冷应激前后大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠α-烯醇化酶基因的定量

目的 研究急性冷刺激对大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠α-烯醇化酶(α-enolase,EN01)基因表达量的影响.方法 取健康大鼠10只,随机分为2组:冷应激组和正常对照组,每组5只.正常对照组饲养环境为24℃,冷应激组大鼠环境温度为4℃,应激时间为12h.实验后分别取两组大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠组织样品,应用实时荧光定量PCR检测应激前后大鼠四种内脏器官EN01 mRNA表达量.结果 冷应激组肺脏与十二指肠ENO1 mRNA表达水平显著高于正常对照组(P＜0.05);肾脏与肌肉ENO1 mRNA表达水平显著下降(P＜0.05).结论 急性冷刺激可通过影响肺脏、肌肉、肾脏及十二指肠EN01基因表达调节代谢燃料的选择和应激反应程度.

冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中α-烯醇化酶基因mRNA的转录水平

目的 研究冷应激前后大鼠心脏、肝脏、脾脏中α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因mRNA的转录水平.方法 将大鼠随机分为正常对照组(24℃,正常饲喂7d)和冷应激组(置4℃,应激12 h),提取各组大鼠心脏、肝脏及脾脏细胞总RNA,反转录成cDNA,以其为模板,PCR扩增ENO1基因,应用生物信息学软件DNAstar进行同源性分析,实时荧光定量PCR法检测大鼠心脏、肝脏、脾脏中ENO1基因mRNA的转录水平.结果 冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏总RNA的1％琼脂糖凝胶电泳可见28S、18S和5S 3条带,A260/A280值为1.8～2.0;ENO1基因经2％琼脂糖凝胶电泳分析可见107 bp的目的基因条带;ENO1基因序列与NCBI上公布序列的同源性为100％;冷应激组大鼠肝脏、脾脏组织中ENO1基因mRNA的转录水平明显高于正常对照组(P＜0.01),正常对照组大鼠心脏组织中ENO1基因mRNA转录水平明显高于冷应激组(P＜0.05).结论 冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中ENO1基因mRNA的转录水平均发生显著改变,本实验为动物应激状态评估及应激发生机制的研究提供了实验依据.

miRNA与机体冷应激反应关系的研究进展

环境温度是一种普遍存在于生物体周围的应激原,低温会诱导机体进入冷应激状态.miRNA是一类拥有19～25个核苷酸的非编码RNA,参与人类细胞的多种基本生命活动.多基因遗传学证据表明,miRNA在介导冷应激反应中起着关键作用.随着对miRNA研究技术的日益成熟,近年多项研究结果证明,多种miRNA与冷应激反应密切相关.本文就miRNA的作用机制及其与冷应激反应关系的研究进展作一综述.

丙酮酸对细胞寒冷应激损伤的保护作用研究

目的:细胞冻存、移植器官保存过程中,机体细胞会产生细胞寒冷应激过程,导致细胞产生损伤作用,而其作用机制尚不清楚,本研究通过观察4℃冷暴露对HEK293细胞增殖活性及凋亡的影响,分析线粒体分裂蛋白Drp1在此过程中的表达变化,阐明Drp1在细胞寒冷应激中作用及其机制.方法:采用MTT法观察4℃环境暴露对HEK293细胞损伤的影响,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测蛋白Drp1、Bcl2表达水平变化,提取线粒体观察线粒体中Drp1表达水平.结果:4℃冷暴露抑制HEK293细胞增殖(P＜0.05),Drp1线粒体表达水平增高,并向线粒体转位;丙酮酸可以逆转4℃冷暴露对细胞增值抑制,抑制Drp1线粒体表达水平增高,并向线粒体转位,增加细胞中Bcl2表达水平.结论:研究发现细胞寒冷应激可以使细胞凋亡,细胞增殖出现显著抑制,而寒冷应激引起细胞Drp1的线粒体转位,丙酮酸干预后可以对细胞起到保护作用,研究发现丙酮酸可以逆转Drp1的线粒体转位过程,增加Bcl2表达水平,可能是其产生保护作用的机制之一.

冷应激引发小鼠骨关节炎模型的建立

[目的]明确冷应激对小鼠膝骨关节炎发生的作用,为建立冷应激诱导的实验性小鼠骨关节炎模型提供参考.[方法]选用清洁级BALB/C小鼠20只,随机分为空白组和模型组,每组各10只.给予模型组小鼠右膝关节6~8℃冷水刺激,30d后用游标卡尺测量关节肿胀程度,用酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定小鼠血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、类风湿因子(IgM)及透明质酸(HA)的含量,并取膝关节进行苏木精-伊红(HE)染色制作病理切片.[结果]实验结束时(第31天),模型组小鼠右膝关节直径大于左膝关节直径(P<0.01),且与第0天时比较,右膝关节直径差异有统计学意义(P<0.01);而空白组小鼠左右膝关节直径及与第0天时右膝关节直径相比,差异均无统计学意义(P>0.01).与空白组相比,模型组血清TNF-α和HA水平升高,差异有统计学意义(P<0.01);血清IgM的水平无变化(P>0.05).模型组膝关节切片出现软骨及滑膜细胞排列紊乱,核溶或消失,有明显软骨及滑膜细胞增生、钙化、粘连及关节腔间隙变窄等骨关节炎病理改变.[结论]冷水刺激可促进小鼠骨关节炎形成,小鼠骨关节炎建模初步成功.

当归有效部位对冷应激小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞周期的影响作用

目的 观察当归有效部位对冷应激小鼠模型脾淋巴细胞增殖及细胞周期的影响.方法 采用水提醇沉法提取当归的总提取物、总多糖、小分子物质.随机数字表法将60只SPF小鼠分为对照组、模型组、当归总提取物组、当归总多糖组、当归小分子物组、红景天组,每组10只.分别灌胃,连续14 d.从第10天起每天灌胃0.5h后逐一将动物置于水温为(8±2)℃的游泳池游泳3 min,连续5d建立冷应激小鼠模型.对照组给予等量生理盐水.第14天游泳后处死动物,无菌摘除脾脏,制备脾淋巴细胞悬液.MTT观察各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期分布变化.结果 与对照组相比,模型组细胞OD值明显下降,增殖抑制率为(36.24±3.56)％,细胞周期分布变化显著,其中G0/G1期增高,S期降低,G2/M期降低,分裂增殖指数均明显下降(P＜0.01).与模型组相比,当归多糖组、红景天组细胞OD值增高,增殖抑制率明显降低(P＜0.05或P＜0.01),而当归总提取物组、当归小分子物组OD值及抑制率均无明显变化(P＞0.05).与模型组相比,当归多糖组、红景天组G0/G1期百分比均下降(P＜0.05),当归多糖组、当归小分子物组、红景天组S期百分比均增高(P＜0.05),红景天组G2/M期百分比增高(P＜0.01),当归多糖组、红景天组分裂增殖指数均增高(P＜0.05),当归总提取物组、当归小分子物组均无明显变化(P＞0.05).结论 当归总多糖能增强冷应激小鼠脾淋巴细胞增殖能力.

冷应激对健康人直肠肛管压力、感觉及顺应性的影响

急性冷应激大鼠肝脏中mir-210的生物学功能预测

本文通过观察冷应激时mir-210在大鼠肝脏中的表达情况,预测了mir-210在冷应激中的功能.本实验采用了30只12周龄SPF级Wistar雄性大鼠,体重(340±20)g,将大鼠在常温预饲一周后,随机分成急性冷应激组[温度(4±0.1)℃]和常温对照组[温度(24±0.1)℃],急性应激12h后,提取肝脏,qRT-PCR检测mir-210表达.结果表明,急性冷应激组大鼠肝脏中的mir-210表达量升高,与常温对照组相比差异极显著(P＜0.01).通过生物信息学方法分析发现,mir-210的靶基因有上百种,其中与冷应激相关性较高的靶基因是E2F3、RAD52、ISCU和Ephrin-A3.ISCU能够调节细胞的呼吸代谢,而Ephrin-A3对细胞的增殖和凋亡有显著影响;mir-210的上调还能够直接影响DNA的修复机制,从而导致遗传不稳定.结果提示,冷应激时肝脏mir-210的上调能够对细胞生长发育、能量代谢和遗传等方面产生影响.

铜预投对大鼠冷应激性胃溃疡的影响及机制

目的:探讨铜预投对应激性胃溃疡的影响及可能的机制.方法:28d龄清洁级SD大鼠80只,随机分成4组,即灌水组、低铜组(LC)、中铜组(MC)和高铜组(HC),每组再分应激组和室温对照组;灌胃3 w后,采用冷拘束法使大鼠产生应激性胃溃疡,观察胃黏膜溃疡指数,测定血清铜、锌值及超氧化物岐化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量.结果:①冷应激后各组血清锌含量显著上升,灌水组、LC组和MC组血清铜含量略有下降,HC组血清铜含量则不降反升.②灌水组、LC组、MC组和HC组溃疡指数依次有降低趋势,HC组与灌水组和LC组比较有显著的降低(P＜0.05).③冷应激后各组血清中SOD活性均降低,以MC组和LC组为明显(P＜0.01);GSH含量均极明显升高(P＜0.01);MDA含量均略有升高.结论:冷应激能影响大鼠血清中铜锌含量和Cu/Zn比值,适量的铜给予对应激性胃溃疡有保护作用;其机制可能与铜提高了血清中SOD活性和GSH含量,从而增强机体的自由基清除能力有关.

NE系统在冷应激诱导NK细胞活性下降中的作用

目的用6-OHDA分别选择性地损毁外周和中枢的去甲肾上腺素(NE)能系统,探讨去甲肾上腺素能系统在冷应激诱导大鼠NK细胞活性下降中的作用.方法大鼠置于4℃的冷室4 h.腹腔和侧脑室分别注射6-OHDA.采用YAC-1细胞51Cr释放法测定脾脏NK细胞的活性.用免疫细胞化学法观察下丘脑室旁核(PVN)和脑干蓝斑(LC)中的Fos表达,以及Fos表达阳性的神经元的性质.用放射免疫法测定血浆CORT的浓度.结果脑室注射6-OHDA能部分翻转冷应激诱导的血浆CORT浓度的升高,减少PVN和LC 中Fos的表达,同时使脾脏NK细胞活性不再下降.同样,腹腔注射6-OHDA也能翻转冷应激诱导NK细胞活性的下降,但对脑内Fos表达没有明显影响.另外,双染实验表明,PVN中有少量的Fos阳性的神经元同时表达精氨酸加压素(AVP)或催产素(OT),而LC中大多数Fos阳性的神经元同时表达酪氨酸羟化酶(TH).结论冷应激诱导大鼠NK细胞活性下降的可能机制是:一方面通过中枢去甲肾上腺素能系统去激活HPA轴;另一方面介导外周交感神经系统.后两者共同作用于脾脏NK细胞,导致其活性下降.

冷应激对高血压大鼠交感神经活性及脑干基质交感分子1表达的影响

目的 观察冷应激对自发性高血压(SHR)大鼠交感神经活性及脑干基质交感分子1(Stim1)表达的影响.方法 选择雄性SHR及正常大鼠各10只,将正常大鼠随机分为正常对照组、单纯冷应激组各5只,SHR大鼠随机分为SHR模型组、SHR冷应激组各5只.正常对照组及模型对照组均置于24℃的代谢笼中6 h,单纯冷应激组及SHR冷应激组均置于4℃代谢笼中6 h进行诱发冷应激.应用Panlab NIBP System无创血压测量系统测量各组大鼠尾动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP);采用代谢笼法收集各组大鼠尿液,高效液相色谱仪检测尿去甲肾上腺素(NE)排泄量.取脑干组织,采用实时定量PCR法检测脑干Stim1 mRNA表达,Western blotting法检测脑干Stim1蛋白表达.结果 单纯冷应激组SBP、DBP和尿NE排泄量均高于正常对照组;SHR冷应激组SBP、DBP和尿NE排泄量均高于SHR模型组和单纯冷应激组;SHR冷应激组脑干Stim1 mRNA及蛋白表达均低于SHR模型组和单纯冷应激组(P均<0.01).结论 冷应激下,Stim1可能为调控交感神经活性的关键基因.

冷应激对健康人直肠动力及自主神经功能的影响

目的研究冷应激前后直肠动力及自主神经功能的变化,探讨冷应激对自主神经功能及直肠运动的影响,揭示自主神经功能对直肠运动的调节作用.方法选择符合入选标准的健康志愿者15名,用液体灌注测压系统测定直肠动力,用电子恒压器检测直肠顺应性,同时用心率变异性分析的方法反映自主神经张力.数日后以冷水浸手作为应激源获得应激状态重复上述实验.结果应激后直肠静息压、直肠动力指数显著升高(P＜0.001);应激后直肠顺应性显著降低(P＜0.05);心率变异频域分析低频带功率P1、低频带功率与高频带功率比P1/P2显著升高(P＜0.05).结论冷应激后直肠静息压、动力指数升高、直肠顺应性降低可能与交感神经兴奋性升高有关.

冷库工人血浆中NO及NOS水平的研究

目的研究低温作业人群血浆中NO、NOs水平,探讨低温作业对人可能的危害与机制.方法选冷库作业工人为研究对象,其中保鲜冷库(0℃组)53人,水产冷库(-20℃组)53人,另选不从事有毒有害职业的村民57人作为对照,用试剂盒检测血浆中NO、NOs水平.结果0℃组与-20℃组分别与对照组相比,其血浆中NO含量和NOs活性均增高(P＜0.05).0℃组与-20℃组相比,各指标差异无显著性.结论在冷作业工人中存在着NO含量和NOS活性增高,可能与机体处于冷应激状态有关.

人参多糖对冷应激大鼠睾丸雄激素受体mRNA表达及血浆睾酮的影响

目的 探讨人参多糖对冷应激大鼠生殖功能的影响,研究大鼠睾丸组织雄激素受体mRNA表达与血浆睾酮变化及人参多糖的调节作用.方法 采用大鼠雄激素受体(AR)cDNA探针斑点杂交法检测雄激素受体mRNA表达强度,血浆睾酮含量测定采用放射免疫分析法.结果 对照组睾酮含量为(10.93±1.44) nmol·L-1,冷应激实验组为(6.06±1.78) nmol·L-1,冷应激人参多糖实验组为(8.01±1.38) nmol·L-1.实验组与对照组比较,差异显著(P＜0.05).Dot - blot杂交结果:冷应激实验组明显弱于对照组,冷应激加人参多糖实验组弱于对照组但强于冷应激实验组.结论 冷应激使睾酮水平下降,雄激素受体mRNA表达信号减弱,人参多糖可促进冷应激条件下的睾酮生成,加强雄激素受体mRNA表达.

冷应激对虚寒证人群线粒体膜电位的影响

目的 通过研究冷应激即低温环境下对虚寒证人群线粒体呼吸链模块中线粒体膜电位功能的影响,从能量代谢角度探讨虚寒证的可能发生机制.方法 先从学生中选出正常对照组及典型虚寒证组,再分别从二组中随机选出20例组成被试组,分别置于寒冷环境(约-4～5℃)30min和室温环境(23～25℃)20min,采集静脉血,用流式细胞仪检测其线粒体膜电位的含量.结果 二组证型间线粒体膜电位的变化规律为正常对照组＞虚寒证组.与正常对照组相比,在低温条件下,虚寒证组膜电位差异有统计学意义(P＜0.05),而在室温条件下,膜电位差异无统计学意义(P＞O.05).结论 冷应激状态下,虚寒证组线粒体膜电位变化较小,说明虚寒证组体内线粒体膜电位功能存在异常.这也可能是虚寒证人群畏寒的原因之一.

针刺足三里穴对冷应激性溃疡大鼠下丘脑与肾上腺NOS表达的影响

目的研究针刺足三里穴对急性胃溃疡(由冷应激引起)的保护作用,以及冷应激对大鼠下丘脑及肾上腺一氧化氮合成酶(NOS)表达的影响.方法通过计算胃粘膜溃疡指数和应用RT-PCR技术,对大鼠下丘脑、肾上腺NOS的表达情况进行半定量研究.结果实验数据表明,针刺足三里穴可以明显减少溃疡(由冷应激导致)指数;同时发现下丘脑NOS1不参与冷应激溃疡病理过程,针刺足三里穴可在生理范围内上调下丘脑NOS1的表达水平;下丘脑NOS2参与了冷应激溃疡病理过程,针刺足三里穴可下调其表达,减轻病理损害程度;NOS3也参与了冷应激溃疡病理过程,针刺可以下调其表达水平,但下调程度较轻微;肾上腺NOS1及NOS3表达水平在应激过程中增高,针刺只能抑制NOS1表达,肾上腺NOS2不参与该应激过程.结论针刺对冷应激溃疡具有一定的保护作用,该保护作用是通过生理性上调下丘脑NOS1表达、下调NOS2及NOS3病理性高表达以及抑制肾上腺NOS1表达而实现的.

高盐饮食与冷应激复合诱导大鼠心肌肥厚的药物干预

目的:研究药物干预对高盐复合冷应激诱导大鼠心肌肥厚的影响及其可能机制.方法:Wistar大鼠给予含8%氯化钠饲料喂养,并每天置于(5±2)℃冷室内4 h,分别用0.85 %氯化钠、卡托普利、美托洛尔和尼群地平干预,并与对照组比较.实验8周.结果:①美托洛尔组大鼠左室心肌肾素活性、血管紧张素Ⅱ和醛固酮浓度明显低于0.85%氯化钠组、卡托普利组和尼群地平组(P<0.01),与对照组差异无显著性意义.②3种药物干预的大鼠血压均明显低于0.85%氯化钠组(P<0.01),与对照组之间差异无显著性意义.③尼群地平组大鼠心脏重量指数与对照组之间差异无显著性意义,但明显低于0.85%氯化钠组、卡托普利组和美托洛尔组(P<0.01).结论:尼群地平可抑制大鼠心肌肥厚,提示细胞内钙离子在高盐复合冷应激诱导大鼠的心肌肥厚发生发展过程中起重要作用.

冷应激对铜预投大鼠血清铜锌代谢、SOD活性及GSH含量的影响

为揭示应激对体内微量元素代谢的影响和机制,预先给予大鼠不同水平的铜3周后,采用冷束缚法使大鼠产生应激,测定了血清铜、锌水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量.结果表明,高铜给予没有对清洁级大鼠生长产生明显的影响,血清铜、锌及铜锌比值变化不明显,但适量的铜给予能显著提高血清中 SOD 活性和 GSH 含量;冷应激处理后大鼠血清中 Cu 水平下降,Zn 水平升高,同时 SOD 消耗降低,而 GSH 含量显著升高.表明冷应激可使大鼠体内铜锌代谢及 SOD 活性和 GSH 含量发生变化,适量的铜给予在应激状况下才发挥出积极的生理作用.

实验性脾虚大鼠与冷应激大鼠回肠段SP、VIP含量的变化

目的 研究实验性脾虚大鼠与冷应激大鼠引起胃肠功能紊乱可能的共同机理。方法 应用放射免疫分析方法(RIA)，对实验性脾虚证大鼠及冷应激大鼠回肠始段P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)进行测定，并与对照组进行比较。结果 发现脾虚组SP含量显著升高(P＜0.005)，Ⅷ含量显著降低(P＜0.005)；应激组回肠段SP含量无明显改变(P＞0.10)，VIP含量明显降低(P＜0.05)。结论 脾虚大鼠与冷应激大鼠回肠始段SP、VIP含量有改变，并可能与脾虚或应激引起的胃肠功能紊乱有关。结合其它研究可能设想：胃肠激素含量的变化是脾虚大鼠或冷应激大鼠引起胃肠功能调节的共同中间机理之一。

降压药物干预高盐饮食复合冷应激诱导大鼠的心肌肥厚

目的研究药物干预对高盐复合冷应激诱导大鼠的肾素-血管紧张素-醛固酮系统、血压和心肌肥厚的影响.方法 Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组,未治疗组,卡托普利组,倍他乐克组和尼群地平组.除正常对照组外,其余4组大鼠在药物或生理盐水干预的同时,均给予含8%NaCl饲料喂养,并每天置于5±2 ℃冷室内4 h.每周测血压和体质量一次,8周后处死动物称全心脏湿质量.用放免法测定大鼠左室心肌肾素活性、血管紧张素Ⅱ和醛固酮浓度.结果①倍他乐克组大鼠左室心肌肾素活性、血管紧张素Ⅱ和醛固酮浓度明显低于未治疗组、卡托普利组和尼群地平组(P<0.01),与对照组无明显差异.②3种药物干预的大鼠血压均明显低于未治疗组(P<0.01),与对照组之间无差异.③尼群地平组大鼠心脏质量指数与对照组之间无显著性差异,但显著低于卡托普利组和倍他乐克组(P<0.01).结论尼群地平可抑制大鼠心肌肥厚,卡托普利和倍他乐克则无此作用,提示细胞内钙调节异常可能在高盐复合冷应激诱导大鼠心肌肥厚发生发展过程中起重要作用.