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抗巨细胞病毒早晚期抗原单克隆抗体制备及在病毒培养物鉴定中的初步应用
目的 制备抗CMV早晚期抗原单克隆抗体并在病毒培养物鉴定中初步应用.方法 CMV感染MRC-5细胞24h、48h和72h后甲醛灭活的可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1进行融合.酶免法筛查阳性杂交瘤并有限性稀释法进行克隆.免疫荧光及印迹对筛选后的克隆进行鉴定,终获得的杂交瘤制备腹水并使用Protein G进行纯化.纯化后单抗应用于CAP室间质评标本以及临床标本CMV培养物的鉴定.结果 3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合后初步筛查出约110株阳性克隆.剔除与其它抗原有交叉反应、抗体效价低、非全覆盖早晚期抗原的克隆终获得抗CMV单抗杂交瘤1株,即23B5-1.免疫荧光显示23B5-1株单抗与CMV感染后3h-120h的MRC-5细胞均反应,即覆盖即刻、早期和晚期抗原.免疫印迹试验显示23B5-1株单抗与CMV抗原25KD-50KD之间的5个蛋白条带结合.23B5-1株单抗免疫球蛋白亚型为IgG1.Protein G纯化腹水后的单抗效价≥1∶12800.纯化单抗染色鉴定6份室间质评及10份临床标本CMV培养物全部符合.结论 初步应用显示制备的抗CMV早晚期抗原单克隆抗体性能良好.
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医院中禁忌种植52种含有"Epsteln-Barr病毒早期抗原诱导物"的促癌植物
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间接免疫荧光法检测咽分泌物中肺炎支原体抗原
肺炎支原体(MP)是人类原发性非典型肺炎的病原体,根据临床症状不易作出鉴别诊断.因此,实验室检查是诊断肺炎支原体引起的肺炎的主要依据.本研究于2004年10月-2005年3月对来我院就诊的60例次呼吸道感染患儿和20名健康体检儿童同时进行鼻咽分泌物肺炎支原体早期抗原间接免疫荧光法检测,探讨间接免疫荧光法早期诊断MP感染的特异性、敏感性,并与荧光定量支原体PCR方法进行比较.
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Epstein-Barr病毒早期抗原IgG抗体在鼻咽癌筛查中的应用
利用血清学方法对鼻咽癌高发区和高危家系的人群进行监测,是提高癌的早诊率和疗效的有效途径,所用的血清学方法通常以检测血清Epstein-Barr(EB)病毒相关的IgA抗体滴度为主,我们将检测血清抗病毒早期抗原(early antigen,EA) IgG抗体的酶联免疫吸附测定(enzyme linked immuno-absorbent assay,ELISA)方法与检测血清抗EB病毒壳抗原(viral capasid antigen,VCA) IgA抗体(IgA/VCA)滴度的间接免疫酶染色法(indirect immuno-enzyme staining,IES)联用,对来自高发区人群和高发家系成员的血清进行鼻咽癌筛查和监测,取得比较满意的效果,报道如下.
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胎儿巨细胞病毒感染超声表现1例
孕妇,29岁.孕1产0,妊娠36周,孕期无不适,无肝炎病史.产前常规超声检查:胎儿颅骨光环完整,双顶径9.2 cm,脑实质回声均匀,脑室未见扩张,脊柱排列整齐,心包及心脏四腔心观未见异常,胎心130次/min,律齐.胎儿肝上下径约7.9cm,前后径约8.2 cm,实质回声不均匀,可见片状低回声区,肝缘下方见少量无回声区,大深度1.5 cm,内透声好(图1).股骨长6.5 cm,胎盘、羊水未见异常.脐动脉血流频谱S/D 6.7.超声诊断:①宫内孕单活胎、头位;②胎儿肝肿大,肝实质不均匀性改变;③胎儿腹腔积液(少量).排除胎儿宫内感染,建议孕妇检测血清中抗巨细胞病毒(CMV)-IgM,检测结果血清抗CMVIgM阳性.孕妇自愿终止妊娠,引产一女死婴,尸检于腹腔内可见淡黄色液体约30 ml,肝肿大,取羊水及胎儿心腔血检查发现CMV-DNA阳性,胎儿肝组织免疫酶组化法检测:CMV前早期抗原和CMV早期抗原均阳性.病理诊断为:CMV肝炎.
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EB病毒早期弥散型抗原基因片段BMRF1真核表达质粒的构建
鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国南方常见的一种恶性肿瘤,目前筛查鼻咽癌特异的手段就是通过酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法检测患者血清中EB病毒早期抗原(EA)-IgA抗体[1,2]。 EA抗原是EB病毒感染细胞后早期合成的一种蛋白,可以进一步分为弥散型(D型)和局限型(R型)抗原。鼻咽癌患者血清中抗体主要是与D型EA发生特异性反应,因此有的学者认为建立检测D型EA抗体的血清学方法对提高鼻咽癌的诊断率十分重要。本研究构建了EB病毒早期弥散型(D型)抗原基因片段BMRF1的真核表达质粒pPICZαA-BMRF1,使体外获得重组抗原EA-D成为可能,为建立其抗体的血清学检测方法奠定基础。
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EB病毒与非肿瘤性重症疾病
EB病毒(EBV)是线性双链DNA病毒,基因组长度172kb,编码大约100个基因,其中重要的有编码壳抗原(viral capsid antigen,VCA)、早期抗原(early antigen,EA)、核抗原(EBV nuclear antigen,EBNA)的基因.
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巨细胞病毒感染诊断方案
巨细胞病毒感染(cytomegalovirusinfection)是由人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,CMV)引起的人类感染性疾病。CMV感染在我国广泛流行,且多在婴幼儿时期发生。CMV属疱疹病毒科,具有潜伏-活化的生物学特征。病毒在受染细胞内复制时,可产生典型的巨细胞包涵体(cytomegalic inclusion)。CMV在复制早期(1~3小时内)产生前早期抗原(immediate early antigen,IEA),3小时后产生早期抗原(early antigen,EA),然后于6~24小时产生晚期抗原(late antigen,LA)即结构蛋白,如pp65等。CMV一旦侵入人体,将长期或终身存在于体内,在绝大多数免疫正常个体,常呈无症状感染;但在免疫抑制个体,胎儿和幼小婴儿可出现明显病症。CMV感染的靶器官与宿主年龄密切相关,中枢神经系统损害和各种先天畸形仅见于先天性宫内感染的胎儿。婴幼儿以肝炎、肺炎多见,而较大儿童多无症状。
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ELISA法测定EB病毒IgG/EA抗体在血清学诊断鼻咽癌中的意义
近年研究表明,鼻咽癌(NPC)的发展与EB病毒感染密切相关[1].本室应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清抗EB病毒早期抗原(EA)的IgG抗体(IgG/EA)水平,与间接免疫酶染色法测定EB病毒壳抗原(VCA)IgA抗体进行比较,研究结果报道如下:
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儿童 EB 病毒感染的 EB 病毒相关血清学特征研究
EB病毒感染呈全球性分布,以儿童及青少年居多,其中以传染性单核细胞增多症(IM )多见,具有自限性,部分患者可发展为EBV相关性噬血性淋巴组织增生(EBV‐HL H ),病情凶险致死率高达30%‐40%[1]。目前实验室EB病毒血清学特异性抗体检测主要包括针对EBV衣壳抗原(VCA‐IgM、VCA‐IgG)、抗 EBV 核抗原(NA‐IgG )以及 EBV 早期抗原(EA‐IgG),我们回顾性分析我院2013年1月至2014年11月间我院87例EB抗体检测阳性儿童临床资料,旨在探讨儿童EB病毒感染不同血清学模式临床表现以及病毒复制情况的差异,为儿童EB病毒感染的防治提供研究资料。
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定量检测EB病毒VCA-IgA和EA-IgA抗体对EB病毒相关鼻咽癌的诊断意义
目的:评价EB病毒特异性VCA-IgA和EA-IgA抗体定量检测对EB病毒相关的鼻咽癌的诊断意义.方法:试验组为228例鼻咽癌血清标本,对照组为102例正常健康体检者血清标本.用ELISA法定量检测血清标本中EBV特异性VCA-IgA和EA-IgA抗体水平,以临床病理诊断为金标准,分析各血清检测指标的准确性、灵敏性、特异性及其cut-off值的设定.结果:正常健康人血清中EB病毒特异性VCA-IgA和EA-IgA抗体的平均水平分别为15U/ml和11.5 U/ml,鼻咽癌患者血清中VCA-IgA和EA-IgA抗体的平均水平分别为56.5 U/ml和63.5 U/ml,鼻咽癌组抗体水平显著高于健康体检组.根据VCA-IgA、EA-IgA定量榆测结果绘制ROC曲线图,曲线下面积分别为0.903和0.948,VCA-IgA、EA-IgA定量榆测可用于鼻咽癌的准确诊断.根据ROC曲线图分析,cut-off值分别设定为30 U/ml和23 U/ml.按此值设定时,VCA-IgA检测鼻咽癌的敏感性和特异性分别为84.9%和66.8%,EA-IgA检测鼻咽癌的敏感性和特异性分别为87.9%和91.1%.联合检测VCA-IgA和EA-IgA的敏感性为92%,特异性为91%.结论:以ELISA法定量榆测VCA-IgA、EA-IgA的血清抗体水平对鼻咽癌具有诊断意义,尤其将两指标联合应用.
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健康体检人群EB病毒抗体检测结果
鼻咽癌是发生于鼻咽黏膜的恶性肿瘤,鼻咽癌的病因可能与EB病毒的感染、环境、生活习惯和遗传等因素有关[1],鼻咽癌患者血清中含有高水平的EB病毒壳抗原(VCA)和早期抗原(EA)抗体[2],应用免疫学方法检测血清中EB病毒抗体已成为临床鼻咽癌诊断常规检测手段之一[3-4].通过对健康检人员血清EBVCA-IgA及EBEA-IgA检测分析,以了解绍兴县健康人群中EB病毒感染情况,为健康体检者提供更好的信息.
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巨细胞病毒DNA早期抗原与巨细胞病毒-IgM、IgG滴度一致率的对比研究
目的: 正确认识巨细胞病毒(CMV) DNA及CMV早期抗原(EA)的病毒学意义及临床价值.方法: 检查34例急性黄疸性肝炎患儿和19例健康儿童的血白细胞CMV-DNA、尿CMV-DNA、血白细胞CMV-EA,并与其同时检测的CMV-IgM、CMV -Ig G双份血清(急性期/恢复期)滴度有4倍以上升高(IgG升高)相比较.结果 : CMV-DNA与CMV-IgM及CMV-IgG升高的一致率都低于50%;CMV-EA与CMV -IgM的一致率为66.7%(肝炎患儿)、68.4%(健康儿童),显著高于血CMV-DNA(37 .7% ,P<0.01)和-CMV-DNA(44.4%,P<0.05)与CMV-IgM的一致率,但CMV-EA与CMV -IgG升高无相关性;CMV-DNA与CMV-EA在肝炎患儿和健康儿童中的检出率无显著差异性. 结论: CMV-DNA定性检查不适于做为CMV活动性感染的指标,而CMV-EA更能反映CMV的活动性感染.联合开展CMV的多种抗原检查以及定量检查C MV-抗原和DNA可能是必要的.
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孕早期人巨细胞病毒宫内活动性感染的诊断方法学研究
目的探讨诊断孕早期HCMV宫内活动性感染的实验方法及其价值.方法留取68例有异常妊娠史的早孕妇女绒毛组织,分为两份,一份提取总RNA,采用RT-PCR检测其中的HCMV mRNA,一部分制成冰冻切片,分别采用原位杂交技术(ISH)检测HCMV mRNA,免疫组织化学法检测HCMV早期抗原.结果采用RT-PCR检测到的孕早期绒毛组织HCMV mRNA阳性率为39.7%;ISH阳性率为23.5%;免疫组化检测HCMV早期抗原阳性率22.1%.RT-PCR检出率明显高于ISH(P<0.05),而ISH与免疫组化的阳性率无显著性差异(P>0.05).结论测定绒毛组织中的HCMV mRNA、早期抗原是HCMV宫内活动性感染的客观指标.RT-PCR的敏感性高,但ISH与免疫组化可同时作定位、定量观察,可操作性强,因而有较大的临床推广应用价值.
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识别HCMV早期抗原单克隆抗体的鉴定及应用
目的:建立人巨细胞病毒(HCMV)感染的实验室早期快速诊断方法.方法:从6株HCMV单克隆抗体(mAb)中,选择1株识别HCMV早期抗原(EA)的mAb进行了进一步鉴定,并用于临床标本中EA的快速诊断.用间接免疫荧光试验筛选出识别EA的mAb8B8,并用Western blot检测EA的相对分子质量(Mr),mAb8B8在免疫组化染色(IHC)方法中用于检测临床标本中的EA.结果:HCMV感染细胞4 h时,用mAb8B8染色,见到核内荧光.该EA的Mr为72000.在73份HCMV阳性标本中测出EA 59份(81%),而用常规细胞培养方法观测到细胞病变效应(CPE)的标本58份(79%),2种方法测定均阳性的44份(60%),仅EA测定阳性的15份(21%),仅检测到CPE的14份(19%),考虑到所有种类的样本,2种方法在检测HCMV方面无统计学意义.结论:mAb8B8可用于HCMV感染的实验室早期快速诊断.
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EB病毒EA/IgA抗体定量检测在鼻咽癌血清学诊断中的意义
目的采用酶联免疫吸附法(ELISA)定量测定EB病毒抗早期抗原的IgA水平(EA/IgA)在鼻咽癌血清学诊断中的临床价值.方法用ELISA法定量检测血清EB病毒EA/IgA水平,其中鼻咽癌134例,头颈部其它恶性肿瘤56例,鼻咽部非癌疾病47例,健康对照组50例.结果被检血清中鼻咽癌组EA/IgA检测结果阳性率50%,平均值(-x)=53.27u/ml,特异性100%,健康对照组检测结果平均值(-x)=3.50u/ml.结论 EB病毒EA/IgA抗体定量检测对鼻咽癌具有高度的特异性(100%),是一项较好的临床诊断辅助指标.
关键词: 鼻咽肿瘤/诊断 酶联免疫吸附测定 Epstein Barr病毒 抗体 早期抗原 -
由植物肿瘤所想到的……
植物与肿瘤有着千丝万缕的联系,一些植物中蕴含着抗癌活性物质如喜树碱、紫杉醇等,另一些植物如铁海棠、变叶木等因含EB病毒早期抗原诱导物而被认为具有潜在的致癌作用。