首页 > 文献资料
-
华东农村地区利福平耐药结核病的分子流行病学特征研究
目的 描述华东农村地区利福平耐药结核分枝杆菌(结核菌)的耐药相关分子特征和成簇性规律.方法 以浙江省和江苏省两个农业县结核病防治所一年内所有登记的结核菌检测阳性肺结核病例为研究对象,收集痰标本、培养分离菌株,并进行问卷调查;对培养获得的结核菌株采用比例法进行药敏试验.对获得的65株利福平耐药结核菌株进行rpoB基因利福平耐药决定区和katG基因异烟肼耐药相关热点区测序,采用间隔区寡核苷酸分型(spoligotyping)方法识别北京株,采用IS6110限制性内切酶多态指纹技术(RFLP)对分离株进行基因分型和成簇性分析.结果 92%(60/65)的利福平耐药菌株在利福平耐药决定区531位(57%)、526位(29%)或516位(11%)发生突变,82%(49/60)的rpoB基因突变菌株为耐多药结核菌(MDR-TB);spoligotyping识别H{54株(83%)北京家族菌株;IS6110-RFLP发现共有24株(37%)利福平耐药菌株成簇,形成11个簇,提示簇中病例的结核菌近期传播.所有成簇菌株都为MDR-TB.共有7个簇,簇内菌株具有不完全相同的利福平耐药相关的rpoB基因突变.分析可能与成簇性相关的因素,初治病例在菌株成簇患者中的比例高于在菌株非成簇患者中所占的比例(初治/复治:OR=3.342,95%CI:1.081～10.32).结论 在其他耐药结核菌(如异烟肼耐药结核菌)中进一步产生对利福平的选择性耐药和生长,很有可能是利福平耐药结核病流行的基础,而既往较长的不规则治疗史也为利福平耐药的发生和传播提供条件.
-
Xpert MTB/RIF检测痰标本中结核分枝杆菌的方法学研究
目的 探讨Xpert MTB/RIF检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)的佳实验条件并进行方法学评价. 方法 应用Xpert MTB/RIF检测MBT标准株H37Rv、H37Ra和牛分枝杆菌及20种常见非结核分枝杆菌(NTM)、18种非分枝杆菌病原体和临床分离株,分析Xpert MTB/RIF的敏感性、特异性和重复性,比较不同前处理方法对实验结果的影响,针对仪器出现的报警、错误及无效结果进行相应的处置和总结. 结果 MTB标准菌株H37Rv、H37Ra和牛分枝杆菌Xpert MTB/RIF检测阳性,敏感度为1×102 CFU/ml(在痰标本中的检测极限为106 CFU/ml);20种常见NTM和18种非分枝杆菌病原体检测阴性;标本中含有1％浓度的红细胞、白细胞、血清未对103/ml的H37Rv产生干扰作用;重复试验表明本法批间、批内变异系数均小于15％.100株MTB(其中50株Hain线性探针试验确认存在rpoB基因突变)和20株NTM临床分离株加入阴性临床痰标本制备成为含菌浓度为2×102条/ml的模拟痰标本经Xpert MTB/RIF检测均相符.在SR处理液加入半胱氨酸的改良直接法前处理痰液Xpert MTB/RIF检测出现“错误+无效”的比例显著低于沉淀处理法和直接法前处理的痰标本(x2值分别为4.19和6.74,P＜0.01). 结论 Xpert MTB/RIF灵敏、特异、快速、简便,可用于MTB和利福平耐药MTB的快速检测,但仍存在错误和无效检测而影响实验结果,应采取有效措施予以避免.
-
结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特征研究
目的：了解郑州市结核分枝杆菌耐利福平临床分离株的相关耐药rpoB基因突变特征。方法应用PCR方法对40株结核分枝杆菌利福平耐药、40株结核分枝杆菌利福平敏感临床分离株及1株H37Rv结核分枝杆菌标准株中包含“利福平耐药决定区（RRDR）”在内的rpoB基因片段（385bp）进行扩增，并将扩增产物进行测序，以H37Rv结核分枝杆菌标准株的DNA序列作为参比序列，分析结核分枝杆菌临床分离株的突变特征。结果40株结核分枝杆菌利福平敏感临床分离株及1株H37Rv结核分枝杆菌标准株均未检测到突变，结核分枝杆菌耐利福平临床分离株中有36株检测到突变，突变率92．3％，且突变均位于RRDR区域内；突变位点为8个，共有8个突变类型；常见的突变热点依次为531位点，该位点突变率为64．1％；526位点，其突变率为12．8％和516位点，其突变率为10．3％。结论rpoB基因是郑州市结核分枝杆菌对利福平耐药的相关基因，其中在RRDR内的531位点基因突变率高，并可通过对rpoB基因的突变检测，对耐多药结核病进行预测。
-
利用寡核苷酸芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB基因突变
目的:开发快速检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB寡核苷酸突变的基因芯片.方法:根据结核杆菌rpoB基因序列设计探针和引物并制备基因芯片,从临床痰标本中提取结核菌的基因组DNA,PCR扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段,荧光标记后与芯片上的特异性寡核苷酸探针进行杂交,同时与DNA测序法比较.结果:22株临床痰标本有18株可用寡核苷酸芯片检测出来,正确率可达82%;患者痰液中少量DNA足够进行芯片检测,无须细菌培养.结论:利用寡核苷酸芯片检测结核菌对利福平的耐药性具有较高的准确性和敏感性,可以应用于临床耐药性诊断.
-
GeneXpert MTB/RIF技术在结核性胸膜炎临床诊断中的应用价值
目的 评价GeneXpert MTB/RIF技术在结核性胸膜炎临床诊断中的应用价值.方法 选取2015年1月至2017年6月本院收治的165例结核性胸膜炎患者作为试验组,同期154例非结核性胸膜炎患者作为对照组,两组患者均进行抗酸染色涂片、GeneXpert MTB/RIF、TB-DNA、BACTEC MGIT 960培养.并对BACTEC MGIT 960液体培养阳性的标本进行药敏试验.比较各种检测方法在结核性胸膜炎临床诊断中的灵敏度和特异性.结果 GeneXpert MTB/RIF、BACTEC MGIT 960液体培养、抗酸染色涂片、TB-DNA检测胸腔积液中结核分枝杆菌的灵敏度分别为72.1%、21.2%、11.5%、38.8%,特异性分别为100%、100%、96.8%、98.7%.GeneXpert MTB/RIF检测的敏感性均显著高于BACTEC MGIT 960液体培养、抗酸染色涂片、TB-DNA检测(χ2=85.9,P<0.05;χ2=124.5,P<0.05;χ2=37.1,P<0.05).以BACTEC MGIT 960液体培养药敏结果作为金标准,Gene Xpert MTB/RIF检测利福平耐药结核性胸膜炎的灵敏度为70%,特异性为88%.结论 GeneXpert MTB/RIF检测方便高效,具有较高灵敏度和特异性,对快速诊断结核性胸膜炎及利福平耐药情况判定具有较高的价值.
关键词： GeneXpertMTB/RIF 结核性胸膜炎 利福平耐药 -
两小时内快速检测结核分枝杆菌及是否利福平耐药
目的：研究同时检测患者是否结核，以及是否对利福平耐药，对涂阴培阳病人具有非常高的敏感性和特异性，两小时内即可得到检测结果，所用仪器设备简单。
关键词： 结核 利福平耐药 Gene xpert检测试剂盒 -
耐药结核分枝杆菌感染动物模型所用菌株的筛选
本研究通过小鼠体内实验检测我国部分地区结核分枝杆菌耐药菌株的毒力，以筛选耐药结核分枝杆菌感染动物模型所用菌株。收集从我国部分省份98例结核病患者痰培养液中分离出的结核分枝杆菌，用比例法药敏试验进行结核分枝杆菌一线和二线药物的药敏试验，筛选出对二线药物敏感而对一线药物利福平或异烟肼耐药或敏感的菌株，然后进行小鼠体内毒力实验，对异烟肼耐药相关基因 katG和利福平耐药相关基因rpoB测序并进行基因突变分析。从98株菌中筛选出药物敏感谱清晰的40株，进行小鼠体内毒力实验。结果显示，共35株半数死亡时间≤H37Rv的半数死亡时间，其中18株耐利福平合并耐异烟肼、5株单耐利福平，7株单耐异烟肼、5株对利福平和异烟肼均敏感。通过小鼠毒力研究，分别筛选出基因背景清晰，半数死亡时间≤7d的耐利福平合并耐异烟肼的菌株1株、半数死亡时间≤7d单耐利福平和异烟肼的菌株各1株，作为耐药结核分枝杆菌感染小鼠模型所用菌株及进一步进行豚鼠等其他动物模型感染用候选菌株。
-
DNA芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB基因突变
目的 建立快速检测结核分枝杆菌利福平(RFP)耐药rpoB基因突变的DNA芯片.方法 从34株临床痰样本中提取结核分枝杆菌的基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段,荧光标记后与芯片上含有特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,同时与DNA测序法比较.结果 用DNA芯片检测出19株耐药株和15株敏感株,且结果与DNA测序相同,准确率可达88.2%,敏感性为78.9%,特异性为100.O%.结论 DNA芯片快速检测结核分枝杆菌对RFP的耐药rpoB基因突变是一种操作简便、准确性、敏感性和特异性较高,且易于开展的方法.
-
Xpert MTB/RIF、荧光染色镜检、改良罗氏培养在肺结核实验室诊断中的应用
目的 评价Xpert MTB/RIF、荧光染色镜检、改良罗氏培养在肺结核实验室诊断中的应用价值.方法 收集2015年1月至2016年8月在北京市昌平区结核病防治所门诊1967例初诊被怀疑为肺结核的患者的痰标本,每例患者至少留取两份合格痰标本,实验室人员对每份痰标本均进行涂片镜检和固体培养,选择其中一份痰进行Xpert MTB/RIF检测;培养阳性菌株完成对硝基苯甲酸(P-nitrobenzoic acid,PNB)初步菌种鉴定,对鉴定为结核分枝杆菌的菌株采用比例法进行利福平药敏试验.结果 720例确诊肺结核患者中,涂片镜检、固体培养和Xpert MTB/RIF检测的灵敏度分别为18.06％(130/720)、26.94％(194/720)和36.25％(261/720).Xpert MTB/RIF检测诊断肺结核病的灵敏度显著高于涂片镜检(χ2=60.25,P<0.01)和固体培养(χ2=14.42,P<0.01).以比例法药敏试验结果为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的灵敏度和特异度分别为100％(10/10)和96.97％(160/165).结论 Xpert MTB/RIF检测灵敏度和特异度较高,可更好的为临床肺结核病早期诊断及指导患者用药提供实验室依据.
关键词： 结核分枝杆菌 Xpert MTB/RIF 利福平耐药 诊断 -
株洲地区北京基因型结核分枝杆菌感染与利福平耐药的相关研究
目的 研究北京基因型结核分枝杆菌(MTB)感染的易感因素及其与利福平耐药的相关性. 方法 收集株洲市2014年5月至2016年8月痰抗酸染色阳性肺结核患者156例痰标本,对MTB进行分离培养与菌种鉴定.培养阳性菌株行DNA提取,运用RD105缺失基因检测法鉴定北京基因型MTB、Xpert MTB/RIF检测法鉴定耐利福平MTB,分析性别、年龄、糖尿病、复治患者以及利福平耐药与北京基因型的关系.结果 156例痰标本中培养出分枝杆菌150株,其中MTB菌株142株,非MTB菌株8株.女性患者的北京基因型MTB(38/68,55.8%)的比例明显高于男性患者 (13/74,17.5%),复治患者北京基因型MTB(26/55,47.2%)比例明显高于初治患者(18/87,20.6%),糖尿病患者北京基因型MTB(32/61,52.4%)比例明显高于非糖尿病患者北京基因型MTB(19/81,23.4%),年龄≥55岁的患者北京基因型MTB(31/60,51.6%)明显高于年龄≤30岁的患者 (4/30,13.3%),差异均有统计学意义(P<0.05).在耐利福平菌株中北京基因型MTB(40/48,83.3%)明显高于非耐利福平菌株中北京基因型MTB(11/94,11.7%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 女性、高龄、并发糖尿病、复治,可能是感染北京基因型MTB的危险因素.北京基因型MTB与利福平耐药有明显相关性.
关键词： 分枝杆菌 结核 RD105 利福平耐药 XpertMTB/RIF -
Xpert MTB/RIF检测结核杆菌的应用效果及对患者用药影响
目的 探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)对肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌利福平耐药的应用效果及对患者用药影响.方法 收集我所2014年1月-2017年6月肺结核患者痰标本1200例进行药敏试验;诊断为耐多药肺结核患者100例,按随机数字法分为Xpert MTB/RIF组和比例法组,每组50例,Xpert MTB/RIF组患者根据Xpert MTB/RIF药敏试验结果指导用药,比例法组患者根据比例法药敏试验结果指导用药.收集药敏试验结果和抗结核治疗疗效.结果 比例法检出利福平耐药410例,耐药率34.2％,Xpert MTB/RIF法检出利福平耐药422例,耐药率35.2％;Xpert MTB/RIF法检测利福平耐药的灵敏度、 特异度、 阳性预测值、 阴性预测值分别为100.0％(410/410)、98.5(778/790)、97.2％(410/422)、100.0％(778/778),Kappa值为0.978.比例法耐药410例患者中377例异烟肼耐药,筛查耐多药结核分枝杆菌的灵敏度、 特异度、 阳性预测值、 阴性预测值分别为100.0％(377/377)、96.0％(790/823)、92.0％(377/410)、100.0％(790/790),Kappa值为0.938.Xpert MTB/RIF组和比例法组治疗3个月和治疗6个月痰菌转阴率比较差异无统计学意义(P>0.05).治疗6个月时,肺部空洞治疗有效率和病灶吸收好转率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 Xpert MTB/RIF法检测快速,能够准确检测利福平的耐药性,可作为耐多药结核分枝杆菌的快速筛查手段,用于指导肺结核的治疗.
关键词： XpertMTB/RIF 结核分枝杆菌 利福平耐药 应用效果 -
结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术在肺结核快速诊断中的应用价值
目的 探讨Xpert MTB/RIF检测肺结核及利福平耐药性的应用价值.方法 收集200例疑似肺结核患者的痰标本,进行痰涂片抗酸染色显微镜镜检、改良罗氏固体培养、比例法药敏试验和Xpert MTB/RIF检测,分析Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌及其利福平耐药性的敏感度和特异度,与“金标准”进行一致性检验.结果 以改良罗氏固体培养为“金标准”,Xpert MTB/RIF检测痰标本MTB的敏感度和特异度分别为88.30％和87.74％;以痰涂片抗酸染色法为“金标准”,Xpert MTB/RIF检测痰标本MTB的敏感度和特异度分别为88.18％和100.00％;以比例法药敏试验为“金标准”,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为83.33％和100.00％;Xpert MTB/RIF法和改良罗氏固体培养、痰涂片抗酸染色法、比例法药敏试验均具有较好的一致性(K值分别为0.76、0.87、0.77).结论 Xpert MTB/RIF在肺结核快速诊断中具有较高的诊断效能,在我国结核病实验室中具有较好的应用前景.
-
3种结核病快速诊断新技术与传统方法的对比分析
目的 探讨3种诊断技术对结核病及耐药结核病的应用价值.方法 使用LED法、Xpert MTB/RIF、固体培养检测259例疑似结核病患者痰标本,比较各方法的阳性率、灵敏度与特异度;142份菌株使用比例法、Xpert RIF与线性探针检测利福平耐药,比较2种方法与比例法的差异.结果 259例痰标本中,固体培养、LED法、Xpert MTB阳性率分别为54.83％、44.79％、55.60％,平均时间为32.6 d、0.5h、2.5h;以固体培养阳性的142例为金标准,LED法、Xpert MTB阳性数分别为109例、129例,灵敏度为76.76％、90.85％,特异度为94.02％、87.18％.对142例菌株进行药敏试验,利福平耐药菌株34例,时间为28 d;以34例为金标准,Xpert RIF、线性探针检测利福平耐药符合率分别为94.12％、91.18％,时间为2.5h、8h.结论 3种检测技术对结核病及耐药结核病的诊断具有灵敏性高、特异性高、检测时间短等特点,在临床中有很好的应用前景与推广价值.
关键词： 结核分枝杆菌 LED荧光 Xpert MTB/RIF 线性探针 利福平耐药 -
Xpert MTB/RIF技术对结核分枝杆菌检测和耐多药结核快速筛查的研究
目的 探讨Xpert MTB/RIF技术检测涂阳痰标本结核分枝杆菌和利福平耐药性的效能,分析该技术在不同利福平耐药率患者中进行耐多药结核诊断的应用价值.方法 连续纳入769例涂阳肺结核患者的痰标本,分别进行涂片镜检、固体培养、分枝杆菌初步菌型鉴定、比例法药敏试验和Xpert MTB/RIF检测.结果 Xpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌的灵敏度为98.15％,特异度为70.00％.检测利福平耐药性与比例法药敏结果比较,Kappa值为0.859,灵敏度为93.04％,特异度为95.71％,复治涂阳患者特异度低于初治涂阳患者,阳性预测值和阴性预测值分别为85.47％和98.07％.结论 Xpert MTB/RIF技术能够陕速检测出涂阳痰标本中结核分枝杆菌和利福平耐药性,具有较高的灵敏度和特异度.在云南省用于耐多药结核病患者快速筛查时,优先用于利福平耐药率较高的定点医院以及罹患耐多药高危人群.
关键词： 结核分枝杆菌 Xpert MTB/RIF技术 利福平耐药 耐多药结核病 -
南阳市耐多药结核(MDR-TB)rpoB基因突变分子特征研究
目的 研究南阳市耐多药结核菌(MDR-TB)利福平耐药相关的rpoB基因突变分子特征.方法 特异性扩增172株MDR-TB rpoB基因耐药决定区(81 bp)并进行基因测序.结果 有157株(91.2％)在耐药决定区发生了突变,常见的三种突变类型是531(TCG-TTG),526(CAC-GAC)和533(CTG-CCG),突变率分别为41.3％,11.6％和10.5％.结论 rpoB基因耐药决定区(81 bp)的基因突变是引起南阳市结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因.
-
合肥地区结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征研究
目的:了解合肥地区结核分枝杆菌利福平(RFP)耐药株rpoB基因突变特点.方法:应用PCR -直接测序法对合肥地区肺结核病人痰液中分离的90株结核分枝杆菌的rpoB基因629 bp(包括rpoB基因利福平耐药决定区(RRDR)的81 bp)序列进行测定分析.结果:90株结核分枝杆菌中69株对RFP耐药,21株对RFP敏感；69株耐利福平临床分离株中53株发生rpoB基因突变,突变率为76.8％；突变发生在531位丝氨酸的31株,发生率为44.9％,发生在526位组氨酸的8株,发生率为11.6％；还有6株发生了联合突变,发生率为8.7％.21株敏感株中1株rpoB基因发生突变,突变位点是533位亮氨酸.结论:合肥地区结核分枝杆菌利福平耐约基因rpoB基因的RRDR发生了突变,其中531位丝氨酸和526位组氨酸是常见的突变位点.
-
rpoB基因突变与结核分枝杆菌利福平耐药相关性研究
目的 探讨临床患者痰标本中分离的结核分枝杆菌rpoB基因突变与利福平耐药之间的关系. 方法 对115株结核分枝杆菌应用L-J药敏培养法,检测对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的耐药情况；根据rpoB基因序列设计包含利福平耐药决定区(RRDR)的扩增引物,PCR法进行扩增,运用生物信息学方法对耐药决定区扩增产物序列进行比对分析,对耐药株与非耐药株基因突变率进行统计学分析. 结果 115株结核分枝杆菌经比例法药敏试验,RIF耐药株53株,占所有菌株的46.09％；53株RIF耐药株中39株rpoB基因存在不同位点的变异,突变率为73.58％,突变位点包括531、526、522、516、513、511,主要的突变位点集中在531位,引起氨基酸呈Ser531Gln、Ser531Leu、Ser531Trp 3种形式改变；RIF敏感株62株,其中有2株检测到rpoB基因的突变,敏感株与耐药株突变率经McNemar统计检验,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 岳阳地区rpoB基因变异与利福平耐药呈高度相关,rpoB基因主要的突变位点位于531位和526位.
-
利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)快速诊断淋巴结核及其耐药性
目的 探讨Xpert MTB/RIF试验在诊断淋巴结核及其对利福平耐药的意义.方法 选取156例疑似脓肿性淋巴结核患者的脓液分别进行960液体变色培养基培养、涂片镜检、传统比例法药敏试验以及Xpert MTB/RIF试验检测,分析Xpert MTB/RIF试验检测MTB及其耐药性的敏感性和特异性.结果 以液体变色培养基培养试验作为金标准,Xpert MTB/RIF试验检测淋巴结核的敏感性和特异性分别为(95.42%,84.00%),Kappa值为0.77,两者一致性较好.以传统比例法药敏试验为金标准,Xpert MTB/RIF试验检测利福平耐药的敏感性和特异性分别为(70.0%,98.42%)两种方法检测结果比较差异无统计学意义.结论 Xpert MTB/RIF试验检测淋巴结核及其耐药性与传统的检测方法比较具有较高的敏感性和特异性,并且检测时间短、及时的优点.
关键词： 淋巴结核 利福平耐药 敏感性 特异性 XpertMTB/RIF -
一次性完成结核分枝杆菌鉴定与利福平耐药突变基因检测的新方法
目的 建立一种可同时进行结核分枝杆菌鉴定并检测结核分枝杆菌利福平耐药突变基因的分子方法.方法 以“TGTTCTTCAAGGAGAAGCG”、“TCGTCGGCGGTCAGGTA”为上下游引物对101株结核分枝杆菌复合群及52株非结核分枝杆菌临床分离株进行rpoB基因扩增及序列测定,并应用BLAST数据库和DNAMAN软件进行菌种与rpoB基因突变分析.结果 在153例分枝杆菌临床分离株中,104例鉴定为结核分枝杆菌复合群,49例被鉴定为非结核分枝杆菌,与16SrDNA基因序列鉴定方法符合率为96.73％,与传统分枝杆菌菌种鉴定方法符合率为83％;在104例鉴定为结核分枝杆菌复合群菌株中,54例被检测到rpoB基因突变,与比例法检测利福平耐药表型的符合率为96.15％.结论 应用本引物进行rpoB基因序列分析可以一次性完成结核分枝杆菌鉴定与利福平耐药突变基因检测工作,有较大的临床应用价值.
-
GeneXpert MTB/RIF技术在肺结核诊断及利福平耐药检测中的意义研究
目的 探讨GeneXpert MTB/RIF技术在肺结核诊断及利福平耐药检测中的意义.方法 选取我院120例疑似结核病患者,根据临床诊断结果将其均分为结核组和非结核组,两组患者均进行GeneXpert MTB/RIF实验、T-spot实验、液体培养以及药敏试验,比较各项检测的敏感性和特异性.结果 GeneXpert MTB/RIF法、T-spot、痰涂片、液体培养检测结核分枝杆菌敏感性分别为71.67％、66.67％、51.67％、53.33％,特异性分别为96.67％、95.00％、96.67％和100.00％,其中GeneXpert MTB/RIF法检测的敏感性明显高于痰涂片、液体培养法(P均＜0.05).与传统药敏试验比较,GeneXpert MTB/RIF检测利福平耐药结核病的敏感性和特异性分别为83.33％、90.00％.结论 GeneXpert MTB/RIF技术在肺结核诊断及利福平耐药检测中具有较好的敏感性和特异性,值得推广.
