患者免疫组化检测正常粘膜组织FRα表达阳性率为8.57%(3/35),癌组织FRα表达阳性率为68.57%(24/35),癌旁组织FRα表达阳性率为14.29%(5/35).流式细胞技术检测癌组织中FRα表达为(53.78±10.37)%,癌旁组织为(19.68±6.22)%,正常粘膜组织为(11.68±5.6)%,癌组织与癌旁组织FRα表达情况比较差异有统计学意义(P＜0.05).同时FRα表达与大肠癌的分化程度呈负相关关系(P＜0.05),分化程度越低,FRα表达率越高.结论 大肠癌组织中FRα高表达,为FRα成为预测大肠癌发生发展的新的肿瘤分子标志物,大肠癌新的靶向基因治疗手段提供了理论基础.
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叶酸受体介导的宫颈特殊染色法筛查宫颈病变临床研究
目的:评价在宫颈病变筛查中予以叶酸受体介导的宫颈特殊染色法(FRD)的临床应用价值.方法:选取清远市人民医院住院和门诊接收的宫颈病变筛查患者5000例,样本选取时间为2014年6月至2017年3月,主要针对来院要求妇检、轻度阴道炎、宫颈炎及入院择期手术的患者,少部分患者存在接触性出血、反复白带增多等临床症状,随机分成两组,其中,研究组120例,对照组117例.予以叶酸受体介导的FRD检查呈阳性结果的患者设置为研究组,予以液基薄层细胞检测(TCT)检查呈阳性结果的患者设置为对照组,两组阳性结果均行病理学检查,临床诊断标准以病理学检查结果为准,比较两组患者的临床诊断结果.结果:研究组患者检出阳性122例,其中正常/炎症:16例,宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ:21例,CIN Ⅱ:28例,CIN Ⅲ:46例,宫颈癌:11例;对照组检出阳性117例,其中正常/炎症:19例,CIN Ⅰ:23例,CIN Ⅱ:24例,CIN Ⅲ:42例,宫颈癌:9例,两组阳性检出率比较,差异无统计学意义(P＞0.05);同时两组患者的特异度、灵敏度、阳性预测值、阴性预测值比较,差异均无统计学意义(P＞ 0.05).结论:在宫颈病变筛查中予以叶酸受体介导的FRD与TCT检查法具有基本一致的诊断效果.
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叶酸受体在血液肿瘤细胞株的表达及叶酸-聚乙烯亚胺共聚物的制备
目的:研究叶酸受体(folate receptor,FR)在血液肿瘤细胞表达的特点,合成叶酸-聚乙烯亚胺(FA-PEI)聚合物,探讨其作为靶向性基因输送载体的可行性.方法:用实时荧光定量PCR(real time PCR)法检测α、β、γ3种FR在血液肿瘤细胞K562、K562/A02、U266细胞株上的表达;利用叶酸(FA)活性酯在微碱性条件下与聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)的支链氨基反应,合成FA-PEI共聚物;用葡聚糖凝胶柱G-25分离、纯化;用紫外分光光度计波长扫描法及氢核磁共振谱(~1H NMR)法验证交联是否成功.结果:α、β、γ3种FR在K562、K562/A02、U266 3种细胞株上均表达,其中,α-FR的表达占优势,较β-FR和γ-FR表达量高;紫外分光光度计扫描图谱在365 nm处出现叶酸的特征性吸收峰;核磁共振(~1H NMR)示:在2.5～3.2处出现PEI亚甲基质子的特征性化学位移,在6.5～9.0处出现叶酸芳香质子的特征性氢信号.结论:FR在K562、K562/A02、U266 3种细胞株上均有较高表达;FA-PEI偶联成功,为其作为血液肿瘤治疗中1种潜在的靶向性基因输送载体提供了依据.
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PI3K/Akt信号通路抑制剂对食管癌细胞EC109中FR和hnRNP-E1表达的影响
目的 研究PI3K/Akt信号通路靶向抑制剂LY294002对人食管癌细胞EC109中叶酸受体(FR)和核内不均一核糖核蛋白E1(hnRNP-E1)表达的影响.方法 不同浓度LY294002作用于人食管癌细胞株EC109不同时间段后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,免疫印迹法(Westorn blot)检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(P-Akt)、FR和hnRNP-E1的表达情况.结果 MTT法检测结果显示,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关趋势,P-Akt和FR蛋白表达明显下降,hnRNP-E1蛋白表达无显著变化.结论 阻断PI3K/Akt信号通路可以改变人食管癌细胞EC109中FR的表达,并明显抑制细胞增殖,其机制可能与抑制Akt磷酸化有关.
关键词： PI3K/Akt信号通路 LY294002 EC109细胞 叶酸受体 -
叶酸受体介导宫颈特殊染色法在宫颈病变筛查中的应用价值
目的 探讨叶酸受体介导宫颈特殊染色法在宫颈病变筛查中的应用价值.方法 选择2016年1月至12月1000例在本院妇科门诊就诊的患者,所有患者在妇科检查后均进行TCT检测、FRD检测,并对阳性患者进行阴道镜下活检,然后观察两种检测的诊断结果.结果 以病理检查为金标准,FRD检测的灵敏度为64.86％,特异度为53.19％,阳性预测值为52.17％,阴性预测值为65.79％;而TCT检测的灵敏度为56.76％,特异度为51.06％,阳性预测值为47.73％,阴性预测值为60.00％;FRD检测的灵敏度、阳性预测值以及阴性预测值均高于TCT检测,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).结论 FRD在临床宫颈病变筛查中具有更高的灵敏度、阳性预测值以及阴性预测值,基于其检测费用低,而且操作简单,适用于检测设备落后的偏远地区.
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叶酸受体在鼻咽癌组织中的表达及其意义
目的:研究叶酸受体在人鼻咽癌组织中的表达情况,了解其与肿瘤临床和病理特征间的关系,为进一步研发叶酸受体靶向头颈部肿瘤药物载体奠定基础.方法:分别通过免疫组织化学SP法和RT-PCR法检测鼻咽癌组织中的叶酸受体(FRα)和FRo mRNA的表达情况,结合临床参数进行分析.结果:鼻咽癌组织中FRα水平和FRα mRNA水平均高度表达.结论:叶酸受体表达与鼻咽癌的发生、发展有重要关系.叶酸受体可作为鼻咽癌靶向治疗的分子靶点,并为鼻咽癌的早期诊断及靶向治疗提供重要依据.
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叶酸-顺铂纳米药物的制备及其对人鼻咽癌细胞的靶向治疗作用
目的:制备连接叶酸分子的顺铂纳米药物,并研究该药物对人鼻咽癌细胞的体外靶向治疗作用.方法:采用化学共沉淀法制备顺铂纳米药物并通过聚乙二醇二胺连接叶酸分子合成叶酸-顺铂纳米药物(FA-MNP-CDDP)并对其进行表征.将人鼻咽癌细胞HNE-1和CNE-2与FA-MNP-CDDP体外共培养,采用普鲁士蓝染色法测定细胞摄取纳米药物的情况,采用MTT法测定纳米药物的细胞毒性.结果:合成FA-MNPCDDP纳米药物顺铂含量为(1.6 ±0.1)mg/mL,药物粒子平均直径为(10.1 ±1.5)nm.表达叶酸受体的HNE-1细胞对该纳米药物摄取能力显著强于不表达叶酸受体的CNE-2细胞.FA-MNP-CDDP对HNE-1细胞的体外抑制效果明显,IC50[(1.300±0.10)μg/mL]较单纯顺铂[(2.161±0.85)μg/mL]降低约40%.结论:叶酸-顺铂纳米药物具有针对鼻咽癌细胞的靶向载药和抑制增殖的能力.
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叶酸受体介导的药物靶向投递系统研究进展
目的肿瘤细胞膜上表达一些正常细胞不表达或低表达的受体,它可成为肿瘤治疗的靶点.一些肿瘤组织高水平表达叶酸受体,利用多聚阳离子为载体,结合药物/DNA形成叶酸交联复合物,通过叶酸受体介导的基因转移方式,将药物/DNA靶向投递到肿瘤组织或细胞,具有转移效率高和靶向性投递的特点.现就叶酸受体、叶酸受体介导的内化机理、基因药物、蛋白毒素、放射性药物靶向投递等方面作一综述.
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叶酸靶向肿瘤免疫治疗研究进展
叶酸受体(FR)是一种通过聚糖磷脂酰肌醇(GPI)锚着于膜上的糖蛋白,对叶酸具有高度亲和力,在正常组织分布较少,而在90%以上的卵巢癌和许多上皮细胞及髓细胞来源的恶性肿瘤有过度表达.FR对叶酸偶联的药物同样具有高度亲和力,因此FR被开发为治疗肿瘤的叶酸偶联药物的选择性靶向受体[1].在众多有关FR靶向疗法中,FR阳性肿瘤通过免疫调节的疗法取得了显著效果.
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新型靶向纳米材料介导基因治疗胶质瘤的体外研究
目的:合成可降解性叶酸(FA)-PEG-PEI和PEG-PEI并研究其负载质粒DNA的能力,比较所形成纳米材料/DNA复合物在体外对细胞的毒性大小及其转染效率,为进一步体内基因治疗做好准备.方法:化学方法合成可降解性FA-PEG-PEI和PEG-PEI,检测所形成纳米材料/DNA复合物的粒径、zeta-电位和凝胶阻滞能力,以及对C6(叶酸受体中度表达)、293T(叶酸高度表达)和HepG2(叶酸不表达)3种细胞的细胞毒性,并对3种细胞进行转染,分别用流式细胞仪、荧光素酶基因表达水平和倒置荧光显微镜检测转染效果.结果:FA-PEG-PEl与PEG-PEI复合pDNA后进行电位、粒度分析表明其带正电,粒径在200～300nm,FA-PEG-PEI和DNA的完全结合在N/P比为5,PEI和PEG-PEI与DNA的完全结合则出现在N/P比为10.M1TT怯证实了复合物在c6、293T、HepG23种细胞中的细胞毒性表明其细胞毒性比常用的PEI 25ku低;在3种细胞中,转染效率从整体来看,N/PtL=15时,FA-PEG-PEI萤光素酶基因表达水平高;类似的,通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜更直观的检测了转染效果,表明FA-PEG-PEI对C6、293T细胞都有靶向效果且在N/P比为15时靶向效果好,而在HepG2细胞中没有靶向效果.结论:此研究结果为叶酸靶向基因治疗神经胶质瘤寻找行之有效的基凶载体提供了理论和实践基础,可进一步于动物体内进行联合基因治疗神经胶质瘤.
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一种新的FR4剪切变异体的确认和鉴定
目的 确认并鉴定一个新发现的小鼠FR4剪切变异体,并在mRNA水平检测其在小鼠脾淋巴细胞亚群中的表达.方法 PCR克隆FR4 CDS区时发现存在一个新的剪切变异体,酶切和测序予以鉴定,Western blot检测脾细胞中变异体的表达,流式分选脾细胞中CD8+、CD4+CD25-、CD4+CD25+T淋巴细胞,RT-PCR检测新的变异体在各细胞亚群中的表达.结果 凝胶电泳显示存在一个CDS区碱基数大于野生型FR4的条带,测序表明此条带在野生型外显子基础上包含一个内含子成分,Westernblotting证实新发现的剪切体在蛋白水平也存在,脾细胞中不同T细胞亚群均表达此新型变异体.结论 mRNA和蛋白水平均证实存在一种新型FR4剪切变异体,不同T细胞亚群均表达此变异体暗示其在淋巴细胞摄取叶酸功能上不可或缺.
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膜转运缺陷与甲氨蝶呤耐药
甲氨蝶呤(MTX)耐药有多种机制,其中膜转运缺陷与MTX耐药和临床有密切的关系,深入研究二者之间的关系,可为临床用药提供指导,并为新药的研发应用提供一定的思路.
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叶酸偶联纳米紫杉醇靶向治疗耐药卵巢癌的动物实验研究
目的:研究腹腔注射叶酸偶联纳米紫杉醇(FA-N.P.)对耐药卵巢癌裸鼠的体内治疗效果,并探讨其适给药方式.方法:建立裸鼠耐紫杉醇卵巢癌腹腔种植瘤模型,50只荷瘤鼠分5组,连续4周腹腔内分别注入空白载体(腹腔空白载体组)、紫杉醇(腹腔紫杉醇组)、纳米紫杉醇(腹腔N.P.组)、FA-N.P.(腹腔FA-N.P.组)及静脉注入FA-N.P.(静脉FA-N.P.组),比较其生存期及荷瘤量;电子显微镜及流式细胞仪定性和定量观察该药物对腹腔转移瘤的杀伤效果.结果:腹腔FA-N.P.组与其他4组比较,裸鼠生存期显著升高(P＜0.05,P＜0.01),瘤体数目(2.9±0.3个)明显降低(P＜0.05,P＜0.01).腹腔FA-N.P.组瘤体内肿瘤细胞的凋亡率(44.6％±8.5％)明显高于其他4组(P＜0.05).与腹腔给药组比较,静脉FA-N.P.组肿瘤细胞的凋亡率降低(20.1％±6.2％,P＜0.05).结论:FA-N.P.药物靶向治疗耐药卵巢癌腹腔转移瘤有效,且腹腔给药效果优于静脉给药.
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应用FR靶向PCR法检测CTC在肺癌诊断中的临床价值：初步研究
背景与目的评价一种通过叶酸受体（folate receptor, FR）检测循环肿瘤细胞（circulating tumor cell, CTC）的方法用于肺癌临床诊断的实用性和可行性及进一步探究CTC在肺癌术后复发的预测价值。方法通过免疫磁珠负向富集方法从3 mL外周血中捕获循环肿瘤细胞，再用肿瘤特异性叶酸配体-寡核苷酸偶和物标记捕获的循环肿瘤细胞，洗去没有结合的偶和物后，洗脱下特异性结合的偶合物的寡核苷酸用于定量PCR扩增分析。结果97例肺癌患者的CTC水平高于肺部良性疾病患者（P<0.001）。本检测方法以8.7 Folate Units/3 mL为cutoff值，结果显示靶向PCR法对肺癌的检测灵敏度为82.5%，特异性为72.2%，特别是在I期肺癌灵敏度达到86.8%。与其他肿瘤标志物（NSE、CEA、CYFRA21-1）比较，CTC对肺癌及I期肺癌具有较高的诊断准确性（0.859；95%CI：0.779-0.939）和（0.912；95%CI：0.829-0.994）。5例肺癌患者术后2周内CTC水平高于cutoff值。结论叶酸受体阳性循环肿瘤细胞可以应用于肺癌的临床诊断，即使是对早期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）的诊断。
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叶酸偶联白蛋白纳米粒肿瘤细胞靶向性研究
目的研究能通过叶酸受体介导靶向肿瘤细胞的叶酸偶联白蛋白纳米粒.方法利用叶酸活性酯在碱性条件下与白蛋白纳米粒表面上的氨基反应,制得叶酸偶联的白蛋白纳米粒.以荧光定量法确定浓度、时间、游离叶酸对肿瘤细胞摄取叶酸偶联白蛋白纳米粒的影响程度.结果成功制备了叶酸偶联白蛋白纳米粒.叶酸偶联白蛋白纳米粒的肿瘤细胞摄取量随纳米粒浓度增大、培养时间延长而增加,肿瘤细胞对叶酸偶联白蛋白纳米粒的摄取可被过量的外源性游离叶酸所抑制.结论叶酸偶联白蛋白纳米粒能通过细胞膜上的叶酸受体介导内吞入胞,可显著靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞.
关键词： 叶酸偶联白蛋白纳米粒 叶酸受体 靶向 -
人α型叶酸受体基因融合表达载体的构建和表达
目的采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法获得人α型叶酸受体(folate receptor alpha, FOLR-1,FR-1)基因序列,构建融合表达载体pGEXFR-1并进行表达.方法将RT-PCR法扩增的FOLR-1基因,克隆入融合表达载体pGEX-4T-2中,使其受控于Ptac启动子,转化大肠杆菌DH5α.经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,用SDS-PAGE检测表达产物.结果 SDS-PAGE显示,FOLR-1表达产物的相对分子质量(Mr)约为55 000,与预期的结果相符.Western-blot证实,在相应Mr处,有GST-FR1融合蛋白的显示条带.结论成功地构建了FOLR-1基因的融合表达载体并获得表达,为进一步探讨卵巢癌的免疫治疗提供了实验依据.
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叶酸受体介导靶向药物载体的研究进展
利用叶酸受体在肿瘤细胞(高表达)和正常细胞(低表达)上表达的差异性及叶酸受体与叶酸和叶酸类似物结合的高特异性、高亲和性,可望实现肿瘤的靶向性治疗.而叶酸修饰的药物载体不仅可实现难溶或不稳定药物的体内输送,减少体内酶对药物的降解,提高其生物利用率,同时还可有效地提高药物在肿瘤组织中的浓度,降低对正常组织的毒副作用.本文就近年来叶酸化药物载体的研究进展做一简要综述,旨在为肿瘤的靶向性治疗提供参考.
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叶酸受体介导的用于肿瘤显像的放射性分子探针的研究进展
叶酸受体在正常组织中低表达,而在多种恶性肿瘤,如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、鼻咽癌、肺癌等中高表达.利用叶酸受体亲和力强的特点,可以将抗癌药物、放射性药物通过叶酸或者叶酸类似物,转运到肿瘤细胞内部从而达到诊断和治疗的目的.目前,多种核素被用作标记叶酸受体肿瘤显像剂,本文对叶酸受体介导的分子显像剂研究进展做一综述.
