首页 > 文献资料
-
大肠杆菌分泌表达重组人肝再生增强因子的纯化、鉴定与活性研究
目的建立一种大肠杆菌分泌表达型重组人肝再生增强因子(rhALR)的纯化工艺,并对产品进行鉴定和活性研究.方法通过沉淀、色谱等方法的条件优化,建立纯化工艺,通过电泳、HPLC、N-末端氨基酸测序、免疫杂交、同位素掺入、全波长扫描等方法对纯化产品进行鉴定和活性测定.结果建立了rhALR的纯化工艺路线,40%(NH4)2SO4沉淀,Butyl-S FF疏水色谱,CM-S FF离子交换色谱,Superdex-75分子筛色谱纯化,重组蛋白质的纯度大于95% .该蛋白质稳定存在的形式为二聚体,其单体的相对分子质量为15 000.该蛋白质结合辅酶黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD),对损伤后的肝细胞具有明显的促进作用,明显优于以包涵体形式表达的rhALR.结论从大肠杆菌分泌表达体系能分离纯化得到高纯度、具有生物学功能和活性的rhALR,是潜在的临床治疗肝病药物.
-
大孔树脂纯化胡柚皮总黄酮的工艺研究
目的 研究胡柚皮总黄酮的大孔树脂纯化工艺.方法 通过对8种不同型号大孔树脂进行静态吸附与解吸实验,优选合适的大孔树脂,并优化分离纯化条件.结果 HPD-300型大孔树脂对胡柚皮总黄酮有较好的吸附和洗脱效果,其佳分离纯化条件如下:pH 4.0,3.83 mg.mL-1上样液,上样量为5 mL.g-1,上样体积流量为2.0 BV.h-1,依次用2 BV的水洗脱,4 BV 70％乙醇洗脱,洗脱剂的流速为2 BV.h-1.经HPD-300树脂处理后的总黄酮质量分数达76.21％,收率为93.94％.结论 HPD-300型大孔树脂用于富集胡柚皮总黄酮效果佳,是一种理想的分离纯化介质.
-
毛连菜总酚含量测定和纯化工艺研究
目的 建立毛连菜总酚的含量测定方法,并优选其大孔吸附树脂纯化工艺.方法 采用紫外-可见分光光度法测定毛连菜总酚的含量,以吸附量、解吸率、解吸量等指标优选毛连菜总酚的大孔吸附树脂富集纯化工艺.结果 所建立的质量控制方法的精密度、重复性和稳定性良好,其RSD均＜3.0％.优选出了HP-20树脂对毛连菜总酚有较好的吸附、解吸性能,佳工艺:上样的毛连菜水溶液总酚浓度为8.54 mg·mL-1,上样体积为1 BV,控制流速为2 BV·h-1.先用水和10％乙醇洗去杂质,用量各4 BV,收集4 BV的30％乙醇和3 BV的50％乙醇洗脱液,浓缩,即得.结论 本实验建立的质量控制方法简单、准确,经HP-20树脂分离纯化,毛连菜总酚的纯度可达87％以上,且工艺稳定.
-
正交试验法优选前列宁胶囊的壳聚糖纯化工艺
[目的]筛选前列宁胶囊的佳壳聚糖纯化工艺。[方法]采用天然絮凝剂壳聚糖纯化前列宁胶囊，运用正交设计，以浸膏得率、多糖保留率、大黄素为指标，考察壳聚糖浓度、反应温度、pH值和静置时间等影响因素，综合评价，筛选其佳纯化工艺。[结果]佳纯化工艺参数为：壳聚糖浓度20％，反应温度60℃，反应液pH＝6，静置时间24h，提取液的出膏率大大降低。[结论]采用壳聚糖澄清剂纯化前列宁胶囊除杂效果好，制剂质量稳定。
-
白背叶总黄酮提取纯化工艺研究
目的 优选白背叶总黄酮类成分的提取、纯化工艺条件, 为白背叶中总黄酮工业生产提供科学依据.方法 以白背叶总黄酮含量为指标, 采用单因素试验及正交实验设计方法, 确立白背叶总黄酮类成分佳提取工艺;以总黄酮纯度和收率为指标, 采用聚酰胺树脂 (80～100目) 考察样品吸附浓度、吸附量、吸附液p H、洗脱溶剂等因素, 确定其佳纯化工艺.结果 白背叶佳提取工艺为50％乙醇提取, 料液比为1∶70, 加热回流提取2次, 每次1 h, 提取得到白背叶总黄酮含量为4.040％;调节白背叶提取液p H4, 浓度为4 mg/ml, 上样量为1 BV, 先用8/5 BV水洗脱除杂, 再用90％乙醇洗脱至澄清.纯化后白背叶总黄酮含量为50.32％, 收率为92.74％.结论 该工艺简便快捷、成本低、毒性小、选材可重复使用, 适合工业化生产.
-
大孔树脂富集纯化腺梗豨莶草总萜工艺
目的 优化大孔树脂富积纯化腺梗豨莶草总萜工艺.方法 以总萜类成分吸附量和解吸附率为考察指标,通过静态吸附、动态吸附-解吸附试验筛选出优树脂型号;并考察其纯化工艺.结果 DM130的静态比吸附量为4.33 mg/g,动态吸附量为3.41 mg/g,动态解吸附率为86.70％.佳工艺条件为:用2 BV 1.73 mg/ml样品溶液上样.吸附完全后,用2 BV蒸馏水淋洗,4 BV 80％乙醇溶液洗脱,纯化后总萜的质量分数为26.68％,平均收率为94.92％.结论 DM130大孔树脂可用于腺梗豨莶草总萜类化合物的纯化,工艺简便、稳定可行,适用于工业化生产.
-
AB-8大孔吸附树脂同时分离纯化茶树根总黄酮、总皂苷工艺研究
目的 研究AB-8大孔吸附树脂纯化茶树根总黄酮、总皂苷的工艺条件.方法 以总黄酮、总皂苷的吸附率和转移率为指标,考察吸附药液质量浓度、药液pH、药材树脂比、洗脱乙醇体积分数、乙醇洗脱用量等影响因素.结果 吸附药液质量浓度0.3 g·m1-1,药液pH=6,药材树脂比1∶2,依次用12BV水洗,10 BV 30％乙醇洗脱得总黄酮,10 BV 70％乙醇洗脱得总皂苷.结论 采用大孔吸附树脂AB-8可较好地纯化茶树根总黄酮与总皂苷,纯化后茶树根总黄酮含量、总皂苷含量均达60％以上.
关键词： AB-8大孔吸附树脂 茶树根 总黄酮 总皂苷 纯化工艺 -
北败酱总黄酮的纯化工艺研究
目的 优选北败酱总黄酮的纯化方法.方法 以总黄酮含量为考察指标,选择大孔树脂、上样量、洗脱剂、洗脱速度及吸附时间五个因素,采用L16(45)正交试验安排试验,优选北败酱总黄酮佳纯化工艺.结果 影响北败酱总黄酮含量的主要因素是洗脱溶剂,其次是不同类型大孔树脂,佳纯化方法为大孔树脂D-101,50％乙醇洗脱,10ml上样量,吸附20 min,洗脱速度2.5 ml·min-1.结论 按照佳纯化工艺纯化北败酱总黄酮,总黄酮含量可达到65.7％.
-
阳离子交换树脂法不同洗脱剂纯化苦参总碱的工艺研究
目的 考察阳离子交换树脂法中不同洗脱荆对苦参总碱的纯化效果,优选佳纯化工艺.方法 以苦参碱、氧化苦参碱和总生物碱的洗脱率作为考察指标,分别考察洗脱剂(氨水、氨性乙醇、盐酸、氯化钠溶液)对苦参总碱纯化精制的影响,并优选佳工艺参数.结果 四种洗脱荆对苦参总碱的纯化效果差异较大:3 mol·L-1氯化钠溶液效果优,盐酸溶液次之,氨性乙醇溶液居中,氨水溶液差.结论 以氯化钠溶液作为洗脱剂纯化苦参总碱时效率较高,简便、快捷,可用于苦参总碱的纯化.
-
大孔树脂纯化马兰总三萜工艺研究
目的 研究大孔树脂纯化马兰总三萜的工艺.方法 以齐墩果酸为对照品,以吸附量和解吸率作为效果评定指标,筛选出对马兰中总三萜纯化效果好的大孔树脂,并对上样量、上样液浓度、洗脱速率、洗脱乙醇浓度及用量参数进行考察,筛选出佳工艺条件.结果 HPD-500的吸附量为0.495 5 mg/mL,解吸率为30.47％,效果佳;佳上样液浓度:0.02 g/mL;流速:2 mL/min;洗脱剂:70％乙醇;洗脱体积:2倍柱体积.纯化后马兰三萜含量可达到17.81％.结论 HPD-500大孔树脂在所得工艺条件下可以对马兰中总三萜进行较好的纯化.
-
三草素胶囊醇提物中间体的大孔吸附树脂纯化工艺
目的 优选三草素胶囊醇提物中间体的大孔吸附树脂纯化工艺. 方法 以落新妇苷与总黄酮为指标,对不同型号树脂进行了筛选,并对上样条件和纯化过程进行优化. 结果 佳条件为上样质量浓度为0.8 g/mL,pH为3,上样体积为2 BV,水洗体积为2 BV,洗脱溶剂为70％乙醇,洗脱溶剂用量为3 BV,上样流速、洗脱流速均为2 BV/h. 结论 本工艺操作简单,重复性好.
-
重组金葡萄球菌肠毒素B纯化工艺研究
目的 建立无降解、高纯度的重组金葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcal enterotoxin B,SEB)的纯化工艺,并检测活性以考察纯化工艺对蛋白的影响.方法 用PBV220表达载体诱导表达出重组SEB后,采用(NH4)2SO4粗纯-疏水层析-离子交换色谱的组合纯化法纯化该蛋白.纯化后的样品经Western-blot鉴定及动物致死实验检测活性.结果 通过该纯化工艺得到了纯度高(纯度＞99%),稳定性高的重组SEB,其活性与天然SEB蛋白无明显差异,保持了高活性.结论 本实验建立了无降解、高纯度、高活性的重组SEB的纯化工艺,为进一步研究SEB的临床应用打下了基础.
-
人用地鼠肾细胞狂犬病疫苗纯化工艺中上样量的选择
经过Sepharose 4FF凝胶柱层析法[1]纯化的人用地鼠肾细胞狂犬病疫苗,其杂蛋白去除率可达99%以上,副反应率较现行的3-5倍浓缩疫苗明显降低,且免疫效价可达3.7IU/ ml以上,值得大力推广并终取代浓缩疫苗.在深入研究纯化工艺佳条件时,发现待纯化的浓缩疫苗上样量的多少直接影响纯化后疫苗的质量,研究结果表明,上样量为柱床体积的 10%以下时,纯化效果佳.
-
三七总皂苷纯化和脱色工艺研究
目的 筛选优化三七总皂苷纯化和脱色的工艺条件及参数.方法 采用高效液相色谱法,以三七总皂苷中人参皂苷Rb1、Rg1的纯度和转移率为考察指标,考察了大孔吸附树脂的吸附容量及其它影响纯化效果的因素,以及离子交换树脂的脱色效果.结果 通过大孔吸附树脂纯化后总固物中人参皂苷Rb1、Rg1的纯度和为59.2%,其转移率分别为96.1%、95.9%;离子交换树脂脱色后总固物中人参皂苷Rb1、Rg1的纯度和为69.2%,Rb1、Rg1的转移率分别为98.2%、95.2%.结论 本文所建立的优化工艺简单可行,可为工业生产提供依据.
-
采用DOE试验方法优化重组人干扰素α2a纯化工艺
目的 采用DOE试验方法对重组人干扰素α2a纯化工艺参数进行优化,并寻找各参数的操作空间,为实际的产品生产提供指导.方法 利用DOE中的中心符合表面设计(CCF)模型,设置两个响应值目标蛋白纯度和得率,对重组人干扰素α2a纯化工艺的疏水层析精纯进行优化并找出操作空间.选取两个工艺参数,即洗脱液B的(NH4)2SO4浓度(0.60M·L-1~0.70M·L-1)和洗脱液C的(NH4)2SO4浓度(0.30M·L-1~0.40M·L-1).结果 从模型的线性、正确性、有效性和重复性判断,所建立的模型拟合度高,可较为准确的预测实验结果.其中,洗脱液B的(NH4)2SO4浓度、洗脱液C的(NH4)2SO4浓度以及各自的平方对响应值有显著影响.同时,利用sweet spot找出关键层析步骤的操作空间.
-
复方栝楼桂枝汤的大孔树脂纯化工艺研究
目的:优选大孔树脂分离纯化复方栝楼桂枝汤的工艺条件.方法:以栝楼桂枝汤中芍药苷、芍药内酯苷、肉桂酸、6-姜酚、甘草苷、甘草酸和甘草素为指标,通过单因素试验筛选大孔树脂型号并优选其分离纯化工艺.结果:HPD-100型大孔树脂为优选树脂,佳工艺条件为:上样浓度为0.3 g生药/mL,大上样量为2.5 g生药/g,吸附流速为2 BV/h,洗脱剂为70%乙醇,洗脱流速为3 BV/h,洗脱剂用量为6 BV.结论:HPD-100型大孔树脂在确定的工艺条件下纯化复方栝楼桂枝汤效果较好,优选的工艺稳定可行.
-
正交设计优选芪归通络口服液纯化工艺
目的：研究芪归通络口服液纯化工艺。方法：采用L8（4×24）正交试验法，选取乙醇浓度、药液浓缩比、醇沉pH值为考察因素，以80%醇浸出物量和芍药苷转移率作为优选芪归通络口服液纯化工艺的评价指标。结果：佳纯化工艺为：乙醇浓度70%，药液浓缩比为1：1，醇沉pH值为4.5。结论：优选得到的芪归通络口服液纯化工艺条件稳定可行。
-
阳离子交换树脂氯化钠溶液洗脱纯化益母草总碱的研究
目的:优选阳离子交换树脂以氯化钠作为洗脱荆纯化益母草总碱的佳工艺条件.方法:采用732型阳离子树脂,以益母草总碱和盐酸水苏碱洗脱率为指标.优选佳纯化工艺参数.结果:以3.0moL/L氯化钠溶液洗脱时益母草总碱的洗脱率为87.35%,盐酸水苏碱的洗脱率为86.04%,经纯化所得提取物的益母草总碱含量>75%.结论:采用732型阳离子树脂以氯化钠溶液作洗脱刑纯化益母草总碱,不仅洗脱率高,成本低,而且易于推广至工业化生产.
-
不同纯化方法对止嗽定喘口服液水提液纯化效果的研究
目的:研究不同纯化方法对止嗽定喘口服液水提液的纯化效果.方法:以盐酸麻黄碱、甘草酸和浸膏率为考察指标,对离心法、水提醇沉法、壳聚糖絮凝沉降法进行比较.结果:水提醇沉法对止嗽定喘口服液水提液有效成分的损失较小,澄明度好,醇沉浓度为60％时对止嗽定喘口服液水提液有较好的纯化效果.结论:水提醇沉法可以用于止嗽定喘口服液水提液的纯化.
-
阳离子交换树脂酸水洗脱法纯化苦参总碱的工艺优选
目的 优选阳离子交换树脂不同浓度盐酸溶液洗脱纯化苦参总碱的佳工艺条件.方法 以苦参碱、氧化苦参碱和总生物碱的洗脱率为考察指标,以盐酸溶液作为洗脱剂,优选阳离子交换树脂纯化苦参总碱的佳工艺和参数条件.结果 苦参总碱阳离子交换树脂纯化洗脱条件为:以5%盐酸溶液作为洗脱剂,以6 BV*h-1的流速洗脱,苦参碱和氧化苦参碱、苦参总碱洗脱率均可达85%.结论 采用阳离子交换树脂酸水洗脱法纯化苦参总碱效率高,工艺简便,可用于苦参总碱的提取纯化.
