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  • 新疆地区经典型卡波氏肉瘤相关因素的病例对照研究

    作者:秦江梅;李锋;谭晓华;郭淑霞;王小波;张万江;谢建新;黄瑾;普雄明;芮东升;杨磊

    目的分析新疆经典型卡波氏肉瘤相关危险因素.方法利用新疆8个地州市随访的经典型卡波氏肉瘤病例,按同性别、同民族、年龄相差≤5岁、同一个居住地区配对要求,1:4选取对照,开展病例对照研究,采用条件logistic回归进行统计分析.结果单因素分析显示:白细胞介素、血管内皮生长因子、β2微球蛋白(β2-MG)、新喋呤和8型疱疹病毒(HHV-8)等5个相关因素与经典型卡波氏肉瘤有关系.β2-MG和HHV-8两项危险因素进入了多因素条件logisistic回归模型,其OR值分别为1.002(95%CI:1.000~1.003)、81.041(95%CI:1.790~3669.620).结论β2-MG与经典型卡波氏肉瘤的发生呈正相关关系,HHV-8感染是经典型卡波氏肉瘤独立的危险因素.

  • 新疆某市维吾尔族人类免疫缺陷病毒感染高危人群共感染人疱疹病毒8型的调查

    作者:

    目的 初步分析新疆某市维吾尔族人类免疫缺陷病毒(HIV)感染高危人群共感染人疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV8)的现况.方法 以该市2006年HIV感染高危人群哨点监测资料中全部维吾尔族监测对象(共468例)为研究对象,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清HHV8潜伏期相关核抗原(latency-associated nuclear antigens 1,LANA1)抗体、溶解期抗原开放读码框65(open reading frame 65,ORF65)、K8.1抗体;利用X~2检验、非条件logistic回归分析数据,以P<0.05为有统计学意义.结果 HIV与HHV8共感染率是14.3%(67/468).男性HIV与HHV8共感染率(22.6%,54/239)高于女性(5.7%,13/229)(X~2=27.285, P<0.001);≥124岁组的HIV与HHV8共感染率(15.8%,65/412)高于<24岁组(3.6%,2/56)(X~2=5.987,P=0.014);小学及文盲组HIV与HHV8共感染率(20.7%,40/193)高于初中及以上文化(9.8%,27/275)(X~2=10.999,P=0.001);未婚、已婚/同居、离异/丧偶HIV与HHV8共感染率分别是16.9%(14/83)、12.2%(42/345)、27.5%(11/40),三者间HIV与HHV8共感染率差异有统计学意义(X~2=7.399,P=0.025).有注射吸毒史者的HIV与HHV8共感染率(26.5%,50/189)高十无注射吸毒史者(6.1%,17/279)(X~2=38.083,P<0.001),按照性别分层分析其ORM-H值4.207(95%CI:1.529~11.578);非条件logistic回归分析只有注射吸毒史进入方程,与无注射吸毒史者相比,有注射吸毒史者HIV与HHV8共感染的危险较大(OR=5.544;95%CI:3.081~9.975).结论 新疆某市维吾尔族HIV感染高危人群中有较高的HIV与HHV8共感染率,注射吸毒可能是HIV与HHV8共感染的危险因素,注射吸毒可能是该人群HIV与HHV8共感染的途径之一.

  • 移植相关性Kaposi肉瘤的研究进展

    作者:程恩成;李汉忠

    器官移植后Kaposi肉瘤预后不良,已成为器官移植患者长期生存的严重威胁之一,本文对近年来器官移植后Kaposi肉瘤的研究进展作一综述.

  • 下调let-7微小RNA对卡波西肉瘤相关疱疹病毒裂解复制和丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4及其下游因子的影响

    作者:张进霞;谭晓华;袁震;李燕虎;齐燕;南希;齐明键;高鹤;连福治;杨磊

    目的:探讨下调let?7微小RNA( miRNA)的表达对卡波西肉瘤相关疱疹病毒( KSHV)裂解复制的影响。方法采用miRNA海绵技术抑制let?7 miRNAs的表达,脂质体法将pEGFP?C2?let?7 sponge质粒转染到BCBL?1和293T细胞中。实时荧光定量PCR法检测let?7 miRNAs的表达,丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4(MAP4K4)、环氧合酶2(COX?2)和基质金属蛋白酶13(MMP?13) mRNA的表达以及KSHV开放读码框( ORF)50和ORF72基因DNA复制水平。 Western blot法检测MAP4K4和COX?2蛋白的表达以及 p38丝裂原活化蛋白激酶、细胞外调节蛋白激酶( ERK1/2)和c?Jun氨基末端激酶( JNK)蛋白的表达及磷酸化水平。结果在BCBL?1细胞中,let?7 sponge组中let?7 miRNAs的相对表达水平与空载体组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);在293T细胞中,let?7 sponge组中let?7a、let?7b、let?7c、let?7d、let?7e、let?7f、let?7g和let?7i的相对表达水平与空载体组比较,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。质粒转染 BCBL?1细胞48 h后,空载体组和 let?7 sponge组中KSHV ORF50 DNA的相对复制水平分别为1.00±0.10和2.33±0.18,差异有统计学意义(P<0.001);KSHV ORF50 mRNA的相对表达水平分别为1.08±0.48和3.22±0.27,差异有统计学意义( P<0.001)。空载体组和let?7 sponge组中 KSHV ORF72 DNA的相对复制水平分别为1.07±0.49和1.67±0.45, mRNA相对表达水平分别为1.01±0.19和1.54±0.11,差异均有统计学意义(均P<0.05)。转染质粒48 h后,空载体组和let?7 sponge组中 MAP4K4 mRNA的相对表达水平分别为1.00±0.05和5.73±0.96, COX?2 mRNA的相对表达水平分别为1.00±0.05和2.68±0.19,MMP?13 mRNA的相对表达水平分别为1.00±0.02和2.69±0.25,差异均有统计学意义(均 P<0.001)。 let?7 sponge 组与空载体组比较, MAP4K4和COX?2的蛋白表达水平也明显提高。在 BCBL?1细胞中 let?7 miRNAs 的表达下调时, KSHV ORF50和 ORF72 mRNA 的表达水平增加, KSHV ORF50和 ORF72 DNA 的复制水平增加, MAP4K4、COX?2和MMP?13 mRNA的表达上调。在293T和BCBL?1细胞中,let?7 sponge组的ERK1/2磷酸化水平高于空载体组,但p38和JNK磷酸化水平无变化。结论抑制细胞let?7 miRNAs的表达可激活KSHV复制,其可能是通过上调其靶基因MAP4K4的表达,上调MAP4K4下游因子COX?2和MMP?13的表达水平及ERK1/2磷酸化水平来诱发KSHV的激活,终导致卡波西肉瘤的发生和发展。

  • 以声音嘶哑首发的Castleman病一例并文献复习

    作者:付鑫;王凯忠;闫旭;赵慧

    目的 探讨Castleman病(Castleman(s) disease,CD)的临床诊断及治疗现状,总结临床诊治经验.方法 回顾性分析我院1例以声音嘶哑为首发症状的胸内多中心型CD的临床资料.结果 本例因刺激性咳嗽、咳痰伴声音嘶哑入院,经手术病理检查确诊为透明血管型CD,临床分型为多中心型,术后予糖皮质激素对症治疗,随访1年未见复发.结论 CD的病因及发病机制尚未阐明,目前大量研究证实人类疱疹病毒-8感染和白细胞介素6可能是其主要致病因素,有效治疗措施还有待进一步研究.

  • 三种人类8型疱疹病毒特异性抗原表达及复合抗原血清学检测方法的建立

    作者:王星;何方平;卢晓梅;赵淑君;林仁勇;何斌;温浩

    目的 建立人类8型疱疹病毒(HHV-8)血清学检测方法.方法 利用E.coli系统合成HHV-8三个抗原性较强的融合蛋白:K8.1,ORF65和ORF73 C,作为检测抗原,阳性血清为本地12份卡波西肉瘤患者血清和32份AIDS相关型卡波西肉瘤患者血清;阴性血清为20份皮肤肿瘤患者血清和77份15岁以下儿童血清.以Western印迹及ELISA法确定各重组蛋白免疫原性和该混合抗原ELISA法的敏感度和特异度.结果 获得高纯度的3种8型疱疹病毒特异重组蛋白,均具备较强的抗原特性.应用上述复合抗原ELISA法与传统免疫荧光法共同筛查同批次阳性和阴性血清,发现前者敏感度远高于后者,分别为81.8%和34.4%,特异度则为97.9%.结论 K8.1、ORF65、ORF73 C是建立HHV-8血清学检测方法较佳的候选抗原,有更高的敏感度和特异度.

  • 人类免疫缺陷病毒-1负调控因子通过调控糖原合成酶激酶-3β/β连环蛋白信号通路促进人类疱疹病毒8型病毒白细胞介素6诱导血管生成

    作者:姚水洪;邱惠萍;刘建军;朱小飞;秦娣;严沁;卢春

    目的 探讨糖原合成酶激酶(GSK)3β/β连环蛋白信号通路在HIV 1负调控因子(Nef)蛋白促进人类疱疹病毒8型(HHV-8)病毒白细胞介素6(vIL-6)诱导血管生成中的作用.方法 将GSK-3β突变质粒GSK-3β-S9A、显性负相质粒GSK 3β-DN及其对照质粒pcDNA3.1+分别转染稳定表达HHV-8 vIL-6、HIV-1-Nef以及共表达vIL-6和Nef蛋白的内皮细胞,观察EA.hy 926细胞微管形成;将上述转染质粒的细胞接种鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)检测血管生成情况;Western印迹法检测转染上述质粒的细胞及CAM组织中GSK-3β/β连环蛋白通路中信号分子的表达水平.计量资料两两比较采用t检验.结果 转染GSK-3β-DN降低GSK-3β活性,能增强HIV-1 Nef蛋白促进vIL-6诱导微管形成(3.42比2.51,t=3.67,P<0.01)和血管生成(6.25比3.97,t=4.06,P<0.01)的能力.转染GSK-3β-S9A活化GSK-3β,则能显著抑制Nef蛋白的上述功能(0.62比2.51,t=8.48,P<0.01;0.39比3.97,t=8.59,P<0.01).转染GSK-3β-DN后,细胞或组织中信号通路下游β连环蛋白(细胞中:3.53比2.07,t=6.60,P<0.05;组织中:2.76比1.74,t=17.40,P<0.01)、血管内皮生长因子(VEGF,细胞中:2.68比1.87,t=4.28,P<0.01;组织中:2.20比1.39,t=7.08,P<0.01)的表达升高;转染GSK-3β-S9A后,GSK-3β的磷酸化水平降低(细胞中:0.50比1.47,t=7.33,P<0.01;组织中:0.35比1.97,t=10.72,P<0.01),β连环蛋白(细胞中:1.05比2.62,t=29.50,P<0.01;组织中:0.79比1.77,t=5.72,P<0.01)、VEGF(细胞中:0.74比2.16,t=20.95,P<0.01;组织中:0.43比1.65,t=11.89,P<0.01)的表达也随之减少.结论 GSK-3β/β连环蛋白信号通路参与调控HIV-1 Nef蛋白促进HHV-8 vIL-6诱导血管生成,极可能成为临床治疗艾滋病患者卡波齐肉瘤的一个潜在分子靶点.

  • 人类8型疱疹病毒开放读码框73C基因原核

    作者:何方平;王星;林仁勇;卢晓梅;冯晓辉;张亚楼;张跃新;何斌;温浩

    目的 构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)基因开放读码框(ORF)73C重组原核表达质粒并诱导表达,获得HHV-8潜伏态相关核抗原重组蛋白,并对其免疫活性进行初步鉴定.方法 软件设计引物,分别在引物两端添加特异的酶切位点,以pGEM-Teasy/ORF73质粒为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增ORF73C基因序列,克隆入原核表达载体pET-28a(+),构建原核表达质粒pET28a-ORF73C;转化E.coli DH5α,经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性,转入E.coli BL21(DE3),并诱导表达,以多聚组氨酸亲合层析柱纯化,凝胶蛋白电泳、Western印迹方法行表达蛋白的分析和抗原特异性免疫鉴定.结果 测序结果表明构建的pET28a-ORF73C原核表达质粒连接正确,插入的ORF73C基因片段为453 bp.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表明ORF73C基因成功表达,在相对分子质量20 000处有表达条带Western印迹分析显示重组蛋白能被卡波济肉瘤患者阳性血清识别,具有良好的抗原性.结论 成功构建了pET28a-ORF73C原核表达质粒,获得的纯化HHV-8潜伏态相关核抗原蛋白与卡波济肉瘤患者血清具有特异性识别,显示其作为检测抗原的可能,但其敏感性和特异性则有待进一步的验证.

  • 人类疱疹病毒8型在多中心Castleman病发病机制中的进展

    作者:吴秀娟;普雄明

    多中心Castleman病是一种罕见的通常不可治愈的淋巴结增生紊乱性疾病.其发病机制不清,但现在大多数学者认为与人疱疹病毒8型感染关系密切,并且发现HIV感染的患者较易发生多中心Castleman病,其原因可能是HIV感染的患者人疱疹病毒8的感染率增加.人疱疹病毒8型为一种DNA病毒,多中心Castleman病中可以检测到人疱疹病毒8型及其编码的基因,它们在多中心Castleman病发病机制中起到重要的作用.

  • 人疱疹病毒8型在Kaposi肉瘤发病机制中作用的研究现状

    作者:徐益明;普雄明;杨磊

    人疱疹病毒8型,又称为Kaposi肉瘤相关疱疹病毒,现已明确为一种DNA病毒,参与Kaposi肉瘤的发病机制,其病毒基因引发的细胞增殖,细胞因子的促生长作用及病毒对机体免疫状态的影响均有助于Kaposi肉瘤的发生和发展.但目前其确切发病机制尚不明确.

  • 鳞状细胞癌组织中HHV-8K15等位基因型研究

    作者:李双会;张德志;靳颖;石岩;刘建勇;普雄明

    目的 探讨皮肤鳞状细胞癌和食道鳞状细胞癌患者癌组织中人类疱疹病毒8型(HHV-8)K15等位基因型与肿瘤的发病关系。方法 序列特异性引物-巢式PCR技术检测40例皮肤鳞状细胞癌、40例食道鳞状细胞癌石蜡包埋组织中HHV-8 K15基因,并确定HHV-8 K15等位基因型,运用x2检验对结果进行统计学分析。结果 9例皮肤鳞状细胞癌(22.5%)石蜡包埋组织中检测到HHV-8 K15P型,8例食道鳞状细胞癌(20%)石蜡包埋组织中检测到HHV- 8K15P型,两种肿瘤均未检测出K15M基因型。HHV-8在皮肤鳞状细胞癌与食道鳞状细胞癌感染率组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 鳞状细胞癌中感染HHV-8K15P基因为K15P等位基因型,其发生发展可能与HHV-8的感染有一定的关系。

  • Kaposi肉瘤组织内人类疱疹病毒8型K1基因型的初步分析

    作者:王晓东;王星;王慧;多兰·大力汗;杨克健;帕丽达·阿布利孜;林仁勇;卢晓梅;惠艳

    A5和C7亚型,与非洲和欧洲来源毒株的同源性很高.

  • 人疱疹病毒8型ORF75基因亚型与Kaposi肉瘤的相关性研究

    作者:马春雷;普雄明;吴卫东;张德志;吴秀娟

    目的 探讨人类疱疹病毒8型(HHV-8)ORF75基因亚型,与Kaposi肉瘤不同临床分型及侵袭性的相关性.方法 对25例新疆Kaposi肉瘤石蜡包埋组织进行HHV-8 DNA抽提、扩增及双向测序,使用Clustal W软件和PHYLIP软件包对测序结果进行发生学分析,从而确定HHV-8 ORF75基因哑型.结果 25例Kaposi肉瘤中,21例HHV-8阳性,阳性率为84%,其中7例AIDS相关型Kaposi肉瘤患者HHV-8均阳性.21例HHV-8阳性患者中,18例为HHV-8 ORF75 A亚型,3例为C亚型;不同亚型间Kaposi肉瘤患者有无黏膜损害及临床分型的分布差异均无统计学意义(P>0.05).结论 新疆Kaposi肉瘤患者感染HHV-8 ORF75亚型属于A亚型和C亚型,HHV-8 ORF75不同亚型可能与新疆Kaposi肉瘤黏膜损害及临床分型无关.

  • 人类疱疹病毒8型ORF26基因亚型与Kaposi肉瘤的相关性研究

    作者:吴秀娟;普雄明;吴卫东

    目的 明确Kaposi肉瘤患者感染的人类疱疹病毒8型(HHV-8)ORF26基因亚型分类,初步探讨其与Kaposi肉瘤不同临床分型及侵袭性的相关性.方法 对32例Kaposi肉瘤石蜡包埋组织进行HHV-8 DNA抽提、扩增、双向测序,使用DNAStar软件、Clustal W软件和PHYLIP软件包对测序结果进行系统发生学分析,从而确定HHV-8 ORF26基因亚型,后运用Fisher确切概率法对结果进行统计学分析.结果 32例Kaposi肉瘤中有30例HHV-8阳性,阳性率为93.75%,其中6例艾滋病相关型患者HHV-8均阳性.30例HHV-8阳性患者中,17例为HHV-8 ORF26 A亚型,13例为C亚型.不同亚型间Kaposi肉瘤患者有无黏膜损害及临床分型的分布差异均无统计学意义(P>0.05).结论 Kaposi肉瘤患者感染HHV-8 ORF26亚型属于A亚型和C亚型,不同亚型与黏膜损害及临床分型无关.

  • Kaposi肉瘤组织内人类疱疹病毒8型的K15基因型研究

    作者:张德志;普雄明;吴卫东;靳颖

    目的 了解Kaposi肉瘤组织中人类疱疹病毒8型(HHV-8)K15等位基因型分布情况,并初步探讨Kaposi肉瘤不同临床分型及临床表现与不同HHV-8 K15等位基因型的相关性.方法 采用酚-氯仿-异戊醇法对收集的27例Kaposi肉瘤石蜡包埋组织标本进行病毒DNA抽提,并使用巢式PCR扩增K15基因片段,然后测序并确定其等位基因型.结果 27例Kaposi肉瘤中有22例HHV-8感染为阳性,阳性率为81.48%,其中4例艾滋病-Kaposi肉瘤患者HHV-8感染均为阳性,感染率100%;在分析的22例HHV-8病毒株中,20例为P型,2例为M型;4例艾滋病-Kaposi肉瘤患者感染的均为P型HHV-8,2例M型感染者均为经典型Kaposi肉瘤患者.结论 Kaposi肉瘤组织内HHV-8的K15等位基因型主要是P型,也存在部分M型HHV-8感染者.4例艾滋病-Kaposi肉瘤患者感染的HHV-8均为P型.

  • 湖北地区普通人群卡波氏肉瘤相关疱疹病毒感染的血清学分析

    作者:方勤;刘娟;白志强;康涛;何之恒;胡志红;Shou-Jiang Gao

    卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)可导致人类产生卡波氏肉瘤(KS),即AIDS病人为常见的肿瘤.广泛的流行病学研究显示,KSHV的流行与KS相似并呈现明显的地域分布型.为调查KSHV在汉族普通人群中的感染情况,我们以KSHV ORF65编码的小衣壳蛋白(small capsid protein)为抗原,采用酶联免疫(ELISA)分析方法,对湖北地区560例汉族普通人群血清样品进行了KSHV抗体检测.在检测的560份血样中,KSHV抗体总阳性率为5.2%,其中,男性阳性率为5.7%,女性为4.5%.统计学分析显示,KSHV感染率在男女性别上无差异(P=0.542),但与年龄有一定的相关性:10岁以下儿童群体较之10岁以上人群KSHV感染率具有显著的统计学差异(P=0.006,OR=6.692,95%CI=1.710-26.198);60岁以上的老年人群KSHV感染率有上升趋势,但无统计学明显差异(P=0.052).上述结果表明,KSHV在这一地区的流行与西方成年人群的感染率相似,但在儿童群体中的相对较高的感染率与一些非洲地区的接近.由此提示在该群体可能存在特殊的传播模式.

  • 百色市献血者中人类疱疹病毒8型病毒DNA的PCR检测

    作者:赵丽娟;陈源红;周正东;李晓华;黄干荣;覃艳春;曾怡

    目的 聚合酶链反应检测百色市献血者中人类疱疹病毒8型的感染.方法 取- 80℃冻存的献血者肘静脉血679份,其中男性356份,女性323份.提取DNA,PCR法扩增血液标本中的HHV-8 DNA,PCR产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳,出现369bp条带者为阳性.结果 679份血液标本中有9份标本检出HHV -8 DNA,阳性率为1.33%.其中356份男性献血者的血液标本中检出阳性标本5份,阳性率为1.40%;323份女性献血者的血液标本中检出阳性标本4份,阳性率为1.24%.x2检验分析男性与女性献血者之间的HHV-8 DNA检出率P>0.05.结论 百色市献血者中存在HHV-8感染,不同性别献血者之间的感染率差异无显著性.

  • 人类疱疹病毒8型k12/T0.7基因亚型与Kaposi肉瘤的相关性研究

    作者:关灿彬;张德志;吴秀娟;李婷婷;李幸丽;普雄明

    目的:了解Kaposi肉瘤患者所感染的疱疹病毒8型(HHV-8)k12/T0.7基因亚型分类,初步探索k12/T0.7基因亚型与Kaposi肉瘤不同临床分型的相关性.方法:对30例病理诊断明确的Kaposi肉瘤石蜡包埋组织进行HHV-8 DNA提取、k12/T0.7基因扩增、双向测序.使用DNAMAN软件、ClustalW软件和PHYLIP软件包对测序结果进行系统发生学分析,确定HHV-8 k12/T0.7基因亚型.后用Fisher确切概率法对结果进行统计学分析.结果:30例Kaposi肉瘤中有22例HHV-8阳性,阳性率为73.33%,其中7例艾滋病相关型患者HHV-8均阳性.30例HHV-8阳性患者中,10例为HHV-8 k12 A亚型,12例为A/C亚型.Kaposi肉瘤患者不同亚型间有无黏膜损害及临床分型的分布差异均无统计学意义(P>0.05).结论:Kaposi肉瘤患者感染HHV-8 k12亚型以A亚型和A/C亚型为主,不同亚型与临床分型无关.

  • 人类疱疹病毒7型和8型与扁平苔藓的相关性

    作者:管成飞;王君;史同新;王莹莹

    目的 探讨人类疱疹病毒7型(HHV-7)、8型((HHV-8)与扁平苔藓(LP)之间的相关性.方法 收集临床表现典型 、经病理确诊的20例LP病人为实验组,切取其皮损组织;对照组为同期行美容外科手术的健康者17例,切取其皮肤组织.应用实时荧光定量PCR方法检测两组皮肤组织的HHV-7 DNA和HHV-8 DNA的阳性情况.结果 4例LP病人的皮损组织中检测出HHV-7 DNA,对照组皮肤组织中未检测出HHV-7 DNA,两组比较差异无显著性(P>0.05).所有样本中均未检测出HHV-8 DNA.结论 LP皮损组织可以检测出HHV-7 DNA,但其是否参与了LP的发病机制尚不能确定.HHV-8可能与LP的发病没有相关性.

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