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人骨肉瘤细胞系OS-732与血管生成的相关作用
一、材料与方法 1.细胞株和细胞培养：人骨肉瘤细胞株OS-732， 购自北京积水潭医院骨科实验室，常规培养于含10%新生小牛血清的RPMI-1640培养液中。 2.鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）制备及瘤细胞接种：选取孵育至9 d的胚蛋，参考付生法［1］的方法制备CAM，选择近胚头1 cm处的两条前卵黄静脉间的相对无血管区接种对数生长期OS-732细胞，每只5×106/100 μl,共接种10只。另10只设为空白对照组。于接种第2天至接种第9天在解剖显微镜下逐日观察接种区5 mm范围内血管数目及形态学变化。
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1缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸对新生血管形成的抑制作用
目的:研究缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸对肿瘤血管形成的影响.方法:通过将腺病毒包装的反义HIF-1α(Ad-antiHIF-1α)和腺病毒包装的lacZ标志基因(Ad-lacZ)注射入人大肠癌鸡胚移植模型的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)中,观察他们对鸡胚移植瘤新生血管形成的影响.结果:注射Ad-antiHIF-1α组血管稀疏、纤细,一级血管数(16.8±1.6 vs 45.2±2.8,t=2.42,P=0.02＜0.05)及二级血管数(34.8±3.6 vs 58.4±5.3,t=2.97,P=0.005＜0.01)均明显少于注射Ad-lacZ组.结论:Ad-antiHIF-1α能有效抑制鸡胚移植瘤新生血管的形成.
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三氧化二砷抗肿瘤血管形成研究
目的:探讨三氧化二砷(As2O3)注射液抗肿瘤血管形成的作用及其相关机制.方法:采用MTT比色法、鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管形成实验和免疫组化等方法观察As2O3对内皮细胞株ECV304增生、CAM血管形成以及对裸鼠肝癌移植瘤LCI-D20表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响.结果:As2O3有显著抑制内皮细胞增生作用;能抑制CAM血管形成,其机制与损伤形成血管的原始间充质细胞、破坏血管形成中的内皮细胞的结构和功能有关;As2O3并能降低裸鼠人肝癌转移模型肝移植瘤VEGF的表达.结论:As2O3注射液有明显的抗肿瘤血管形成作用,其机制可能与破坏内皮细胞结构和功能、抑制内皮细胞增生以及抑制肿瘤组织表达VEGF有关.
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通窍益心丸促血管生成作用的实验研究
目的：建立鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型并探讨中药通窍益心丸干预对血管生成作用的影响。方法本实验采用血清药理学的方法制备药物血清并建立鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型，鸡胚随机分为空白血清组、VEGF 组及通窍益心丸大、小剂量组，干预后检测鸡胚绒毛尿囊膜的血管增生程度。结果通窍益心丸小剂量组 CAM的血管增生数与空白血清组相比有明显差异（P ＜0．05），而通心络大剂量组的血管增生数不仅与空白组有显著差异（P ＜0．01），且与 VEGF 组无明显差异（P ＞0．05）。结论通窍益心丸能够促进鸡胚绒毛尿囊膜的血管增生，并呈剂量依赖性，具有一定的促血管新生作用。
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血管内皮生长因子单克隆抗体治疗子宫内膜异位症的实验研究
目的:观察血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体(单抗)对子宫内膜异位症(EMs)血管生成的抑制作用,为从抗血管途径治疗EMs提供依据.方法:60只新鲜受精鸡蛋随机分为接种组(20枚)、接种治疗组(20枚)、单纯空白组(10枚)和空白载体组(10枚).接种组和接种治疗组建立子宫内膜异位症鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,接种治疗组给予VEGF单抗10 μg/d.单纯空白组不接种子宫内膜,空白载体组以无菌明胶海绵为载体,给予PBS 20μg/d.通过显微血管计数、原位铺片及组织学观察等方法检测接种的子宫内膜组织对CAM血管生成和'VEGF单抗对异位内膜病灶生长行为的影响.结果:接种组CAM血管生成反应明显增强.血管数目显著高于单纯空白组和空白载体组;接种治疗组血管数目显著低于接种组.有明显的间质坏死.结论:子宫内膜能明显促进CAM的血管生成,VEGF'单抗能够显著抑制异位病灶的血管形成,并抑制子宫内膜的生长,证实抗血管途径可以作为治疗EMs的一种有效方法.
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整合素аvβ3单克隆抗体治疗子宫内膜异位症的实验研究
目的 探讨整合素аvβ3单克隆抗体对子宫内膜异位症(EMS)血管生成的抑制作用,为从抗血管途径治疗EMS提供依据.方法 建立子宫内膜异位症鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,分设接种组、接种治疗组(LM609)和空白组.通过显微血管计数、原位铺片及组织学观察等方法检测接种的子宫内膜组织对CAM血管生成和整合素аvβ3单克隆抗体对异位内膜病灶生长行为的影响.结果 接种组CAM血管生成反应明显增强,血管数目显著高于空白组;接种治疗组血管数目显著低于接种组;接种治疗组病灶在光镜下可见明显的坏死,LM609能明显抑制子宫内膜异位病灶形成.结论 子宫内膜能明显促进CAM的血管生成,这为子宫内膜能够在异位种植和存活提供了一个依据;整合素аvβ3单克隆抗体能显著抑制异位病灶的血管形成,进而抑制子宫内膜的生长,由此证实抗血管治疗EMs的途径及策略.
关键词： 子宫内膜异位症 鸡胚绒毛尿囊膜 整合素аvβ3单克隆抗体 -
血管生成抑制剂对子宫内膜异位症作用的研究
目的 探讨不同类型的血管生成抑制剂对子宫内膜异位症(EMs)血管生成的作用,为抗血管生成途径治疗EMs提供依据.方法 建立子宫内膜异位症鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,鸡胚随机分成7组,其中5组每组20枚,接种子宫内膜24h后以无菌明胶海绵为载体,接种治疗组分别给予YH-16 5μg/(20μl·d)(YH-16组),沙利度胺10μg/(20μl·d)(沙利度胺组),LM609 10μg/(20μl·d)(LM609组),VEGF单抗10μg/(20μl·d)(VEGF单抗组),接种组给予生理盐水20μl/d(NS组);另两组设为空白组,各10枚,不接种子宫内膜组织,其中空白载体组以无菌明胶海绵为载体并给予生理盐水20μl/d,单纯空白组则在开窗后即予无菌贴膜封口.通过显微血管计数、原位铺片及组织学观察等方法检测接种的子宫内膜组织对CAM血管生成和四种抑制剂对异位内膜病灶生长行为的影响.结果 NS组CAM血管生成反应明显增强,血管数目高于两空白组(P＜0.01);各接种治疗组血管数目低于NS组(P＜0.01);接种治疗组病灶在光镜下可见腺体结构不完整,甚至腺体消失,间质伴有不同程度的坏死.结论 子宫内膜能明显促进CAM的血管生成,血管生成抑制剂能够显著抑制异位病灶的血管形成,并抑制子宫内膜的生长.
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克拉霉素抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究
目的:评价克拉霉素对活体血管生成的影响.方法:采用鸡胚绒毛尿囊膜方法检测,克拉霉素配制成10～150mmol/L的浓度梯度,观察其对血管生成抑制效果的量效关系,成纤维细胞生长因子、磷酸缓冲盐和环孢素分别用作阳性和阴性对照,Leica图像分析系统测量实验区域的血管面积.结果:克拉霉素浓度＞30mmol/L时对鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成产生明显抑制作用,抑制效果与药物剂量明显负相关.结论:克拉霉素对活体血管的生成具有抑制作用,在肿瘤和其他病理情况下的抗血管形成治疗中可能具有一定的应用价值.
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β-七叶皂苷钠对鸡胚血管新生的影响
目的:研究β-七叶皂苷钠对鸡胚血管新生的抑制作用.方法:采用平皿法,观察β-七叶皂苷钠对鸡胚卵黄囊和绒毛尿囊膜血管(chick chorioallantoic membrane,CAM)的作用.结果:β-七叶皂苷钠(100和500μmol·L-1,10μL/药膜)显著抑制卵黄囊血管网的发育,使血管走形发生改变.β-七叶皂苷钠(500和1 000μmol·L-1,10μL/药膜)能够显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成,500μmol·L-1组作用12和24 h后其抑制率分别为59.7%(P＜0.01)和54.5%(P＜0.01),1 000μmol·L-1组作用12和24 h后抑制率分别为67.7%(P＜0.01)和65.3%(P＜0.01).结论:β-七叶皂苷钠能显著抑制鸡胚血管的新生,可能成为抗血管形成抑制剂.
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青蒿琥酯抑制新生血管生成的作用
目的为研究青蒿琥酯成为抗血管生成药物的可能性,观察其对新生血管的影响,并初步探讨其机制.方法采用鸡胚绒毛尿囊膜、大鼠主动脉环无血清培养、人脐静脉内皮细胞损伤迁移等实验,检测青蒿琥酯对新生血管增殖与迁移的抑制作用.结果鸡胚绒毛尿囊膜实验表明,青蒿琥酯有较强的血管增殖抑制作用,对微血管作用强于大血管;大鼠主动脉环无血清培养实验表明,青蒿琥酯能明显推迟血管新生,减少新生血管数量;人脐静脉内皮细胞损伤迁移实验表明青蒿琥酯对内皮细胞具有增殖和迁移抑制作用.在这些体内外实验中,青蒿琥酯抑制血管生成作用呈剂量依赖性.结论青蒿琥酯具有抑制新生血管生成作用,此作用可能与抑制血管内皮细胞迁移有关.
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DADAG在体内外对血管生成的抑制作用
DADAG是一种糖醇烷基化的衍生物,现已被证实具有抗肿瘤活性.通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型以及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖和迁移实验进一步发现DADAG有抗血管生成作用,并且探讨了其可能的作用机制.实验结果显示,DADAG(100,500和1000 μmol/L)可以浓度依赖地抑制CAM中的血管生成.在SRB实验中,DADAG(45,90,135,180和225 μmol/L)可以抑制HUVEC的增殖,并且也具有浓度和时间依赖性.为了在检测时有效排除细胞增殖对细胞迁移结果的影响,运用高内涵实验证实了DADAG(45,135和225 μmol/L)可以直接抑制HUVEG的运动.免疫荧光实验显示DADAG对血管生成的抑制作用可能是通过降低HUVEC中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达实现的.总之,DADAG在体内及体外的抗血管生成作用与下调内皮细胞中VEGF的表达有关.
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青蒿琥酯抑制鸡胚尿囊膜血管生成作用的研究
目的观察青蒿琥酯对新生血管生成的影响.方法采用鸡胚绒毛尿囊膜方法,检测青蒿琥酯对正常鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成抑制作用,对肿瘤细胞诱导的鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成的敏感性以及对MCF-7细胞、白血病K562细胞生长和浸润的影响.结果青蒿琥酯有较强的抗肿瘤细胞和浸润作用,以及抑制血管增殖作用,并且呈剂量依赖性.结论青蒿琥酯具有抑制新生血管增殖作用.
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当归、黄芪注射液对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响
目的 探讨当归、黄芪注射液对鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)血管生成的影响.方法 种蛋在37.8℃孵育7 d后制备CAM模型,当归、黄芪注射液及其不同配比滴加于CAM表面的载体上,继续孵育3 d,观察鸡胚存活状况,然后制备鸡胚CAM标本,解剖显微镜下计数新生毛细血管数目.结果 当归、黄芪注射液及其不同配比均具有促进鸡胚CAM血管生成作用,与生理盐水对照组相比有显著性差异(P＜0.05),除当归与黄芪1∶5,其他各组药效低于表皮生长因子(EGF)(P＜0.05).结论 当归注射液、黄芪注射液及其不同配比具有显著促进鸡胚CAM血管生成作用,其可能的机制是血管内皮细胞的增殖与迁移.
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四种抗肝癌中药对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响
目的 通过测定四种中草药对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型血管生成的作用,并与阳性药物索拉菲尼对比,探究药物作用与血管生成的关系,探究药物可能存在的靶向治疗作用.方法 醇提取四种广西特色中草药,建立鸡胚绒毛尿囊膜模型测定不同药物醇提物与极性组段抗血管生成的抑制作用.结果 索拉菲尼、破骨风、土半夏、血党均有不同程度的抑制鸡胚尿囊血管生长作用,与空白对照组相比,索拉菲尼与破骨风对二、三级血管均有明显抑制作用(P＜0.01);土半夏、血党对三级血管有抑制作用(P＜0.01),其高剂量组对二级血管也有明显抑制作用(P＜0.01).结论 索拉菲尼、破骨风、土半夏、血党均可不同程度抑制血管的生长,可能是通过与索拉菲尼相同的作用机制实现;天胡荽对血管生长的抑制作用较弱.
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固摄方和人参皂甙Rg3对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响
1材料1.1受精鸡胚:北京白鸡种胚,购自北京中国农业大学养殖场.培养于中国农业大学养殖场动物实验室.
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三种鸡胚绒膜尿囊膜移植瘤模型对比分析
目的 通过比较三种不同癌细胞株在鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)上的生长情况,从中筛选佳移植癌细胞株,建立移植瘤模型并观察生物学特性.方法 分别将人肺癌A549株、舌鳞癌TCA8113株与人肝癌QGY7703株接种于7日龄鸡胚CAM上,对各自鸡胚成活率、瘤株成活、成瘤率和诱导血管生成情况等指标进行检测,并观察筛选移植瘤模型生长特性.结果 与人肺癌A549株和肝癌QGY7703株接种组相比,舌鳞癌TCA8113株接种组成瘤率高(P < 0.05),为佳移植癌细胞株,佳接种癌细胞数量为8.0×106/个,接种后瘤体佳生长周期为4 ~ 8 d,佳实验时间为接种后第7 天.结论 筛选建立了舌鳞癌TCA-CAM移植瘤模型,为深入研究肿瘤生长生物学特性、血管生成机制、侵袭转移机制和筛选抗肿瘤药物提供了良好的实验动物模型.
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淫羊藿苷在体内外对血管生成的抑制作用
目的 观察淫羊藿苷(ICA)对血管生成的影响.方法 采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测ICA对CAM血管生成的影响,MTr法检测ICA对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长的影响,流式细胞术分析ICA对HUVEC周期的影响,聚碳酸酯膜小室趋化运动模型检测ICA对HUVEC细胞运动能力的影响.结果 ICA能明显抑制CAM血管生成;抑制HUVEC生长,其抑制效果与剂量和作用时间相关;ICA作用下HUVEC细胞可出现周期阻滞,180 μg/mlICA处理HUVEC 6 h对细胞迁移抑制率为78.0％.结论 ICA能抑制血管生成,但其体内抑血管生成作用还有待于进一步证实.
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胆碱对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的促进作用
目的:研究胆碱对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的促进作用.方法:制备CAM模型,将氯化胆碱、人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)和生理盐水分别通过载体加到CAM上,观察CAM特异性血管生长情况和血管数目变化.结果:氯化胆碱在0.5 nmol/L～1 mmol/L浓度范围内,当浓度增至0.01 μmol/L～1 000μmol/L浓度范围时均有促进血管新生的作用,其低有效浓度为0.01 μmol/L,促进血管新生的作用幅度与hVEGF相当.结论:胆碱可促进鸡胚绒毛尿囊膜血管新生.
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子宫内膜异位症动物模型研究进展
子宫内膜异位症是妇科常见病,是育龄期妇女盆腔痛和不孕的主要原因之一,其发病机制尚不明确,治疗手段不充分,体内、外模型的建立及应用是探索子宫内膜异位症的发生、发展以及治疗措施的重要途径.通过手术建立子宫内膜异位症动物模型的方法主要包括同种移植和异种移植,同种移植是将同基因动物的子宫内膜组织移植到灵长类或啮齿类动物的腹腔,异种移植是将人体在位或异位子宫内膜组织移植到免疫缺陷鼠体内或直接种植到鸡胚绒毛尿囊膜.本文分析、总结了子宫内膜异位症常用模型中灵长类、啮齿类和鸡胚绒毛尿囊膜不同动物模型的构建方法和优缺点,旨在为实验中模型的选择应用提供指导.
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鸡胚绒毛尿囊膜在抗血管形成研究中的应用
鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)是研究血管形成与抗血管形成的理想体内模型.鸡胚血管网到第8d发育成毛细血管丛,快速增长持续到第11d,而此时机体的免疫系统尚未完全建立,对异物的刺激不产生排异反应,便于观察诱导剂及抑制剂对机体免疫的影响.CAM已广泛的应用于肿瘤的研究中,包括对血管形成及抗血管形成的研究.目前CAM用于研究血管形成在子宫内膜异位症(EMs)发病中的作用机制,是理想的研究EMs发病原因的体内模型.
