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大孔吸附树脂纯化两色金鸡菊总黄酮的工艺研究
目的 研究大孔树脂纯化两色金鸡菊总黄酮的工艺条件及参数.方法 采用静态吸附解吸法优选适宜的大孔树脂,以树脂吸附量、总黄酮解吸率为考察指标,对筛选出的树脂进行工艺优化.结果 D-101树脂具有较好的吸附及解吸附性能,其佳工艺为:上样液质量浓度3.4 mg/mL,树脂的上样量为15 mL/g,上样液pH值为5.0,上样流速1.0 mL/min,6 BV去离子水洗脱除杂后,用pH 5.0的70％乙醇以1.5 mL/min洗脱5 BV;所得两色金鸡菊总黄酮质量分数为73.5％,得率为8.8％.结论 D-101树脂综合性能好,适合于两色金鸡菊总黄酮的分离纯化.
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凹叶厚朴叶总黄酮纯化工艺研究
[目的]研究凹叶厚朴叶总黄酮纯化工艺.[方法]采用大孔树脂纯化方法,考察大孔树脂静态和动态吸附对凹叶厚朴总黄酮纯度的影响,并比较凹叶厚朴叶总黄酮纯化前后的总黄酮纯度及其DPPH和ABTS体外模型的抗氧化活性.[结果]确定佳型号大孔树脂为HPD722大孔树脂,其对凹叶厚朴叶总黄酮具有较好的纯化作用,佳纯化工艺为上样液浓度为0.12 g/mL,以2 BV/h上样,上样体积为5.5倍柱体积,用3.5倍柱体积10％乙醇除去杂质,再用4倍柱体积50％乙醇洗脱.凹叶厚朴叶总提物经HPD722大孔树脂纯化后总黄酮纯度由原来的27.44％提高到61.67％,且清除DPPH自由基能力纯化后[IC50为(19.97±0.85) mg/L]较纯化前[IC50为(44.88±1.31) mg/L]强,清除ABTS自由基能力纯化后[IC50为(169.78±0.99) mg/L]较纯化前[IC50为(592.2±13.14) mg/L]也得到提高.[结论]HPD722大孔树脂可以作为凹叶厚朴叶总黄酮纯化的吸附剂,为凹叶厚朴叶总黄酮资源开发提供依据.
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复方止咳颗粒制备工艺研究
目的:以传统中医药理论为指导,运用现代技术,对复方止咳颗粒的制备工艺进行优化研究.方法:采用正交试验法对止咳处方的提取工艺进行优选,以加水量、提取时间、提取次数为影响因素进行正交试验,以出膏率、挥发油量为指标确定其佳水提取工艺;选择糊精、糖粉和柠檬酸为辅料以及不同浓度乙醇为粘合剂挤出制粒,以成型难易、颗粒得率等指标综合考察了颗粒剂的成型工艺.结果:以出膏率为指标,影响因素A(加水量)和C(提取次数)具有显著性差异(P＜0.05),B(浸煮时间)无显著性差异,确定以加10倍水、每次1h、煎煮2次为佳提取工艺;当药粉:糊精:糖粉:柠檬酸=1:0.4:0.5:0.1,粘合剂为95％乙醇时制粒,得到的颗粒质量佳.结论:结果所述工艺在现有技术条件下可作为工业化生产的预设条件,颗粒质量可控.
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苦荞黄酮类化合物的提取及微乳薄层色谱鉴别
苦荞又称鞑靼养麦(tartary buckwheat),为双子叶蓼科荞麦属植物,在我国西南、北方种植广泛,资源丰富[1].苦养含有黄酮类化合物、多种氨基酸、多糖、不饱和脂肪酸等许多化学成分.其中黄酮类化合物具有较强的生理活性,药效学的动物实验及临床观察表明其具有较明显的降血糖、降血脂、增强免疫功能等作用[2].民间亦以食用苦荞防治糖尿病、高血压、高血脂等病[3].本研究拟对苦荞进行水提取工艺的研究,以总黄酮量及其含量为指标来评价提取工艺并采用新技术——微乳薄层色谱法分离鉴别其主要成分,为进一步作纯化工艺及质量控制研究奠定基础.
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大孔树脂纯化黄刺玫果中总黄酮的工艺研究
目的 研究大孔树脂分离纯化黄刺玫果中总黄酮的工艺条件及参数. 方法 采用静态吸附解吸法考察8种大孔树脂对黄刺玫果中总黄酮的吸附和解吸性能,筛选树脂型号;以总黄酮的含量为指标考察各因素对D101大孔树脂纯化黄刺玫果中总黄酮的影响. 结果 选用D101型大孔吸附树脂,佳工艺条件为:上样液料液比为1∶12,大上样量为2.6g生药/g树脂,用3BV的70％乙醇进行洗脱,解吸率达95％,总黄酮回收率为72％.经上述工艺纯化后黄刺玫果提取物中总黄酮含量为24.87％. 结论 该方法简单可行,分离效果好,可为工业生产提供参考.
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柱层析法纯化传代Vero细胞狂犬病疫苗上样量的选择
传代Vero细胞狂犬病疫苗较原代地鼠肾细胞狂犬病疫苗具有效价高,工艺简单,无外源因子污染,易于大规模生产的优点.其浓缩液经过Sepharose 4FF凝胶柱层析纯化后[1],其杂蛋白去除率可达99%以上,一、二期临床试验证明副反应率极低,且免疫效价可达4.5IU/ml以上,高于<中国生物制品规程>所规定的2.5IU/ml要求.在深入研究纯化工艺佳条件时,发现待纯化的浓缩疫苗上样量的多少直接影响纯化后疫苗的质量.对此,我们做了研究,结果报告如下.
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杠板归总黄酮提取及大孔树脂纯化工艺优化研究
目的:采用正交试验和大孔树脂吸附法优化杠板归总黄酮提取和纯化工艺条件,为其开发和利用提供参考.方法:首先以提取时间、次数、温度和料液比为考察因素,采用正交试验优选提取工艺;接着以静态吸附容量、动态吸附率为考察指标,从4种型号大孔树脂中筛选出1种,并对其吸附和解吸条件进行探究.结果:杠板归总黄酮佳提取工艺为提取2次,每次100 min,温度80℃,料液比1∶12;HPD-100型大孔树脂适宜杠板归总黄酮的纯化,其纯化工艺为上样液浓度2.5 g/L,上样速率2 BV(柱体积)/h,上样液体积2.5 BV,用70％乙醇以2 BV/h流速洗脱,在此工艺条件下,吸附的总黄酮纯度55.4％,解吸得率83.2％.结论:该提取和纯化工艺稳定、简单、可行,可用于工业生产.
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远志总皂苷大孔吸附树脂纯化工艺研究
目的:优选远志总皂苷大孔树脂纯化工艺.方法:在以细叶远志皂苷的纯度为指标,考察多种型号大孔树脂纯化远志总皂苷的吸附及洗脱条件.结果:HPD-100型大孔吸附树脂为佳纯化远志总皂苷的大孔树脂.佳纯化工艺为上样液细叶远志皂苷的质量浓度为0.5 g/ml,以蒸馏水3 BV、30％乙醇、70％乙醇各4 BV以1 BV/h速度依次洗脱,收集70％乙醇洗脱部位.结论:该法工艺可较好地纯化远志总皂苷且稳定可行,为新药研发提供了一定的依据.
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黄芩中黄酮类药效部位大孔吸附树脂纯化工艺研究
[目的]研究黄芩中黄酮类药效部位的大孔树脂纯化工艺.[方法]以黄酮类药效部位含量为指标,考察大孔树脂静态吸附、解吸试验和动态吸附、解吸试验工艺参数.[结果]D101型大孔吸附树脂对黄酮类药效部位的适宜纯化工艺条件:上柱液浓度0.5g·mL-1,吸附流速3mL·min-1,洗脱流速10mL·min-1,水洗脱体积为3BV,70％乙醇洗脱体积为7BV.[结论]D101大孔吸附树脂纯化黄芩中黄酮类成分方法,操作简便、重现性好、消耗少、树脂再生处理方便、所得药效部位含量高等,具有较好的推广前景.
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大孔吸附树脂富集纯化大黄总蒽醌的工艺研究
目的:筛选纯化大黄总蒽醌的佳树脂,确定树脂纯化大黄总蒽醌的工艺参数.方法:以大黄中总蒽醌含量为指标,研究大孔吸附树脂富集、纯化大黄总蒽醌的吸附性能和洗脱参数.结果:X-5型树脂对大黄总蒽醌有良好的吸附性能.洗脱剂为60%乙醇,用量为6倍量树脂柱体积,大黄总蒽醌富集于60%乙醇洗脱液部分,且除杂质效果好.结论:通过X-5型大孔吸附树脂富集、纯化后,大黄总蒽醌的洗脱率在90%以上,总蒽醌的含量提高到35.4%.说明采用本法富集、纯化大黄总蒽醌是可行的.
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小蓟中蒙花苷的制备工艺研究
目的:筛选大孔树脂吸附法制备小蓟中蒙花苷的优条件.方法:采用大孔吸附树脂富集小蓟中的蒙花苷,用高效液相色谱法测定样品中蒙花苷的含量,评价6种大孔吸附树脂对蒙花苷的静态吸附/解吸和动态吸附/解吸程度,筛选出对小蓟中蒙花苷富集纯化能力佳的大孔吸附树脂.结果:经实验,确定6种树脂中的HPD450型大孔吸附树脂对小蓟中蒙花苷的富集纯化能力佳.其佳工艺条件为:以3 BV的小蓟供试品溶液(生药浓度为0.5g·mL-)为上样量,吸附速率为1 BV·h-1,吸附2h后,洗脱流速为4 BV·h-1,收集5 BV的水洗脱液,4 BV的30％乙醇洗脱液,3 BV的50％乙醇洗脱液,减压浓缩,即得.结论:用HPD450型大孔吸附树脂从小蓟中纯化得到的蒙花苷含量达75％以上.
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补肾活血颗粒的纯化工艺优选
目的:优选补肾活血颗粒的纯化工艺.方法:采用单因素试验法和L9(34)正交试验法,考察乙醇浓度、醇沉时间等因素对纯化工艺的影响,以羟基红花黄色素A和松脂醇二葡萄糖苷的转移率为评价指标,采用多指标综合评分法优选佳的纯化工艺.结果:补肾活血颗粒佳纯化工艺为减压浓缩至药液相对密度为1.05,加95％乙醇使舍醇量为60％,醇沉24h.结论:优选得到的纯化工艺方法简便可靠,重复性好,有效成分转移率高,可以保证补肾活血颗粒的质量和疗效.
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响应面法优化鬼针草叶总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺
目的:利用响应面分析法对鬼针草叶总黄酮纯化工艺进行优化.方法:以芦丁的含量为指标,考察上样流速、上样浓度、pH值、洗脱剂浓度、柱子径高比等因素,通过Box-Behnken设计建立响应面模型来优选鬼针草叶中总黄酮的纯化工艺参数.结果:选用HPD-100型大孔吸附树脂,上样流速为2BV/h,pH为6,上样浓度为2.027 mg/mL,70％乙醇洗脱,柱子径高比为1∶15.结论:该方法纯化工艺良好,总黄酮的纯度可达到62.86％,与理论值61.88％的相对误差为1.56％
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甘草地上部分水提液总黄酮纯化工艺研究
目的:研究大孔树脂纯化甘草地上部分水提液中总黄酮的工艺.方法:通过考察D-101、AB-8、DM-130、HPD-BJQH、HPD-600、HPD-100和HPD-450等7种树脂对总黄酮的静态吸附与解吸附,优选适宜类型的大孔树脂,并进一步对富集纯化参数进行考察及优化.结果:选用AB-8型大孔树脂,优选的工艺条件为:上样液质量浓度2.128 mg·mL-1,样品液pH5.42,树脂的上样量为7 mL/g,上样速度为1.5 BV,依次用2 BV水洗脱,4BV60％乙醇洗脱,经AB-8树脂处理后的甘草地上部分水提液的总黄酮纯度由9.08％提升到34.02％,收率为74.40％.结论:AB-8型大孔树脂能有效地纯化富集甘草地上部分水提液总黄酮,且此工艺稳定.
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改善中药口服液澄清度工艺研究进展
近年来,中药口服液获得了迅速的发展.在新药审批过程中口服液与澄清度项目检查密切相关,如何改善中药口服液澄清度,同时大限度的保留有效成分,成为了中药口服液制备过程中的难点.该文通过对中药口服液澄清度及其影响因素的分析,以大量实例为佐证,对改善中药口服液澄清度的工艺进行了研究,为中药口服液快速发展提供了新的研究思路与方法.
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生地黄水提液中环烯醚萜苷类成分纯化工艺研究
目的 优选生地黄水提液中环烯醚萜苷类成分的纯化工艺参数.方法 以梓醇含量为评价指标,采用大孔树脂纯化方法,确定总环烯醚萜苷的纯化工艺条件.结果 生地黄水提液中总环烯醚萜苷佳分离纯化工艺为:选用H103型大孔树脂,以l BV/h速度上样,用3 BV的去离子水水洗除杂,然后用5 BV的30％的乙醇以1.5 BV/h的速度洗脱,纯化后梓醇含量为8.31％,较纯化前提高4.7倍.结论 该纯化工艺条件稳定、合理、可行,可作为生地黄水提液中环烯醚萜苷类成分的纯化方法.
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正交实验优选益视口服液纯化工艺
目的：考察壳聚糖澄清剂用于益视口服液的纯化工艺。方法以益视口服液中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的转移率及干膏率为考察指标，采用 L9（34）正交试验设计，优选壳聚糖絮凝沉降法的纯化工艺条件；并对纯化前后药液的黏度、浊度、蛋白质及鞣质含量进行测定。结果壳聚糖絮凝沉降法的佳条件是药液质量浓度是1.0 g / mL，壳聚糖的加入量为30％，药液 pH 4，温度是40℃，经纯化后黏度、浊度、蛋白质及鞣质含量均有所下降。结论壳聚糖絮凝沉降法可用于益视口服液的纯化。
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决明子中橙黄决明素的提取分离纯化工艺
目的:分析和研究决明子中橙黄决明素的提取、分离、纯化工艺,为橙黄决明素的生产和开发提供相关的参考数据.方法:按照橙黄决明素的含量为指标,首先使用正交实验法记录乙醇浓度、提取次数、提取时间及用量等数据,分析对橙黄决明素的提取率的影响；其次选用硅胶柱层分析方法,对适当洗脱系统分离决明子中橙黄决明素,使丙酮反复多次重结晶以获得纯度较高的橙黄决明素.结果:佳提取工艺为:决明子用6倍量90％乙醇回流提取2次,1 h·次-1；柱层析法[石油醚(60 ～90℃)-丙酮=(9:1)]及丙酮重结晶后得到的橙黄决明素纯度可＞99％.结论:本次研究表明决定决明子中橙黄决明素有显著影响的为乙醇,其分离纯化的方法实用性较强,操作简单,成本低,值得临床广泛推广和应用.
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重组鲨鱼血管生成抑制因子功能活性区蛋白纯化工艺的优化
目的 优化重组鲨鱼血管生成抑制因子(Shark angiogenesis inhibition factor,SAIF)功能活性区(aSAIF)蛋白的纯化工艺.方法 利用离子交换层析和镍柱亲和层析对带有组氨酸标签的融合蛋白His6-SUMO-aSAIF进行纯化.纯化后的融合蛋白经SUMO蛋白酶切除小分子泛素样修饰蛋白(Small ubiquitin-related modifier,SUMO)标鉴,再经镍柱二次亲和层析获得非融合aSAIF蛋白,采用WST-8法对其进行血管生成抑制活性检测.结果 优化的纯化工艺参数为:离子交换层析采用0.2mol/L的NaCl进行洗脱;亲和层析的洗脱液为20 mmol／L磷酸盐,500 mmol／L NaCl,250 mmol／L咪唑,pH 7.4;SUMO蛋白酶与融合蛋白的佳酶切比例为1∶480,酶切时间为1h.终获得的aSAIF蛋白纯度可达95％,具有较好的抑制血管内皮细胞增殖的活性,且呈剂量依赖性.结论 已成功建立了aSAIF的纯化工艺,为后续大规模生产及抑制血管生成机制的研究奠定了基础.
关键词： 鲨鱼血管生成抑制因子 纯化工艺 优化 -
WuT3无血清培养上清中单克隆抗体纯化工艺的建立
目的 对WuT3杂交瘤细胞生物反应器无血清培养上清中单克隆抗体进行分离纯化,建立中试分离纯化工艺.方法 采用两步离子交换层析法结合硫酸铵盐析法分离纯化WuT3单抗.在通过小量试验优化纯化参数后,进行中量试验和中试放大.结果 建立的纯化方法可以放大到中试规模,每批投料30 000 ml培养上清,可收获单抗达1.5 g,单抗总回收率大于60%.经分离纯化后,单抗IgG纯度大于95%,采用免疫荧光法检测抗体活性合格.结论 建立了一条生物反应器无血清培养杂交瘤细胞大规模分离纯化单抗的工艺路线.
