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大肠癌细胞表达的Fas配体具有功能性
目的:探讨大肠癌细胞Fas配体(FasL) mRNA和蛋白的表达及其功能.方法:分别采用RT-PCR和Western印迹法以及氚释放细胞活性测定技术检测大肠癌细胞株中FasL mRNA和蛋白的表达及其功能.结果:所检测的6株大肠癌细胞(RPMI 4788、HCT-116、DLD-1、LoVo、WiDr和COLO 320DM)全部表达FasL mRNA和蛋白;DLD-1, LoVo 和 WiDr等部分大肠癌细胞具有Fas依赖的细胞毒活性.其中DLD-1 细胞活性具有量效关系,并且乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA) 和离子霉素(ionomycine )刺激能显著增强DLD-1的细胞活性.结论:DLD-1、LoVo和WiDr等3株大肠癌细胞表达功能性Fas配体,并可能以此反击机体免疫系统,逃避免疫监督.
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GAD及GADmRNA在人胃癌组织中的表达
目的探讨人胃癌谷氨酸脱羧酶(GAD)、GADmRNA(包括GAD65mRNA和GAD67mRNA)的表达.方法随机选取30例胃癌手术标本,采用免疫组化法检测GAD,RT-PCR法检测GADmRNA的表达,并探讨与胃癌部位、浸润深度、分化程度、分期及有无淋巴结转移之间的关系.结果与正常胃黏膜组织比较,胃癌组织中GAD表达减弱(P＜0.05),但与胃癌的临床病理特征无明显相关,人胃癌组织及正常胃黏膜组织只有GAD67mRNA的表达,而无GAD65mRNA的表达.结论 GAD表达异常可能与胃癌的发生有密切关系;人胃癌组织及正常胃黏膜组织只有GAD67mRNA的表达.
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银屑病患者皮损中转化生长因子β受体及SMADs mRNA的低表达
目的观察银屑病患者皮损与非皮损组织以及正常人对照皮肤组织中转化生长因子β受体及其细胞内信号转导分子SMADs mRNA的表达,分析转化生长因子β信号转导在银屑病发病中的作用.方法用定量实时PCR法检测13例银屑病患者皮损与非皮损组织以及10例正常人对照皮肤组织中转化生长因子β受体Ⅰ型和Ⅱ型以及不同类型的SMADs(SMAD2、3、4、6、7)mRNA的表达.结果转化生长因子β受体Ⅰ型、Ⅱ型及各种SMADs mRNA水平在银屑病患者皮损处均明显低于正常人对照(P＜0.05或P＜0.01).然而,转化生长因子β受体Ⅰ型、Ⅱ型及SMAD2、3、6、7 mRNA的表达在非皮损组织与正常人对照皮肤组织中差异无显著性(P＞0.05).结论银屑病患者的皮损处存在有转化生长因子β信号转导功能下调,提示缺乏转化生长因子β介导的生长抑制在银屑病的发病中可能起着一定的作用.
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发夹状RNA对人乳头瘤病毒16型E6表达的影响
目的研究发夹状RNA对人乳头瘤病毒(HPV)E6基因表达的影响.方法构建发夹状RNA、正义RNA及反义RNA表达质粒,重组体转入人宫颈癌细胞株CaSKi,应用RT-PCR及蛋白印迹法检测其对CaSKi细胞E6 mRNA及蛋白表达的影响.结果发夹状RNA表达质粒的导入明显下调了E6 mRNA及蛋白表达,发现含有发夹状RNA的HPV-E6 mRNA表达水平相当于空白对照组的14.6%,蛋白表达水平相当于空白对照组的23.3%,此效果优于传统的反义RNA.结论利用发夹状RNA的干扰技术可有效抑制靶基因的表达.
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c-Met蛋白和c-Met mRNA在地方性及艾滋病相关性Kaposi肉瘤中的表达
目的探讨c-Met原癌基因蛋白和c-Met mRNA在地方性及艾滋病相关性Kaposi肉瘤不同期的表达.方法对源自坦桑尼亚首都Muhimbili医疗中心病理科的30份标本,用免疫组化、原位杂交方法进行了研究.结果根据Kaposi肉瘤组织中血管成分和梭形细胞的比例分为早期血管瘤样型(11个病灶)、晚期梭形细胞型(14个病灶)和中期混合型(13个病灶).c-Met蛋白在早期表达弱,晚期表达强,中期介于两者之间,相互间差异有非常显著性(P＜0.01);c-Met mRNA在不同期的表达与c-Met蛋白的表达类似.c-Met蛋白和c-Met mRNA在地方性和艾滋病相关性Kaposi肉瘤的表达差异无显著性(P＞0.05).结论c-Met表达的改变在地方性和艾滋病相关性Kaposi肉瘤的发生发展过程中起了作用.
关键词： 肉瘤 Kaposi 原癌基因蛋白质c-Met类 RNA 信使 -
天疱疮患者外周血单一核细胞γ干扰素、白介素10mRNA表达水平的研究
目的探讨天疱疮患者发病期和缓解期辅助性T细胞(Th)发病模式.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例天疱疮患者急性发病期、缓解期和20例正常对照外周血单一核细胞干扰素γ(IFN-γ)、白介素10(IL-10)、mRNA的表达水平.结果天疱疮患者急性发病期IFN-γ mRNA水平高于正常人,差异有显著性(P＜0.001);缓解期IFN-γ mRNA水平与正常人差异无显著性(P=0.9800).发病期IL-10 mRNA水平低于正常人,但差异无显著性(P=0.0834).结论天疱疮患者发病过程中有Th1/Th2细胞失平衡现象,发病期Th1型细胞因子IFN-γ可能占优势.
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99Tcm-hTERT mRNA反义分子探针荷MCF-7乳腺癌裸鼠显像
目的 制备99Tcm-人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA反义寡核苷酸(ASON)显像分子探针并验证其在荷MCF-7乳腺癌裸鼠早期诊断中的价值.方法 采用双功能螯合剂法制备99Tmc hTERT mRNA无义寡核苷酸(SON)、ASON探针.建立荷MCF-7乳腺癌裸鼠模型,运用阳离子脂质体介导法进行活体显像.采用SPSS 12.0软件进行单因素方差分析.结果 99Trc-hTERT mRNAASON标记率达到(76±5)%,放化纯＞96%,比活度达到1850 kBq/μg,室温放置和健康人血清孵育24 h后的放化纯均＞93%,SON与ASON的标记率基本一致.注射后4 h反义组荷瘤裸鼠右上肢接种肿瘤部位可见放射性摄取,6-8 h后显影清晰;无义组始终未见肿瘤部位放射性浓聚.反义组有和无脂质体介导的肿瘤/非肿瘤组织放射性(T/NT)比值分别为8.02±0.03和7.55±0.12,差异无统计学意义(t=-1.99,P＞0.05);无义组有和无脂质体介导的T/NT比值分别为1.23±0.06和1.33±0.15,差异无统计学意义(t=0.42,P＞0.05).但是分别比较反义组与无义组、脂质体介导组与无介导组间差异均有统计学意义(t=26.30和28.71,P均＜0.001).结论 99Tcm-hTERT mRNAASON在荷瘤裸鼠活体内可与高表达hTERT基因的人乳腺癌MCF-7肿瘤组织特异靶向结合,在肿瘤分子功能显像中具有潜在应用价值.
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99Tcm标记反义肽核酸探针的制备及其荷瘤裸鼠体内分布
目的 探讨99Tcm标记反义肽核酸(PNA)探针的新方法及其在生物体内的分布.方法 合成12mer且5'端含有四肽G-(D)-A-G-G的c-myc mRNA反义、无义PNA片段,利用G-(D)-A-G-G形成的N4结构为螯合基团进行99Tcm标记,用聚酰胺薄膜层析法和高效液相色谱仪法(HPLC)测定其标记率和标记物的稳定性,并行人结肠癌荷瘤裸鼠体内分布[每克组织百分注射剂量率(%ID/g)]及显像研究.采用SAS 6.22软件对数据进行分析.结果 反义、无义PNA片段合成物的纯度>95%.99Tcm标记c-myc mRNA反义、无义PNA的标记率>95%,标记物室温放置18 h测定其标记率仍可达95%以上.c-myc mRNA反义、无义PNA片段4～8℃下放置3个月标记率仍>95%.HPLC测定标记物呈单峰.99Tcm标记c-myc mRNA反义PNA主要分布在荷瘤鼠肾、脾、肿瘤、肠道、肝组织中,99Tcm标记c-myc mRNA无义PNA在荷瘤鼠血液、脾、肾、肝及肺组织中分布较多;注射后4 h两者在荷瘤鼠肿瘤组织中的分布差异有统计学意义[(1.11±0.12)%ID/g和(0.14±0.02)%ID/g;t=14.75,P<0.01].99Tcm标记c-mycmRNA反义PNA在小鼠体内肿瘤/肌肉、肿瘤/肺的摄取比值较高,肿瘤显像明显.结论 用99Tcm标记c-myc mRNA反义、无义PNA的方法简单,标记率高,标记物稳定,前者有望成为一种新型肿瘤显像剂.
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99Tcm-c-myc mRNA反义肽核酸荷结肠癌裸鼠显像
目的 制备99Tcm-c-myc mRNA反义肽核酸(PNA)显像探针,通过反义显像研究99Tcm-c-myc mRNA反义PNA早期诊断结肠癌的可行性.方法 利用化学合成法在c-myc mRNA反义PNA片段的5'端连上4个氨基酸[G-(D)-A-G-G]和1个氨基丁酸(Aba),再利用配体交换法对c-myc mRNA反义PNA行99Tcm标记.并用同样的方法制备99Tcm-c-myc mRNA无义PNA.进行人结肠癌LS174-T荷瘤裸小鼠显像.采用SAS 6.12软件进行统计学处理.结果 99Tcm-c-myc mRNA反义PNA 6h内标记率＞95%.血清孵育5h后标记率为91.1%.无义PNA的标记率与反义PNA基本一致.1h时反义组荷瘤裸鼠右后肢肿瘤部位可清晰显影,4h内未见明显变化.无义组肿瘤部位始终未见明显放射性摄取.注射99Tcm-c-myc mRN反义PNA 1h后,反义组与无义组肿瘤与对侧组织的放射性(T/N)比值分别为5.06±1.35和1.53±0.30,差异有统计学意义(t=4.47, P=0.04).结论 99Tcm-c-myc mRNA反义PNA可在荷瘤裸鼠活体内与高表达c-myc基因的人结肠癌LS174-T肿瘤组织特异结合,在肿瘤反义显像中有潜在的应用价值.
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外周血甲状腺球蛋白mRNA对分化型甲状腺癌的诊断价值
目的 探讨外周血甲状腺球蛋白(Tg)mRNA在分化型甲状腺癌(DTC)复发或转移中的诊断价值.方法 经术后病理检查诊断为DTC且已完全去除残留甲状腺组织,于2006年4月-2007年2月进行随访的162例DTC患者,均进行左旋甲状腺素(l-T4)替代治疗.应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对患者外周血中Tg mRNA进行检测,分析Tg mRNA表达阳性率与患者TNM分期等临床特征的关系;应用电化学发光免疫分析(ECLIA)仪测定血清Tg和抗Tg抗体(TgAb),分别以＞1μg/L和＞104U/L为阳性判断标准.以随访时131I全身显像、胸部X线、颈部超声、CT扫描等检查确诊病灶为复发或转移"金标准",比较Tg mRNA和Tg诊断DTC复发或转移的诊断效能.结果 外周血Tg mRNA和血清Tg监测DTC复发或转移的灵敏度分别为86.61%和53.57%,差异有统计学意义(X2=29.153,P＜0.001).52例TgAb阳性患者中,检测外周血Tg mRNA和血清Tg的灵敏度分别为86.54%和0,差异有统计学意义(X2=79.322,P＜0.001).外周血Tg mRNA的表达与TNM分期呈明显正相关(Kendall相关系数为0.515,P＜0.001),与年龄、性别、肿瘤组织学类型及转移灶的分布无相关性(Kendall相关系数分别为0.020,0.069,0.050,0.028,P均＞0.05).结论 外周血Tg mRNA可作为监测DTC复发或转移的指标,其灵敏度高于血清Tg,特别适合于TgAb阳性的DTC患者.
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离子辐射通过caspase途径而非p53途径诱导Jurkat细胞凋亡
目的:研究离子辐射诱导Jurkat细胞凋亡的动态趋势及其机制.方法:分别以5、10、20Gy的辐射量照射Jurkat细胞,其中一份样本在照射前加入zVAD.fmk,在照射后培养6、12、24、36和48 h收获细胞,应用AnV/PI双染和呈现sub-G1峰技术,在流式细胞仪上定量测定凋亡细胞.采用Western Blot技术检测p53蛋白的表达.结果:细胞受照射后,凋亡细胞数随培养时间的延长和辐射量的加大而增加.在6 h,只有20Gy才诱导细胞显著凋亡(P＜0.005),5Gy的照射要到24h才出现明显的凋亡(P＜0.05).在48h,20Gy照射诱导的凋亡细胞数是所有时间点和剂量强度中高的(P＜0.001).加有zVAD.fmk的细胞,尽管都是10Gy照射,比未加zVAD.fmk的细胞表现出凋亡细胞明显减少(P＜0.005),但与未加zVAD.fmk、照射量是5Gy的细胞相比,凋亡细胞数仍显著增加(P＜0.005).Jurkat细胞在照射前后都没有p53表达.结论:离子辐射诱导细胞凋亡呈现出时间和剂量效应关系;capase抑制剂zVAD.fmk部分抑制离子辐射诱导细胞凋亡;离子辐射诱导细胞凋亡的机制独立于肿瘤抑制基因p53,caspase可能在其中起重要作用.
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正常早期妊娠血浆和绒毛组织中肾上腺髓质素的测定
目的:探讨肾上腺髓质素(ADM)在正常早期妊娠中的作用. 方法:应用放免法测定30例正常早期妊娠和10例正常非妊娠者血浆ADM水平,用免疫组化和原位杂交方法检测ADM蛋白、ADM及其受体mRNA在绒毛组织中的表达. 结果:正常早期妊娠者血浆ADM水平高于非妊娠者(P<0.05).正常早期妊娠绒毛组织中细胞滋养细胞和合体滋养细胞细胞质中均有ADM蛋白、ADM及其受体mRNA的表达. 结论:血浆ADM可能参与调节人类早期妊娠母体内环境稳定,而绒毛组织中的ADM可能促进滋养细胞的侵袭和血管系统的建立.
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名人之柳趣
柳是报春的信使,春来柳先知."东风勾起垂杨柳"的万条绿丝,"湍湍乱扑行人面"的柳花飞絮,"无心插柳柳成行"的顽强生命力,都给人以无穷的联想和启迪.
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钙池操纵性钙内流在非小细胞肺癌中的作用
目的 探讨钙池操纵性钙通道(store-operated calcium channel,SOCC)介导的钙池操纵性钙内流(storeoperated calcium entry,SOCE)在非小细胞肺癌中的作用.方法 应用实时定量PCR方法和Western blot方法检测非小细胞肺癌组织和A549肺腺癌细胞中SOCC的mRNA和蛋白表达.应用Fura-2Am荧光素方法检测A549细胞的SOCE;经过不同浓度SOCE抑制剂处理A549细胞后,应用WST-1比色法和Transwell方法检测A549细胞的增殖和侵袭能力改变.结果 在非小细胞肺癌组织和A549细胞中有STIM1、ORAI1～3的mRNA和STIM1、ORAI1的蛋白表达,分化差的肿瘤组织比分化好的高表达ORAI1 mRNA(P =0.028);A549细胞中存在SOCE,并且SOCE抑制剂SKF-96365或NiCl2可抑制A549细胞的增殖和侵袭.结论 非小细胞肺癌组织中表达STIM1和ORAI1～3.A549肺腺癌细胞存在SOCE,并且由SOCC介导的SOCE在肺癌细胞生长和转移过程中起着重要的作用.
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COX-2和VEGF-C基因在乳腺良恶性病变中的表达研究
目的 研究COX-2和VEGF-C mRNA在乳腺良恶性病变中的表达情况,探讨两者在乳腺肿瘤发生过程中的相互关系.方法 运用Real-time PCR方法对90例乳腺良恶性病变组织中COX-2和VEGF-C mRNA的表达进行检测.结果 8例副乳腺组织中,COX-2和VEGF-C mRNA不表达或低表达,15例腺病和16例纤维腺瘤中两者表达明显增加(P＜0.05),11例DCIS中,两者均高表达,高于腺病和纤维腺瘤(P＜0.05),40例IDC中,两者同样高表达,并且肿瘤级别越高,表达水平越高.在DCIS和IDC中,两者表达存在正相关关系(分别r=0.82,P=0.002；r=0.89,P=0.000).结论 COX-2和VEGF-C基因在乳腺良恶性病变中表达明显增高,而且在恶性肿瘤中的表达高于良性肿瘤,两者在乳腺癌组织中的表达呈正相关,表明两者参与了乳腺疾病,尤其是乳腺癌发生、发展的过程.
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shRNA沉默多药耐药胃癌细胞7901/VCR MDR1基因表达的实验研究
目的 利用RNAi技术干扰胃癌多药耐药细胞(7901/VCR)多药耐药基因(MDR1)的表达,为临床肿瘤的基因治疗奠定基础.方法 根据MDR1的碱基序列设计并合成两对短发夹RNA,构建重组载体,用阳离子脂质体法体外转染7901/VCR;采用MTT法检测转染胃癌细胞的生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,RT-PCR和Western blot检测转染前后MDR1 mRNA和蛋白表达的变化.结果 成功构建RNAi质粒载体,转染后细胞IC50明显降低(P<0.05);G1期细胞增加,S期细胞减少(P<0.05);MDR1 mRNA转录水平下降(P<0.05),P-糖蛋白(P-gp)的表达水平降低(P<0.05).结论 RNAi能明显抑制胃癌细胞7901/VCR MDR1mRNA和P-gp蛋白的表达,进而对肿瘤细胞多药耐药性有明显的逆转作用,为基因治疗提供了一种新的手段.
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胆囊腺癌中IR和IR mRNA的表达及临床病理意义
目的 研究胆囊腺癌、癌旁组织、慢性胆囊炎组织中IR和IR mRNA表达水平及其临床病理意义.方法 应用S-P免疫组化方法和原位杂交染色法分别检测108例胆囊腺癌、46例癌旁组织和35例慢性胆囊炎组织中IR和IR mRNA表达情况.结果 胆囊腺癌IR和IR mRNA表达阳性率明显高于癌旁组织和慢性胆囊炎组织,差异有高度显著性(P＜0.01),腺瘤癌变或高分化腺癌、肿块大径＜2 cm、淋巴结无转移及周围组织无侵犯病例IR和IRmRNA表达阳性率明显低于低分化腺癌、肿块大径≥2 cm、淋巴结转移及周围组织侵犯病例,差异均有显著性(P＜0.05或P＜0.01);胆囊腺癌中IR和IR mRNA的表达具有高度一致性(P＜0.01).结论 IR和IR mRNA表达可能是反映胆囊腺癌发生、进展、转移或侵袭潜力及预后的重要生物学标记物.
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乳腺癌组织中PSA mRNA和VEGF mRNA的表达及其关系
目的 探讨前列腺特异抗原(PSA)mRNA和血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA在乳腺癌组织中的表达及其关系.方法 采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测35例乳腺癌、12例癌旁乳腺组织和10例乳腺纤维腺瘤组织中的表达,免疫组化检测35例乳腺癌组织中ER、PR的表达,分析PSA mRNA和VEGF mRNA表达之间的关系.结果 PSA mRNA在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁乳腺组织和乳腺纤维腺瘤组织,差异有显著性(P值均=0.00).VEGF121、165mRNA在乳腺癌中的表达水平明显高于癌旁乳腺组织和乳腺纤维腺瘤组织的表达(P值均=0.00).ER、PR阳性表达的乳腺癌组织中PSA mRNA表达高于ER、PR阴性者,差异有显著性(P=0.001和0.004).PSA mRNA表达阳性者VEGF121、165mRNA表达水平明显低于PSA mRNA表达阴性者(P=0.034、0.026).结论 PSA mRNA在乳腺癌组织中的表达下调,但其表达受ER、PR的调控,而且其可能具有抑制乳腺肿瘤血管生成的作用.
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荧光定量PCR法检测转移性大肠癌患者化疗前后外周血CEAmRNA的表达及临床意义
目的 定量监测转移性大肠癌患者化疗前、后外周血中的CEAmRNA,探讨其与临床疗效的关系,并分析其临床价值.方法 用荧光定量PCR(FQ-PCR)法,对28例转移性大肠癌患者外周血中CEAmRNA作定量检测.结果 临床疗效评价为PR的病例,其化疗前、后外周血中CEAmRNA荧光定量数据数量级变化均数为2.5108,有降低趋势;SD病例的数量级变化均数为0.1476,变化不大;PD病例的数量级变化均数为-1.8424,有升高趋势.临床疗效不同的患者其外周血中CEAmRNA表达量变化不同(F=85.30,P＜0.01).结论 化疗前、后外周血中CEAmRNA表达量的变化与临床疗效评价分级有相关性.大肠癌患者外周血中CEAmRNA表达量的变化可能成为指导治疗、判定疗效及预后的重要指标.
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蛋白激酶C同工酶在乳腺癌中表达的研究
目的观察蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)同工酶PKC-α、PKC-ι在乳腺癌组织中的表达状况,探讨癌细胞信息传递的分子生物学机制.方法应用半定量RT-PCR检测31例乳腺癌组织与12例癌旁正常乳腺组织中PKC-α、PKC-ι mRNA的表达;应用Western blot检测以上组织中PKC -α、PKC-ι蛋白表达.结果乳腺癌组织PKC-α mRNA与蛋白表达均高于癌旁正常乳腺组织(P<0.01);乳腺癌组织PKC-ι mRNA及蛋白表达与癌旁正常乳腺组织比较差异均无显著性(P>0.05).结论乳腺癌组织细胞增殖可能与PKC-α同工酶过表达所介导的信号转导有关,与PKC-ι同工酶无明显关系.
