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孕妇尿样中邻苯二甲酸酯代谢产物和脐带血中睾丸甾体激素水平的关联性研究
目的 研究孕妇尿样中邻苯二甲酸酯(PAEs)代谢产物与脐带血中抑制素B(INHB)、胰岛素样因子3(INSL3)水平的关联性.方法 将2011年6月至2012年9月在天津某三级甲等妇产科医院进行产前检查的孕妇作为研究对象,采集孕期晨尿中段尿,随访其妊娠过程直至分娩,抽取脐带血10 ml,追踪到符合条件的孕妇-新生儿共69对.应用固相萃取-三重四极杆高效液相色谱串联质谱技术检测孕期尿样中PAEs的4种代谢产物[邻苯二甲酸单甲酯(MMP)、邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)、邻苯二甲酸单乙酯(MEP)、邻苯二甲酸单丁酯(MBP)]水平.应用ELISA测定脐血样品中INHB、INSL3水平,应用多元线性回归模型进行关联性分析.结果 孕妇尿中MMP、MEHP、MEP和MBP中位数分别为49.74、24.96、19.52和17.73 μg/L；脐带血中INHB和INSL3中位数分别为89.09和106.21 ng/L.MMP(β '=-0.252)、MEP(β'=-0.363)和∑PAEs(β'=-0.346)的改变对INHB水平的影响具有统计学意义,且呈负相关；∑PAEs(β'=-0.313)的改变对INSL3水平的影响具有统计学意义,且呈负相关.结论 孕期暴露PAEs代谢产物水平与脐血中INHB和INSL3水平具有关联性.
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隐睾症病因的研究
隐症是临床上常见的小儿泌尿生殖系统先天畸形的疾病.隐睾症的病因一直未能明确,解剖学、性激素及其受体、胰岛素样因子3、生殖股神经、降钙素基因相关肽等是目前研究的热点.
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苯并(a)芘对大鼠睾丸胰岛素样因子3基因表达的影响
目的 观察青春期大鼠苯并(a)芘(BaP)亚慢性染毒对睾丸间质细胞功能标志物胰岛素样因子3(Ins13)mRNA表达水平的影响.方法 72只青春期健康雄性SD大鼠随机分为溶剂对照组(玉米油)、1、5mg/kgBaP染毒组,每组24只.隔日染毒,等体积灌胃,连续染毒90d.分别于染毒后30、60和90 d,每组各随机选取8只大鼠处死.取睾丸、附睾、心、肝、脾、肾称重并计算脏器系数,放免法检测血清睾酮含量,实时荧光定量PCR法检测睾丸Ins13 mRNA表达差异.结果 60dBaP各染毒组以及90 d5 mg/kg组附睾系数显著低于对照组(P＜0.05);染毒30 d5 mg/kg组肝脏系数显著大于对照组(P＜0.05),90d时显著小于对照组(P＜0.05);血清睾酮水平30 d和60 d 5 mg/kg染毒组明显高于对照组(P＜0.05),90 d 5 mg/kg组明显低于1 mg/kg组(P＜0.05);BaP处理组睾丸Ins13 mRNA表达水平各时相点比对照组显著下调(P＜0.01),染毒60 d比30 d显著下调(P＜0.05),尤其是5mg/kg组(P＜0.01).结论 青春期大鼠BaP亚慢性暴露可以干扰血清睾酮及睾丸Ins13基因表达水平,对附睾、肝脏可能有潜在毒性.
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邻苯二甲酸二丁酯与邻苯二甲酸单丁酯对睾丸间质细胞睾酮水平和胰岛素样因子3表达的影响
目的 观察邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)、邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)对小鼠睾丸间质瘤细胞(MA-10)中胰岛素样因子3(insulin-like factor 3,INSL3) mRNA 及蛋白的表达量和细胞睾酮分泌水平的影响.方法 以小鼠睾丸间质瘤细胞(MA-10)为模型,经过DBP、MBP直接染毒后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养基上清中睾酮的含量,采用荧光定量PCR测定细胞中INSL3 mRNA的表达,采用蛋白免疫印迹法(western blot)测定INSL3蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,MA-10细胞睾酮合成量在低染毒剂量(10-9～10-6 mol/L)时均表现出刺激效应,睾酮含量增加；在高染毒剂量(10-3 mol/L)时表现抑制效应,随着染毒时间的延长,睾酮水平逐渐降低.荧光定量PCR以及Western blot测定结果显示,DBP在10-6、10-4 mol/L染毒时,INSL3 mRNA及蛋白表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05)；随着MBP染毒剂量的增加,INSL3 mRNA及蛋白表达水平呈现下降趋势,但MBP在10-7 mol/L时,与对照组相比,对MA-10细胞中INSL3蛋白表达表现出刺激作用.结论 DBP、MBP染毒对MA-10细胞睾酮分泌表现出高剂量抑制、低剂量刺激的双向效应；DBP、MBP染毒可抑制MA-10细胞中INSL3 mRNA和蛋白的表达.
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胰岛素样因子3用于青少年精索静脉曲张评估
目的:探讨胰岛素样因子3(INSL-3)应用于青少年精索静脉曲张评估的可行性.方法:将80例青少年精索静脉曲张患者作为阳性组,另外纳入80例健康青少年志愿者作为正常对照组,对比分析两组左侧睾丸体积,睾丸萎缩指数(AI)、血清促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)、精液量、精子密度、精子活力(a+b)、正常形态精子率及INSL-3等参数,统计分析阳性组和对照组在INSL-3表达是否存在差异,分析INSL-3与其他检测指标的相关性.结果:和对照组比较,阳性组左侧睾丸体积、睾丸萎缩指数显著偏小(P<0.05).阳性组血清促卵泡激素(6.21±2.41)IU/L、黄体生成素(6.02±1.47)IU/L、睾酮(7.87±1.66)μg/L显著升高;而精液量(2.86±1.19)mL、精子密度(60.77±35.97)M/mL、精子活力(a+b)(29.14±16.77)%和正常形态精子率(60.31±18.66)%明显降低(P<0.05);INSL-3水平(259.6±30.7)pg/mL明显下降(P<0.01);INSL-3的浓度与精子活力(a+b)和正常形态精子率显著相关(P<0.05).结论:血清INSL-3水平与青少年精索静脉曲张紧密相关,相比于常规指标与疾病的相关性更强,有望用于青少年精索静脉曲张的诊断和干预.
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胰岛素样因子3及其在多囊卵巢综合征中的作用
胰岛素样因子3（INSL3）既往被称为松弛素样因子，男性主要由睾丸间质细胞分泌，女性主要由卵巢卵泡膜细胞分泌。近有研究发现，多囊卵巢综合征（PCOS）患者特别是非肥胖的PCOS患者，INSL3浓度较正常人明显升高，这被认为是与黄体生成激素依赖性卵巢高雄激素血症有关。综述INSL3基因及分子结构、受体（新型G蛋白耦联受体LGR8/GREAT）在女性中的生理学作用，INSL3对PCOS患者发生和发展的重要影响。
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胰岛素样因子3研究进展
胰岛素样因子3属于胰岛素超家族松弛素亚族,是睾丸间质细胞分泌的主要产物,其合成完全依赖睾丸间质细胞的分化状态.胰岛素样因子3除了在睾丸下降方面起重要作用,对于评估睾丸间质细胞功能也很敏感,有很大的临床价值.胰岛素样因子3在生殖细胞存活、骨代谢调控中发挥重要作用.
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INSL3在生殖领域的研究进展
胰岛素样因子3 (INSL3)既往被称为松弛素样因子,女性主要由卵巢卵泡膜细胞以及黄体分泌,男性主要由睾丸Leydig细胞分泌.近年来逐渐成为生殖领域的研究热点,INSL3可用于评价卵巢的功能,且在男性生殖领域与隐睾、精索静脉曲张、年龄以及性功能密切相关,同时胎儿期羊水中INSL3的水平与胎儿的性别有关;其与生殖系统的功能以及相关病变联系紧密,因此有望成为一种新的生殖内分泌疾病的血清标志物.本文就INSL3与男性生殖系统、女性生殖系统的关系以及孕期INSL3的特点进行综述.
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胰岛素样因子3受体(LGR8)在生精细胞与精子顶体中表达
使用免疫共沉淀及Western印迹,检测胰岛素样因子3(Insl3)受体(LGR8)在野生型(Wt)及Insl3基因敲除鼠(K0)睾丸表达情况.取胚胎18天(E18)和出生后(P)1、3、7、14、17、20、23、51和90天Wt及KO鼠睾丸及Wt小鼠精子,用免疫组化法检测LGR8表达.LGR8蛋白在所有年龄段小鼠睾丸间质细胞均为Wt着色强于KO鼠(均P＜0.05).LGR8蛋白在小鼠睾丸的表达随年龄变化；除了在出生1天的Wt小鼠睾丸精细胞上强表达外,主要表达在青春期后、成熟的精细胞上及精子的顶体.
关键词： 胰岛素样因子3 富含亮氨酸的G蛋白受体 隐睾 精子 精子顶体 -
不同性激素对大鼠睾丸下降的影响及其与胰岛素样因子3 mRNA表达的关系
目的 观察苯甲酸雌二醇(E2)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、促黄体激素释放激素(LHRH)对大鼠睾丸下降的影响及其与胰岛素样因子3(INSL3)表达的关系.方法 将刚出生的40只SD雄性大鼠分成4组,每组10只,在生后29 d内分别给每组每天注射生理盐水、E2、hCG+E2、LHRH+E2.第30天从睾丸组织抽提RNA,通过RT-PCR分析INSL3的表达.结果 (1)第30天生理盐水组睾丸下降率100%(20/20),E2组为0%(0/20),hCG+E2组为85%(17/20),LHRH+E2组为70%(14/20).后两组之间差别无统计学意义(P=0.45).(2)各组睾丸重量差异有统计学意义(F=56.67,P＜0.01),轻的是E2组.(3)E2损害了睾丸生精细胞,然而hCG、LHRH能改善上述情况.(4)E2组没有INSL3 mRNA的表达,而其他组均有正常表达.结论 E2能抑制大鼠睾丸的下降,而hCG、LHRH能促使大鼠睾丸的下降,其机制可能与INSL3 mRNA的表达有关.
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隐睾症发病的内分泌分子病因学研究进展
隐睾症系指在胎儿期睾丸未能按照正常发育过程从腰部腹膜后下降,导致一侧或双侧睾丸未能正常下降至同侧阴囊内,又称睾丸下降不全,是小儿常见的男性生殖系统先天性疾病之一.隐睾症在足月新生儿中的发病率约为2％～4％[1],是男性不育和睾丸肿瘤的重要危险因素.睾丸通常从怀孕的第28周开始下降,一般大多数隐睾在出生时或者婴儿早期被发现.
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LGR8基因与隐睾相关性的研究进展
LGR8(leucine rich repeat containing G protein coupled receptor 8),中文名称为富含亮氨酸的G蛋白偶联受体8,是体内胰岛素样因子3(INSL3)的特异性受体,属于G蛋白偶联受体(GPCR)家族.LGR8能与INSL3结合形成受体配体复合物,参与睾丸下降的第一过程(经腹下降阶段),被认为是导致人类隐睾症的一个重要因素.本文就近年来对LGR8基因及其突变与隐睾相关性的研究作一综述.
关键词： 隐睾 富含亮氨酸的G蛋白偶联受体8 胰岛素样因子3 -
己烯雌酚对小鼠睾丸引带中LGR8表达的影响
目的:通过体内实验研究己烯雌酚(DES)对小鼠睾丸引带中胰岛素样因子3受体LGR8的影响,从而探讨外源性雌激素对小鼠睾丸下降的影响. 方法:8～10周龄KM孕鼠随机分为正常组、空白对照组和实验组(0.1、1.0、10、100 μg/kg DES 4个剂量组),共6组,每组20只.于孕9～17 d每天分别给予实验组妊娠小鼠不同剂量的DES(0.1、1、10、100 μg/kg),空白对照组给予等体积DMSO+生理盐水,正常组不给药.应用免疫组化和RT-PCR分别检测胎鼠和幼鼠睾丸引带中LGR8蛋白和mRNA的表达. 结果:HE染色可见胎鼠正常组、对照组睾丸引带发育良好,中间的间叶组织和外周的肌源细胞之间分界清楚；实验组可见睾丸引带发育不良,间叶组织和肌源细胞之间无明显分界,组织结构紊乱.幼鼠正常组和实验组睾丸引带发育未见明显不同.LGR8表达于睾丸引带肌源细胞和间叶组织细胞,以肌源细胞表达为主.实验组LGR8阳性表达较正常组弱,胎鼠各实验组和幼鼠DES 1、10、100 μg组与同发育阶段的正常组相比均有统计学意义(P＜0.05).DES高剂量(10、100μg)组与同发育阶段的正常组相比LGR8mRNA表达增加(P＜0.05).各实验组PCR产物测序均未见明显突变. 结论:DES可影响小鼠睾丸引带LGR8 mRNA和蛋白的表达,DES可能通过影响INSL3-LGR8信号系统干扰睾丸引带的发育,进而影响睾丸正常下降.
关键词： 己烯雌酚 睾丸引带 富含亮氨酸的G蛋白偶联受体 胰岛素样因子3 -
影响睾丸引带发育的内分泌因素研究进展
睾丸引带与睾丸下降关系密切,它的分化发育和多种因素有关,特别是雄激素、降钙素基因相关肽、胰岛素样因子3、苗勒管抑制物质、表皮生长因子以及环境雌激素(EEs)等,其中降钙素基因相关肽、胰岛素样因子3和EEs对生殖系统的影响是目前研究的热点.从影响睾丸引带发育的角度探讨EEs对睾丸及生殖发育的影响很有意义.
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胰岛素样因子3在氟他胺诱导的小鼠隐睾模型中的表达和意义
目的:通过氟他胺诱导小鼠隐睾动物模型的建立,探讨其睾丸组织的胰岛素样因子3(INSL-3)mRNA表达的变化. 方法:妊娠BALB/c小鼠随机分成A、B、C、D、E5组,每组9只(雄鼠3只,雌鼠6只),合笼交配;分别在雌鼠孕第12 ～21天持续10 d给予氟他胺灌胃,剂量依次为0、150、300、500、700 mg/kg;分别在出生后第4周和第8周时运用荧光定量PCR技术检测子代小鼠睾丸组织中INSL-3 mRNA的表达情况. 结果:A组小鼠无隐睾,B、C组有单侧隐睾,发生率分别10.0％和25.0％;D、E组有双侧隐睾的发生,发生率分别为21.1％和40.0％.随着给药剂量的增大,INSL-3 mRNA的表达逐渐降低;与对照组相比,B、C组表达强度无明显变化(P＞0.05);D、E组表达强度明显低于A组(P＜0.05). 结论:剂量为150与300 mg/kg的氟他胺能诱导单侧隐睾模型,剂量为500与700 mg/kg的氟他胺能诱导双侧隐睾模型;并且隐睾小鼠睾丸的INSL-3表达随氟他胺浓度升高水平明显下降,可能是隐睾发生的机制之一.
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胰岛素样因子3对体外培养的小鼠睾丸引带细胞增殖和收缩活性的影响
目的 探讨胰岛素样因子3 (INSL3)对体外培养的小鼠睾丸引带细胞增殖和收缩活性的影响.方法 手术放大镜解剖出3日龄雄性昆明小鼠的睾丸引带组织,进行原代细胞培养后传代.将传代细胞随机分为正常对照组和实验组,实验组加入INSL3,浓度分别为3.3×10-3 μmol·L-1、3.3×10-4 μmol·L-1、3.3×10-5 μmol·L-及3.3 × 10-6 μmol·L-1,分别持续作用12 h、24h、48 h,利用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测其细胞增殖情况；细胞免疫荧光和流式细胞术检测其细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)的结构变化及表达情况.结果 不同浓度INSL3作用后的不同时间点,检测细胞增殖和收缩活性的相关指标,结果均存在时间-剂量效应,且差异有统计学意义(p＜0.05).正常对照组及各实验组细胞均呈持续性增殖,24h后增殖更明显.与正常对照组比较,INSL3可刺激睾丸引带细胞骨架重塑,细胞周边肌动蛋白丝带增多,胞质中微丝F-actin明显粗大、变长,细胞中F-actin表达量增加.各实验组中以3.3 ×10-3 μmol·L-1组变化尤其明显.结论 INSL3对睾丸引带细胞增殖和收缩活性有直接促进作用,可能参与睾丸引带发育甚或睾丸下降过程的调节.
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己烯雌酚和胰岛素样因子3对睾丸引带细胞中富含亮氨酸的G蛋白耦联受体8mRNA和蛋白表达水平的影响
目的 探讨不同水平的己烯雌酚(DES)和胰岛素样因子3(INSL3)对体外培养的睾丸引带细胞中富含亮氨酸的G蛋白耦联受体8(LGR8) mRNA和蛋白表达的影响.方法 将3日龄的雄性昆明小鼠的睾丸引带组织解剖取出,并进行细胞培养.传代后,随机分为正常对照组及实验组(不同浓度DES组:A～E组,不同浓度INSL3组:Ⅰ～Ⅳ组)共11组.其中,实验组加入的DES浓度分别是3.7×10-2 mmol·L-1、3.7×10-3 mmol·L-1、3.7×10-4 mmol·L-1、3.7×10-5 mmol·L-1和二甲基亚砜溶剂对照组;INSL3的浓度分别为3.3×10-3 μmol·L-1、3.3×10-4 μmol·L-1、3.3×10-5 μmol·L-1及3.3×10-6 μmol·L-1.加药持续作用48 h后,应用反转录PCR和流式细胞术分析睾丸引带细胞中LGR8 mRNA及其蛋白的表达情况.结果 A组和Ⅳ组LGR8的mRNA及蛋白水平显著高于正常对照组(P<0.01);与正常对照组相比,B、C、D组LGR8 mRNA及其蛋白表达均显著下降(Pa<0.05),而E组及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组LGR8 mRNA和其蛋白的表达差异均无统计学意义(Pa>0.05).结论 高剂量的DES和极低剂量的INSL3均能上调睾丸引带细胞中LGR8 mRNA及其蛋白表达水平,推测DES和INSL3可能通过LGR8作用途径来影响睾丸引带的发育.
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DEHP诱导的隐睾鼠胰岛素样因子3基因CpG岛甲基化状态研究
目的 研究胰岛素样因子3(insulin-like factor 3,INSL3)基因在邻苯二甲酸二已酯(DEHP)致小鼠隐睾中DNA甲基化的状态.方法 运用"MethPrimer"软件对INSL3基因进行分析.预测CpG岛,通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MS-PCR)检测INSL3基因CpG岛的甲基化状况,并应用RT-PCR检测INSL3基因在正常组与实验组睾丸组织中的表达情况.结果实验组INSL3基凶第一外显子区存在CpG岛甲基化;实验组INSL3基因mRNA表达显著下降.结论 INSL3基因第一外显子区CpG岛的异常甲基化导致INSL3在隐睾鼠睾丸中表达降低,可能与隐睾的发生密切相关.
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己烯雌酚干预下围产期小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA的表达变化
目的:通过体内、体外实验研究己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES)对KM小鼠围产期小鼠睾丸Leydig细胞胰岛素样因子3(Insuliu-like hormone 3,INSL3)mRNA表达的影响,探讨隐睾发生的可能机制.方法:DES分别以低、中、高3组剂量(1、5、25μg/L)分别作用于原代培养的胎龄16 d小鼠胚胎Leydig细胞,应用RT-PCR和原位分子杂交技术检测DES对睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA 的表达水平;DES分别以低、中、高3组剂量[1μg/(kg·d)、10 μg/(kg·d)、100 μg/(kg·d)]灌胃作用于GD(Gestation day)12～PND(Postnatal day)3孕鼠,RT～PCR检测新生小鼠睾丸INSL3 mRNA表达的相对强度,并比较其差异性.结果:DES改变原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞和新生小鼠睾丸的形态结构,以中、高剂量组改变尤为明显;体外实验中,DES中、高剂量组原代Leydig细胞INSL3 mRNA表达水平均明显低于对照组(P＜0.01)和DES低剂量组(P＜0.01);DES试验组Leydig细胞INSL3 mRNA表达相对强度低于对照组(P＜0.01) .体内实验中,DES试验组不同时间点的新生鼠睾丸INSL3 mRNA表达相对强度均明显低于对照组(P＜0.05,或P＜0.01),实验组组间两两比较也有差异(P＜0.05,或P＜0.01) .结论:DES可下调睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA的表达水平,其可能是影响小鼠睾丸引带发育导致隐睾的机制之一.
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胰岛素样因子3应用于男性迟发性性腺功能减退诊断的可行性研究
目的：分析胰岛素样因子3（insulin like factor 3， INSL 3）应用于男性迟发性性腺功能减退（ late onset hypogonadism， LOH）诊断的可行性。方法选取中老年男性，间隔1个月抽取空腹晨血2次，分析INSL 3在血清中的平均浓度及其稳定性；依据男性LOH的诊断标准，分析患者组与正常对照组之间血清中INSL 3的浓度是否存在差异。结果接受重复抽血的中老年男性44人，血清INSL 3的浓度均值为（1．86±0．64）ng／mL，经过1个月的间隔期血清中INSL 3的浓度变化差异无统计学意义（P＞0.05）。在患者组与正常对照组之间血清中INSL 3的浓度差异有统计学意义（ P＜0.05）。进一步研究发现血清INSL 3浓度与促黄体生成素（luteotropic hormone，LH）、总睾酮、游离睾酮之间存在相关性（P＜0.05），而与绝育术、烟酒、糖尿病、高血压、冠心病、体质量指数和中老年男性症状量表（ aging males’ symptoms scale，AMS）评分之间无相关性（ P＞0.05）。结论初步研究提示血清INSL 3与男性性腺功能状态紧密相关且表达稳定，有望用于LOH的诊断。
