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SOX10 mRNA在先天性巨结肠肠壁中的表达
目的 研究性别决定区Y基因相关高可变区基因10(SRY related high mobility group-BoX gene 10,SOX10)在先天性巨结肠(Hirschsprung's disease,HD)肠壁中的表达情况,以进一步了解HD在分子基础上的发病机制.方法 分别取12例先天性巨结肠病例的手术标本狭窄段、移行段及扩张段,随机取12例非巨结肠手术病例(如结肠造瘘或关瘘手术)作为对照组,提取平滑肌组织总RNA,应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)扩增目的 基因和看家基因片段,观察病变段和正常段SOX10mRNA的表达,并与看家基因(B-actin)在病变段和正常段的表达比较,进行统计学分析.结果 SOX10mRNA在HD患儿痉挛段呈低表达,在扩张段及正常对照组呈高表达.痉挛段SOX10mRNA的表达量与移行段、扩张段及正常对照组比较,差异均有统计学意义;而移行段、扩张段及对照组比较,差异无统计学意义.结论 HD患儿结肠SOX10mRNA的异常分布显示SOXIO基因出生后肠神经系统维持正常功能所必需的,SOX10mRNA表达减少可引起肠管痉挛,肠腔狭窄,造成肠功能障碍.
关键词： Hirschsprung病/外科学 RNA 信使 -
豚鼠内淋巴囊上皮细胞Na+,K+-ATP酶不同β亚基的mRNA表达
目的进一步研究内淋巴囊上皮细胞Na+,K+-ATP酶不同β亚基的表达.方法采用豚鼠内淋巴囊冰冻切片、原位杂交的方法检测Na+,K+-ATP酶不同β亚基mRNA在内淋巴囊上皮细胞中的表达.结果在内淋巴囊上皮细胞胞浆内可见Na+,K+-ATP酶不同β亚基的阳性颗粒,β1亚基表达较弱,β2亚基表达较强.结论结合其他报道,内淋巴囊上皮细胞具有多种亚基异构体组成的Na+,K+-ATP酶的表达,而结肠上皮、肾小管上皮的Na+,K+-ATP酶几乎仅有α1β1型,提示其离子转运过程可能不同.
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孕早期人巨细胞病毒宫内活动性感染的诊断方法学研究
目的探讨诊断孕早期HCMV宫内活动性感染的实验方法及其价值.方法留取68例有异常妊娠史的早孕妇女绒毛组织,分为两份,一份提取总RNA,采用RT-PCR检测其中的HCMV mRNA,一部分制成冰冻切片,分别采用原位杂交技术(ISH)检测HCMV mRNA,免疫组织化学法检测HCMV早期抗原.结果采用RT-PCR检测到的孕早期绒毛组织HCMV mRNA阳性率为39.7%;ISH阳性率为23.5%;免疫组化检测HCMV早期抗原阳性率22.1%.RT-PCR检出率明显高于ISH(P＜0.05),而ISH与免疫组化的阳性率无显著性差异(P＞0.05).结论测定绒毛组织中的HCMV mRNA、早期抗原是HCMV宫内活动性感染的客观指标.RT-PCR的敏感性高,但ISH与免疫组化可同时作定位、定量观察,可操作性强,因而有较大的临床推广应用价值.
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人细胞色素P450前mRNA的可变剪接研究进展
前mRNA的剪接即将前mRNA中的内含子准确去除,使外显子剪接成为成熟的具有完整的翻译阅读框的RNA分子.剪接要求外显子识别,接着准确地剪除与连接,由分别位于5'(给位)和3'(受位)端外显子-内含子交界的共有内含子二核苷酸GU和AG所决定.
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人IL - 6 mRNA的实时定量检测法
目的:建立TaqMan-MGB技术实时定量检测人IL-6 mRNA的方法,并用于检测人外周血单个核细胞在牛膝多糖诱导下IL-6 mRNA的表达.方法:(1)抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,PCR扩增IL-6后纯化PCR产物,与pMD 18-T载体进行连接,转化宿主菌DH-5α.提取重组质粒DNA,作为实时荧光定量检测的标准品.建立TaqMan-MGB技术实时定量检测IL-6 mRNA的方法.(2)终浓度分别为0、100、200、400、800和1 600 mg/L的牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞,定量检测IL-6 mRNA的表达.结果:(1)酶切分析、PCR扩增以及测序结果均证实IL-6 cDNA成功重组到pMD 18-T载体上.(2)TaqMan-MGB技术检测IL-6 mRNA线性范围广;灵敏度高;特异性好;重复性好.(3)牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞后IL-6 mRNA表达增高.结论:TaqMan-MGB技术能较为精确地定量IL-6 mRNA.
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以黑色素瘤抗原基因mRNA为标记检测胃癌患者外周血肿瘤细胞
目的 以黑色素瘤抗原基因(MAGE)-1和MAGE-3 mRNA作为特异性肿瘤标记物,建立用RT-PCR检测胃癌患者外周血中肿瘤细胞的有效方法.方法 采集40例胃癌患者及20名健康志愿者的外周血,用RT-PCR方法检测其外周血单核细胞(PBMC)中MAGE-1和MAGE-3mRNA表达.同时用RT-PCR方法检测胃癌患者肿瘤组织中上述MAGE-1和MAGE-3的表达.结果 40例胃癌患者中,分别有19例(47.5%)和10例(25.0%)PBMC中可检测到MAGE-1和MAGE-3 mRNA表达;在25例(62.5%)的胃癌患者PBMC中,至少可以检测到一种MAGE mRNA的表达.胃癌组织中MAGE-1和MAGE-3的表达率分别为62.5%和30%;胃癌组织中不表达MAGE-1和(或)MAGE-3基因的患者,其外周血中也检测不到相应的MAGE中mRNA;20例健康志愿者的PBMC中均未测出MAGE基因mRNA.胃癌患者PBMC中MAGE-1和(或)MAGE-3 mRNA的检出率与淋巴结转移和TNM分期密切相关(P<0.05).此外,外周血PBMC中CEA mRNA的检出率为32.5%.MAGE-1、MAGE-3和CEA三者在胃癌中联合检测的检出率为72.5%.结论 MAGE-1和MAGE-3 mRNA可作为相对特异性标记物用于检测胃癌患者外周血肿瘤细胞,联合CEA可以提高其敏感性;MAGE mRNA的检测结果有助于对胃癌患者的预后进行判断.
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手术操作对胃癌细胞外周血播散的影响及其危险因素
目的 研究手术操作对胃癌细胞外周血播散的影响及其危险因素.方法 45例胃癌患者于胃癌根治手术前后即刻分别取外周血,采用RT-PCR的方法测定外周血中癌胚抗原(CEA)mRNA的表达情况.10例健康体检者和3例因胃溃疡而行胃大部切除术者为对照组.结果 胃癌患者手术后CEA mRNA阳性率[48.9%(22/45)]显著高于手术前[8.9%(4/45)](P=0.000);对照组外周血CEA mRNA的表达皆阴性.手术后CEA mRNA阴性组手术时间(2.46±0.51)h,阳性组则为(3.19±0.48)h,P=0.000;早期胃癌组CEA mRNA阳性率10.0%(1/10),进展期胃癌组CEAmRNA阳性率54.8%(17/31),P=0.034;差异均有统计学意义.多因素Logistic回归分析显示,手术时间和肿瘤侵犯深度为手术后CEA mRNA阳性率升高的危险因素.结论 手术操作可导致胃癌肿瘤细胞播散进入血液循环,手术时间和肿瘤侵犯深度为重要的危险因素,随着手术时间的延长和肿瘤侵犯深度的增加,肿瘤细胞播散入血的可能性增加.
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促红细胞生成素受体在肿瘤细胞株中的表达
目的研究促红细胞生成素受体( EPOR)在肿瘤细胞中的表达.方法用 RT- PCR方法测定多种肿瘤细胞株 EPOR mRNA的表达.结果 16种恶性肿瘤细胞有 EPOR mRNA表达, 2种耐药恶性肿瘤细胞株和嗜铬细胞瘤无表达.结论促红细胞生成素受体在多种恶性肿瘤细胞内表达,可能参与肿瘤贫血的发病机制.
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大鼠弥漫性颅脑损伤后脑红蛋白mRNA变化的实验研究
目的 研究弥漫性颅脑损伤后大鼠脑组织中脑红蛋白(NGB)mRNA的表达变化情况,初步探讨NGB与颅脑损伤的关系.方法 选择Marmarou自由落体打击装置制作弥漫性颅脑损伤模型,采用实时、定量PCR检测伤后不同时间脑组织中NGB mRNA的表达情况,并对所得数据进行统计学分析.结果 在伤后30 min,脑组织中NGB mRNA的表达出现首个高峰,此后逐渐下降,至6 h恢复至正常水平;伤后12 h再次升高,于伤后48 h达高峰,此后下降,至伤后5 d仍高于正常水平.结论 弥漫性颅脑损伤后,脑组织中NGB mRNA表达呈"双峰",提示其可能参与神经元损伤后应激及继发缺血、缺氧性脑损害的应答机制.
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原位逆转录PCR检测千细胞因子mRNA在白血病细胞的表达
目的探索应用原位逆转录PCR(RT-PCR)检测低拷贝的干细胞因子mRNA在白血病细胞表达的可行性.方法在普通的PE480型PCR仪进行原位RT-PCR,检测干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞的表达.结果直接法和间接法原位RT-PCR均可以检测到干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞表达,而常规的原位杂交则为阴性.结论(1)干细胞因子在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞均有表达,但是表达量较低,应用原位RT-PCR可进行检测;(2)在普通的PE480型PCR仪上可以进行原位PCR.
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大枣中性多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子及其mRNA表达的影响
目的研究大枣中性多糖(JDP-N)对小鼠腹腔巨噬细胞(Mψ)分泌肿瘤坏死因子(TNF)及其mRNA表达水平的影响.方法MTT法测定细胞增殖,半定量RT-PCR测定TNF-αmRNA的表达.结果JDP-N能诱导Mψ分泌TNF,诱生TNF达峰时间约为6h,与脂多糖相比,时效关系相仿;蛋白激酶C激活在JDP-N诱导Mψ分泌TNF过程中具有关键性作用;JDP-N能促进MψTNF-αmRNA的表达.结论JDP-N增强小鼠免疫功能的机制之一是促进Mψ分泌TNF.
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HBV感染者外周血单个核细胞白细胞介素18 mRNA的表达
目的探讨白细胞介素18(IL-18)在乙型肝炎病毒感染中的作用.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对60例HBV感染者(无症状携带者15例、慢性肝炎33例、重型肝炎12例)及10例正常对照外周血单个核细胞(PBMC)在脂多糖刺激6 h后IL-18的表达进行检测.结果各临床类型之间IL-18的表达均有显著差异(P＜0.05);肝组织炎症活动度不同的慢性乙型肝炎患者IL-18的表达有显著差异(P＜0.05);慢性乙型肝炎组中IL-18的表达与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平呈正相关(r=0.92,P＜0.01).结论不同临床类型HBV感染者IL-18表达水平有显著差异,与肝组织炎症程度相关.
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加味猪苓汤治疗原发性系膜增殖性肾炎的实验研究
[目的]探讨猪苓汤治疗原发性系膜增殖性肾炎的作用机制.[方法]采用兔抗鼠胸腺细胞抗体(Thy-1)大鼠肾炎模型,检测各组大鼠血液生化指标和细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的活性以及白细胞介素6信使核糖核酸(IL-6mRNA)的表达波.[结果]模型组的IL-1β、TNF-α和IL-6水平均升高,IL-6 mRNA表达增强,与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.01);猪苓汤组能降低IL-1β、TNF-α和IL-6的水平及减弱IL-6mRNA的表达,与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).[结论]加味猪苓汤可能是通过抑制细胞因子的基因表达、降低细胞因子的活性对原发性系膜增殖性肾炎产生治疗作用.
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泽泻对肾结石形成的抑制作用研究
[目的]探讨泽泻抑制肾结石形成的作用机理.[方法]将大鼠随机分为正常对照组、肾结石对照组和泽泻治疗组,肾结石组和泽泻组均采用乙醛酸溶液制作大鼠肾结石模型,泽泻组腹腔注射泽泻注射液,正常组和肾结石组注射生理盐水,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测大鼠骨桥蛋白(Osteopotin,OPN)信使核糖核酸(mRNA)的表达.[结果]肾结石组可见双肾表面粗糙,有许多白色晶体形成,OPN mRNA表达增加(与正常组比,P＜0.05),泽泻组虽肾表面粗糙,但白色晶体较肾结石组少,OPNmRNA表达较肾结石组减少(P＜0.05),并接近正常组水平(P＞0.05).[结论]泽泻可抑制由诱石剂引起的肾结石的形成.
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Wilms瘤基因WT1 mRNA的FQ-RT-PCR定量分析研究
[目的]探讨WT1mRNA在Wilms瘤表达的临床意义及其与Wilms瘤生物学性状的关系.[方法]对22例Wilms瘤、瘤旁肾组织及血液标本行WT1 mRNA FQ-RT-PCR定量检测.用SPSS软件进行统计学检验,分析.[结果]肿瘤组织中WT1mRNA表达显著高于肾组织和血液,与年龄、性别、BWT或UWT无关.UH型高于FH型,而肾组织表达又较血液高,BWT血中WT1mRNA表达高于正常对照组及UWT组,而UWT与正常表达无差别.[结论]Wilms瘤基因WT1mRNA表达与Wilms瘤发生发展存在关联,且与肿瘤的病理及预后相关,表达越高病理类型及预后越差,但与WT患儿的年龄、性别、BWT或UWT无关.血WT1mRNA表达水平可能作为BWT的诊断或高危筛选指标.
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OCT4基因在体细胞肿瘤的研究进展
OCT4基因是POU转录因子家族中的成员,系8聚体结合转录因子,在人类定位于人6号染色体,能转录不同的信使RNA亚型(isoform),翻译几种不同的蛋白质.研究发现OCT4基因主要表达于胚胎干细胞和原始生殖细胞,随着干细胞的分化成熟其表达量逐渐下调.胚胎干细胞的信号调控通路中OCT4、SOX2、Nanog处于核心位置.
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外周血CK19 mRNA表达与乳腺癌微转移的相关性研究
目的 检测乳腺癌患者外周血中细胞角蛋白19 (cytokeratin 19,CK19) mRNA的表达,探讨其表达是否可作为判断乳腺癌外周血微转移及预后的分子生物学指标.方法 采用逆转录-多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测75例乳腺癌患者、21例乳腺良性病变患者和20例健康者外周血中CK19 mRNA的表达情况.结果 CK19 mRNA在乳腺癌患者、乳腺良性病变患者和健康者血清中阳性率分别为36％、0％和0％.乳腺癌患者和乳腺良性肿瘤患者及健康者血清中CK19 mRNA表达阳性率差异有统计学上的意义(P＜0.05).CK19mRNA表达阳性率和临床分期呈正相关(P＜0.05).结论 乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA表达与临床分期密切相关,提示该项指标有望预测乳腺癌外周血微转移和判断预后.
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TGF/Smad信号通路与肝纤维化的研究进展
肝纤维化是由于细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成和降解失衡,ECM过度沉积而发生的,是许多慢性肝脏疾病发展为肝硬化的主要病理过程.目前认为转化生长因子β1(transforming growth factor-betal,TGFβ1)在肝纤维化过程中发挥重要作用,而Smads蛋白是TGF-β信号通路传导过程中关键的受体后信使蛋白[1].
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心肌细胞和淋巴细胞β1受体mRNA水平的关系
目的:探讨β1受体mRNA在心肌和淋巴细胞表达的关系.方法:用PT-PCR技术对25例不同心功能状态的心脏病患者(心功能Ⅰ级6例,Ⅱ级14例,Ⅲ级5例),分别检测其心肌和淋巴细胞的β1受体mRNA水平.结果:两种标本检测结果差异无显著意义.结论:淋巴细胞β1受体mRNA水平可反映心肌β1受体mRNA水平.
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相对定量检测HLA-B27 mRNA表达水平的方法建立
目的 建立检测HLA-B27 mRNA表达水平的相对定量的方法.方法 筛选未经治疗的AS患者外周静脉血27例,其中HLA-B27阳性患者22例,HLA-B27阴性患者5例,对标本进行Total RNA提取.然后用RT-PCR方法进行HLA-B27反转录及相对定量.结果 22例HLA-B27阳性AS患者有着相对较高的HLA-B27 mRNA表达水平,低值为1.16,高值为37.01,均值为7.77.5例HLA-B27阴性AS患者均值为1.19,接近于HLA-B27阴性健康对照组.结论 检测外周静脉血HLA-B27 mRNA表达水平对检测AS是一种有效可行的方法.
