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重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1α对血管新生的影响
目的 研究重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1α(Ad-HIF-1α-Ala564-Ala402-Ala803,简称Ad-HIF-1α-564/402/803)对体外血管新生的影响.方法 将前期构建的Ad-HIF-1α-564/402/803在HEK293A细胞中进行扩增,用氯化铯浓度梯度离心法进行腺病毒纯化,终点稀释法测定病毒滴度,提取病毒DNA,进行PCR及PCR产物测序鉴定三突变型HIF-1α基因;X-GaI染色法测定重组腺病毒转染效率;Ad-HIF-1α-564/402/803、Ad-HIF-1αnature、Ad-Null分别转染hMVECs后,观察hMVECs在Matrigel上毛细血管管腔样结构的形成情况;Ad-HIF-1α-564/402/803、Ad-HIF-1αnature、Ad-Null和PBS分别转染鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型后,利用Image Pro Plus6.0软件收集数据并计算各组CAM血管面积比.结果 经PCR及基因测序鉴定,扩增纯化后的腺病毒所携带的目的基因信息无丢失或变异,病毒滴度达10 11～10 12PFU/ml;X-gal染色显示MOI为100 pfu/cell时,转染效率趋于稳定;Ad-HIF-1α-564/402/803转染hMVECs后Matrigel上的管腔数目显著多于Ad-HIF-1α-nature组、Ad.Null及对照组;基因转染CAM 72h后,Ad-HIF-1α-564/402/803组CAM上微小血管数目较Ad-HIF-1α-nature组、Ad-Null组、PBS组明显增多;Ad-HIF-1α-564/402/803组血管面积比与Ad-HIF-1α-nature组、Ad-Null组、PBS组相比,差异有统计学意义(P值分别为0.01、0.000、0.000).结论 Ad-HIF-1α-564/402/803能明显促进hMVECs毛细血管管腔样结构的形成,同时可以促进CAM模型上微小血管新生,证实了Ad-HIF-1α-564/402/803在常氧情况下对血管新生有一定的促进作用.
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靶向NF-κB的小干扰RNA抑制人子宫内膜异位症体外血管生成模型的实验研究
目的 探讨NF-κB p65 siRNA对子宫内膜异位症(EMs)血管生成的抑制作用,为抗血管途径治疗EMs提供依据.方法 将EMs患者在位子宫内膜组织接种于8 d胚龄的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上.建立EMs CAM模型.分设空白组、单纯接种组、阳性siRNA干预组和阴性siRNA干预组.通过Image-proplus软件测量新生血管面积与鸡胚尿囊膜面积比(VA/CAM)及组织病理学观察等方法评价沉默NF-κB基因对CAM血管生成及异位内膜病灶生长行为的影响.结果 各组VA/CAM分别是(22.18%±1.51)%、(30.28±3.91)%、(10.36±2.18)%及(28.60±4.22)%.组间比较:阳性干预组VA/CAM均低于其余3组,差异有显著性(P<0.05);接种组及阴性干预组VA/CAM均高于空白组,差异有显著性(P<0.05);接种组与阴性干预组间比较差异则无显著性(P>0.05).阳性干预组病灶在光镜下町见腺体完整性破坏.结论 NF-κB参与调控子宫内膜异位症的发生发展,沉默NF-κB基因可以显著抑制异位病灶的血管形成.并干扰子宫内膜的异位生长,抗血管途径可能成为治疗EMS的有效策略之一.
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DMPP对于鸡胚血管形成的抑制作用
目的 研究1,1-二甲基-4-苯基哌嗪(1,1-dimethyl-4-phenyl piperazinium,DMPP)对于鸡胚发育期血管新生的作用.方法 采用质量浓度为50 μg/mL的DMPP溶液局部处理鸡胚绒毛尿囊膜(chicken chorioallantoic membrane,CAM)和鸡胚卵黄囊膜(yolk sac membrane,YSM)表面,分别用肉眼和显微镜观察与被测物作用后CAM膜上血管生成情况和YSM膜血管密度和生长率的变化.结果 DMPP能明显抑制CAM模型血管的生成和YSM模型的血管面积和密度的增长.结论 DMPP可抑制鸡胚血管的形成.
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益气养阴方抗血管生成作用的实验研究
目的:探讨益气养阴方抗鸡胚绒毛尿囊膜(Chick chorioa-llantoic membrane,CAM)血管及肿瘤细胞诱导CAM血管生成的效应.方法:制备CAM模型及接种肿瘤细胞的CAM模型,采用血清药理学方法制备含药血清.观察含药血清对CAM血管和肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与生理盐水血清组对照.结果:益气养阴方含药血清可抑制CAM血管及肿瘤细胞诱导的CAM血管生成,各剂量含药血清组血管数目(高剂量组:9.662±0.599,中剂量组:9.682±0.818,低剂量组:10.242±0.640)与血管面积(高剂量组:887 8.500±187 0.115,中剂量组:936 9.750±320 6.427,低剂量组:112 26.875±266 5.071,mm2)均较对照血清组(10.511±0.990,127 59.375±437 9.058,mm2)明显减少,与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:益气养阴方对血管生成有明显抑制作用.
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重组人血管内皮细胞生长因子的表达及活性研究
目的:用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子(VEGF),分离纯化并检测其生物学活性,以研究其在药学领域潜在的药用价值.方法:利用PCR技术扩增VEGF基因片段,克隆到pQE30表达载体中,转化E.coli M15菌株后用IPTG进行诱导表达.经裂解细胞、变性、复性和Ni-NTA agarose金属螯合柱层析等方法纯化得到VEGF.用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成实验检测VEGF的生物活性.结果:重组表达质粒在大肠杆菌中成功地表达了相对分子质量为20 600的融合蛋白,它以不溶性的包涵体形式存在,占菌体总蛋白的30%左右.经分离纯化融合蛋白SDS-PAGE显示为单一区带.CAM结果表明给药组血管生成数(21.7±3.1、39.3±2.8) 与对照组(15.4±1.9、29.2±4.2)相比有明显增加(P<0.05).结论:利用原核表达系统得到血管内皮生长因子具有天然VEGF生物学活性,为进一步的应用研究奠定了基础.
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重组人血管生长素的纯化
目的建立表达重组人血管生长素(recombinant human angiogenin, rhANG)的简便纯化工艺,为扩大生产及临床应用打下基础.方法工程菌经超声破碎,离心洗涤后,变性萃取rhANG的包涵体,通过Sephacryl S-200柱层析分离,再经CuCl2复性,得到rhANG纯品.结果所获取rhANG的纯度达96%以上,蛋白回收率为80%,活性测定经鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane, CAM)测试法显示,该rhANG具有明显的促血管生长作用.结论建立了一套较为简捷的rhANG纯化技术.
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干扰素抗病毒作用机制的研究进展
干扰素（interferon，IFN）是1957年英国和瑞士科学家在利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感干扰现象时发现的一种细胞因子，并根据其可干扰病毒的复制而命名。自1976年Greenberg 报道用人白细胞 IFN 治疗4例慢性活动性乙型肝炎使2例 HBeAg 转阴后，其抗病毒作用一直倍受关注。为解决来源有限、价格昂贵的问题，各种类型的基因工程 IFN不断问世，并相继被美国 FDA 批准进入临床试验及相关病毒感染性疾病的治疗。目前已经成为了临床中治疗乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒感染的主要用药［1］。更有新瑞士科学家发现某些类型的 IFN 能有效减少曾一度威胁人类健康的严重急性呼吸综合征冠状病毒新种类在人类呼吸道上皮细胞环境中的复制，从而可以为严重急性呼吸综合征的疑似感染者提供可能的治疗选择。由此足见 IFN 强大的抗病毒潜能，有待于更广阔的研究和利用，但其抗病毒的具体机制目前还没有统一的认识。本文就目前研究较为清楚的 IFN 抗病毒的几种可能机制作一综述，以期为进一步的研究提供参考。
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血管生成素与肿瘤的研究进展
血管生成素(angiogenin,Ang)初从建立的人腺癌细胞系(HT-29)无血清培养上清分离纯化获得,鸡胚绒毛尿囊膜试验显示其有明显的促血管生成活性,存在于人血清和多种组织.目前研究表明Ang与肿瘤的快速生长和转移存在密切关系,Ang水平可作为提示有无肿瘤及肿瘤恶性程度的指标.
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地塞米松治疗子宫内膜异位症鸡胚尿囊膜模型的实验研究
目的:探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)对子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)血管生成的抑制作用,为抗血管途径治疗EMs提供依据.方法:将EMs患者在位子宫内膜碎屑接种于8 d胚龄的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上,建立子宫内膜异位症鸡胚尿囊膜模型(EMsCAM).分别设定接种组、接种治疗组(DEX)和空白组.利用Image-Pro Plus 6.0软件,定量血管新生面积、蛋壳开窗处对应的CAM面积,计算出血管新生面积与CAM面积的比值.结果:接种组CAM血管生成反应明显增强,血管面积比(VA/CAM)明显大于空白组;接种治疗组VA/CAM明显小于接种组.结论:EMs在位子宫内膜能明显促进CAM的血管生成,为EMs异位种植和存活理论的研究提供一个理论依据.地塞米松能显著抑制异住病灶的血管形成,是抗血管途径治疗EMs的有效策略之一.
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菲牛蛭素对血管新生作用的研究
目的:通过菲牛蛭素刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管,研究其对血管新生的影响.方法:体外培养HUVEC,以血管内皮生长因子(VEGF)作阳性对照药,采用四甲基噻唑蓝(MTT)比色法测定菲牛蛭素对HU-VEC细胞活力的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测菲牛蛭素对HUVEC培养液中VEGF释放含量的影响;制备CAM模型,生理盐水作对照,观察不同浓度菲牛蛭素对血管生成的影响.结果:菲牛蛭素终浓度0.25 U/mL时细胞活力强,与空白对照组比较增殖率为28.4％,且在此浓度培养液中VEGF含量高,比空白对照组高出80.7％;与生理盐水对照组比较,CAM血管总数明显增加,大、中血管数增加显著(P＜0.01),小血管数变化不明显(P＞0.05),其中以22 U/mL剂量组增生作用明显.结论:菲牛蛭素对血管新生具有促进作用,这可能为缺血性疾病治疗提供依据.
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鸡胚绒毛尿囊膜模型与人类肿瘤研究
有关鸡胚研究的历史可以追溯到Aristotle时期.可用的鸡胚材料包括绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔、胚体、胚内器官及组织等,不仅可用于体内实验,还可用于体外实验.近代,鸡胚材料已被大量地用于多个方面、领域的研究.而鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)在肿瘤学方面的研究,是其中的一个热点.
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暖宫孕子胶囊对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响
目的 观察暖宫孕子胶囊对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响.方法 取7日鸡胚40枚,建立CAM模型,随机分为试验组和空白组,每组20枚;试验组加暖宫孕子胶囊药液于无血管区的载体上,空白组加生理盐水,每日加药1次;3d后检测CAM载体周围一级、二级的血管数目.结果 试验组一级、二级血管数目均多于空白组,两组比较有显著性差异(P＜0.05).结论 暖宫孕子胶囊能促进鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)的血管生成.
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26种活血化瘀中药对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响
目的:采用鸡胚绒毛尿囊膜(Chick Chorioallantoic Membrane,CAM)法从26种活血化瘀中药中初筛血管生成抑制剂.方法:试验组分别为26种活血化瘀中药,所用片剂、胶囊剂、丸剂、散剂溶解成饱和溶液,汤剂制成含生药2g/ml的水煎醇沉液,注射液、口服液、膏剂用原药物浓度.种鸡蛋孵化7天,建立CAM模型,按20μl胚加药液于明胶海绵载体上,每日1次,连续3天.孵化第10天,计数CAM载体周围5mm的血管分支点.结果:15种活血化瘀中药CAM的血管分支点数量降低(P＜0.05).结论:榄香烯乳剂、莪术油葡萄糖注射液、磷酸川芎嗪注射液、注射用阿魏酸钠、雷公藤多苷片、火把花根片、祖师麻片、复方斑蝥胶囊、大黄(庶虫)虫丸、大活络丸、复方丹参滴丸、七厘散、活血通脉片、三棱丸及桃红四物汤Ⅱ号具有抑制CAM血管生成的作用.
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小剂量长春瑞滨抗血管生成化疗的实验研究
目的:探讨长春瑞滨在体内外的抗血管生成活性及其可能的作用机制.方法:以人肺腺癌A549细胞为对照,采用MTT法、Transwell小室趋化实验、体外小管形成实验及流式细胞术(Flow cytometry,FCM),观察长春瑞滨对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelia cell,HUVEC)细胞增殖、迁移、形成毛细网管样结构的能力及细胞凋亡的影响；利用鸡胚绒毛尿囊膜(Chicken chorioallantoic membrane,CAM)模型,观察长春瑞滨对体内CAM新生血管的抑制作用.结果:小剂量(0.1 ～1.0ng/ml)长春瑞滨作用48h,对HUVEC和A549细胞增殖抑制具有差异细胞毒作用(P=0.000).0.1 ～0.8 ng/ml长春瑞滨对HUVEC作用12 h的迁移抑制率在20.56％～57.87％之间,与对照组相比,细胞迁移数明显减少(P＜0.005,F =72 979,P=0.000).0.1～0.8 ng/ml长春瑞滨对HUVEC作用24h的小管形成抑制率在29.07％ ～56.83％之间,与对照组相比,小管形成数目明显减少且管腔结构趋于不完整,差异具有统计学意义(P＜0.05,F=75.794,P=0.000).0.1 ～0.8 ng/ml长春瑞滨作用48h,诱导HUVEC细胞凋亡率在22.30％ ～37.05％之间,高于对照组细胞凋亡率15.60％(P＜0.05;注:与对照组相比,在0.1、0.4、0.8 ng/ml长春瑞滨组的相应P=0.036、P =0.013、P =0.012).体内实验显示,0.1 ～0.8 ng/ml长春瑞滨能够抑制CAM新生血管形成,抑制率在21.05％ ～4.2.11％之间,且抑制作用随药物浓度增加而增强.结论:①小剂量长春瑞滨在体外具有抑制血管内皮细胞增殖、迁移、小管形成及诱导细胞凋亡的作用.②小剂量长春瑞滨在体内具有抑制CAM血管形成的作用.
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去甲二氢愈创木酸对活体血管生成作用的实验研究
目的 观察去甲二氢愈创木酸（NDGA）对在体血管生成的影响。方法 采用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）试验，检测NDGA对血管生成的影响。结果 2.5×10-6 mmol以上量的NDGA均对血管生成有抑制作用，在实验剂量（0.5～50)×10-6 mmol范围内，随给药量的增加，其抑制作用愈加明显。采用Bouin’s液原位固定后取膜、DAB染色、普通显微镜下观察或用图像分析方法可使结果更具可信性与可比性。结论 NDGA可抑制血管生成，对肿瘤及其它病理情况下的抗血管生成治疗可能具有重要的应用价值。
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龙葵碱对人结肠癌鸡胚移植模型血管生成的影响
目的：建立人结肠癌鸡胚移植模型，研究龙葵碱对其血管生成的影响。方法将鸡胚分为对照组和低剂量组、中剂量组、高剂量组（均n＝10），将培养的人结肠癌细胞系HT‐29细胞株接种到鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）上，通过立体显微镜、Image‐proplus6．0图像分析软件及免疫组织化学苏木精‐伊红（HE）染色法，观察移植瘤在CAM上血管生成的特点，及不同龙葵碱剂量对血管生成的影响。结果HT‐29细胞接种到CAM第3～5天，大量血管向瘤体集中，长入或跨越瘤体表面，肿瘤迅速生长。给药后第5天进行拍照，图像分析，定量计算血管新生面积明显低于对照组，且呈剂量依赖性，各组间差异有统计学意义（P＜0．01）。免疫组织化学检测表明不同剂量龙葵碱的微血管密度明显低于对照组，与血管新生面积相一致；ki‐67抗原表达指数逐渐下降，实验组低于对照组，且各组间差异有统计学意义（P＜0．01）。结论龙葵碱能明显抑制人结肠癌HT‐29细胞株诱导的血管生成，从而抑制肿瘤的生长，为抗肿瘤血管生成的治疗方面提供了重要依据。
关键词： 龙葵碱 人结肠癌 HT-29细胞株 鸡胚绒毛尿囊膜 血管新生面积 微血管密度 -
益气消癥法方药含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响
目的:观察益气消癓法方药含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的影响.方法:实验分正常空白血清组(空白血清组)、西药米非司酮组(RU486组)、中药高中低剂量组(中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组)、17β-Estradiol组(E2组)、ICI 182,780组(ICI组)、E2+ICI组、中药高中低剂量+E2组.取7日龄鸡胚制成CAM模型.各组加入药液后继续孵育72h.解剖显微镜下放大10倍,计数各组滤纸片周围一二级血管数.结果:中药高剂量组一二级血管数明显低于空白血清组,差异有显著性(P＜0.01)；中药中剂量组二级血管数低于空白血清组,差异有显著性(P＜0.01),但中药中剂量组二级血管数高于中药高剂量组,差异有显著性(P＜0.05)；中药中剂量组二级血管数和中药低剂量组一二级血管数与空白血清组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).E2+中药高剂量组一二级血管数低于E2组,差异有显著性(P＜0.01).E2+中药中剂量组和E2+中药低剂量组一二级血管数与E2组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:益气消癓法方药含药血清对CAM血管新生有抑制作用,并且中药含药血清有抑制雌激素促血管增殖的作用.
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蛇莓抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生作用研究
目的:研究蛇莓对血管新生的影响.方法: 应用鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管新生模型,在鸡胚培养的第7天,分别给予大、中、小三个剂量的蛇莓水提物,培养至第9天收集数据进行评估.结果: 蛇莓给药组血管新生面积明显小于对照组(P<0.001),载体下CAM新生组织中新生血管数显著减少,并可见大血管结构破坏迹象,载体周围CAM组织中仅见少量新生血管.而对照组的载体下组织及周围CAM中均见大量新生血管.结论: 蛇莓可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生.
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桃红四物汤及其拆方对血管生成的影响
目的:观察桃红四物汤及其不同药物组合对血管生成的作用.方法:种鸡蛋孵化7d建立鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,加药于两条主干血管之间的相对无血管区.孵化第10d检测CAM载体周围5mm的血管数目(N)、血管面积(A)和血管面积相对比值(AA).结果:桃红四物汤Ⅰ号、Ⅱ号、四物汤Ⅱ号、桃仁红花、桃仁、当归、川芎、赤芍组CAM的细小血管N、A及AA显著减少,而四物汤Ⅰ号、熟地白芍、熟地组CAM的细小血管N、A及AA均显著增加.结论:桃红四物汤及其拆方中活血组别,即桃红四物汤Ⅰ号、Ⅱ号、四物汤Ⅱ号、桃仁红花、桃仁、当归、川芎、赤芍组具有抗CAM血管生成作用;而补血组别,即四物汤Ⅰ号、熟地白芍、熟地组具有促CAM血管生成作用.
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鸡胚绒毛尿囊膜血管生成模型在中药研究中应用方法探讨
本文对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成模型(鸡胚CAM)进行改良,尝试用中药血清药理学方法、组织匀浆、中药多糖及生药等给药方式,将本血管活性整体模型引入中医药研究中.
