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错配修复基因与散发性肿瘤
错配修复基因(MismatchRepairGenes,MMRgenes)是细胞内负责对碱基错配进行修复的基因,它们的缺陷导致癌相关基因突变不能及时有效纠正,从而肿瘤易感.近年来发现MMR基因不仅与遗传性肿瘤有关,还与其它许多散发性肿瘤有关,现就其与散发性肿瘤的关系作一综述.
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散发性结直肠癌组织中hMSH2和hMLH1的表达研究
[目的]分析散发性结直肠癌中的hMLH1和hMSH2蛋白表达情况.[方法]选取经病理学确诊并在术前未接受过放疗或化疗的结直肠癌手术切除标本127例,以及内镜活检无肿瘤患者肠黏膜上皮20例.用免疫组化方法检测hMLH1和hMSH2蛋白表达情况.[结果]结直肠癌组织中hMSH2蛋白表达缺失率为65.4％(83/127),高于对照肠组织(20.0％,4/20)(x2=14.714,P＜0.001).结直肠癌组织中hMSH2蛋白缺失率随T分期增加而增加(x2=8.233,P=0.041);与N分期有关(x2=20.235,P＜0.001),有淋巴结转移者患者中hMSH2蛋白表达缺失率达87.1％(27/31),高于无淋巴结转移患者(54.2％)(x2=9.250,P=0.002).hMLH1蛋白表达缺失率为74.0％,与T分期(x2=29.115,P＜0.001)、N分期(x2=9.807,P=0.006)、M分期(x2=7.363,P=-0.007)有关.[结论]结直肠癌组织中存在hMLH1和hMLH2蛋白表达缺失,通过免疫组化方法检测,可以简便、准确地发现错配修复基因的突变,可为后期的治疗和预后判断提供参考.
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错配修复基因hMLH1、hMSH2蛋白在宫颈疾病中的表达
[目的] 分析不同级别宫颈癌前病变及宫颈癌中错配修复基因 hMLH1 和 hMSH2蛋白表达情况.[方法] 收集宫颈活检及手术标本139例,其中宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级43例,CINⅡ、Ⅲ级48例,宫颈鳞癌(SCC)48例；对照组慢性宫颈炎50例.用免疫组化技术检测 hMLH1 和 hMSH2 蛋白,分析其与宫颈病变级别及宫颈癌临床病理特征关系. [结果] hMLH1 阳性率在 CIN 各组明显高于慢性宫颈炎及 SCC 组,差异有统计学意义(P＜0.01).hMSH2 阳性率随宫颈病变级别增加而升高,差异有统计学意义(P＜0.01);但SCC 组与CIN各组相比差异无统计学意义.hMLH1 阳性率随 FIGO 分期增加而下降,但差异无统计学意义；hMSH2 阳性率随FIGO 分期增加而上升,且与淋巴转移及病理分级有关(P＜0.05).两者与肿瘤大小均无关.[结论] 错配修复基因 hMLH1、hMSH2 蛋白与宫颈癌发生发展有关,但两者作用机制可能不同.
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Lynch综合征研究进展
Lynch综合征(Lynch syndrome,LS)又称遗传性非息肉病性结直肠癌,是常见的一种遗传性结直肠癌综合征,占结直肠癌的2％～5％.指的是那些具有错配修复(MMR)基因突变导致易患结直肠癌和其他恶性肿瘤的个体.文章就国内外近10年关于MMR基因突变的特点和对LS的诊断和筛选及其应用的进展作一综述.
关键词： Lynch综合征 遗传性非息肉病性结直肠癌 错配修复基因 -
不同部位Ⅲ期结直肠癌的临床及错配修复基因表达的比较分析
目的探讨不同部位Ⅲ期结直肠癌患者的临床病理及错配修复基因表达的的差异.方法应用En-Vision二步法检测340例结直肠癌中hMLH1、hMSH2和hMSH6的表达,并分析不同部位结直肠癌的临床病理及hMLH1、hMSH2、hMSH6的差异.结果340例Ⅲ期结直肠癌中,右半结肠、左半结肠和直肠癌分别为60、68和212例,肿瘤侵润深度、肿瘤细胞分化程度在右半结肠、左半结肠和直肠癌中均有统计学差异(均P＜0.05),而患者年龄、性别、淋巴结转移数在不同部位肿瘤中均无统计学差异(均P＞0.05).在右半结肠、左半结肠和直肠癌中hMLH1表达缺失率分别为13.4％、2.9％和57％,差异有统计学意义(P＜0.05);hMSH2分别为6.7％、1.5％和47％,差异有统计学意义(P＜0.05);hMSH6分别为3.3％、2.9％和1.9％,差异无统计学意义(P＞0.05);MMR(hMLH1+hMSH2+ hMSH6)分别为23.3％、7.4％和11.8％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论不同部位的Ⅲ期结直肠癌中,其临床病理及hMLH1、hMSH2、hMSH6差异明显.
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MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白在结直肠癌中的表达及在Lynch综合征筛查中的意义
目的 探讨错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白MLH1、MSH2、MSH6和PMS2在结直肠癌中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化EnVision两步法检测102例结直肠癌组织中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白表达缺失情况,分析蛋白表达缺失与结直肠癌临床病理特征的关系,并对其中20例进行微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)检测.结果 102例结直肠癌有15例(14.7％)发生MMR蛋白表达缺失,MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白表达缺失率分别为12.7％ (13/102)、3.9％ (4/102)、4.9％ (5/102)、10.8％ (11/102).结直肠癌标本中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2的蛋白表达缺失与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移无关(P ＞0.05);MLH1与PMS2蛋白表达缺失与组织学分化高低相关(P＜0.05).进行MSI检测的10例MMR蛋白缺失病例中有2例(2.0％)为高频微卫星不稳定(microsatellite instability-high,MSI-H),其余8例为微卫星稳定(microsatellite stability,MSS);另10例无MMR蛋白缺失的病例微卫星状态均为低频微卫星不稳定(microsatel-lite instability-low,MSI-L)/MSS.结论 免疫组化检测MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的缺失可以用于Lynch综合征的初筛,对结直肠癌患者行MMR免疫组化检测和MSI联合检测可提高Lynch综合征的诊断率.
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126例子宫内膜癌中Lynch综合征的初步筛查
目的 探讨hMSH2、hMSH6、hMLH1、hPMS2蛋白缺失情况和hMLH1基因启动子甲基化状态及Lynch综合征患者的家系分析,初步进行Lynch综合征相关子宫内膜癌筛查.方法 采用免疫组化SP法检测126例子宫内膜癌中hMSH2、hMSH6、hMLH1、hPMS2蛋白表达,并用甲基化特异性PCR检测hMLH1蛋白表达缺失病例的hMLH1基因启动子甲基化状态.结果 免疫组化结果显示22％ (28/126)的病例出现MMR蛋白缺失表达,其中12例hMLH1-/hPMS2-、6例hPMS2-、4例hMSH2/hMSH6-,hMSH6-和hMLH1-各3例,以hMLH1和hPMS2蛋白缺失表达为主.甲基化特异性PCR检测有hMLH1蛋白表达缺失的15例子宫内膜癌中hMLH1基因启动子甲基化状态,证实9例存在hMLH1基因启动子甲基化,提示其为子宫内膜癌的散发性病例.结论 对子宫内膜癌患者行MMR蛋白免疫组化SP法染色,结合甲基化特异性PCR检测hMLH1基因启动子甲基化状态,是初步筛查Lynch综合征的有效策略.
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错配修复蛋白和p53蛋白表达与结直肠癌的临床病理关系及其相关性
目的 探讨错配修复蛋白(mismatch repair protein,MMRP)及p53蛋白在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达,进而分析微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)、p53与CRC临床病理特征的关系及其相关性.方法 采用组织芯片及免疫组化法对980例CRC中4种MMRP及p53进行检测,将4种MMMP中的1种及以上表达缺失定为MSI组,全部阳性表达定为微卫星稳定(microsatellite stable,MSS)组.结果 (1)MMRP表达缺失率为11％,MLH1 、PMS2、MSH2及MSH6的表达缺失率分别为7.3％、7.1％、2.0％及1.9％;其中共同缺失表达类型为MLH1-PMS2、MSH2-MSH6者分别为52例、14例,统计分析结果显示二者均呈正相关(ra=0.712),4种蛋白均缺失者3例.(2) p53阳性率为59.1％.(3)MSI与患者年龄、肿瘤部位、大小、组织学类型、淋巴结转移、临床分期及Ki-67有关(P＜0.05).(4)p53与组织学类型、大体分型、浸润深度、远处转移及Ki-67有关(P＜0.05).(5)MSI与p53呈负相关(rs=-0.118).结论 MLH1、PMS2缺失表达较MSH2和MSH6多见.MLH1与PMS2、MSH2与MSH6常常协同表达或缺失.MSI及p53与CRC临床病理特征关系密切,对预测CRC的风险、恶性程度的评估等具有指导意义.MSI与p53表达呈负相关,提示二者可能参与CRC的不同发生、发展过程.
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微卫星不稳定结直肠癌中COX-2、hMLH1、hMSH2的表达
目的 观察微卫星不稳定(MSI)结直肠癌中的环氧化酶-2(COX-2)、hMLH1和hMSH2的表达.方法 采用PCR法检测42例手术切除结直肠癌和癌旁组织中MSI存在情况,并采用Western blot法分别检测癌旁正常组织、MSI及微卫星稳定(MSS)结直肠癌标本COX-2、hMLH1、hMSH2的表达.结果 42例结直肠癌组织中MSI 18例,MSS 24例.在18例MSI阳性的结直肠癌组织中COX-2和hMLH1低表达率分别为61.11%(11/18)、77.78%(14/18),明显高于MSS组(P＜0.05).结论 hMLH1表达降低可能与MSI发生有关.COX-2、hMLH1在MSI和MSS结直肠癌发生途径中起不同的作用.MSI可以作为结直肠癌分类的参考指标.
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散发性结直肠癌hMLH1和hMSH2蛋白表达
目的研究hMLH1及hMSH2两种错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白在散发性结直肠癌中的表达变化并评估其可能的临床意义.方法应用EnVision免疫组化两步法检测111例散发性结直肠癌中hMLH1和hMSH2的蛋白表达变化,采用Kaplan-Meier曲线、Log-rank检验分析hMLH1蛋白表达变化与患者生存率之间的关系.结果111例散发性结直肠癌中,hMLH1失表达有19例,占17.1%(19/111),hMSH2失表达有2例,占1.8%(2/111),两者之和占总散发性结直肠癌病例的18.9%(21/111).hMLH1或hMSH2蛋白失表达与患者肿瘤部位、组织学类型密切相关.近端结肠、低-未分化腺癌及黏液腺癌中MMR异常表达比例高(P＜0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大体类型、肿块大小、浸润深度、淋巴结转移与否以及患者的Dukes分期均无显著性相关(P＞0.05).癌组织中hMLH1正常表达及失表达患者的5年生存率分别为69.57%及73.68%,8年生存率分别为53.58%及73.68%,8年生存率差别较明显,然差别无统计学显著性(P＞0.05).结论一定比例的散发性结直肠癌中存在MMR基因的缺陷,其中hMLH1所起的作用远远大于hMSH2,hMLH1失表达与否可能成为有意义的远期生存预后指标.
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广东籍中老年人结直肠癌分子遗传学的致癌途径
目的探讨中国广东地区中老年人(年龄>50岁)结直肠癌(CRC)的分子致癌途径.方法应用流式细胞学和免疫组化方法检测60例中老年人CRCs的DNA倍性及p53、hMSH2和hMLH1蛋白表达,结合临床病理学资料,分析它们之间的相关性.结果在60例广东籍中老年大肠癌患者中,有43例(71.7%)为非整倍体DNA的含量,39例(65.0%)出现p53蛋白过度表达,2例(3.3%)丢失了hMSH2或hMLH1蛋白.这组CRC的DNA倍性与p53蛋白表达有关(χ2=5.683, P=0.017),43例非整倍体DNA含量的CRC中,有33例(76.7%)呈p53蛋白过度表达.丢失了hMSH2或hMLH1蛋白的2例CRC,全部为二倍体的DNA含量,均呈p53蛋白的正常表达,另外有15例(25%)肿瘤既未出现非整倍体DNA含量,又未丢失hMSH2或hMLH1蛋白,其中多数(10/15)表达正常的p53蛋白.结论在中国广东地区中老年人CRC中,hMSH2或hMLH1蛋白的丢失率低,多数(71.7%)肿瘤是沿染色体不稳定途径而发展.
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错配修复基因功能缺陷与相关肿瘤发生
肿瘤的发生与基因组不稳定性密切相关,基因组不稳定性可发生于染色体和核苷酸水平[1].
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胃癌组织中hmlH1蛋白表达及其突变的研究
目的 探讨hmlH1基因与胃癌的发生及临床病理特征的关系.方法 应用SP法检测胃癌组织hmlH1蛋白表达;应用激光捕获显微切割技术获取所需细胞,聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)-银染技术检测胃癌hmlH1基因突变.结果 胃窦部胃癌、无淋巴结转移、乳头状及管状腺癌、高分化腺癌及早期胃癌组中hmlH1蛋白表达缺失率与对应组比较显著增高(P＜0.05);胃癌hmlH1基因5个外显子总突变率为6.12%,与胃癌的临床病理特征均无显著相关(P＞0.05);hmlH1蛋白表达阳性胃癌组与hmlH1蛋白表达缺失组的hmlH1基因突变率,无显著性差异(P＞0.05).结论 hmlH1蛋白表达缺失与部分胃癌的发生有关,hmlH1蛋白表达缺失的胃癌有特殊的临床病理特征和发病机制.hmlH1基因突变可能参与胃癌的发生,且可能是引起胃癌中该蛋白表达下调原因之一 .
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错配修复基因异常改变与大肠癌的关系
研究表明,大肠癌(colorectal cancer,CRC)的发生是1个多因素多步骤的过程,是机体的内因与环境的外因相互作用的结果.其中错配修复基因的改变与遗传性和散发性结直肠癌的基因不稳定性有关.本文就错配修复基因异常导致大肠癌的机制及其诊断与治疗的新研究进展做一综述.
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DNA错配修复系统和微卫星不稳定性与结直肠癌
结直肠癌(CRC)是消化系统常见的恶性肿瘤之一.其发生发展涉及到一系列遗传学改变.已有大量的研究证实,微卫星不稳定性(MSI)存在于遗传性非息肉性结直肠癌(HNPCC),部分散发性结直肠癌(SCRC)胃癌等当中,MSI是错配修复基因的异常造成的.DNA错配修复基因的突变可以解释90%以上的HNPCC,少部分的HNPCC肿瘤和散发性MSI+的肿瘤可由其他途径所致,比如基因的甲基化.
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用变性高效液相色谱检测CpG岛胞嘧啶甲基化
目的：建立一种新型的CpG岛胞嘧啶甲基化快速检测方法。方法：用亚硫酸氢钠处理DNA，再用链特异性聚合酶链式反应(PCR)对错配修复基因hMLH1启动子含CpG位点的靶序列进行扩增；利用变性高效液相色谱(DHPLC)在部分变性温度下测定靶序列的保留时间，并与亚硫酸氢钠-酶切法测定结果进行比较。结果：用DHPLC对结肠癌细胞株RKO和胃癌细胞株PACM82的hMLH1启动子进行测定，发现RKO细胞PCR产物的保留时间明显长于PACM82细胞(6.7 min比6.2 min)。RKO细胞PCR产物保留时间延长是亚硫酸氢钠处理后的模板中胞嘧啶和岛嘌呤含量较PACM82高所致。从此结果分析，可以判断出RKO的hMLH1启动子已甲基化，而PACM82细胞未甲基化。此结论与酶切法结果完全一致。结论：新方法可以快速检测CpG岛胞嘧啶甲基化。
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结直肠癌中hMLH1和hMSH2表达的临床意义
目的:探讨结直肠癌中hMLH1和hMSH2蛋白的表达的临床意义.方法:对山东省沂南县人民医院2007年2月-2010年2月间符合中国人HNPCC诊断标准的1 5例结直肠癌患者及同时期40侧散发性结直肠癌患者的结直肠癌组织标本进行hMLH1和hMSH2蛋白检测,并对其临床病理资料进行回顾性分析.结果:15例HNPCC患者发病年龄＜50岁的4人.在结直肠癌发生的部位上,10发生在右半结肠,5例发生在左半结肠.病理类型上管状腺癌3例、黏液腺癌7例、混合癌5例.分化程度上高分化3例、中分化4例、低分化癌8例.HNPCC组中hMLH1/hMSH2蛋白阴性表达共9例,其中有8例癌灶位于右半结肠,7例病理为低分化.散发组中hMLH1/hMSH2蛋白阴性表达共6例.尚未发现hMLH1和hMSH2两种蛋白在同一病例中均为阴性表达者.结论:hMLH1和hMSH2的阴性表达与癌灶部位与病理分化高度相关；可作为HNPCC的临床初步筛查指标之一.
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错配修复基因hMSH2在宫颈腺癌组织中的表达
目的:探讨hMSH2基因在人宫颈腺癌组织中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测36例宫颈腺癌组织中错配修复基因hMSH2蛋白的表达.结果:36例宫颈腺癌组织中10例hMSH2呈阴性(28%),26例为阳性表达(72%),且与肿瘤分化程度相关,分化程度越低阳性率越低(P＜0.05),hMSH2的表达与肿瘤组织学类型和FIGO分期未见明显关系(P＞0.05).结论:hMSH2基因与宫颈腺癌的发生、发展及分化有关.
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回族 Lynch 综合征一家系错配修复基因表达及突变情况分析
目的：分析回族Lynch综合征一家系错配修复基因（ MMR）表达及突变情况，探讨回族Lynch综合征的基因特点。方法先证者男性，37岁，第4代，回族，直肠低分化腺癌。本家系现存6代（均为回族），共有结直肠癌患者14例，在世7例。提取本家系中6例患者及5例正常人外周血及肿瘤组织DNA。采用DNA测序检测肿瘤细胞DNA微卫星不稳定性（MSI），采用免疫组化法检测肿瘤细胞MMR表达，采用PCR技术检测MMR基因突变情况。结果该家系结直肠癌患者肿瘤组织MSI检测均表现为高度微卫星不稳定性（ MSI-H）；肿瘤组织MMR家族中MLH1表达均为阴性；MLH1基因第一外显子存在2个新的错义突变位点c．264G＞T、c．265G＞T，其中c．265G＞T突变导致MLH1基因蛋白质翻译在该位点提前终止。结论回族Lynch综合征家系存在MLH1基因突变，即存在第一外显子错义突变位点c．265G＞T。
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MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子甲基化状态对脑胶质瘤预后的影响
目的 探讨脑胶质瘤DNA修复基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)和错配修复基因(MMR)(hMLH1、hMSH2)启动子甲基化状态及其对患者预后和烷化剂化疗敏感性的影响.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测39例脑胶质瘤和6例正常脑组织MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态,免疫组化方法测定其蛋白表达.绘制Kaplan-merier生存曲线.结果 脑胶质瘤组织MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区甲基化发生率分别为46.2%、10.3%和20.5%,而正常脑组织相应基因启动子区未发生甲基化;三种基因启动子未甲基化模式与其对应蛋白表达模式相似.MGMT基因甲基化的脑胶质瘤患者存活率显著高于未甲基化者(P＜0.05);MMR基因甲基化患者中MGMT基因甲基化与未甲基化者的生存期无统计学差异(P＞0.05).结论 hMLH1、hMSH2及MGMT甲基化是脑胶质瘤发生过程中常见的分子事件;联合检测MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子甲基化状态可判断脑胶质瘤患者的预后及其对烷化剂化疗的敏感性.
