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内毒素介导的急性肺损伤大鼠白细胞介素13表达及肺组织激活剂蛋白1活性的变化
目的观察内毒素/脂多糖(LPS)致伤大鼠的血浆白细胞介素(IL)13含量及肺组织激活剂蛋白1(AP-1)活性的变化,探讨AP-1与IL-13表达的关系.方法将120只Wistar大鼠根据注射LPS剂量不同随机分为A(2 mg/kg)、B(4 mg/kg)、C(6 mg/kg)、D(8 mg/kg)组,并设立相应的等渗盐水对照组(NS组),取伤后1、2、4、6 h为观察时相点,每组每时相点6只大鼠.致伤Wistar大鼠,复制全身炎症反应综合征-急性肺损伤(SIRS-ALI)模型.在致伤后1、2、4、6 h,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血浆IL-13含量,采用凝胶迁移率分析法(EMSA)检测肺组织中AP-1活性.结果 LPS可使IL-13含量及AP-1活性同步升高.A、B、C、D组与NS组比较,差异均有显著性意义及非常显著性意义(P＜0.05～0.01).C、D组的血浆IL-13含量及肺组织中的AP-1活性均显著增加,D组两指标的峰值分别为(45.62±5.78)pg/mi、(177.68±6.81)NII%,均出现在伤后2 h.结论IL-13表达增强时AP-1活性亦升高,并与SIRS-ALI发生有关.
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机械牵张对缺血缺氧心肌细胞肌球蛋白重链mRNA表达的影响
目的探讨机械牵张对缺血缺氧心肌细胞肌球蛋白重链(MHC)mRNA表达的影响.方法建立离体培养的SD乳鼠心肌细胞机械牵张模型,并施加无糖缺氧刺激因素,模拟烧伤后缺血缺氧损害.实验分10%牵张组、缺血缺氧培养组、10%牵张+缺血缺氧培养组,每组每时相点3皿细胞.各组分别在刺激前和刺激后1、3、6、12 h时相点进行观察.采用二步法逆转录聚合酶链反应检测心肌细胞MHC mRNA表达的变化,并用凝胶软件进行分析.结果与刺激前比较,10%牵张组d、β型MHC mRNA表达均增加,但以β型增加为主(P＜0.01).缺血缺氧培养组α-MHC mRNA向β-MHC mRNA转化加速,且缺氧12 h后心肌细胞α-MHC mRNA下调明显(P＜0.05);β-MHC mRNA表达先升后降,6 h表达强(P＜0.05).10%牵张+缺血缺氧培养组α-MHC mRNA向β-MHC mRNA转化明显,随机械刺激时间的延长转化加剧;12 h后α、β型MHC mRNA表达均下调(P＜0.05).结论机械牵张进一步加剧缺血缺氧对MHC mRNA表达的下调,可能是严重烧伤后早期心肌功能降低的原因之一.
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PTEN基因在原发性肝细胞癌中的表达
目的 探讨PTEN基因变异在原发性肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用.方法 应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对30例肝癌组织、30例癌旁组织和16例正常肝组织细胞中PTEN基因的表达情况进行了检测和分析.结果 肝癌组织中PTEN基因表达水平明显低于癌旁组织和正常肝组织(F＝6.785,q=4.269、4.549,P＜0.05).低分化肝癌组织中PTEN基因表达水平显著低于高、中分化肝癌组织 (t=3.266,P＜0.01).结论 PTEN基因失活与肝癌发生密切相关;PTEN基因表达水平与HCC恶性程度有明显相关性,提示其变异可以作为病人预后判断的指标.
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SFRP5 mRNA在大鼠肌肉挫伤后的表达
目的：通过real-time PCR技术检测大鼠肌肉挫伤后组织中分泌型卷曲相关蛋白5（secreted frizzled-related protein 5，SFRP5） mRNA的表达变化情况，分析其与挫伤时间及损伤类型的关系。方法90只SD大鼠，随机分为肌肉挫伤后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48 h组，切创后4、8 h组和对照组。于相应时间点取损伤处肌肉组织样本。提取组织中总RNA，反转录后用于SFRP5 mRNA表达量的检测。结果SFRP5 mRNA的表达量在损伤后很快明显下降，在20 h时降至低，然后逐渐上升，但挫伤后48 h内其表达量均低于对照组；切创组SFRP5 mRNA的表达量均明显降低，在伤后4 h，切创组低于挫伤组，而在8 h时两组的表达差异无统计学意义。结论 SFRP5 mRNA在大鼠肌肉挫伤后一段时间内呈现规律性表达，可望作为推断骨骼肌损伤时间的指标之一。
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不同功能基因mRNA推断损伤时间的指标同质性
目的 探索大鼠骨骼肌挫伤后PUM2、TAB2、Cx45、CHRNA1四个不同功能基因mRNA表达在个体间的同质性高低.方法 利用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(quantitative real-time reverse transcrip-tion-polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测上述PUM2、TAB2、Cx45、CHRNA1 mRNA的相对表达量,计算每个损伤组不同个体间的相对表达量的变异系数(coefficient of variation,CV),并比较CV极值、累积变异度、集中趋势(X CV)和离散趋势(CV CV).结果 PUM2、TAB2 mRNA在多个时间点出现较大CV,而Cx45、CHRNA1 mRNA的CV较小.累积变异度从大到小依次为PUM2 mRNA、CHRNA1 mRNA、TAB2 mRNA和Cx45 mRNA.PUM2 mRNA相对表达量的CV CV高于TAB2、Cx45、CHRNA1 mRNA的相对表达量(P<0.05).TAB2、CHRNA1、Cx45 mRNA间相对表达量的CV CV差异无统计学意义(P>0.05).结论 参与生物过程调控作用的PUM2、CHRNA1 mRNA相对表达量个体间同质性低,其次为TAB2 mRNA,参与细胞结构组成的Cx45、CHRNA1 mRNA相对表达量个体间同质性较高,在今后筛选用于损伤时间推断的mRNA指标时应注意其功能分类.
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急性白血病病人WT1mRNA表达及临床意义
目的 研究肾母细胞瘤基因1 (WT1) mRNA在急性白血病(AL)病人骨髓中的表达及其临床意义.方法 采用RQ-PCR方法检测65例初治AL病人骨髓中WT1 mRNA的相对表达量,并随访观察其中53例病人疾病不同阶段骨髓中WT1 mRNA表达水平.结果 65例AL病人中,78.5％的病人骨髓中WT1 mRNA表达阳性,急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性髓系白血病(AML)病人骨髓中WT1 mRNA阳性表达率分别为62.5％和80.4％.初诊组、复发组、未缓解(NR)组病人骨髓中WT1 mRNA相对表达量显著高于完全缓解(CR)组(Z=-6.089～-5.450,P＜0.01);WT1 mRNA阳性组病人的CR率明显低于阴性组病人(P=0.012).结论 AL病人WT1 mRNA表达水平与疾病的发生发展密切相关,可作为临床疗效评估、预后判断及微小残留病检测的指标.
