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缺血预处理对大鼠大脑皮质晚期糖基化终末产物受体和Toll样受体4的影响
目的 观察脑缺血预处理(CIP)对大鼠大脑皮质晚期糖基化终末产物受体(RAGE)和Toll样受体4(TLR4)的表达变化.方法 将108只SPF级SD健康雄性大鼠随机分为CIP组、缺血再灌注(I/R)组和假手术纽(Sham 组),每组36只;大鼠建立大脑中动脉栓塞模型后,每组随机选6只于再灌注1d时处死,采用TTC法检测脑梗死体积,之后于再灌注后12h,1、2、3和7d共5个时间点处死大鼠,每个时间点6只,通过RT-PCR法测定RAGE和TLR4 mRNA表达.结果 CIP组大鼠在12h、1、2、3和7d的神经功能行为缺损评分较I/R组明显减低(P＜0.05,P＜0.01).CIP组1d脑梗死体积明显低于I/R组[(19.04±1.65)％ vs (34.55±4.78)％,P＜0.05].CIP、组和I/R组RAGE、TLR4 mRNA表达均显著高于Sham组(P＜0.05),均于1d时达高峰,随再灌注时间延长,两者表达逐渐下降,CIP组较I/R组表达均明显降低(P＜0.05).结论 CIP可使大脑产生缺血耐受,其机制可能与下调I/R损伤时RAGE和TLR4的表达有关.
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糖基化终末产物对人外周血内皮祖细胞数量及功能的影响
目的 观察糖基化终末产物(AGEs)对体外培养的人外周血内皮祖细胞(EPCs)数量及功能的影响.方法 体外培养的人外周血EPCs根据不同AGEs-人血白蛋白(HSA)浓度分为对照组、正常组(终浓度7.5 mg/L)、干预1组(终浓度15 mg/L)、干预2组(终浓度30 mg/L)和干预3组(终浓度60 mg/L).采用密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞;激光共聚焦显微镜检测其对FITC-标记荆豆凝集素-1的吸附和Dil-标记乙酰化低密度脂蛋白进行细胞功能鉴定;加入AGEs后,分别采用MTT法、Boyden小室测定EPCs的增殖、迁移能力;人纤维连接蛋白检测EPCs的黏附能力;用体外血管生成分析试剂盒检测不同浓度AGEs-HsA作用后的EPCs成血管能力.结果 高浓度AGEs可减少EPCs贴壁细胞数量(P<0.01),减弱EPCs的黏附(P<0.01)、增殖(P<0.01)、迁移(P<0.05)和成血管能力(P<0.01).结论 AGEs可减少人外周血EPCs的数量并使其功能受损.
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晚期糖基化终产物对缺氧条件下内皮细胞血管生成能力的影响
目的 明确晚期糖基化终产物(AGE)对缺氧条件下内皮细胞血管生成能力的影响,并探讨其可能机制.方法 将酶消化法分离、培养的大鼠心肌微血管内皮细胞随机分为5组,对照组、AGE组、缺氧组、AGE+缺氧组、抑制剂组.MTT法测定细胞增殖能力;Transwell法检测细胞迁移;管样结构形成实验观察血管生成能力;Western blot检测细胞外信号调节激酶(ERK)5磷酸化水平;ELISA检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌.结果 与对照组比较,缺氧组内皮细胞的增殖、迁移、管样结构形成能力和VEGF分泌水平显著提高.与AGE+缺氧组比较,抑制剂组内皮细胞的增殖、迁移、管样结构形成能力增强,ERK5磷酸化水平明显降低,VEGF分泌水平增加.结论 AGE可抑制缺氧条件下内皮细胞的血管生成能力,其机制可能与ERK5的磷酸化抑制VEGF的表达有关.
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晚期糖基化终产物对心肌细胞p57、p27、p21及hhLIM蛋白表达的影响
目的探讨晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞p577、p27、p21及hhLIM蛋白表达的影响.方法采用酶消化法体外培养乳鼠心肌细胞,实验前换用含1%胎牛血清的DMEM培养液饥饿培养24 h.应用Western蛋白印迹法检测不同浓度AGEs(50 mg/L、100mg/L)对心肌细胞刺激12、24、48 h后细胞中p57、p27、p21及hhLIM蛋白表达情况.结果不同浓度的AGEs刺激心肌细胞12 h均可使p27蛋白表达增加,以50 mg/L浓度作用更为明显,刺激24、48h无影响.AGEs对p57蛋白的表达呈动态变化:刺激12 h时表达下降,24、48 h呈增加趋势.p21蛋白在心肌细胞表达较弱,AGEs对其表达无显著影响.AGEs增加hhLIM蛋白的表达,以50 mg/L浓度作用12 h为显著.结论AGEs通过增加心肌细胞细胞周期素依赖性激酶抑制因子p57和p27蛋白及hhLIM蛋白的表达,参与心室重塑的发生和发展.
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α-硫辛酸抑制糖基化终末产物诱导血管内皮细胞凋亡的研究
目的 研究α-硫辛(ALA)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导血管内皮细胞凋亡的抑制作用及机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,加不同培养液孵育60 min,以人血清白蛋白(HSA)培养液作为对照组,以AGEs-HSA 200 mg/L培养液体外培养60 min为AGEs-HSA组,以ALA 200 μg/ml加入200 mg/L AGEs为ALA组,采用Hoeehst 33258染色检测细胞凋亡,Western blot法检测NF-κB p65核蛋白表达,ELISA法测定天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性.结果 AGEs以浓度依赖方式促进内皮细胞凋亡.与对照组比较,AGEs-HSA组细胞NF-κB p65蛋白表达量明显减低,caspase-3活性明显增高(P<0.05);与AGEs-HSA组比较,ALA组内皮细胞凋亡明显减少,NF-κB p65蛋白表达量明显增加,caspase-3活性明显降低(P<0.05).结论 ALA可能通过增加NF-κB表达,抑制caspase-3激活的AGEs诱导内皮细胞凋亡.
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晚期糖基化终产物对心肌微血管内皮细胞管样结构形成和崩解的影响及机制
目的 研究晚期糖基化终产物(AGEs)对大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)管样结构形成和崩解的影响及其初步机制.方法 分离、培养SD大鼠CMECs,将AGEs-BSA与大鼠CMECs共同孵育,实验分为对照组(只加DMEM培养液)、BSA组(100μg/ml BSA)、AGEs-BSA组(100μg/ml AGEs-BSA).分别在孵育第1、3天时,用管样结构形成实验观察CMECs管样结构的长度,流式细胞仪检测CMECs的凋亡;ELISA法测定CMECs半胱天冬酶3(caspase-3)的活性.孵育1天采用Westem blot法检测CMECs血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白的表达.结果 第1天时,与对照组和BSA组比较,AGEs-BSA组CMECs管样结构的长度明显增加,VEGF蛋白表达显著增加.差异均有统计学意义(P<0.01);而CMECs早期凋亡率及caspase-3的活性,差异无统计学意义(P>0.05).第3天时,与对照组和BSA组比较,AGEs-BSA组CMECs的管样结构长度明显降低,CMECs早期凋亡率及caspase-3的活性显著增加,差异有统计学意义(P<0.01).结论 AGEs-BSA在早期可能通过自分泌VEGF促进CMECs管样结构的形成,晚期可能通过促进CMECs的凋亡,加速管样结构的崩解.
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辛伐他汀抑制糖基化终产物诱导心肌微血管内皮细胞炎性反应及机制探讨
A的表达;Western blot法检测内皮细胞表面特异性受体(RAGE)蛋白表达.结果 与BSA对照组比较,AGEs组MCP-1、ICAM-1、RAGE mRNA及其蛋白表达明显增强,差异有统计学意义(P＜0.05).辛伐他汀预孵则显著抑制AGEs诱导的MCP-1、ICAM-1的表达,并在mRNA及蛋白水平下调RAGE蛋白的表达.结论 辛伐他汀可能通过抑制AGEs-RAGE信号途径来发挥对糖尿痛心肌微血管病变的保护作用.
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晚期糖基化终末产物的血管损伤效应及机制
晚期糖基化终末产物(AGE)是蛋白质、脂质等与糖类发生非酶促反应后形成的一种聚合物,在糖尿病所引起的血管损伤过程中发挥重要作用.大量证据表明,AGE的不断增加和累积与糖尿病增加的大血管以及微血管并发症风险相关[1-5].关于AGE的损伤机制,目前认为它可以通过结合特异性受体、破坏正常的分子构象、促进交联、改变酶的活性、损害受体识别等来影响血管的正常功能.另外,近年来许多研究表明AGE通过影响动脉粥样硬化过程中多种细胞:内皮细胞、血小板、单核/巨噬细胞以及平滑肌细胞等发挥相应的血管损伤效应[6-10].
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晚期糖基化终产物致动脉粥样硬化的作用机制
大量研究逐步确定了高血压、糖尿病、高脂血症、肥胖、吸烟等危险因素与心血管疾病的关系,尤其是糖尿病导致的动脉粥样硬化.目前与糖尿病及动脉粥样硬化关系密切的一个物质就是晚期糖基化终末产物(AGEs).
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糖基化终末产物与急性冠状动脉综合征
糖基化终末产物(AGEs)由体内一些还原糖(如葡萄糖、果糖)与氨基酸结合,经非酶糖化和脂质氧化等一系列反应和结构重排而形成,其在血管壁沉积后町作用于内皮细胞外基质,刺激胶原蛋白发生交联,引起血管通透性增加和血管壁增厚,并可导致血管舒张功能障碍.在血管病变中,AGEs沉积是一个重要因素,其主要通过AGEs受体(RAGEs)起作用 [1].
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糖化血清白蛋白与缺血性脑卒中的研究进展
糖化血清白蛋白(GA)是血中葡萄糖与白蛋白发生非酶促糖化反应的产物,可反映2～3周的平均血糖水平,是临床上用来判断短期血糖控制的重要指标,适用于餐后高血糖症、血糖波动较大的糖尿病患者治疗效果的评价[1].《中国血糖监测临床应用指南》已将GA列为血糖控制的监测内容之一[2].既往研究证实,GA作为一种重要的糖基化产物,与糖尿病肾病、视网膜病变、冠心病及动脉粥样硬化等慢性并发症具有良好的相关性[3-4].随着GA的生理作用逐步被认识,GA与缺血性脑卒中预后及复发风险的评估密切相关,对预测心脑血管事件的发生,具有较高临床价值[5-6].
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皮肤组织晚期糖基化终产物对高血压患者血管弹性功能影响的研究
目的 探讨高血压患者皮肤组织晚期糖基化终产物(AGE)的变化特点及与血管弹性功能异常的相关性.方法 选择高血压患者157例,依据合并疾病分为高血压组62例,高血压合并糖尿病组(合并1组)42例,高血压合并糖尿病及冠心病组(合并2组)53例,同期选择健康体检者32例作为对照组.采用荷兰DiagnOptics公司AGE无创测量装置测定皮肤组织AGE水平,用皮肤自体荧光光谱(AF)值表示；采用法国Complior公司动脉弹性测定仪测定颈-股脉搏波传导速度(cf PWV).结果 与对照组比较,高血压组、合并1组和合并2组的皮肤AF明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01)；合并1组和合并2组cf-PWV明显升高(P＜0.05,P＜0.01).与高血压组比较,合并1组和合并2组皮肤AF明显升高(P＜0.01)；合并2组cf PWV明显升高,差异有统计学意义[(9.27±2.13)m/s vs (11.59±3.36)m/s,P＜0.01].AF与cf-PWV呈正相关(r=0.329,P=0.000).结论 高血压患者皮肤组织AGE水平增高对血管风险评价具有重要意义.
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晚期糖基化终产物受体基因多态性与缺血性脑卒中遗传易感性的相关性分析
目的 探讨晚期糖基化终产物受体(RAGE)基因多态性与缺血性脑卒中遗传易感的关系. 方法 采用病例对照研究方法,选取河南汉族老年人124例缺血性脑卒中患者为脑卒中组,125例同期健康体检者为对照组,利用限制性片段长度多态性分析方法对RAGE基因3个常见的多态性位点82G/S(rs2070600)、-429T/C(rs1800625)和374T/A(rs1800624)进行分型,采用Logistic回归分析方法检查上述多态性位点与缺血性脑卒中易感性的关系. 结果 与对照组比较,脑卒中组体质指数、舒张压、血脂水平明显升高,吸烟比例也明显较高,差异有统计学意义(均P＜0.05).RAGE基因82G/S位点GG基因型占29％,GS占27％,SS占44％;-429T/C位点TT基因型占15％,TC占44％,CC占41％o;-374T/A位点-TT基因型占8％,TA占41％,AA占50％.在对年龄、性别、吸烟、血压等混杂因素进行调整后结果显示,脑卒中组82G/S位点SS基因型及S等位基因频率显著高于对照组(SS:OR=2.14,95％CI:1.37～3.51;S:OR=1.96,95％CI:1.24～3.34),而两组429T/C、-374T/T位点基因型及等位基因频率差异无统计学意义(均P＞0.05). 结论 RAGE基因82G/S位点多态性与河南汉族老年人群缺血性脑卒中发病相关,其中S等位基因是缺血性脑卒中发生的危险因素,而-429T/C和-374T/A位点与缺血性脑卒中遗传易感性无关.
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葡萄籽多酚对糖基化终产物诱导的内皮细胞组织因子表达的影响
目的 观察葡萄籽多酚(GSP)对糖基化终产物(AGEs)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)组织因子(TF)蛋白及其mRNA表达的抑制作用.方法 牛血清白蛋白(BSA)与葡萄糖在体外共同孵育以制备糖基化终产物(AGE-BSA),将培养的HUVEC与不同浓度的GSP(5、15、25μg/ml)预孵育4 h,再加入200 μg/ml AGE-BSA共同培养,分别用流式细胞仪测定TF蛋白表达,用逆转录PCR检测TF mRNA的表达,用激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧簇(ROS)的产生.结果 HUVEC未受刺激时,细胞内活性氧簇(ROS)(0.83±0.23)产生较低,TF蛋白[(4.42±0.69)%]及mRNA(0.0020±0.0008)表达亦较低,而AGE-BSA刺激明显增强了细胞内ROS(3.12±0.31)产生和TF蛋白(42.28±5.80)%及其mRNA(0.2964±0.0403)表达,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).不同浓度GSP预孵育则以剂量依赖性的方式显著抑制了AGE-BSA诱导的细胞内ROS[分别为(2.36±0.34)、(1.88±0.43)、(1.23±0.20)]产生,并下调了TF蛋白[分别为(28.45±2.19)%、(17.49±3.84)%、(8.54±1.57)%)]及其mRNA[分别为(0.0994±0.0231)、(0.0382±0.0073)、(0.0065±0.0010)]表达,P＜0.01.结论 GSP可能通过抑制细胞内氧化应激而影响AGEs诱导的内皮细胞TF生成,改善血管促凝血活性.
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晚期糖基化终产物及其受体在白细胞中表达与老年人精神障碍的关系
目的 探讨血液中晚期糖基化终产物(AGEs)及其受体(RAGE)表达水平与老年人精神障碍性疾病的关系. 方法 将观察对象分为健康对照组31例、阿尔茨海默病(AD)组36例、血管性痴呆组20例、脑血管病所致精神障碍组28例.以荧光分光光度法测定各组血清AGEs水平,以逆转录多聚酶链式反应测定RAGE mRNA水平. 结果 血清AGEs水平在AD组、血管性痴呆组和精神障碍组分别为(477.1±36.2)AU/ml、(512.6±33.2)AU/ml和(415.25±32.5)AU/ml,均明显高于健康对照组(357.4±28.2)AU/ml(F=3.77,P<0.05).RAGE mRNA水平(RAGE/b-actin)分别为1.12±0.34、1.27±0.41和1.18±0.42,亦高于健康对照组的0.92±0.37(F=4.07,P<0.01),但各疾病组间差异无统计学意义(F=0.979,P>0.05).白细胞中RAGE mRNA水平与血清AGEs呈正相关关系(r=0.442,P<0.01). 结论 AD、血管性痴呆、脑血管病所致精神障碍患者血中的AGEs及其受体RAGE mRNA水平均较同龄健康老年人明显升高,AGEs与RAGE的相互作用可能直接或间接参与了老年人精神障碍性疾病的病理变化.
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D-松醇对晚期糖基化终末产物诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的保护机制
目的 研究D-松醇(D-pinitol)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的作用及其机制. 方法 体外培养小鼠主动脉VSMC,应用AGEs建立VSMC糖基化损伤模型,观察不同浓度的D-松醇对VSMC增殖和迁移的影响,应用CCK-8测定细胞增殖,细胞划痕检测细胞迁移,并测定各组细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)、p-smad2、p-smad3、Asporin等蛋白的表达. 结果 AGEs组与对照组比较,Asporin(40.06±4.50比17.47±0.57)、TGF-β1(55.25±2.07比14.42±2.07)、p-smad2(0.97±0.02比0.47±0.02)、p-smad3(0.45±0.01比0.26±0.02)蛋白表达升高(均P＜0.01);与AGEs组比较,不同浓度D-松醇可明显抑制VSMC的增殖和迁移,并下调TGF-β1、p-smad2、p-smad3及Asporin蛋白的表达,且呈浓度依赖性(P＜0.05或P＜0.01). 结论 D-松醇可抑制AGEs诱导的小鼠VSMC的增殖和迁移,Asporin可能通过TGF-β/smad通路参与血管平滑肌细胞外基质重构过程.
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糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子表达的影响
目的 研究糖基化终产物对结缔组织生长因子(CTGF mRNA)及蛋白质表达的影响,探讨糖基化终产物致动脉粥样硬化机制. 方法 采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞.反转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测血管平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA及蛋白质的表达. 结果 随着糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)的干预浓度(100、200、400 mg/L)升高,CTGF mRNA的表达水平呈上升趋势,分别为(0.78±0.03)、(1.15±0.03)、(1.40±0.04)mg/L,与未干预(0.40±0.02)mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度间差异亦有统计学意义(P<0.05).以200 mg/L的AGE-BSA对平滑肌细胞分别干预0、4、8、16、24、48、72 h,发现4 h时CTGF mRNA表达即已升高(0.93±0.04)mg/L,8 h时高(1.29±0.04)mg/L,以后虽略有下降,但仍维持较高水平. 结论 糖基化终产物促进血管平滑肌细胞表达结缔组织生长因子,可能是其致动脉粥样硬化机制中的一个重要方面.
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葡萄籽原花青素对糖尿病大鼠心肌糖基化终末产物受体和结缔组织生长因子的影响
目的 探讨葡萄籽原花青素(GSPE)对糖尿病大鼠心肌糖基化终末产物受体(RAGE)、核转录因子κB(NF-κB)和结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法 将链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠30只随机分为两组,糖尿病未治疗组(糖尿病1组)和糖尿病GSPE治疗组(糖尿病2组,每日给予GSPE 250 mg/kg灌胃)各15只；正常大鼠20只随机分为正常对照组(对照l组)和正常GSPE治疗组(对照2组,每日给予GSPE 250 mg/kg灌胃)各10只,24周后采血检测空腹血糖(FBG)、糖基化终末产物(AGEs),免疫组织化学染色和Western blot测定心肌NF-κB蛋白的表达,并应用Westernblot测定各组心肌RAGE和CTGF的蛋白表达变化.结果 糖尿病1组FBG、血清AGEs含量较对照1组显著升高(P＜0.05),经GSPE治疗后,血清AGEs含量显著降低(P＜0.05),而FBG降低差异无统计学意义；糖尿病1组心肌组织RAGE、NF-κB和CTGF蛋白表达较对照1组显著升高(P＜0.05),GSPE能够显著抑制RAGE、NF-κB和CTGF蛋白表达.结论 GSPE对糖尿病心肌病具有保护作用,其可能机制与抑制糖尿病大鼠AGEs-RAGE、NF-κB和CTGF的表达有关.
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糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响
目的探讨糖基化终产物(AGEs)对大鼠主动脉平滑肌细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)mRNA及蛋白表达的影响.方法将培养的大鼠主动脉平滑肌细胞用不同浓度(100、200、400 mg/L)的AGEs孵育24 h及同一浓度(400 mg/L)AGEs孵育0、12、24、36 h,采用RT-PCR方法及流式细胞仪检测MIP-1αmRNA及蛋白的表达水平.结果对照组平滑肌细胞内MIP-1α呈弱表达,100、200、400 mg/L AGEs培养平滑肌细胞24 h显著增高MIP-1αmRNA的表达,其电泳条带相对积分吸光度值分别为对照组的1.36、1.75、2.45倍(P<0.05);100、200、400mg/LAGEs孵育24 h后,各组平滑肌细胞MIP-1α蛋白的平均荧光强度分别为197±3、260±6 及375±6,分别为对照组(158±4)的1.24、1.63、2.37倍(P<0.05).400 mg/L AGEs培养12、24、36 h后,各组平滑肌细胞MIP-1αmRNA的表达也明显增高,其电泳条带相对积分吸光度值分别为0 h组的1.52、2.38、2.53倍(P<0.05);400mg/L AGEs孵育12、24、36 h后,各组平滑肌细胞MIP-1α蛋白的平均荧光强度分别为244±5、375±6及 425±3,分别为0 h组(170±5)的1.43、2.21、2.49倍(P<0.05).结论糖基化终产物以时间及剂量依赖的方式促进平滑肌细胞MIP-1αmRNA及蛋白的表达.
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吡咯烷类对糖基化终产物诱导的老年大鼠内皮细胞纤连蛋白mRNA表达的影响
目的 观察抗氧化剂吡咯二硫代氨基甲酸乙酯(PDTC)对糖基化终末产物(AGEs)诱导的老年大鼠内皮细胞核转录因子(NF-κB)活性、活化蛋白(AP-1)组成成分c-jun和纤维连接蛋白(Fn)mRNA表达的影响.方法 取24月龄的SD大鼠主动脉内皮细胞进行原代培养,再给予不同剂量AGEs及PDTC继续培养并分为5组,采用荧光免疫化学法检测细胞NF-κB活性和RT-PCR检测细胞c-jun和Fn mRNA的表达.结果 不同剂量AGEs组中,NF-κB活性呈浓度依赖性上升,AGEs 25 mg/L组和50 mg/L组分别为(0.25±0.02)%和(0.42±0.03)%,与未给AGEs对照组(0.04±0.01)%比较,差异有统计学意义(P＜0.05);AGEs还上调了Fn mRNA和c-jun mRNA的表达(P＜0.05).给予PDTC干预后,抑制了AGEs诱导的NF-κB激活,干预后AGEs 25 mg/L组和50mg/L组NF-κB分别为(0.21±0.01)%和(0.22±0.01)%,与干预前比较,差异有统计学意义(P＜0.05);PDTC干预后,AGEs诱导的cjun和Fn mRNA的表达均有所下调.结论 抗氧化剂PDTC通过抑制NF-κB和c-jun途径,下调了AGEs诱导的血管基底膜Fn的表达.
