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大黄总蒽醌对雌性大鼠下丘脑、垂体功能和结构的影响及可逆性
目的:观察大黄总蒽醌对雌性大鼠下丘脑和垂体功能及结构的影响及其可逆性.方法:SD雌性大鼠40只,随机取10只作为正常组,其余30只灌胃大黄总蒽醌73 mg· kg-1,连续60 d.于末次给药后24 h,停药30,60 d分别处死1/3动物.酶联免疫(ELISA)法检测大鼠血清促性腺激素释放激素(GnRH),黄体生成素(LH),卵泡刺激素(FSH)水平;记录性周期;取垂体称重,计算脏器指数;HE染色观察下丘脑、垂体形态学变化.结果:给药60 d和停药30 d LH,FSH水平高于正常组,GnRH水平低于正常组(P＜0.05).停药60 d LH,FSH水平低于给药60 d,GnRH水平高于给药60 d(P ＜0.05).给药30,60 d大鼠性周期紊乱率、动情间期天数高于正常组(P＜0.05);给药60 d大鼠性周期紊乱率、动情间期天数高于给药30 d(P＜0.05).停药30 d性周期紊乱率高于正常组(P＜0.05).垂体指数:给药60 d高于正常组(P＜0.05);停药30,60 d低于给药60 d(P＜0.05).组织形态学检测,给药60 d,下丘脑神经元减少,有红色神经元、鬼影细胞、染色质边集;垂体细胞减少,排列不规整,血窦扩张,嗜酸性细胞适应性增生.停药30 d,下丘脑神经元增加,鬼影细胞、染色质边极减少;垂体细胞增加,血窦扩张减轻,嗜酸性细胞增生减少.停药60 d,下丘脑和垂体的上述病理改变进一步恢复.结论:灌胃60 d大黄总蒽醌对雌性大鼠性激素水平、性周期和下丘脑、垂体组织结构均有毒性,但这种损害是可逆的,停药60 d基本恢复.
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大黄总蒽醌结肠定位微球的生物黏附性及泻下作用
目的:考察大黄总蒽醌结肠定位微球的生物黏附性及泻下作用.方法:采用大鼠结肠离体灌注观察不同pH溶液中微球滞留率和在体肠道灌注技术观察不同肠道部位的滞留率来评价大黄总蒽醌结肠定位微球的生物黏附性,并以排便时间、稀便量和排便重为指标观察其对小鼠的泻下作用.结果:大黄总蒽醌结肠定位微球在大鼠结肠离体灌注试验中,不同pH环境的肠道中均有黏附,pH 3.0 ～7.4的滞留率为79％～68％.大鼠在体灌注时胃、小肠、结肠的滞留率分别为8.5％,23％,63％.微球0.2 g·kg-1剂量组(相当于大黄药材4.0 g·kg-1)8h排便粒数(66.4±8.4)粒,排便重(0.74±0.41)g,泻下作用与大黄药材4.0 g·kg-1组二者比较差异无显著性.结论:所制备的大黄总蒽醌结肠定位微球泻下作用与同等剂量药材相当、生物黏附性良好.
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醒脑灵颗粒渗流提取工艺
目的:优选醒脑灵颗粒的佳渗漉提取工艺.方法:采用单因素试验法,以丹参酮ⅡA提取率、大黄总蒽醌提取率和得膏率为考察指标,对影响醒脑灵颗粒渗漉提取工艺的因素进行研究.结果:佳渗漉工艺为药材粗粉碎,用2倍量70%乙醉浸泡24 h,以3.0 mL·min(-1)·kg(-1)速度渗漉,收集6倍量渗漉液.结论:优选的渗漉提取工艺提取效率高,验证试验结果表明该提取工艺重复性好、稳定可行.
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正交试验法优化SFE-CO2萃取大黄总蒽醌工艺探讨
目的:优化SFE-CO2流体萃取大黄总蒽醌工艺.方法:以大黄蒽醌类成分含量为考察指标,萃取物收得率为参考指标,用正交试验法考察影响SFE-CO2流体萃取大黄主要的3个因素及佳萃取条件.结果:实验所得SFE-CO2流体萃取大黄佳条件为:萃取压力18 MPa,萃取温度60℃,95%乙醇作夹带剂,用量为2倍药材量.结论:SFE技术具有萃取效率高、速度快、环保等优点,本试验研究为大黄药材的开发提供有益的实验依据.
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吴茱萸挥发油、芥子油及大黄总蒽醌对芍药苷体外经皮渗透的影响
目的：考察吴茱萸挥发油、芥子油、大黄总蒽醌作为促渗剂对芍药苷经皮渗透的影响。方法采用YB-P6型智能透皮试验仪,以小鼠离体腹部皮肤为渗透屏障,采用高效液相色谱法对芍药苷含量进行测定,考察吴茱萸挥发油、芥子油、大黄总蒽醌3种促渗剂在12 h内对芍药苷累积渗透量、透皮吸收速率、透皮时滞等体外透皮吸收动力学参数的影响。结果吴茱萸挥发油、芥子油、大黄总蒽醌的渗透速率分别为8.1886、3.4117、1.2303 g/(cm2?h),增渗倍数分别为22.6、9.40、3.40,透皮时滞分别为0.93、0.51、0.83 h。结论3种天然透皮促渗剂均能明显促进芍药苷的透皮吸收,为其作为透皮促渗剂提供了参考依据。
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大黄总蒽醌对大鼠远端结肠AQP2表达的调节效应
目的:探讨大黄总蒽醌对大鼠远端结肠水通道蛋白2(aquaporin2,AQP2)表达的调节作用.方法:32只SD大鼠随机分为正常组,大黄总葸醌低、中、高剂量组(0.14,2.5,4.5 g·kg-1·d-1,灌胃),正常组给予生理盐水灌胃.大鼠5 d后麻醉处死,取全段结肠内粪便,干燥后检测粪便含水量;留取远端结肠,运用免疫组织化学、Western blot及RT-PCR检测远端结肠AQP2表达的变化.结果:低剂量组大鼠没有出现泻下现象,其远端结肠AQP2表达无显著差异;中剂量组(2.5 g·kg-1·d-1)大鼠出现软便及稀便,高剂量组(4.5 g·kg-1·d-1)大鼠出现稀便和水样便,粪便含水量显著性增加,其远端结肠AQP2表达亦显著降低(P<0.01).结论:大黄总蒽醌能抑制大鼠远端结肠AQP2的转录与翻译、增加粪便的含水量,这可能是其泻下效应产生的机制之一.
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大黄蒽醌衍生物对大鼠结肠及LoVo细胞水通道蛋白4表达的调节效应
目的 探讨大黄总蒽醌对SD大鼠的泻下效应及对结肠水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)表达的影响及大黄酸、大黄素对体外培养LoVo细胞AQP4的调节效应.方法 雄性SD大鼠24只随机分为正常对照组、大黄总蒽醌泻下剂量组及高剂量组,分别予大黄总蒽醌悬液或蒸馏水灌胃5天,观察大鼠结肠粪便含水量:应用Western blot、RT-PCR方法观察其近端结肠AQP4表达的变化.体外培养LoVo细胞并予不同浓度大黄酸/大黄素含药培养液作用24 h及大黄酸/大黄素含药培养液(20 mg/L)不同时间作用,采用Westernblot及RT-PCR检测AQP4蛋白及mRNA的表达.结果 大黄总蒽醌泻下剂量组及高剂量组作用后,大鼠结肠内粪便含水量明显增加,同时其近端结肠AQP4表达降低且表现为量效关系.大黄酸/大黄素能够显著下调体外培养LoVo细胞的AQP4蛋白及mRNA表达,且表现为剂量-效应及时间-效应关系.结论 大黄总蒽醌在发挥泻下作用的同时,能够有效下调大鼠近端结肠AQP4的表达;大黄酸、大黄素可抑制体外培养Lo-Vo细胞AQP4的表达,可能是大黄泻下作用机制之一.
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SD大鼠经口给予大黄总蒽醌的基因表达差异和肾脏毒性靶点研究
目的 通过对肾脏基因的差异表达研究,对大鼠口服大黄总蒽醌肾脏毒性作用靶点提供科学推论.方法 SD大鼠大黄总蒽醌4 500 mg·kg-1·d-1灌胃给药13周,选用大鼠全基因组芯片检测肾脏基因差异表达,使用荧光定量PCR手段对10条关键基因进行了差异表达确认.实验分为给药组和正常组(n=4),对基因芯片检测结果进行按生理通路聚类分析.结果研究发现有143条基因在给药组中发生上调,101条基因发生了下调.上调的基因中与糖脂代谢相关的有29条,免疫相关的有13条,肾脏解毒功能相关的有15条,与细胞周期调控、信号传导、内分泌调节相关的有24条,未知功能的有26条;下调的基因中与糖脂代谢相关的有12条,免疫相关的有11条,细胞周期调控、信号传导相关的有20条,肾功能相关的有25条,功能未知的为39条.结论 大黄总蒽醌给药组基因芯片分析结果显示,caspase3和p53通路并不是造成细胞凋亡的主要原因.研究发现,p38 MAPK通路中,MAPK激酶6可能是某种程度上造成细胞损伤的原因.细胞周期调节相关通路研究表明,周期蛋白D1和周期素依赖性蛋白激酶1的下调可能是造成真核细胞周期调控受阻,进而产生增殖抑制作用的原因.
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新健胃包芯片中大黄总蒽醌类成分提取因素的优化
目的：优化提取新健胃包芯片中大黄总蒽醌类成分的影响因素,完善质量标准,加强产品质量控制。方法对提取方式进行单因素考察,对提取温度、时间,水解时间等影响因素进行优化处理,以HPLC法测定制剂中大黄总蒽醌类成分含量为质控指标。结果新健胃包芯片制剂中佳提取条件为75℃甲醇回流提取1.5 h,8%盐酸酸化后,再提取2.0 h,有效成分的提取率高,总蒽醌类成分稳定。结论该方法稳定可行,可以作为该制剂的质量控制方法。
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紫外分光光度法测定骨伤康复外洗颗粒中大黄总蒽醌含量
目的:提高骨伤康复外洗颗粒的质量标准.方法:采用紫外分光光度法在509 nm波长处测定大黄总蒽醌的含量.结果:大黄素浓度在2.88～28.80μg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.999 3),平均加样同收率为99.30%,RSD=1.91%(n=5).结论:本方法专属性强,快速,准确,适用于该制剂的质量控制.
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优选大黄总蒽醌结肠定位壳聚糖微球的制备工艺
目的 优选大黄总蒽醌(RTA)壳聚糖(CS)口服结肠定位微球的制备工艺.方法 以包封率和粒径为考察指标,CS为载体材料,采用乳化-交联法制备RTA壳聚糖微球(RTA-CMS),并用正交试验优选佳制备工艺,再采用肠溶材料Eudragit S 100进行包衣.结果 优选的佳工艺为CS质量分数为2.5％,RTA与CS质量比为1∶4,液体石蜡与二氯甲烷的比例为1∶1,司盘-80用量为2％,微球包封率为64.5％,粒径为(248.8±54.2) μm,包衣后粒径为(269.3±172.7) μm.结论 根据优选工艺制备的RTA-CMS包封率较高,微球形态良好,可用于RTA结肠定位CMS的制备.
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表面活性剂对大黄总蒽醌提取率的影响
大黄具有清热解毒、抗菌消炎、泻热通肠等功效.其主要化学成分为结合和游离的大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚和芦荟大黄素等蒽醌类化合物.游离蒽醌难溶于水,溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂.结合蒽醌易溶于水和乙醇,难溶于氯仿和乙醚等有机溶剂.大黄总蒽醌的提取多采用70%～80%乙醇回流提取[1,2],但所使用的乙醇体积分数高,回收耗能高.利用表面活性剂能够提高姜黄中姜黄素提取率[3],因此本实验研究了不同表面活性剂对大黄中总蒽醌提取率的影响,结果表明十二烷基硫酸钠(SDS)可大幅度提高大黄中总蒽醌的提取率.
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大黄与总蒽醌对大鼠肾脏 Bcl －2、Bax 的表达影响及可逆性
目的：观察长期应用大黄和总蒽醌对大鼠肾脏细胞凋亡因子Bcl－2、Bax蛋白及mRNA表达水平的影响及可逆性研究。探讨总蒽醌是否为大黄的主要毒效部位。方法8周龄SD大鼠90只，随机分为2g／kg大黄组、73mg／kg总蒽醌组、正常对照组，每组30只。连续灌胃60d ，分别在末次给药后24h、停药30d、60d ，处死1／3大鼠。采用Western Blot法检测大鼠肾脏Bcl －2、Bax蛋白的表达水平；RT －PCR法检测肾脏Bcl－2、Bax mRNA的表达水平。结果①给药60d大黄组与总蒽醌组大鼠肾脏Bcl－2蛋白及mRNA表达水平均显著低于正常对照组（P＜0．05）。②给药60d总蒽醌组Bax蛋白及mRNA表达水平显著高于正常对照组（P＜0．05）。③给药60d大黄组与总蒽醌组Bcl－2／Bax蛋白及mRNA的比值均低于正常对照组（P＜0．01）。结论连续灌胃60d大黄或总蒽醌均可通过上调Bax、下调Bcl －2的表达对大鼠肾脏产生一定的损害作用，且该损害作用是可逆的。推测总蒽醌可能为大黄的主要毒效部位。
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大黄总蒽醌对大鼠子宫中 Bcl-2、Bax 表达的影响及可逆性
目的：观察长期灌胃大黄总蒽醌对大鼠子宫中 Bcl-2、Bax 蛋白表达的影响及其可逆性。方法8周龄 SD 雌性大鼠40只,随机取10只做为正常对照,其余30只灌胃大黄总蒽醌73mg/kg,连续给药60d。末次给药后24h、停药30d、60d 分别处死10只。取子宫,采用免疫组化 S-P 法检测子宫中 Bcl-2、Bax 蛋白表达水平。结果给药60dBax 表达水平显著高于正常对照(P <0.05),Bcl-2表达显著低于正常对照(P <0.05)。停药30dBax 表达水平低于给药60d、高于正常对照(P <0.05),Bcl-2表达水平高于给药60d、低于正常对照,差异有统计学意义(P <0.05)。停药60dBax 表达水平明显低于给药60d、停药30d(P<0.05),与正常对照比较差异无统计学意义(P >0.05)；Bcl-2表达水平明显高于给药60d、停药30d(P<0.05),并且低于正常对照组(P <0.05)。结论长期应用大黄总蒽醌可降低成年雌性大鼠子宫内膜中Bcl-2蛋白表达,提高 Bax 蛋白表达,这种影响是可逆的。
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大黄总蒽醌对大鼠睾丸支持细胞增殖及Cyt-C、Caspase3表达的影响
目的:探讨大黄总蒽醌(RTA)含药血清对大鼠睾丸支持细胞(SC)增殖及细胞色素C(Cyt-C)、Caspase3表达的影响.方法:两步酶消化法分离培养大鼠SC细胞,第三代SC细胞随机分为空白对照组和3个RTA含药血清组,分别以胎牛血清和RTA含药血清作用48h后,MTT法观察SC细胞的增殖活力,Westem blotting法检测SC细胞Cyt-C、Caspase3蛋白的表达情况.结果:与空白对照组比较,RTA高剂量组含药血清(4.50g/kg)SC细胞增殖活力明显降低(P＜0.05),Cyt-C、Caspase3蛋白表达明显升高(P＜0.05);RTA中剂量组含药血清(2.25g/kg)可显著抑制SC细胞增殖,上调Caspase3蛋白表达水平(P＜0.05).结论:RTA中、高剂量组含药血清可抑制大鼠SC细胞增殖,其机制可能与调节Cyt-C和Caspase3蛋白表达有关.
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大黄总蒽醌含药血清对NRK细胞AQP2与AQP4表达的调节效应
目的:探讨大黄总蒽醌含药血清对体外培养NRK细胞水通道蛋白2(AQP2)、水通道蛋白4(AQP4)表达的调节效应.方法:16只SD大鼠随机分为正常组、大黄总蒽醌低、中、高剂量组(0,1 400,2 500,4 500 mg·kg-1·d-1灌胃),7 d后麻醉处死取血制备含药血清.体外培养NRK细胞并给予不同浓度大黄含药血清培养液24 h处理,采用免疫荧光检测AQP2、AQP4的定位,Western blot及半定量RT-PCR检测AQP2、AQP4蛋白及mRNA的表达.结果:AQP2、AQP4主要表达在NRK细胞膜上,2 500,4 500 mg·kg-1·d-1大黄总蒽醌含药血清培养液可抑制NRK细胞的AQP2、AQP4蛋白及mRNA的表达,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:大黄总蒽醌含药血清可抑制NRK细胞AQP2、AQP4基因转录与翻译,提示大黄的利尿作用可能与调节AQP2、AQP4表达有关.
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大孔吸附树脂富集纯化大黄总蒽醌的工艺研究
目的:筛选纯化大黄总蒽醌的佳树脂,确定树脂纯化大黄总蒽醌的工艺参数.方法:以大黄中总蒽醌含量为指标,研究大孔吸附树脂富集、纯化大黄总蒽醌的吸附性能和洗脱参数.结果:X-5型树脂对大黄总蒽醌有良好的吸附性能.洗脱剂为60%乙醇,用量为6倍量树脂柱体积,大黄总蒽醌富集于60%乙醇洗脱液部分,且除杂质效果好.结论:通过X-5型大孔吸附树脂富集、纯化后,大黄总蒽醌的洗脱率在90%以上,总蒽醌的含量提高到35.4%.说明采用本法富集、纯化大黄总蒽醌是可行的.
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盐酸小檗碱、吴茱萸挥发油、大黄总蒽醌促进苦参碱透皮吸收的量效关系研究
目的 研究不同质量分数的盐酸小檗碱、吴茱萸挥发油、大黄总蒽醌对苦参碱透皮吸收的影响.方法 采用YB-P6型智能透皮试验仪,以小鼠皮肤为渗透屏障进行体外透皮吸收试验,采用HPLC法测定苦参碱的量,计算累积透过量和透皮速率等渗透动力学参数.结果 不同质量分数(5％、3％、1％)的3种物质对苦参碱透皮吸收的影响为吴茱萸挥发油3％＞1％＞5％＞空白,大黄总蒽醌5％＞空白＞3％＞1％,盐酸小檗碱空白＞1％＞3％＞5％.结论 吴茱萸挥发油对苦参碱有显著的促透作用,大黄总蒽醌不明显,盐酸小檗碱不仅无促透作用,反而抑制其透皮吸收.
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大黄总蒽醌纯化工艺的研究
目的:研究4种不同纯化方法对大黄提取液中总蒽醌富集的效果.方法:以纯化液的固体物收率和总蒽醌的含量为指标,对明胶沉淀法、醇调pH值法、聚酰胺法以及大孔吸附树脂法的纯化作用进行比较.结果:4种纯化方法所得纯化液的固体物收率明显降低,而对总蒽醌的保留率具有显著的差异,以ResinⅠ、Ⅱ两种大孔吸附树脂高(93.21%,95.63%).结论:大孔吸附树脂对大黄总蒽醌具有较强的富集作用.
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大黄总蒽醌对SD大鼠灌胃给药的长期毒性研究
目的观察大黄总蒽醌对SD大鼠所发生的各种毒性反应,以评价大黄总蒽醌的安全性.方法大黄总蒽醌以0、140、794、4 500 mg/kg,ig,1次/d,每周6次,连续给药26周.结果 ig高剂量后,大鼠精神不佳,排稀便、软便,体重增长缓慢.在给药11周时,高剂量组1只大鼠濒临死亡.高剂量组红细胞计数、血红蛋白含量、红细胞压积和Na+显著低于对照组,而尿素氮、总胆固醇、尿酸、K+和Ca2+升高,尿β-微球蛋白、总蛋白质等也显著升高.高剂量组肾脏均可见近曲小管上皮细胞不同程度肿胀变性.结论在该试验条件下,大黄总蒽醌对SD大鼠的毒性反应靶器官可能主要是肾脏(特别是肾近曲小管),这种毒性反应是可逆的,对SD大鼠的安全剂量为794 mg/kg.
