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大黄素联合吉西他滨抑制体内外胰腺癌生长及其机制研究
目的 探讨大黄素联合吉西他滨对体内外胰腺癌生长的影响及其机制.方法 采用吉西他滨(20 μmol/L)、大黄素(40 μmol/L)单独及联合作用胰腺癌细胞株SW1990后,CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测Bax及Bcl-2蛋白表达.建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予大黄素、吉西他滨单独及联合用药,监测移植瘤体积变化；免疫组化法检测移植瘤组织中Ki-67、Bax及Bcl-2表达.结果 与吉西他滨组及大黄素组比较,联合用药组显著降低SW1990细胞存活率,提高细胞凋亡率(P＜0.05)；与对照组比较,大黄素组及联合用药组明显上调SW1990细胞中Bax蛋白表达水平,抑制Bcl-2蛋白表达(P＜0.05).与对照组比较,大黄素组及联合用药组可显著抑制裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长,提高Bax在肿瘤组织中阳性表达,明显降低Ki-67和Bcl-2的阳性表达(P＜0.05),以联合用药组作用佳(P＜0.05).结论 大黄素可能通过上调Bax表达和下调Bcl-2表达增强吉西他滨对体内外胰腺癌的抑制作用.
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鲜壁虎冻干粉诱导C6胶质瘤细胞凋亡的血清药理学研究
目的探讨鲜壁虎冻干粉对C6胶质瘤细胞凋亡的影响.方法将30只小鼠随机分为3组,分别给予顺铂腹腔注射,口服鲜壁虎冻干粉及口服等量蒸馏水.20天后,取小鼠血清体外处理C6胶质瘤细胞.通过形态学分析、流式细胞仪及TUNEL法,观察细胞凋亡情况;S-P免疫组化法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平.结果形态学变化、流式细胞仪分析和TUNEL法结果均证实含鲜壁虎血清在体外可诱导C6胶质瘤细胞凋亡;鲜壁虎组与空白对照组比较,细胞内的bcl-2基因表达无明显变化,bax基因表达升高.结论含鲜壁虎血清能够诱导细胞凋亡,其机制可能与上调bax基因有关.
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C60-氮芥对体内肿瘤组织的杀伤作用
目的:探讨C60-氮芥对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织瘤体大小的影响及相关可能的作用机制.方法:通过一系列加成反应所合成的一种C60-氮芥,以Lewis肺癌荷瘤小鼠为研究对象,动物模型建立成功以后,24只荷瘤鼠随机分为4组:A:生理盐水组B:C60组C:氮芥组D:C60氮芥组.取A、B、C、D组动物肿瘤组织,制作成电镜标本,电镜下观察C60-氮芥组小鼠肿瘤组织细胞中是否出现出现凋亡细胞.测肿瘤体积、称重,计算抑瘤率.结果:电镜下观察C60-氮芥组小鼠肿瘤组织细胞中是否出现凋亡细胞,氮芥组小鼠的抑瘤率高于其他三组.结论:合成的C60-氮芥保存了杀伤肿瘤组织细胞的功能;与氮芥比较,在荷瘤小鼠体内,C60-氮芥可以提高对机体肿瘤组织的杀伤作用,其机理可能与其能延长滞留于肿瘤组织时间有关.
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寿胎丸含药血清对自然流产患者滋养层细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的 探讨寿胎丸防治自然流产的可能作用机制.方法 体外分离培养自然流产患者滋养层细胞,并用不同浓度(5％、10％、20％)寿胎丸含药血清干预24h(寿胎丸含药血清组),并以空白血清及地屈孕酮含药血清分别作为空白对照(空白血清组)及阳性对照(地屈孕酮含药血清组),每个浓度3个复孔.检测各组不同药物浓度血清干预后滋养层细胞总凋亡比例及细胞凋亡相关蛋白BCl-2、Bax蛋白表达水平.结果 与空白血清组比较,寿胎丸含药血清组和地屈孕酮含药血清组各浓度药物血清干预后能降低滋养层细胞总凋亡比例,上调Bcl-2蛋白水平,在浓度为10％和20％的药物血清干预后下调Bax蛋白水平(P＜0.05),并且呈一定的剂量依赖性(P＜0.05). 结论 寿胎丸含药血清呈剂量依赖性减少自然流产患者滋养层细胞凋亡,可能与上调Bcl-2蛋白、下调Bax蛋白有关.
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消痞颗粒对慢性萎缩性胃炎伴不典型增生大鼠胃黏膜增殖和凋亡的影响
目的 探讨慢性萎缩性胃炎伴不典型增生的发病机制及消痞颗粒对其作用的机制. 方法 将60只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、自然恢复组、消痞颗粒组、维酶素组,每组12只.采用幽门弹簧插入术加灌胃高盐热糊法复制大鼠模型,正常组、模型组于第16周造模成功后处死;消痞颗粒组大鼠于手术1周后,给予浓度为0.6g/ml的消痞颗粒溶液灌胃0.5ml/(100g·d);自然恢复组大鼠于造模16周后,蒸馏水灌胃0.5ml/(100g·d);维酶素组大鼠手术1周后,以浓度为0.4g/ml维霉素混悬液0.5ml/(100g·d)灌胃,各组均每周灌胃6天,12周后采用免疫组化法检测胃黏膜增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达.结果 模型组与自然恢复组PCNA阳性细胞面密度、Bcl-2均明显高于正常组(P＜0.05或P＜0.01);Bax低于正常组(P＜0.05或P＜0.01);与模型组比较,其余各组PCNA阳性细胞面密度差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).消痞颗粒组PCNA面密度明显低于自然恢复组(P＜0.05),消痞颗粒组与维酶素组比较差异无统计学意义(P＞0.05).消痞颗粒组Bcl-2较模型组明显减弱(P＜0.05),Bax明显升高(P＜0.01);消痞颗粒组与维酶素组比较差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 降低胃癌癌前病变大鼠胃黏膜中的PCNA、Bcl-2表达、升高Bax表达可能是消痞颗粒改善慢性萎缩性胃炎伴不典型增生有效机制之一.
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祛瘀生肌法对糖尿病大鼠创面新生肉芽组织凋亡相关基因的动态影响
目的 探讨祛瘀生肌法对糖尿病溃疡大鼠创面愈合中凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响. 方法 48只SD大鼠采用四氧嘧啶造成糖尿病模型后,剪去背部局部全层皮肤造成糖尿病溃疡.将大鼠随机分成生肌化瘀方1组、生肌化瘀方2组、生肌化瘀方3组和生理盐水对照组.分别于创面修复第3天、11天取材,采用实时PCR法检测新生肉芽组织中凋亡相关基因Bax和Bcl-2 mRNA变化. 结果 创面修复第3天,生肌化瘀方1组和生肌化瘀方2组Bcl-2拷贝数及Bax/Bcl-2比值均高于生理盐水对照组(P<0.05);创面修复后第11天,生肌化瘀方1组Bcl-2拷贝数和Bax/Bcl-2比值仍高于生理盐水对照组(P<0.05),而生肌化瘀方2组Bax/Bcl-2比值与生理盐水对照组差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 祛瘀生肌中药调节糖尿病溃疡大鼠模型新生肉芽组织中凋亡相关基因Bax和Bcl-2 mRNA表达是促进创面愈合的原因之一.早期重用化瘀药物能抑制细胞凋亡,有利于创面愈合,而晚期重用生肌药物能促进细胞凋亡,有利于减少疤痕形成.
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补肾活血法对子宫内膜异位症模型大鼠细胞凋亡的影响
目的 探讨补肾活血法治疗子宫内膜异位症的细胞凋亡机制. 方法 将雌性8～12周龄SD大鼠分为模型组、西药组、中药组及中西药合并组,每组15只.造模成功后,分别给药4周,采用光镜、电镜、TUNEL法及免疫组化法检测药物干预前后模型大鼠异位子宫内膜的病理形态学、凋亡细胞的阳性率及凋亡调控蛋白bcl-2、bax的阳性表达. 结果 中西药合并组的异位内膜组织发生凋亡的改变为明显,凋亡指数高,并可明显下调bcl-2蛋白的阳性表达和提升bax蛋白阳性的表达,从而使bcl-2/bax比值下降,其次为中药组、西药组和模型组. 结论 子宫内膜异位症的发生与细胞凋亡能力的下降有关.补肾活血中药能促进异位内膜细胞发生凋亡,使异位病灶萎缩、消退细胞.
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补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体凋亡的影响
目的 观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体凋亡的影响. 方法 复制小鼠胚泡着床障碍模型,分为对照组、模型组和治疗组,每组30只.观察小鼠妊娠率和着床胚泡数,分析子宫内膜腺体的凋亡情况,检测子宫内膜腺体的增殖细胞核抗原(PCNA)、bax、bcl-2和激活型Caspase-3蛋白表达情况. 结果 模型组妊娠率和平均着床胚泡数均显著降低,治疗组两者均较模型组显著提高(P<0.05或P<0.01).模型组子宫内膜腺体增殖指数(PI)明显高于对照组(P<0.01),而凋亡指数(AI)则明显低于对照组(P<0.05);治疗组与模型组比较,腺体PI明显降低而AI明显增高(P<0.01),两者与对照组比较差异均无统计学意义.模型组子宫内膜腺体中bax和激活型Caspase-3蛋白显著低于对照组(P<0.01);治疗组两者则显著高于模型组(P<0.01);治疗组与对照组差异无统计学意义. 结论 促进子宫内膜腺体中bax蛋白的表达和Caspase-3的激活,调节植入窗期腺体细胞增殖和凋亡的平衡,可能是补肾益气和血方促进子宫内膜接受性建立和改善胚泡着床障碍的机制之一.
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桥本甲状腺炎甲状腺组织细胞凋亡与凋亡基因Bc1-2、Bax表达
为了探讨桥本甲状腺炎(HT)甲状腺组织细胞凋亡的变化、凋亡基因Bc1-2、Bax的表达及其与HT发病机制的关系, 采用TUNEL法检测41例HT、10例正常甲状腺组织细胞凋亡状况, 同时采用免疫组化S-P法检测Bc1-2、Bax表达及分布, 应用Mias99图像分析系统对免疫组化结果进行定量分析.结果表明: HT组甲状腺细胞凋亡率及甲状腺组织Bc1-2、Bax阳性颗粒面积、平均光密度和积分光密度均显著高于正常组(P＜0.05-0.001);HT甲状腺滤泡区Bc1-2阳性颗粒面积和积分光密度与Bax的比值明显低于正常甲状腺的比值, 其组织结构破坏较重区域中小滤泡及失去正常滤泡结构的腺上皮Bax表达高于其它腺上皮, 滤泡结构较完整的区域Bc1-2表达较高, 提示甲状腺细胞凋亡增高是HT甲状腺滤泡结构破坏和功能异常的重要机制之一; 凋亡基因Bc1-2、Bax表达的失衡与HT时甲状腺细胞凋亡增高密切相关.
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室旁核注射Apelin-13加重大鼠缺血-再灌注胃黏膜细胞凋亡
目的 研究大鼠室旁核(PVN)注射Apelin-13对胃缺血.再灌注(GI-R)的损伤作用及其细胞机制.方法 PVN内微量注射Apelin-13,制备GI-R模型,用免疫组化方法检测胃黏膜细胞的凋亡、增殖及凋亡相关基因BCL-2和BAX的表达.结果 (1)注射0.2、1.0和5.0 μg Apelin-13到PVN,GI-R损伤显著加重,且有剂量-效应依赖关系;(2)与GI-R组相比,注射Apelin-13能明显增加GI-R后胃黏膜细胞的凋亡,减低胃黏膜细胞的增殖,同时可以增加促凋亡因子BAX蛋白的表达,明显降低抗凋亡因子BCL-2蛋白的表达.结论 室旁核内注射Apelin-13可促进胃黏膜细胞的凋亡、抑制其增殖,对GI-R损伤产生显著的加重作用.
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细胞增殖和凋亡失调在肺曲菌病发病中的意义
目的 观察细胞增殖与凋亡在肺曲菌病中的表达特征,探讨其在发病中的意义.方法 选用成人正常肺组织10例(对照组1)、肺曲菌病周围相对正常肺组织20例(对照组2)及肺曲菌病20例(病例组),采用免疫组化法检测KI-67、BCL-2和BAX的表达.结果 肺曲菌病病变区支气管上皮细胞KI-67和BAX的表达明显强于两对照组(P<0.01);BCL-2的表达明显弱于两对照组(P<0.05);BAX/BCL-2的比值明显高于两对照组(P<0.01);肺曲菌病3种亚型中,BAX/BCL-2的比值在IPA中显著高于ABPA和曲菌球(P<0.05).结论 细胞增殖和凋亡的失调在肺曲菌病发生发展中起重要的作用.
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氯沙坦降低心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡
目的 观察氯沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 选8周龄雄性SD大鼠,分为对照组(C组)、心衰组(HF组)和治疗组(LS组).采用腹腔注射阿霉素造模,LS组同时氯沙坦灌胃.透射电镜观察心肌超微结构,检测血清中CPK、CK-MB及LDH的含量.用原位脱氧核糖核酸酶末端标记法(TUNEL法)检测大鼠心肌细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠心肌BAX、BCL-2蛋白的表达.结果 HF组与C组相比,心肌细胞损伤明显,并可见凋亡小体,血清中CPK、CK-MB和LDH升高;LS组与HF组相比,心肌细胞凋亡指数下调(P＜0.01),心肌细胞BCL-2表达增加,BAX表达减少.结论 氯沙坦可有效抑制心力衰竭过程中发生的心肌细胞凋亡,逆转心肌损伤,改善心衰进程.
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大鼠应激性胃黏膜损伤时细胞发生凋亡
目的 探讨急性胃黏膜损伤时细胞凋亡形式及作用.方法 制备大鼠水浸-束缚应激(WRS)模型,计算溃疡指数(UI);TUNEL法检测胃黏膜细胞凋亡;透射电镜观察细胞形态;免疫组化法检测BCl-2/BAX蛋白的表达.结果 与正常大鼠比较,WRS后2 h,黏膜损伤严重(P＜0.01),凋亡细胞明显增多(P＜0.01),BCl-2表达明显减弱(P＜0.05),BAX表达明显增加(P＜0.01);WRS后24 h,黏膜修复,凋亡细胞仍高于正常水平(P＜0.05),BCl-2表达基本恢复正常,BAX表达仍高于正常水平(P＜0.05).透射电镜下可见WRS组发生凋亡的细胞形态各异.结论 细胞凋亡是急性胃黏膜损伤过程中细胞死亡的重要形式.
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蝎毒抗帕金森病小鼠多巴胺能神经元凋亡
研究蝎毒对帕金森病(PD)小鼠脑内多巴胺能神经元的抗凋亡作用及其机制.用C57BL/6-品系小鼠,每日于颈部皮下注入1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP,20 mg/kg)复制帕金森病模型,随机分为模型组及蝎毒(SV)提取液高(200 mg/kg)、低剂量(20 mg/kg) 治疗组;另设对照组(NS) 和空白给SV高、低剂量组.各组均为8只.采用爬杆、游泳行为学检测小鼠的运动功能障碍;应用DNA断裂点标记法(TUNEL)检测黑质致密部(SNc)多巴胺(DA)能神经元的凋亡;利用免疫细胞化学法检测Bcl-2/Bax基因的表达.结果表明:SV能改善PD小鼠运动功能障碍;模型组SNc部可见大量TUNEL阳性细胞(P＜0.01),治疗组TUNEL阳性细胞数均明显减少(P＜0.01);模型组SNc Bcl-2免疫反应活性(IR)阳性神经元数明显减少(P＜0.01),Bax-IR阳性神经元数明显增多(P＜0.01),治疗药组未见Bcl-2-IR阳性神经元数明显减少或Bax-IR阳性神经元数明显增多.提示:SV可能通过上调Bcl-2、下调Bax基因表达抑制DA能神经元凋亡.
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电刺激大鼠室旁核减轻缺血-再灌注胃黏膜细胞凋亡
目的 研究电刺激大鼠室旁核(PVN)对胃缺血-再灌注(GI-R)损伤的保护作用及细胞机制. 方法 电刺激大鼠PVN后,制备GI-R模型;用免疫组化方法检测胃黏膜细胞的凋亡和增殖以及凋亡相关基因BCL-2、BAX的表达. 结果 与单纯GI-R组相比,电刺激PVN能明显减少GI-R后30 min、1 h和3 h胃黏膜细胞的凋亡,并能加快胃黏膜细胞的增殖;同时可以明显增加抗凋亡因子BCL-2的蛋白表达,降低促凋亡因子BAX的蛋白表达. 结论 电刺激大鼠PVN对GI-R损伤的保护作用可能是通过上调抗凋亡因子BCL-2、下调促凋亡因子BAX的蛋白表达,从而促进了胃黏膜细胞增殖、抑制其凋亡来实现的.
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纳秒脉冲电场可用于治疗裸鼠人恶性黑色素瘤
目的 观察纳秒脉冲电场(nsPEF)治疗裸鼠皮下人恶性黑色素瘤的效果及其机制.方法 建立裸鼠皮下人黑色素瘤模型,随机分为:1)长期治疗组及对照组各10只,观察肿瘤生长、裸鼠存活率时间；2)短期治疗组(分2 h、4d组)及对照组(分别为4、6和6只),以HE染色检查细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳、TUNEL 法分析细胞凋亡,Western blot和免疫组织化学法检测肿瘤组织BAX、BCL-2的表达.两组均用电场峰值40 kV/cm、脉冲宽度200ns、频率1Hz、脉冲次数1000个的nsPEF进行治疗.结果 长期治疗后即刻看到肿瘤区均变为灰白色,表面皮肤均没有出血现象,肿瘤质地变硬；随生存时间延长,肿瘤体积较对照组明显缩小(P＜0.01)；平均生存时间(60.6±6.9)d较对照组(17.7±5.4)d明显延长(P＜0.01)；短期治疗组,4d时坏死区域增多；4d时较对照组有明显“阶梯”状分布,凋亡率明显高于对照组(P＜0.01),较对照组相比BAX表达明显增高(P＜0.01)、而BCL-2表达明显降低(P＜0.o1).结论 nsPEF对裸鼠皮下人黑色素瘤有明显的治疗效果,可能是通过调控BAX、BCL-2基因表达诱导细胞凋亡.
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血糖波动对糖尿病大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响
目的 观察糖尿病大鼠在血糖波动状态下海马神经元的病理形态学改变及BCL-2、BAX的异常表达,探讨血糖波动对糖尿病大鼠海马神经元的影响.方法 用链脲佐菌素(STZ)诱导,间断短效胰岛素应用制备糖尿病血糖波动模型.12周后,用免疫组化法检测海马神经元凋亡蛋白BCL-2、BAX的表达,分别在光镜、透射电镜下观察各组海马神经元病理形态学改变及超微结构的变化.结果 DM组BCL-2的表达较N组显著下降,BAX显著升高(P<0.01),出现锥体细胞退变的典型病理改变.RDM组BCL-2的表达较DM组进一步下降,BAX进一步升高(P<0.05),病理改变较DM组进一步加重.结论 糖尿病大鼠血糖波动可明显加速海马CA1区神经元凋亡,BCL-2、BAX的异常表达可能是糖尿病大鼠海马神经元损伤机制之一.
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抑郁模型大鼠杏仁核神经元凋亡增加
目的 观察细胞色素C(Cyt C)和凋亡相关基因BAX在抑郁模型大鼠杏仁核神经元的表达,探讨抑郁症杏仁核神经元凋亡的机制.方法 将Wistar大鼠随机分为对照组和模型组,每组15只.用慢性强迫游泳(4周)制备慢性强迫游泳应激抑郁模型.用糖水偏好实验、开场实验和Morris水迷宫检测大鼠行为学.用TUNEL和流式细胞术检测神经元凋亡和凋亡率,Western blot检测Cyt C和BAX蛋白的表达,RT-PCR检测BAXmRNA表达.结果 模型组糖水消耗量、糖水偏好百分比和直立次数低于对照组(P＜0.01或P＜0.05);逃避潜伏期高于对照组(P＜0.01);模型组和对照组凋亡细胞阳性率分别为24.08%±4.30%和3.08%±0.91%,凋亡率分别为17.14%±2.71%和3.34%±0.80%.凋亡相关基因BAX转录和BAX蛋白以及Cyt C蛋白明显高于对照组(P＜0.01).结论 抑郁模型大鼠杏仁核存在明显的神经元凋亡,BAX上调和Cyt C释放可能是抑郁患者杏仁核神经元凋亡的机制之一.
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橙皮苷预处理减轻Con A致小鼠急性肝损伤
目的 研究橙皮苷(HDN)预处理对刀豆蛋白A(Con A)致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制.方法 给小鼠连续灌胃HDN 10 d,用Con A诱导小鼠急性肝损伤,计算肝和脾指数,测定小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的水平,测定肝匀浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,HE染色观察肝脏病理变化,TUNEL法检测肝细胞凋亡,RT-PCR法检测小鼠肝组织Bcl-2和Bax mRNA表达.结果 HDN预处理能降低Con A致急性肝损伤小鼠肝和脾指数(P＜0.01);降低血清中ALT和AST水平(P＜0.01);降低MDA含量(P＜0.01),提高SOD活性(P＜0.01);明显抑制肝细胞凋亡;上调Bcl-2表达(P＜0.01),下调Bax表达(P＜0.01).结论 HDN预处理对Con A致小鼠急性肝损伤具有保护作用,可能与其抗脂质过氧化作用及抑制肝细胞凋亡有关.
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大鼠脑皮层冲击伤中BCL-2、BAX的表达变化
目的 探讨爆炸冲击伤中大鼠脑皮层BCL-2、BAX基因表达的变化规律.方法 应用爆炸冲击波致伤大鼠,致伤后不同时间(12～96h),光镜和电镜观察脑皮层形态变化;免疫组织化学方法观察BCL-2和BAX蛋白在脑皮层表达;凝胶电泳法观察大鼠脑组织DNA电泳结果.结果 爆炸后12～96 h,光镜和电镜观察脑皮层细胞凋亡改变增多;爆炸后24 h脑组织曰BCL-2、BAX基因表达阳性细胞率均高(P<0.01),BCL-2/BAX表达比值随时间延长而降低(P<0.01);脑组织DNA电泳在爆炸后12、24和48 h组形成典型阶梯状条带;上述改变以24 h组明显.结论 爆炸冲击伤可导致部分脑皮层神经元的细胞凋亡,BCL-2和BAX表达比值下降.
