首页 > 文献资料
-
人感染H7N9禽流感合并急性呼吸窘迫综合征患者的临床特征分析
目的：分析人感染H7N9禽流感合并急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者的主要临床特征。方法采用回顾性研究的方法，分析2013年3月至2014年12月南京大学医学院附属鼓楼医院重症医学科（ICU）收治的9例人感染H7N9禽流感合并ARDS患者的临床资料。结果9例患者平均年龄（46.3±12.3）岁，男性占66.7%（6/9例）。主要临床特征：①病程急性期以高热、咳嗽、咳血性痰、外周血白细胞计数、血小板计数降低和心肌酶升高为特点，胸部CT表现为肺实变及磨玻璃样影。②入院时氧合指数（PaO2/FiO2）均＜200 mmHg （1 mmHg＝0.133 kPa），其中66.7%（6/9例）的患者PaO2/FiO2＜100 mmHg，平均（98.9±62.8）mmHg；55.6%（5/9例）的患者需有创机械通气支持；77.8%（7/9例）的患者合并休克，其血流动力学监测显示外周血管阻力降低。③77.8%（7/9例）的患者继发血行感染及肺部感染（其中血行感染5例，肺部感染4例）。④22.2%（2/9例）的患者停用抗病毒治疗7 d后出现病毒复燃，再次抗病毒治疗有效。结论人感染H7N9禽流感合并ARDS具有典型的临床症状、实验室检查和影像学特征，常合并分布性休克，后期易继发肺部和血行感染，有病毒复燃现象。
-
H7N9禽流感病毒的遗传特性研究进展
2013年3月31日国家卫生与计划生育委员会通报上海和安徽确诊3例人感染H7N9禽流感病毒,尚属全球首次报道.美国、韩国等多个国家曾在火鸟、野鸭和野鸡等禽类中检出H7N9,但从未发现感染人的情况,世界卫生组织(WHO)对人感染H7N9禽流感病毒的疫情高度关注.笔者综述H7N9禽流感病毒的溯源、抗原变异、致病机制、传播机制及预防控制等遗传特征的研究进展,旨为H7N9禽流感病毒的防控和治疗提供参考依据.
-
H7N9禽流感病毒感染A549细胞生物标志物研究
目的 通过建立H7N9禽流感病毒和H1N1pdm09流感病毒(对照病毒)感染A549细胞模型,分析H7N9禽流感病毒感染A549细胞的特征蛋白,筛选其生物标志物,初步揭示H7N9禽流感病毒致细胞病变的蛋白分子机制.方法 感染复数为0.001的H7N9和对照病毒分别感染A549细胞24、48、72 h后提取细胞总蛋白进行荧光双向差异凝胶电泳(2D-DIGE),筛选H7N9禽流感病毒感染A549细胞的可能生物标志物并进行蛋白印迹(WB)验证.结果 血小板活化因子乙酰水解酶Ⅰb亚基β(PAFAH1B2)蛋白在H7N9感染A549细胞72 h后表达量急剧下降,而在空白对照组和H1N1pdm09感染A549细胞组的表达量未出现明显变化.结论 PAFAH1B2可作为H7N9感染A549细胞后期的生物标志物,其表达量的变化可能与H7N9感染患者的症状相关.
-
H7N9禽流感病毒重组质粒构建及应用
目的 构建一种含H7N9禽流感病毒全长血凝素/神经氨酸酶/基质蛋白(HA/NA/M)基因的重组质粒,为核酸检测方法提供一种通用的阳性定量标准品.方法 设计H7N9禽流感病毒HA、NA及M抗原基因全长开放阅读框的克隆引物,提取H7N9禽流感病毒总RNA后用实时荧光定量PCR获得相应片段,用3次酶切连接方法,依次插入到pGEM-T easy质粒,进行测序确认;线性化后的重组质粒用T7 RNA聚合酶进行体外转录,RNA转录产物纯化后测定浓度,用实时荧光定量PCR构建标准曲线进行验证.结果 HA、NA和M基因扩增片段大小分别约为1.7、1.3、1.1 kb,与预期相符;构建的重组质粒pGEM-HA-NA-M插入片段的测序结果与GenBank公布序列一致;由重组质粒体外转录获得同时含有H7N9禽流感病毒HA、NA、M全长开放阅读框序列的RNA片段质量浓度为399.5 ng/μL,梯度稀释后用3种实时荧光定量PCR方法均获得了良好的标准曲线.结论 成功构建重组质粒pGEM-HA-NA-M,由此质粒体外转录获得的RNA片段可作为H7N9禽流感病毒核酸快速检测方法通用的阳性定量标准品.
-
人感染H7N9禽流感病毒危重症患者的救治与护理
目的 探讨人感染H7N9禽流感病毒危重症患者的救治与护理方法.方法 回顾性分析并总结2013年3-4月南京大学医学院附属鼓楼医院重症医学科收治的6例人感染H7N9禽流感病毒危重症患者的临床资料.结果 6例人感染H7N9禽流感病毒危重症患者中,4例病情稳定已出院,其余2例生命体征平稳进入康复期;在6例患者的治疗和护理过程中,无医护人员受到H7N9禽流感病毒感染.结论 高质量的专科护理是人感染H7N9禽流感病毒危重症患者抢救成功的保证.
-
H7N9禽流感患者外周血3种主要固有免疫细胞的变化及意义
2013年3月,在上海及安徽3例已死亡的患者体内首次分离出一种新型的禽流感病毒H7N9,该病毒可导致严重的致死性呼吸系统疾病[1].苏州大学附属第一医院是苏州市H7N9禽流感的定点收治医院,该院感染病科近5年来共收治26例H7N9禽流感患者,其中18例好转、7例死亡,另有1例自行出院,预后不明.目前认为H7N9禽流感患者机体免疫系统功能状况是决定病情发展和预后的重要因素.免疫系统包括免疫器官、免疫细胞和免疫分子,其中免疫细胞分为固有免疫细胞和适应性免疫应答细胞.本研究旨在探讨H7N9禽流感患者部分固有免疫细胞的变化,并阐明其变化的临床意义.
-
H7N9禽流感患者外周血T淋巴细胞亚群的分析及意义
目的 探讨H7N9禽流感患者外周血T淋巴细胞亚群的变化情况.方法 将18例H7N9禽流感患者(感染组)根据治疗预后分为治愈组13例和死亡组5例,以门诊健康献血者20名作为正常对照组.采用特异性引物聚合酶链反应(PCR)检测H7N9禽流感病毒,并用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的变化.结果 感染组CD3+、CD8+和CD4+T细胞绝对数及CD4+/CD8+比值均低于正常对照组(P＜0.05).治愈组CD3+、CD8+及CD4+T细胞绝对数均低于正常对照组(P＜0.05).与治疗前比较,治愈组治疗后CD3+、CD8+及CD4+T细胞绝对数明显升高(P＜0.05);但CD3+、CD4+T细胞绝对数及CD4 +/CD8+比值仍低于正常对照组(P＜0.05).死亡组治疗前、后CD3+、CD8+及CD4+T细胞绝对数均低于治愈组和正常对照组(P均＜0.05);且治疗前、后各项指标之间差异均无统计学意义(P＞0.05).治愈组CD3+、CD8+及CD4+T细胞绝对数均高于死亡组(P＜0.05).结论 H7N9禽流感患者存在比较严重的T淋巴细胞亚群失衡,死亡患者免疫失衡更为严重.T淋巴细胞亚群失衡可能与H7N9禽流感的发病有关.
-
H7N9禽流感患者外周血常规和C反应蛋白的变化及其临床意义
目的 探讨H7N9禽流感患者外周血常规和C反应蛋白(VRP)的变化,为临床诊断、治疗及病情监测提供依据.方法 选取18例H7N9禽流感患者(HN9组),以2009年的20例甲型H1N1流感患者(H1N1组)及20名健康体检者(正常对照组)作为对照.根据患者康复情况将H7N9组再分为轻症组12例、重症组6例.分析各组血常规,同时测定H7N9组外周血CRP水平.结果 与正常对照组比较,H7N9组患病初期白细胞(WBC)总数无明显变化,淋巴细胞(Lym)计数明显降低(P＜0.05),同时伴有血小板(PLT)和嗜酸性粒细胞(Eos)下降(P＜0.05);重症组中性粒细胞(Neu)计数明显增高(P＜0.05),轻症组和重症组之间各项指标均无差异(P＞0.05).与H1N1组比较,H7N9组入院时的血象特点相似,但Lym计数下降更为明显(P＜0.05).与治疗前比较,轻症组治疗后PLT、Lym及Eos计数明显上升(P＜0.05).H7N9组入院时CRP明显升高,重症较轻症组升高更为明显(P＜0.05).轻症组治疗后CRP明显下降,与治疗前比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 外周血CRP水平对区分H7N9禽流感患者轻、重症及判断预后有一定的提示作用.H7N9禽流感患者外周血常规的变化与甲型H1N1流感存在相似之处,特点并不明显,应充分结合多方面信息以明确诊断和判断预后,以防出现严重的疫情后果.
-
实时荧光RT-PCR在人感染H7N9禽流感病毒检测中的应用
目的 评估实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测H7N9禽流感病毒的应用效果,为人感染H7N9禽流感监测和防控提供可靠的实验室检测数据.方法 采集各级医疗单位人感染H7N9禽流感监测及可疑病例标本137例,同时使用4种实时荧光RT-PCR试剂分别检测上呼吸道标本和下呼吸道标本中H7N9禽流感病毒核酸.结果 H7N9禽流感病毒核酸阳性率为3.65％ (5/137);H7N9禽流感病毒核酸阳性标本中上呼吸道标本检出率为60％(3/5),下呼吸道标本检出率为100％ (3/3).4种试剂符合率为100％.结论 实时荧光RT-PCR能有效检出H7N9禽流感病毒核酸,检测下呼吸道标本有助于提高阳性检出率.
关键词： H7N9禽流感病毒 人类感染 实时荧光逆转录聚合酶链反应 下呼吸道标本 -
二例H7N9禽流感病毒感染患者实验室检测分析报告
2013年3月31日,3例H7N9禽流感病毒感染患者经中国疾病预防控制中心(Chinese Center for Disease Control and Prevention,CDC)确认[1].由于H7N9禽流感病毒是一类新亚型的禽流感病毒,人感染H7N9禽流感病毒在全球尚属首发,具有起病急、进展快、致死率高等特点[2].然而,目前医学界对人感染H7N9禽流感病毒的发病和病情演变规律了解甚少,尤其是对于实验室检测在人感染H7N9禽流感病毒的诊断和治疗方面所起的作用还缺乏系统性的研究[3].现对上海交通大学医学院附属瑞金医院收治的2例H7N9禽流感患者自入院以来的实验室检测进行回顾性分析,以期为临床诊断、治疗及病情监测提供客观依据.
-
人感染H7N9禽流感患者外周血T淋巴细胞亚群和细胞因子的变化及其临床意义
目的 探讨H7N9禽流感患者外周血T淋巴细胞亚群及相关细胞因子的变化及临床意义.方法 2013年4月至2015年4月在苏州大学附属第一医院救治的H7N9禽流感患者23例作为H7N9感染组,选取同期在该院门诊体检健康者20名作为健康对照组.采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群CD3+CD4+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞、Treg、Th17、CD3+CD8-γ干扰素+(Th1)、CD3+CD8-IL-4+(Th2)百分率的变化,采用Bio-PlexProhumancytokineGroupⅠ27-plexpanel和GroupⅡ21-plexpanel测定血清中相关细胞因子[IL-8、IL-18、干扰素诱导蛋白(IP)-10、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1b]水平的变化.采用Kolmogorov-Smirnov检验行正态性检验,两组间比较应用两独立样本t检验.结果 治疗前,H7N9感染组外周血CD3+CD4+T淋巴细胞百分率[(27.90±10.19)%比(38.75±6.78)%,t=-2.726,P=0.012]、CD3+CD8+T淋巴细胞百分率[(14.82±7.72)%比(22.79±6.12)%,t=-2.556,P=0.018]明显低于健康对照组,Th17百分率[(2.64±1.40)%比(0.29±0.21)%,t=4.668,P<0.001]、Th2百分率[(2.24±2.00)%比(0.35±0.25)%,t=2.626,P=0.014]较健康对照组明显升高.治疗后好转15例(好转组),治疗后外周血CD3+CD4+T淋巴细胞[(36.54±9.20)%比(25.86±7.22)%,t=-3.339,P=0.007]、CD3+CD8+T淋巴细胞百分率[(22.70±5.68)%比(15.08±8.80)%,t=-2.811,P=0.017]、Treg百分率[(6.08±1.70)%比(3.26±1.64)%,t=-6.670,P<0.001]较治疗前明显升高,Th17百分率[(2.12±1.28)%比(2.76±1.33)%,t=2.220,P=0.048]、Th1细胞百分率[(4.00±2.13)%比(6.97±1.81)%,t=4.407,P=0.001]较治疗前明显下降;死亡8例(死亡组),治疗前后上述免疫学指标的差异均无统计学意义(均P>0.05).治疗前,H7N9感染组IL-8[(23.19±14.35)比(12.78±6.76)ng/L,t=2.277,P=0.035]、IL-18[(230.55±230.18)比(72.80±27.91)ng/L,t=2.348,P=0.036]、IP-10[(28870.55±41815.22)比(1356.13±1093.10)ng/L,t=2.371,P=0.035]、MIP-1b[(197.74±119.87)比(118.51±41.86)ng/L,t=2.198,P=0.043]水平较健康对照组明显增高.结论 H7N9禽流感患者存在严重的T淋巴细胞失衡,监测H7N9禽流感患者外周血T淋巴细胞变化,对评估临床预后具有重要的参考价值,在H7N9禽流感发展过程中存在着细胞因子风暴,可能是引起多脏器功能衰竭的主要原因.
-
H7N9禽流感病毒HA2基因真核表达与免疫原性初步研究
目的 利用真核表达载体构建H7N9禽流感病毒血凝素刺突茎部(HA2)的真核表达质粒,在293F细胞中表达HA2蛋白,并初步探讨其免疫原性.方法 根据pMD18-T-HA中的序列设计H7N9禽流感病毒HA2扩增引物,在下游引物中引入胰酶酶切位点;目的基因经特异性酶切位点克隆入自身带有Fc标签的pFUSE-IgG1-Fc1载体,构建重组质粒HA2-Fc;将重组质粒转染293F细胞,通过间接免疫荧荧光(IFA)和免疫印迹法(WB)鉴定HA2蛋白的表达和免疫原性.结果 成功构建H7N9禽流感病毒HA2基因真核表达质粒HA2-Fc,并在293F细胞中表达出分子量大约为50 kDa的重组蛋白.IFA和WB显示该蛋白与抗H7N9病毒鼠多抗具有良好的免疫反应.结论 成功构建表达HA2亚单位的真核表达系统,重组蛋白具有较高的免疫原性,为筛选H7N9广谱疫苗候选分子、广谱中和抗体,及深入研究其致病机理和免疫机制奠定基础.
-
重组酶介导的等温扩增法检测H7N9禽流感病毒
目的 建立H7N9禽流感病毒一步法逆转录重组酶介导的等温扩增的检测方法(RT-RAA).方法 根据H7N9禽流感病毒HA片段和NA片段的保守区序列分别设计引物、探针,建立RT-RAA方法,研究其特异性、敏感性,并与Real-time RT-PCR方法进行比较.结果 成功建立了H7N9禽流感病毒RT-RAA检测方法,H7反应体系和N9反应体系的低检出限分别为10 copy/μL和100 copy/μL,且与其他呼吸道病原无交叉反应.H7N9 RT-RAA体系检测结果与Real-timeRT-PCR一致性较高,Kappa检验u系数为0.933.结论 建立的RT-RAA检测方法具有快速、特异及灵敏的特点,为H7N9禽流感病毒的快速检测提供了新的分子工具.
-
江苏省2013至2015年人H7N9流感病毒的分子特征
目的 探讨江苏省2013至2015年人源H7N9禽流感病毒的分子特征.方法 从全球禽流感共享数据库(GISAID)中下载江苏省2013至2015年上传的人感染H7N9禽流感病毒株(37株)和禽源性H7N9病毒株(7株)的全基因序列,用MEGA6.0软件分析人感染H7N9禽流感病毒HA、NA、M及PB2等基因的分子遗传特征、关键氨基酸位点的改变情况,并构建HA和NA的系统进化树.结果 江苏省内人源和禽源H7N9禽流感毒株与参考株相比较,HA蛋白的差异均较小,其同源性分别为97.2％～100％和98.2％～100％;NA蛋白之间的差异也较小,其同源性分别为99.8％ ～100％和99.9％～ 100％;人源与禽源H7N9病毒HA或NA之间的同源性分别为98.5％～100％和99.8％ ～ 100％.人源和禽源H7N9毒株的HA蛋白均发生G186V和D225G变异,44株发生Q226L变异,4株出现A134V变异,但HA的裂解位点均未发生改变.2013年1株NA蛋白出现R294K耐药位点的变异.PB2蛋白分析显示:所有毒株均发现L89V变异,其中人源H7N9毒株中,26株发现E627K变异,5株发现D701N变异.所有毒株的M2蛋白均发生S31N变异.结论 江苏省2013-2015年人感染H7N9流感病毒与禽源性H7N9毒株的氨基酸序列高度同源,关键氨基酸位点的变异与人感染该病毒密切相关,应加强人源和禽源H7N9病毒的分子监测.
-
人感染H7N9禽流感病毒1例报告
2013年2月底,在上海和安徽两地先后报道H7N9型禽流感病毒感染患者.鉴于该病毒此前尚无人感染病例,因此,当时未纳入我国法定传染病监测报告系统,亦无针对性疫苗.3月28日本院收治1名危重患者,后确诊为H7N9型禽流感病毒感染.现将其在本院治疗期间的临床及实验室检查情况作简要报告.
-
H7N9禽流感患者外周血Th17和Treg细胞的检测及临床意义
目的 探讨H7N9禽流感患者外周血辅助性T细胞17(Th17细胞)和调节性T(Treg)细胞的变化及其临床意义.方法 将23例H7N9禽流感患者(A组)根据临床治疗预后分为治愈(A1)组15例和死亡(A2)组8例,以健康体检者20例作为对照(B)组.采用流式细胞术检测外周血Th17和Treg细胞的变化.结果 治疗前,A组外周血Th17细胞百分率高于B组[(2.64±1.40)％vs.(0.29±0.21)％](P＜0.05).治疗后,A1组外周血Treg细胞百分率较治疗前增高[(6.08±1.70)％ vs.(3.26±1.64)％](P＜0.05),而Th17细胞百分率较治疗前下降[(2.12±1.28)％ vs.(2.76±1.33)％](P＜0.05);A2组上述指标治疗前后均无统计学差异(P＞0.05).结论 H7N9禽流感患者存在Th17和Treg细胞比例的改变,监测H7N9禽流感患者外周血Th 17和Treg细胞指标的变化对评估患者的预后具有一定参考意义.
-
逆转录环介导等温扩增技术检测H7N9禽流感病毒基因
目的 建立检测H7N9禽流感病毒基因的逆转录环介导等温扩增(reverse transcription Loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法,并初步评估应用.方法 设计、合成H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因、神经氨酸酶(NA)基因的引物组,通过优化参数,建立RT-LAMP反应体系,使用梯度稀释的标准品测试该体系检测灵敏度,并使用对比毒株测试特异性,再对142份临床标本进行实样检测.结果 成功建立了检测H7N9禽流感病毒HA基因、NA基因的RT-LAMP方法,可直接肉眼观察判读结果,检测其HA基因、NA基因的敏感性分别达到10拷贝每反应、5拷贝每反应,对其他常见呼吸道病原无交叉反应;在测序证实阳性的临床样本中,对于病毒HA基因、NA基因检出率分别为100％、92.68％.结论 逆转录环介导等温扩增技术检测H7N9禽流感病毒基因,具有简单、快速、灵敏度高,检测结果可视化,无需特殊设备等优点,在禽流感病原监测上有一定应用前景.
关键词： H7N9禽流感病毒 逆转录环介导等温扩增 检测 -
H7N9禽流感患者外周血T淋巴细胞亚群的分析及临床意义
目的 探讨H7N9禽流感患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及临床意义.方法 将23例H7N9禽流感患者(感染组)根据临床治疗预后分为好转组15例和死亡组8例,另选择体检健康者20例为正常对照组.采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群CD3+CD4+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞、Treg、Th17、CD3+CD8IFN-γ+(Th1细胞)、CD3+CD8-IL-4+(Th2细胞)百分率的变化.结果 感染组治疗前外周血CD3+CD4+T淋巴细胞百分率、CD3+CD8+T淋巴细胞百分率明显低于正常对照组(P＜0.05),而Th17百分率、Th2细胞百分率较正常对照组明显增高(P＜0.05);好转组治疗后外周血CD3+CD4+T淋巴细胞、Treg、CD3+CD8+T淋巴细胞百分率较治疗前明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05),治疗后外周血Th17细胞百分率、Th1细胞百分率较治疗前明显下降(P＜0.05);死亡组治疗前、后上述指标间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 H7N9禽流感患者存在严重的T淋巴细胞失衡,监测H7N9禽流感患者T淋巴细胞指标变化,对评估临床预后具有重要的参考价值.
-
利用高通量测序快速检测H7N9禽流感病毒及基因组序列分析
目的 探索用高通量测序技术检测咽拭子样本中H7N9禽流感病毒的方法.方法 分别提取编号为106、089及024 3份样本RNA,反转录,eDNA扩增,用Ion Torrent进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学分析.结果 3个咽拭子样本的测序结果中均能检测出禽流感病毒,拼接出的基因组序列可以进行生物信息学分析.结论 利用高通量测序技术可以快速地检测H7N9禽流感病毒,并可用生物信息学软件拼接基因组序列及进行序列分析.
-
安徽省人感染H7N9禽流感病毒基因组特征分析
目的 分析安徽省2013年分离的5株人感染H7N9禽流感病毒全基因组特征.方法 从美国国家生物技术信息中心(NCBI)和全球禽流感基因共享数据库(GISAID)中下载具有代表性的H7N9、H7N3、H7N7和H9N2等毒株序列,运用分子生物信息学软件分析病毒全基因组特征.结果 我省流行的H7N9病毒HA基因与A/duck/Fujian/6390/2010(H7N3)相似度高,NA基因与A/northern shoveler/Hong Kong/MPL133/2010(H2N9)株相似度高,6个内部基因片段与中国北京、香港、湖南、江苏地区分离的H9N2毒株相似度接近.氨基酸序列比对发现NS1蛋白218～230位氨基酸缺失、M2蛋白的N31S突变、HA蛋白的G186V、Q226L突变以及NA蛋白69～73位的删除,并且我省人感染H7N9病毒均带有PB2的E627K突变,同时PA-100A、PA-356R、PA-409N这些易感人类的特征氨基酸也在本次流行的H7N9病毒中发现;此外HA蛋白裂解位点仅有1个碱性氨基酸、糖基化位点高度保守以及未发现NA蛋白R294K突变也是我省H7N9病毒主要特征.结论 我省人感染H7N9病毒与中国其他省份流行株高度同源,该病毒获得跨种传播、毒力增强、耐药等能力均与病毒蛋白功能域有关.
