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膀胱移行细胞癌细胞角质蛋白20 mRNA表达的实验研究
目的 探讨膀胱移行细胞癌组织角质蛋白20(CK20)mRNA的表达及其意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测31例膀胱移行细胞癌组织与距癌灶边缘2 cm处膀胱黏膜组织、6例泌尿外科非肿瘤膀胱黏膜(其中膀胱慢性炎症4例、膀胱结核2例)、5例正常膀胱黏膜CK20 mRNA的表达.结果 31例膀胱移行细胞癌组织CK20 mRNA表达均为阳性,距癌灶边缘2 cm处膀胱组织CK20 mRNA表达均为阴性.6例泌尿外科非肿瘤膀胱黏膜及5例正常膀胱黏膜组织无CK20 mRNA表达.结论 CK20 mRNA阳性可以作为支持膀胱移行细胞癌的证据之一,有助于膀胱移行细胞癌的诊断.
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可变剪接及其生物学意义
mRNA可变剪接在脊椎动物中尤其普遍.Johnson等[1]利用芯片杂交技术检测了人类基因组10 000多个外显子基因在不同组织和细胞中的可变剪接产物,结果表明至少74%的基因可发生可变剪接.而Wang等[2]研究表明,此比例可达到92%~94%.mRNA可变剪接极大地增加了真核生物基因表达的复杂程度和蛋白质功能的多样性,并且与人类疾病的发生存在密切联系.近来的研究多致力于可变剪接的调控机制、功能相关性可变剪接体数据库的建立及可变剪接产物的生理与病理功能.本文就可变剪接有关进展进行综述.
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MicroRNA与肿瘤的研究进展
目前随着对microRNA(miRNA)研究的深入,已发现miRNA具有调节细胞增殖、分化和凋亡的功能,参与了心脏疾病、血管疾病、肿瘤及神经系统等疾病的发生和发展过程.本文对近年来miRNA在肿瘤领域的研究作简要综述,从中我们可以看出miRNA在肿瘤诊断的领域具有广阔应用前景,有望改进实验室对肿瘤的诊断.
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实时荧光定量RT-PCR技术在疾病相关mRNA定量检测方面的应用进展
实时荧光定量逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)技术作为一项高度敏感、程序结束无需后处理和可高通量检测的新型技术已广泛用于基因表达的定量检测.为了更好地将这一技术应用于临床研究的各领域,本文就荧光定量RT-PCR检测基因表达的原理、绝对定量与相对定量的区别、实时荧光定量RT-PCR技术检测核糖核酸(mRNA)存在的几个问题,以及目前该技术在临床研究方面的应用进展作一综述.
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人类端粒酶逆转录酶mRNA选择性剪接的研究进展
端粒酶的激活是细胞永生化和恶性转化的关键事件之一,而端粒酶的激活需要端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达.hTERT基因转录后的选择性剪接是调节端粒酶活性的重要机制之一.转变hTERT mRNA的剪接模式为肿瘤治疗提供了一个新的方案.
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血浆/血清中肿瘤相关mRNA的研究现状
mRNA存在于血浆/血清中.现就血浆/血清中肿瘤相关mRNA(包括病毒RNA和各种肿瘤相关基因编码的mRNA等)的存在、稳定性、应用及其在肿瘤诊断和预后中的意义进行综述,并简要展望其应用前景以及其中尚待解决的问题.
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FQ-PCR检测宫颈癌hWAPL基因mRNA及其诊断价值分析
目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测宫颈癌人半翼(hWAPL)基因mRNA的诊断价值.方法 使用高危型人乳头瘤病毒(HPV)检测试剂盒以及建立的FQ-PCR检测慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样变(CIN)和宫颈癌共100例患者hWAPL基因 mRNA和高危型HPV.结果 宫颈癌组hWAPL基因mRNA表达显著高于慢性宫颈炎组和CINⅠ～Ⅲ组(P<0.05);慢性宫颈炎组与CINⅠ～Ⅲ组比较,差异无统计学意义(P>0.05).慢性宫颈炎组和CINⅠ～Ⅲ组部分患者中查出高危型HPV,但无宫颈癌变.宫颈癌组高危型HPV检出率显著高于无宫颈癌病变各组.结论 高危型HPV检出率与宫颈癌发生密切相关,但hWAPL基因mRNA表达与宫颈癌变更直接相关,更有特异性,有助于宫颈癌的早期诊断.
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RUNX3mRNA在原发性肝癌组织中的表达分析
目前,在已知的大多数肿瘤的发生和发展中存在人RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因失活,如肝癌、胃癌、肺癌、喉癌、乳腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌和子宫颈癌等肿瘤中均发现RUNX3基因5'CpG岛甲基化,这是抑癌基因RUNX3失活的主要机制[1-2].而RUNX3mRNA与原发性肝癌的相关性研究尚少,现通过检测RUNX3mRNA在原发性肝癌及其癌旁组织中的表达,并分析其与临床病理因素的相关性,以探讨RUNX3基因作为一种可能的肝癌抑制基因与肝癌发生和发展的关系及其意义.
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决奈达隆对新生大鼠心室肌细胞HCN通道mRNA和蛋白表达的影响
目的 通过检测新生大鼠心室肌细胞在给予药物决奈达隆前后超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN通道)mRNA和蛋白水平的变化,探讨决奈达隆对HCN通道表达的影响.方法 分离新生SD大鼠心室肌,Ⅱ型胶原酶消化,通过差速贴壁分离法收集获得单一的心室肌细胞.并根据浓度(0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0μmol/L的决奈达隆对细胞进行处理48h)和时间(浓度为10 μmol/L的决奈达隆对细胞进行1、6、12、24、48 h的处理)梯度分组.采用实时荧光定量PCR法和Western blot检测HCN2、HCN4通道mRNA水平和蛋白水平.结果 浓度梯度组和时间梯度组的HCN2 mRNA和HCN4 mRNA表达水平均低于对照组(P＜0.05);与对照组比较,10 μmol/L决奈达隆处理后12 h组的蛋白水平明显下调(P＜0.01).结论 决奈达隆可抑制HCN2、HCN4通道mRNA和蛋白的表达,且作用呈浓度依赖性,在给药后12 h达到大作用.
关键词： 决奈达隆 超极化激活环核苷酸门控阳离子通道 RNA 信使 蛋白质类 -
CK19和CEA mRNA表达与乳腺癌外周血微转移的相关性研究
目的 检测乳腺癌患者外周血中细胞角蛋白19(CK19)和癌胚抗原(CEA)mRNA的表达,探讨其表达是否可作为判断外周血微转移及预后的分子生物学指标.方法 采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测45例术前乳腺癌患者及30例乳腺良性病变患者外周血中CK19和CEA mRNA的表达情况.结果 CK19和CEA mRNA在乳腺癌患者血清中阳性率分别为62.2%和53.3%,在30例乳腺良性患者血清中CK19 mRNA阳性率为3.3%,无CEA mRNA表达.乳腺癌患者和良性肿瘤患者血清中CK19、CEA mRNA表达阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.01).CK19和CEA mRNA阳性率与临床分期、淋巴结转移均有关,二者表达呈正相关(P＜0.01).结论 乳腺癌患者外周血中CK19和CEA mRNA表达与临床分期密切相关,提示两项指标有望预测乳腺癌外周血微转移和判断预后.
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肾细胞癌中DACT2基因启动子区甲基化状态与mRNA表达的研究
目的 探讨DACT2基因在肾细胞癌(RCC)发生、发展中的作用.方法 收集该院2014年8月至2015年8月59例住院RCC患者肾癌根治术后RCC及相应癌旁组织、正常组织标本,分别应用甲基化特异性PCR(MSP)、实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测其DACT2基因甲基化状态、mRNA表达情况,应用免疫组织化学过氧化酶标记的链霉卵白素(SP)法检测其细胞质内β-catenin蛋白的表达,并分析RCC组织DACT2基因甲基化状态及mRNA表达与临床病理特征的关系,以及DACT2基因甲基化与mRNA及β-catenin表达的关系.结果 RCC组织中DACT2 mRNA相对表达水平(0.427±0.025)明显低于癌旁组织(0.801±0.047)和正常组织(0.872±0.022),RCC组织中DACT2基因甲基化阳性率(45.76%)明显高于癌旁组织(6.78%)及正常组织(5.08%),差异均有统计学意义(P<0.05),而癌旁组织与正常组织比较差异均无统计学意义(P>0.05).在RCC组织中DACT2基因mRNA相对表达水平及启动子区甲基化发生率与患者的年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、Fuhrman分级等临床资料间均无明显相关性(P>0.05).甲基化组中DACT2基因的mRNA相对表达水平低于非甲基化组,差异有统计学意义(P<0.05).RCC组织中β-catenin蛋白在细胞质中的表达率高于癌旁组织和正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),且DACT2基因甲基化与β-catenin蛋白表达呈正相关(r=0.324,P=0.012).结论 DACT2基因启动子区甲基化及其mRNA相对表达水平降低可能参与RCC的发生,但与RCC的临床进展无关,DACT2基因启动子区发生甲基化可能是引起其mRNA相对表达降低的原因之一,且肾癌组织DACT2基因甲基化的发生可能与β-catenin的高表达有关.
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卤米松与他扎罗汀对角质形成细胞RAR-γ和RXR-α表达的影响
目的 观察不同浓度卤米松和他扎罗汀对体外培养人永生化HaCaT角质形成细胞的维甲酸受体(RAR)-γ和维甲酸X受体(RXR)-α表达的影响,探讨卤米松对他扎罗汀治疗银屑病效应的潜在影响.方法 CCK-8方法检测不同浓度卤米松和他扎罗汀对HaCaT细胞增殖的影响;Western blot法和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测不同浓度卤米松和他扎罗汀作用12 h、24 h后,HaCaT细胞中RAR-γ和RXR-α的mRNA水平和蛋白水平的变化.结果 卤米松和他扎罗汀均可抑制角质形成细胞增殖.卤米松使HaCaT细胞的RAR-γ和RXR-a mRNA水平和蛋白水平升高.他扎罗汀作用后RAR-γ和RXR-α的mR-NA水平降低,而蛋白水平在12 h升高,24 h降低.结论 卤米松作用角质形成细胞后可上调RAR-γ和RXR-α表达,这可能有助于提高角质形成细胞对他扎罗汀作用的反应性,从而提高他扎罗汀的作用效应.
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结肠癌患者CK19的表达及意义
目的：研究红细胞角蛋白19（CK19）mRNA在结肠癌患者外周血中的表达，以及其与肿瘤病理特征的相关性，探讨CK19与结肠癌的关系。方法分析2012年3月至2014年5月在该院接受手术治疗的结肠癌患者的临床资料，共纳入研究对象160例，其中结肠癌患者52例（结肠癌组），结肠息肉患者55例（结肠息肉组），健康者53例（对照组），比较3组外周血CK19 mR‐NA表达差异，分析CK19 mRNA表达情况与结肠癌的肿瘤病理特征间的关系，并比较CK19 mRNA与CEA和CA199对于结肠癌的诊断价值。结果3组受试者外周血的CK19 mRNA阳性表达率差异有统计学意义（χ2＝54．53，P＜0．01），结肠癌患者CK19 mRNA阳性表达高；不同Dukes分期（χ2＝16．14，P＜0．01）、分化程度（χ2＝8．155，P＝0．017）、肝转移情况（χ2＝13．68， P＜0．01）所对应的结肠癌患者的CK19 mRNA阳性并不相同，差异均有统计学意义；CK19 mRNA对于结肠癌的诊断价值ROC曲线分析结果提示曲线下面积为0．947，其敏感性和特异性均高于CEA和CA199。结论 CK19 mRNA在结肠癌中的表达显著升高，且其表达水平与肿瘤的分期、分级及转移有着重要的相关性，其对于结肠癌的诊断价值优于CEA和CA199。
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RGS17在不同肝癌细胞株及HuH7裸鼠移植瘤中的表达
目的 研究G蛋白信号转导调节因子17(RGS 17)在人肝癌细胞株和正常肝细胞株中的表达差异以及在皮下成瘤动物模型中的表达.方法从2种肝癌细胞株HepG2、HuH7及正常肝细胞株THLE-2中提取总RNA,用逆转录酶将总RNA逆转成cDNA,以cDNA为模板,应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测RGS17 mRNA表达水平;在裸鼠皮下接种肝癌细胞株HuH7,成瘤后检测瘤组织与肝组织中RGS17 mRNA的表达差异.结果 (1)在肝癌细胞株HepG2、HuH7以及正常肝细胞株THLE-2中均检测到RGS17 mRNA的表达;(2)与正常肝细胞株THLE-2相比,肝癌细胞株HepG2、HuH7中 RGS17 mRNA的表达明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);(3)在HuH7肝癌细胞株裸鼠成瘤模型的瘤块组织中检测到 RGS17 mRNA表达,且与肝组织相比,瘤块组织中RGS17 mRNA表达显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论体外细胞株和裸鼠动物体内2个层次的研究结果表明,在肝癌细胞中RGS17 mRNA表达上调,提示RGS17可能参与了肿瘤的发生和发展,为肝癌发病机制的研究提供了新思路,并为肝癌的预防和治疗提供了新的分子靶点.
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mdr1反义寡核苷酸增强多药耐药肝癌细胞HepG2/ADM化疗敏感性的实验研究
目的：探讨在体外实验条件下mdr1反义寡核苷酸对多药耐药肝癌细胞株化疗敏感性的影响。方法以肝癌细胞HepG2/ADM为研究对象，设立mdr1反义寡核苷酸组和空白试剂组作对照，利用脂质体包载肿瘤耐药基因mdr1的反义寡核苷酸进行细胞转染，通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫印迹实验（Western blotting）分别检测mdr1基因mRNA和P-gp蛋白表达，通过MTT实验检测细胞转染前后对阿霉素（ADM）、顺铂（DDP）和5-氟尿嘧啶（5-FU）的化疗敏感性。结果 HepG2/AMD肝癌细胞经反义寡核苷酸处理后，mdr1 mRNA、P-gp蛋白表达水平均明显降低，对ADM、DDP 和5-FU的化疗敏感性明显增强。结论反义寡核苷酸能在体外有效增加肝癌细胞HepG2/ADM对化疗药物的敏感性。
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ERCC1 BRCA1 TYMS 的 mRNA 表达水平和 UGT1A1多态性检测在结直肠癌患者个体化化疗中的临床意义
目的：探讨结直肠癌肿瘤组织的切除修复交叉互补基因1（ERCC1）、乳腺癌易感基因1（BRCA1）和胸苷酸合成酶基因（TYMS）的信使RNA（mRNA）表达水平及尿苷葡萄糖醛酸转移酶基因（UGT1A1）多态性检测在结直肠癌患者个体化化疗中的临床意义。方法选取2010年10月至2011年10月收治的进展期结直肠癌患者230例，分为个体化化疗组（41例）和常规化疗组（189例），分别进行个体化化疗和常规化疗。个体化化疗组通过检测患者 ERCC1、BRCA1和TYMS基因中的mRNA表达水平以及UGT1A1基因多态性，指导患者选用敏感且毒性反应小的化疗药物，比较两组患者化疗后的无进展生存期（PFS）、无病生存率（DFS）和毒性反应发生率。结果个体化化疗组患者中位 PFS 为（26.00±1.60）个月，常规化疗组患者中位PFS为（25.00±0.27）个月，两组比较，差异有统计学意义（P<0.01）。两组患者化疗后1、2年DFS比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。个体化化疗组患者血液毒性、腹泻、肝功能损害和血尿素氮升高发生率较常规化疗组低，差异均有统计学意义（P<0.05）；而神经毒性、心脏毒性和血肌酐升高发生率与常规化疗组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。结论以上基因检测使进展期结直肠癌患者在临床个体化化疗中获益，PFS延长，部分毒性反应发生率降低。
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RNA结合蛋白Tristetraprolin在炎症和恶性肿瘤中的作用
信使RNA (message RNA,mRNA)降解在调控哺乳动物基因表达中起着关键作用,其功能失调促进多种与炎症和恶性肿瘤相关基因的过量表达.研究发现,多种炎症和恶性肿瘤相关基因mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)含有保守的AU重复序列(AU-rich element,ARE),该序列与RNA结合蛋白相互作用共同调节mRNA的稳定性.
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增生性玻璃体视网膜病变增生膜内炎性细胞因子mRNA表达
目的检测炎前因子mRNA在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy, PVR)中的表达情况,证实其在PVR发病中的作用. 方法收集14例不同分级的PVR患者玻璃体切割术中所取出的增生膜,石蜡包埋切片,用生物素标记的寡核苷酸探针进行原位杂交,检测IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α mRNA的表达,两例角膜移植后的供体眼作为正常对照. 结果共有5例样本有阳性表达.3例增生膜中IL-1β mRNA表达,3例表达了IL-6 mRNA,1例表达了IL-8 mRNA,3例表达TNF-α mRNA.其中1例既表达了IL-1β又表达了IL-6 mRNA,1例IL-1β、IL-8和TNF-α mRNA三者均表达,2例有IL-6和TNF-α mRNA两者表达.正常视网膜未检测到炎前因子mRNA的表达. 结论 IL-1β、IL-6、 IL-8和TNF-α参予了PVR增生膜的形成过程.
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N-甲基-D-天门冬氨酸-R1不同mRNA构型在斜视性弱视猫视皮层的表达
目的 了解在视觉发育可塑期,NMDA-R1受体基因的mRNA构型与斜视性弱视猫视皮层神经元细胞水平表达减少有关的.方法 同胞正常猫和斜视性弱视猫各两对(共4只).采用一系列地高辛核酸分子探针做猫脑片原位杂交,检测NMDA-R1不同mRNA构型在视皮层的表达情况.结果 与正常猫相比,NMDA-R1 mRNA"Pan"探针和R1-a,R1-b,R1-1构型探针在斜视性弱视猫视皮层的表达显著减少,主要在第Ⅳ层.R1-3构型的表达在斜视性弱视猫视皮层比正常猫增加,主要在第Ⅴ-Ⅵ层.R1-2和R1-4构型的表达在正常猫和斜视猫视皮层的差异不显著.结论 斜视性弱视猫视皮层NMDA-R1 mRNA特异构型的转录抑制导致受体蛋白水平表达的改变.
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环磷酸腺苷cAMP的生理功能
环磷酸腺苷是一种环状核苷酸，（yclic Adenosine monophosphate）简写为cAMP，亦称“腺苷－3＇，5＇－环化一磷酸”，“环化腺核苷一磷酸”，“环腺一磷”。cAMP是由三磷酸腺苷（ATP）脱掉两个磷酸分子后环化反应而成。细胞膜受体在神经递质分子或激素分子作用下，可促进细胞合成cAMP，进而调节细胞的生理活动和物质代谢。
激素类被称为细胞的“第一信使”，而cAMP则称其为“第二信使”。含氮类激素一般与细胞膜受体结合诱导生成第二信使，将信号转导入细胞内。固醇类甾体激素一般直接通过膜进入细胞与细胞质内的受体结合，然后进入细胞核发挥其作用。
