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坐骨神经损伤与修复过程中相应脊髓神经元变化的形态学观察
目的探讨坐骨神经损伤与再生修复过程中相应脊髓前角运动神经元的形态学变化和嗅被膜细胞(OECs)对神经元的保护作用.方法采用硅胶管套接切断的大鼠坐骨神经实验模型,将30只大鼠随机分为两组,治疗组硅胶管内注射OECs悬液,对照组注射生理盐水(SAL),应用尼氏法对术后7d、14d、30dSAL组与OECs组脊髓前角运动神经元进行形态学观察,比较两组同类神经元的存活率.结果OECs组治疗侧脊髓前角外侧核大、中型运动神经元的形态结构和存活率与对照组有明显差别.术后7d,OECs组治疗侧神经元数目较SAL组伤侧丢失减少,存活率上升.术后14d和30d,OECs组治疗侧神经元数目较SAL组伤侧明显增加,存活率明显升高,大多数神经元轮廓清楚,尼氏体清晰.结论OECs能减少坐骨神经损伤后相应脊髓前角运动神经元的退行性变.
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人参皂甙Rg1对脊髓神经元细胞增殖的影响
背景：不同的神经受体通过不同的受体介导产生各自的生物功能，脊髓损伤的根本原因是神经元的死亡和突触的功能丧失，人身皂苷Rg1对神经元细胞可能具有保护作用。
目的：验证人身皂苷Rg1对SD大鼠脊髓神经元细胞的营养保护作用。
方法：对孕龄16日的胚鼠进行脊髓神经元细胞分离提取，对神经元细胞进行冻存和复苏。实验分为3组：空白组、人参皂苷Rg1干预组、阳性对照组(培养孔内加入苯酚溶液)。采用MTT法检测细胞内线粒体的活性及人参皂甙Rg1对神经元细胞的增殖作用。
结果与结论：人参皂苷Rg1干预组细胞吸光度显著高于空白对照组细胞，人参皂苷Rg1干预组细胞的相对活力高于空白组，说明人参皂苷Rg1对神经元细胞具有促进生长的作用。人参皂苷Rg1干预后，细胞的突起增长速度明显快于空白组的细胞，说明人参皂苷Rg1对脊髓神经元细胞具有保护作用，可抑制神经元细胞凋亡，使细胞活力增强。 -
鹿茸多肽联合GDNF基因修饰的雪旺细胞对Aβ25-35诱导脊髓神经元凋亡的保护作用
目的:探讨鹿茸多肽(VAP)联合胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因修饰的雪旺细胞(SCs)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的脊髓神经元凋亡的保护作用,阐明其作用机制.方法:制备胎鼠脊髓细胞,取对数生长期的脊髓神经元,采用Aβ25-35诱导脊髓神经元凋亡,将脊髓神经元分为正常细胞组(正常脊髓神经元)、诱导凋亡组(Aβ25-35诱导凋亡后的脊髓神经元)、SCs组(Aβ25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+SCs)、GDNF组(Aβ25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF)、SCs+GDNF组(Aβ25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF转染的SCs)和VAP联合组(Aβ25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+VAP联合GDNF转染的SCs).流式细胞术检测各组脊髓神经元凋亡率,免疫组织化学染色检测各组脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数.结果:胎鼠脊髓神经元悬液接种后初始脊髓神经元大多为圆形.流式细胞术检测,与诱导凋亡组比较,SCs组、GDNF组、SCs+GDNF组和VAP联合组脊髓神经元凋亡率降低(P<0.05);与SCs+GDNF组比较,VAP联合组脊髓神经元凋亡率明显降低(P<0.05).免疫组织化学检测,各组脊髓神经元中均有caspase-3表达,SCs组、GDNF组和SCs+GDNF组细胞着色差异不明显,脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数差异不大,但与诱导凋亡组比较明显减少(P<0.05).结论:VAP联合GDNF转染的SCs对脊髓神经元凋亡有保护作用,该作用通过下调脊髓神经元中caspase-3表达来实现.
关键词： 鹿茸多肽 胶质细胞源性神经营养因子 雪旺细胞 脊髓神经元 -
脊髓前角原代培养细胞 ACP 酶的观察
目的探讨脊髓前角原代培养细胞 ACP 酶的分布，确定溶酶体形态、整体分布及与其它细胞器之间的相互关系。方法采用 Gomori′s 铅法进行 ACP 酶组化反应，光、电镜观察溶酶体的整体分布和定位。结果光镜下可见 ACP 反应阳性产物为棕色颗粒，散在分布于神经元的胞体及突起内；电镜可见其阳性产物为电子密度高的黑色沉淀，分布于不同形状的溶酶体及高尔基体内，并常见线状溶酶体与一些细胞器相伴行。结论脊髓前角原代培养细胞的 ACP 酶反应可较好的代表溶酶体的整体分布。
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大鼠脊髓神经元原代细胞的分散培养
目的建立一种简单、易行、满足基本科研需要的脊髓神经元原代细胞分散培养法。方法取 Wistar 大鼠胎鼠或新生鼠的脊髓，以胰蛋白酶消化和机械吹打相结合，将组织分散成细胞悬液，培养于含10 %胎牛血清和阿糖胞苷(抑制胶质细胞的增殖)DMEM 培养基中，观察脊髓神经元细胞生长状况。结果 3～6 h 细胞开始贴壁，胞体周围渐有突起；2～3 d 胞体明显增大，突起生长旺盛，连接呈网络；10 d 时细胞形态为丰满；3 周后细胞开始退化，胞内出现空泡。结论培养的脊髓神经元形态发育符合正常规律变化，适用于形态学、生化、遗传、药理等学科研究。
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依达拉奉预处理有效保护大鼠脊髓神经元氧化应激损伤
目的：研究依达拉奉（ Edaravone，Ed）预处理对大鼠脊髓神经元氧化应激损伤的保护作用和机制。方法：通过直接给予过氧化氢（ H2 O2）和葡萄糖氧化酶（ GOX）建立大鼠脊髓神经元氧化应激损伤模型。损伤前30 min给予Ed预处理，通过检测损伤后细胞活性、丙二醛（MDA）含量、培养液中乳酸脱氢酶（LDH）含量变化以及神经元总超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽氧化酶（ GSH-Px）活性变化，明确Ed预处理对大鼠脊髓神经元氧化应激损伤的保护作用以及可能的机制。结果：与正常对照组相比，H2 O2（200μM，4 h）和GOX（20 mU/ml，2 h）均能明显降低大鼠脊髓神经元活性（P＜0.01），增加神经元MDA含量（P＜0.01）以及培养基中LDH含量（P＜0.01）。提前30 min给予Ed预处理能显著减轻这些损伤（P＜0.01）。此外，与单纯氧化应激损伤组相比，Ed预处理还能明显升高脊髓神经元总SOD和GSH-Px活性（P＜0.01）。结论：Ed预处理可以明显减轻H2 O2和GOX诱导的脊髓神经元氧化应激损伤，这种保护效应可能是通过上调脊髓神经元内SOD和GSH-Px活性实现。
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体外培养脊髓神经元过程中关于提高细胞产率以及活性的技术探讨
为了提高用于培养脊髓细胞的产率以及活性,使实验的细胞模型有良好的一致性和可比性.实验探讨了脊髓细胞培养过程中,从取材、解剖到分散细胞等一系列步骤中维持细胞活性的内外因素.应用细胞形态学指标、Trypan blue染色计数分析以及Nissl染色观察结果发现,该改良的方法能够显著提高细胞产率,每条脊髓得到细胞约为3.5～6×106个,而且种植不同时间0、4、18、48小时细胞存活率均在95%以上.
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简化的 Golgi-Дейнека硝酸银法显示中枢神经元的神经终末
简化的Golgi-Дейнека,神经组织染色法我们曾在1957年初步介绍过,显示猫的脊髓神经元的突触.当时工作正在进行,在文稿后记中提到方法正在改进,显示大脑皮层和脊髓的标本染得更为清晰,俟我们的经验比较全面时再作介绍,此事记忆犹新.当时由于多种原因,工作结果未能及时发表,文稿和切片有丢失.近找到当年的部分资料和切片.相隔40多年见到所制的标本保留完整,色泽鲜明,照相仍清晰,又添彩色照片,看得更清楚.在我们有生之年应该总结而详细介绍.
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APP11肽对糖尿病大鼠神经病变的治疗作用
重组人神经生长因子(rhNGF)治疗糖尿病外周神经病变(DPN)在西方国家已进入第三期临床试验,初步结果正如人们所期望的那样,rhNGF能特异性地改善小纤维外周神经元的功能[1].我们几年来的研究表明STZ糖尿病鼠不仅存在DPN,而且脑和脊髓神经元也存在明显的神经退行性病变.特别在海马神经元尤为明显.但这种神经退行性病变可被皮下注射APP(β-amyloid precursor protein)17肽(APP695中319～335肽段)而获明显改善[2-4].
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电针足三里对直结肠扩张大鼠腰髓神经元和小胶质细胞的影响
针灸对各种疾病包括内脏疼痛的治疗具有独特的疗效,但其作用机制仍不明确.研究发现脊髓是针刺信号和机体伤害刺激信号的初级整合中枢.本实验通过观察电针足三里后直结肠扩张模型大鼠疼痛行为学的变化及腰髓Fos、OX42免疫组化表达的影响,初步探讨脊髓神经元和小胶质细胞参与针刺调控内脏疼痛作用的中枢神经机制.
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高压氧预处理对脊髓神经元氧化损伤中超氧化物歧化酶和血红素氧合酶-1的影响
目的 研究高压氧(HBO)预处理诱导脊髓神经元氧化耐受的机制.方法 取胚胎小鼠脊髓行原代神经元培养,分为正常对照组和HBO预处理组(HBO组).利用Westem Blot、RT-PCR等方法,观察HBO预处理对脊髓神经元抗氧化酶水平的影响.结果 HBO预处理前后超氧化物歧化酶(SOD)表达无统计学差异,血红素氧合酶(HO-1)在处理后表达增多.行RT-PCR检测HBO处理前后HO-1 mRAN水平,发现在预处理后4 h开始明显增多,处理后8 h表达达到高峰,直至处理后24 h其表达量仍比预处理前高.结论 HBO预处理对脊髓神经元氧化损伤的保护作用可能与诱导HO-1表达有关.
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高压氧预处理诱导脊髓神经元氧化耐受作用研究
目的 研究高压氧预处理对脊髓神经元氧化损伤的影响.方法 取胚胎小鼠脊髓做神经元原代培养,分正常对照组、高压氧预处理组(0.35 Mpa、2 h)和H2O2处理组(50 μmol/L、37 ℃、1 h).通过形态学观察、甲基噻唑基四唑比色微量分析和单细胞凝胶电泳等试验方法观察H2O2处理所导致的神经元DNA损伤以及高压氧预处理对这种DNA损伤的影响.结果 H2O2处理组细胞活性明显下降(P＜0.01),细胞DNA尾矩与对照组相比明显增加.单次高压氧暴露后,高压氧预处理组与H2O2处理组相比,细胞活性从预处理后4 h开始明显增高.细胞DNA尾矩也从预处理后4 h开始显著减少并持续到预处理后24 h.结论 H2O2处理导致脊髓神经元出现氧化损伤.高压氧预处理对H2O2诱导的脊髓神经元氧化损伤具有保护作用,这种保护作用至少能持续到预处理后24 h.
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鞘内注射重比重布比卡因对糖尿病神经病变大鼠脊髓神经元凋亡的影响
目的：探讨鞘内注射重比重布比卡因对糖尿病神经病变大鼠脊髓神经元凋亡的影响。方法健康雄性 SD 大鼠32只,体重220~300 g,随机取8只设为对照组(C 组),其余大鼠以腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg 制备大鼠糖尿病神经病变模型。C 组和糖尿病神经病变模型大鼠实施鞘内置管。将鞘内置管成功的糖尿病神经病变大鼠采用随机数字表法随机分为三组：重比重布比卡因组(HB 组)、等比重布比卡因组(IB 组)和葡萄糖组(G 组),每组8只。C 组和 HB 组大鼠鞘内注射重比重0.75%布比卡因10μl,IB 组给予等比重0.75%布比卡因10μl,G 组给予10%葡萄糖10μl,1次/天,连续3 d。于制备糖尿病模型前(T1)、鞘内注射给药前(T2)、鞘内给药后第1天(T3)、第2天(T4)、第3天(T5)及结束给药后第4天(T6)时测定大鼠右后爪机械缩足反射阈值(PWT)；T3~T5时分别记录大鼠每次给药2 min 后运动阻滞持续时间；T6时处死大鼠,取腰膨大处的脊髓组织, HE 染色,光镜下观察病理学结果；并采用 TUNEL 法检测脊髓神经元凋亡的情况。结果与 HB 组比较,C 组和 IB 组大鼠运动阻滞时间明显缩短,脊髓凋亡神经元明显减少(P <0.05)。与 T1时比较,T2~T5时 HB 组、IB 组和 G 组 PWT 明显降低(P <0.05)。与 T6时比较,T2~ T5时 HB 组PWT 明显降低(P <0.05)；G 组未出现运动阻滞及未见脊髓凋亡神经元。结论鞘内注射重比重布比卡因可促进糖尿病神经病变大鼠脊髓神经元的凋亡。
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钙敏感受体及钙蛋白酶在大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤中的表达及其意义
目的：探究大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤中钙敏感受体及钙蛋白酶的表达变化及其意义。方法：将原代培养的新生SD大鼠脊髓神经元随机分成4组：正常对照组、缺氧复氧组、激活组、抑制组。后3组神经元均制备缺氧复氧损伤模型，激活组加入钙敏感受体激动剂GdCl3，抑制组加入受体抑制剂NPS2390。应用Hoechst 33258染色观察各组脊髓神经元凋亡；应用免疫荧光技术分析钙敏感受体及钙蛋白酶蛋白在脊髓神经元的表达定位；采用蛋白质印迹法检测各组钙敏感受体、钙蛋白酶以及Bax蛋白的表达水平。结果：与对照组比较，缺氧复氧组脊髓神经元凋亡增加，并且钙敏感受体、钙蛋白酶、Bax蛋白的表达明显升高（均P＜0．01）；GdCl3可明显增强上述作用，而NPS2390可明显抑制上述作用。结论：在缺氧复氧损伤过程中，脊髓神经元凋亡增加，钙敏感受体及钙蛋白酶表达增多。
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丹参注射液对脊髓神经元损伤模型大鼠NOS活性表达的影响
目的:探讨大鼠肢体缺血再灌注损伤后脊髓神经元一氧化氮合酶(NOS)活性改变及丹参注射液对其的影响.方法:通过暂阻断一侧髂总动脉和股动脉,建立肢体缺血再灌注损伤(IRI)模型.采用免疫组织化学ABC法,观察大鼠脊髓神经元NOS阳性神经元的表达和分布特点,以及丹参注射液干预后阳性神经元改变情况.结果:大鼠肢体缺血4 h,脊髓相应节段神经元NOS活性增强(P<0.01).再灌注2 h后,NOS活性进一步增强(P<0.05),并且NOS阳性神经元较集中分布于脊髓相应节段同侧后角及中央管周围(P<0.01).而丹参注射液可抑制再灌注后NOS活性(P<0.01).结论:提示脊髓相应节段同侧神经元可能参与肢体IRI的发病过程.尤其是脊髓后角及中央管周围神经元可能具有更为重要的作用.丹参注射液可能对肢体IRI后脊髓神经元有保护作用.这种保护作用可能与其对NOS活性抑制作用有关.
关键词： 丹参注射液 肢体缺血再灌注损伤 脊髓神经元 一氧化氮合酶(NOS) 动物实验 -
臂丛神经损伤后脊髓神经元脑衰反应调节蛋白2表达上调以加快轴突生长
目的 观察臂丛神经损伤后大鼠脊髓中脑衰反应调节蛋白2(CRMP2)的表达及其作用.方法 构建臂丛撕脱伤大鼠模型,收集损伤后1、3、7、10d大鼠脊髓标本,使用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot方法检测CRMP2的表达变化及磷酸化水平.使用免疫荧光法检测CRMP2在脊髓中的空间表达.在体外培养的神经元中观察调控CRMP2表达对神经元突起生长的影响.结果 在臂丛撕脱伤后第1、3、7、10天,RT-qPCR及Western blot法检测均显示脊髓中CRMP2表达明显增加.Western blot法检测显示术后第3、7天实验组磷酸化CRMP2的表达量为0.154±0.113、0.124±0.200,Sham组磷酸化CRMP2表达量为0.342±0.200、0.434±0.165.实验组较Sham组磷酸化水平明显降低.CRMP2表达于脊髓神经元中,在小胶质细胞及星型胶质细胞中未观察到其表达.在体外培养的神经元中调控CRMP2表达,测得神经元的轴突长度及突起数目在上调组为7.066±1.762、24.500±8.816,下调组为1.044±0.556、8.000±3.295.上调组较下调组明显增加.结论 臂丛神经损伤后,脊髓神经元CRMP2表达增加能够加快神经轴突生长,对神经功能恢复有利.
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腺相关病毒介导人含脑源性神经营养因子基因在体外成纤维细胞中表达的研究
腺相关病毒（adeno-associated virus, AAV）是感染人类的缺陷微小病毒。有研究表明，重组腺相关病毒（recombinant AAV, rAAV）载体能有效转导脑和脊髓神经元细胞，使外源基因持续表达而不产生毒性反应［1］。我们制备含脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor, BDNF）基因的重组腺相关病毒，并进行了体外转染表达的实验，以期为AAV介导转神经营养因子基因治疗中枢神经系统疾病的研究奠定基础，现报道如下。 一、材料和方法 1.重组人BDNF腺相关病毒质粒的构建：重组质粒的构建参照分子克隆有关实验进行。II型腺相关病毒载体质粒为pWAV1，BDNF基因来源于人基因组DNA中BDNF基因的全长编码序列，长760bp。
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先天性肛门直肠畸形患儿术后排便功能障碍病因研究进展
先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)是小儿外科中常见的消化道畸形,排便功能障碍仍然是许多ARM患儿术后常见的后遗症,严重影响了术后生活质量.ARM患儿术后排便功能障碍主要表现为便失禁和便秘,盆底肌和腰骶段脊髓神经元的先天发育缺陷、肛周肌肉群、自身肠神经系统(enteric nervous system,ENS)的发育不良、术巾对肛周肌肉及神经的医源性损伤等均能影响术后的排便功能.本文对ARM术后排便功能障碍的病因研究进展综述如下.
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神经干细胞对谷氨酸兴奋毒性损伤神经元的保护作用
目的 研究未分化状态的神经干细胞对损伤脊髓神经元的直接保护作用.方法 建立体外大鼠脊髓神经元谷氨酸损伤细胞模型,在实验组中加入神经干细胞,对照组中加入培养液.通过MTT比色试验、彗星试验检测神经干细胞对神经元的保护作用.结果 MTT比色试验表明实验组神经元活力明显高于对照组,彗星试验表明实验组拖尾率和彗尾长度均低于对照组.结论 神经干细胞能有效保护谷氨酸损伤的脊髓神经元,其作用可能是通过自分泌、旁分泌因子产生的.
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胚胎脊髓移植和损伤区上下神经根吻合对损伤大鼠脊髓神经元的影响
近年来实验方法治疗脊髓损伤取得了许多进展，如实验性胚胎脊髓移植、周围神经移植、神经细胞移植、大网膜移植、神经营养因子的应用等治疗脊髓损伤取得了较好的效果，但实验结果仍然不能令人满意[1,2]。我们拟采用胚胎脊髓移植和损伤区上下神经根吻合的方法，观察手术后对防止成鼠脊髓轴突损伤引起的神经元萎缩的作用。
