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沈阳地区狂犬病疫苗免疫抗体水平测定
为了解沈阳地区注射狂犬疫苗后的人群免疫保护水平,我们对3 018人份注射狂犬病疫苗前后的免疫效果进行了对比观察.结果报告如下.材料与方法(1)样品来源:分别采集被犬类动物咬伤患者注射狂犬病疫苗前血样,和全程注射狂犬病疫苗50～55天的血样.(2)免疫疫苗:狂犬病疫苗由长春生物制品研究所生产.(3)抗原膜:由福建省卫生防疫站购入.
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柱层析法纯化传代Vero细胞狂犬病疫苗上样量的选择
传代Vero细胞狂犬病疫苗较原代地鼠肾细胞狂犬病疫苗具有效价高,工艺简单,无外源因子污染,易于大规模生产的优点.其浓缩液经过Sepharose 4FF凝胶柱层析纯化后[1],其杂蛋白去除率可达99%以上,一、二期临床试验证明副反应率极低,且免疫效价可达4.5IU/ml以上,高于<中国生物制品规程>所规定的2.5IU/ml要求.在深入研究纯化工艺佳条件时,发现待纯化的浓缩疫苗上样量的多少直接影响纯化后疫苗的质量.对此,我们做了研究,结果报告如下.
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冻干人用狂犬病疫苗致过敏性休克1例
本文报告1例应用冻干人用狂犬病疫苗致过敏性休克病例。
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狂犬病疫苗注射程序不当医院赔偿
2006年10月23日,2岁患儿不小心被狗咬伤,其父母马上带着孩子到近的医院就诊.经检查,伤口无大碍,注射狂犬病疫苗,共5针,完成一个免疫疗程即可.
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狂犬病疫苗的发展与现状及评述
1885年7月6日,这是一个值得永久纪念的日子.法国巴斯德(PASTEUR,1822-1895)创制的第一支狂犬病疫苗首次用于人体,治疗获得成功,疫苗的疗效轰动了世界.巴斯德征服狂犬病的伟大功绩,拯救了无数狂犬患者的生命,开僻了一条崭新的免疫之路,在世界范围内掀起了以疫苗为武器与传染病的斗争,数以亿计的人免受疾病的痛苦而获得新生,巴斯德开创了人类文明健康历史的新纪元[1].在巴斯德狂犬病疫苗后的100多年中,狂犬病疫苗被不断地改进,不断地完善.本研究重点介绍与评述狂犬病疫苗百年关健性进展的历程.
关键词： 狂犬病疫苗 -
狂犬病暴露者行预防注射的护理
狂犬病是一种由狂犬病毒引起的人、畜共患的急性传染病,是一种可防不可治的疾病,一旦发病,病死率几乎达百分之百.狂犬病"暴露"是指被狗、猫等动物咬伤、抓伤及被狂犬病患者分泌物污染而具有被狂犬病毒感染的可能性.对狂犬病暴露者,及时规范的进行伤口处理,注射抗狂犬血清(简称抗血清)或人狂犬病免疫球蛋白(简称球蛋白)、狂犬病疫苗(简称疫苗)可以预防狂犬病和降低发病率[1].我院门诊于2003年1月-2004年12月对狂犬病暴露者2289例进行免疫预防注射,免疫失败仅2例,成功率达99.91%,收到较好的预防效果,笔者将预防注射体会进行总结,现报道如下.
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小儿接种狂犬病疫苗的不良反应及护理对策
目的:探讨小儿接种狂犬病的主要不良反应及其应对措施.方法:选择我中心2016年5月～2017年5月出现的32例小儿接种狂犬病疫苗不良反应患者的临床资料进行回顾性分析.结果:32例中发热24例,注射部位局部疼痛14例,硬结3例.部分小儿同时合并发热和局部疼痛两种不良反应.结论:小儿接种狂犬病疫苗不良反应发生率较高,必须注意观察,遵守预防接种的相关工作规范,加强与家长的沟通,发现症状立即给予及时的处理.
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超过24小时再打狂犬疫苗还管用吗
问:前些天我被小狗咬了一下,由于当时没有出血,也没有在意,没去医院打狂犬病疫苗.听朋友说狂犬病疫苗越早打越好,超过24小时后再注射就没用了,请问是这样吗?答:关于"被狗、猫咬伤、抓伤超过24小时再打狂犬疫苗就不管用"的说法是不科学的.国家卫生部《狂犬病暴露后处置工作规范》中明文规定:"首次暴露后接种狂犬病疫苗越早越好.但对已暴露一段时间而一直未接种狂犬疫苗者也可按接种程序接种疫苗."可见,如果没有及时接种上狂犬病疫苗,超过几天还是可以接种的,只要未发病之前接种狂犬疫苗仍管用,但超过2天者首次接种剂量要加倍.
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狂犬病暴露人群的伤口处理及防治探讨
目的:通过对狂犬病暴露人群伤口的及时处理探讨狂犬病的有效防治措施.方法:以我社区卫生服务中心2015年1月~2017年1月所收治的168例狂犬病暴露人员为例,对于被狗或猫咬伤的病人,如果破损皮肤未被疑似携带狂犬病毒的动物舔舐或没有出血,则对患者注射狂犬病疫苗;如果伤口被舔舐或出血,便及时进行伤口处理,并采取相关防治措施并注射狂犬疫苗.3个月后对所有患者进行狂犬病众和抗体检测,以免出现接种不成功的显现.结果:通过对我卫生服务中心160例狂犬病暴露人员进行及时恰当的处理,并按相关用药规范及时注射狂犬疫苗.没有1例暴露人员出现狂犬病,狂犬病中和抗体检测结果均为阳性.结论:狂犬病虽然目前还是不可治愈,但只要做好伤口处理及防治措施,还是可以有防范的.
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接种狂犬疫苗致播散性脑炎分析
接种疫苗是预防和控制传染病特异而有效的方法.但个体差异的存在,要求医务工作者时时警惕,防止意外事故的发生.我们在工作中曾遇到1例因接种狂犬病疫苗发生严重反应致死的案例.
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冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)对大鼠的生殖毒性
目的:观察不同剂量冻干人用狂犬病疫苗( Vero细胞)对大鼠的胚胎-胎仔发育毒性,为评价冻干狂犬病疫苗的安全性提供依据. 方法:雌性SD大鼠60只,随机分为4组:低剂量疫苗组( 1剂/次)、高剂量疫苗组( 2剂/次)、阴性对照组和辅料对照组,于交配前第0、3、7、14天免疫,21天合笼交配后,妊娠第7和14天再次免疫,分别观察各项生殖毒性指标. 结果:各剂量组孕鼠生殖能力及胎仔生长发育各项指标均未见明显差异. 结论:高剂量冻干人用狂犬病疫苗( Vero细胞)对大鼠无生殖毒性作用.
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孕妇被狗咬后能否注射狂犬疫苗
刘女士今年29岁,已经怀孕4个月了.两天前,她在家中与狗玩耍时,不小心被狗咬到了,被咬处有五个清晰的牙印.虽然并没有出血,但是刘女士不敢大意,准备去防疫站注射狂犬病疫苗.这时,她被婆婆拦住了,刘女士这才意思到她是有身孕的人.刘女士的婆婆赶紧给妇产医院打电话咨询,医生说孕妇是不可以注射狂犬疫苗的,否则会对胎儿造成不良影响.她们又给疾病防控中心打电话咨询,工作人员说像刘女士这种情况是必须注射狂犬疫苗的.因此刘女士和家人不知道怎么办才好.
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氢氧化锌与硫酸乙酰肝素复合佐剂对狂犬病疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的作用
目的 探讨氢氧化锌与硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)复合佐剂对狂犬病疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的影响.方法 取64只ICR小鼠随机分为8组,每组8只,分别为复合佐剂(0.27 mg氢氧化锌,100 μg HS,0.125 IU狂犬病疫苗)1、2、3次免疫组,狂犬病疫苗1、2、3次免疫组,狂犬病疫苗常规5次免疫组,生理盐水对照组.均经小鼠胫骨前肌免疫,除狂犬病疫苗常规5次免疫组于0、3、7、14、28 d进行免疫外,其他各组均为隔周免疫.分别于初免疫后1、2、3、4、8、12、16周经尾静脉采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中抗-狂犬病毒(Rabies virus,RABV)IgG水平.结果 初免后1周,除生理盐水对照组小鼠血清未检测到抗-RABV IgG外,各实验组均产生抗-RABV特异性IgG;所有复合佐剂组在初免后3周均可产生高水平的IgG,初免后12周反弹性升高达到峰值,第16周仍维持较高水平.初免后1、2、3、4、8、12、16周,复合佐剂1、2、3次免疫组IgG水平均高于狂犬病疫苗相同次数免疫组,差异均有统计学意义(P均＜0.05),且IgG水平持续时间较长.初免后2周,复合佐剂2、3次免疫组的IgG水平均高于狂犬病疫苗常规5次免疫组(3次免疫后);初免后3周,复合佐剂3次免疫组的IgG水平高于狂犬病疫苗常规5次免疫组(4次免疫后)(P均＜0.05).结论 氢氧化锌和HS复合佐剂能增强狂犬病疫苗诱导的小鼠体液免疫应答.
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氢氧化锌胶体与三磷酸腺苷二钠联用对狂犬病疫苗诱导小鼠体液免疫应答的增强作用
目的 制备氢氧化锌[Zn(OH)2]胶体,并检测其单独或与三磷酸腺苷二钠(Disodium adenosine tripho-sphate,简称ATP)联用对狂犬病疫苗诱导小鼠体液免疫应答的增强作用.方法 采用葡萄糖酸锌作为锌源,与NaOH反应制备Zn(OH)2胶体溶液,对其进行纯化及检测,并进行小鼠急性毒性试验;将不同剂量的Zn(OH)2胶体单独或与不同剂量的ATP联用,与狂犬病疫苗(0.25 IU)混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组和抗原对照组,每组8只,Zn(OH)2和Zn(OH)2+ ATP和生理盐水对照组采用单次免疫,抗原对照组分别免疫1、2、3、5次,分别于初次免疫后4、8、12、16周采血,分离血清,检测血清中抗狂犬病病毒特异性IgG抗体水平.结果 所制备Zn(OH)2胶体溶液大吸收波长为213nm,可观察到明显的丁达尔现象,浓度为6 mg/ml,经光学色差显微镜及扫描电镜观察合格,小鼠急性毒性试验未观察到急性毒副作用.大部分佐剂组抗体水平高于抗原单次免疫组,但均未达到抗原5次免疫组水平;0.27和0.21 mg Zn(OH)2组在初次免疫后8周内有高水平抗体产生;0.27 mg Zn(OH)2组在初次免疫后16周出现抗体水平反弹性升高;0.18 mg Zn(OH)2+1.0 mg ATP组和0.18 mg Zn(OH)2+0.5 mg ATP组在初次免疫后4周内产生的抗体水平较高,之后逐渐下降;2次和3次免疫抗原对照组在初次免疫后8周内,其抗体水平不及佐剂组.结论 所制备的Zn(OH)2胶体佐剂单独或与ATP联用均可增强狂犬病疫苗诱导小鼠特异性体液免疫应答,且安全性良好,有望应用于疫苗生产.
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疫苗中聚肌胞的分离测定
目的 采用两步水解及反相高效液相色谱法(reversed phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)分离测定疫苗中聚肌胞(polyinosinic-cytidylic acid,PIC)成分.方法 对经蛋白酶K消化、饱和酚抽提、乙醇沉淀回收的含有PIC成分的狂犬病疫苗样品采用KOH碱水解及碱性磷酸酶水解2、6、10h后,采用RP-HPLC法检测疫苗中的PIC成分,色谱条件:色谱柱Xtimate HPLC Column (C 18,4.6 mm× 250 mm,5μm);流动相:乙酸铵溶液-甲醇(96∶4),流速:0.8 ml/min;紫外检测波长:254 nm;柱温:25℃;进样量:5μl.结果 PIC经碱性磷酸酶不同时间水解,确定佳水解时间为6h;疫苗中的PIC成分被成功分离成肌苷峰和胞苷峰,且分离度良好.结论 两步水解及RP-HPLC法可成功分离出疫苗中的PIC成分,为疫苗的质量控制及监管提供参考.
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多种方法结合去除冻干人用狂犬病疫苗中Vero细胞残留DNA
目的 采用多种方法结合去除冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中Vero细胞残留DNA.方法 采用滤芯(滤板)澄清、鱼精蛋白处理、核酸酶处理、Sepharose 4FF层析纯化或澄清、核酸酶、Sepharose 4FF层析纯化结合的方法去除Vero细胞培养的狂犬病病毒液中的Vero细胞DNA,检测Vero细胞DNA残留量、抗原含量、核酸酶残留量及疫苗效价.结果 0.45 μm UB玻璃纤维澄清病毒液,抗原损失率较小;鱼精蛋白去除Vero细胞DNA,抗原损失量较大;核酸酶处理后,病毒液中Vero细胞DNA残留量仍高于1 ng/ml;经Sepharose 4FF层析纯化,能有效去除浓缩后经核酸酶处理的病毒液中的核酸酶及一定量的Vero细胞DNA;采用多种方法结合去除病毒液中Vero细胞残留DNA,DNA残留量＜100 pg/ml,疫苗效价≥4.0 IU/ml,均达到《中国药典》三部(2010版)要求.结论 多种方法结合能有效去除冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中Vero细胞DNA残留量,且疫苗效力达到《中国药典》三部(2010版)要求.
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应用复合纯化介质Capto Core700纯化狂犬病疫苗
目的 应用复合凝胶Capto Core700作为纯化介质去除狂犬病疫苗中的Veto细胞宿主蛋白和宿主细胞DNA等杂质.方法 将Vero细胞接种至微载体,在celligen plus生物反应器中培养,按MOI=0.002接种狂犬病病毒,连续制备10批狂犬病疫苗原液.经过滤及浓缩后加入β-丙内酯,于2～8℃灭活24 h,获得病毒灭活液.上样至装载复合凝胶Capto Core700的纯化柱进行层析纯化,并按《中国药典》三部(2015版)的方法检测宿主细胞蛋白去除率、宿主细胞DNA去除率、狂犬病病毒糖蛋白回收率及总蛋白去除率.同时与传统Sepharose系列凝胶纯化方法进行比较.结果 10批疫苗纯化液的宿主细胞蛋白去除率为58.3％～63.2％,宿主细胞DNA去除率均＞90％,糖蛋白回收率范围为52.3％ ～ 74.5％,蛋白去除率范围为7.22％ ～ 11.76％.与传统Sepharose系列凝胶纯化方法比较,差异较小,且Capto Core700的上样量为3倍柱体积,高于Sepharose凝胶(15％).结论 Capto Core700凝胶可有效去除狂犬病疫苗中的杂质,缩短了纯化工艺时间.
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阈值法检测人用狂犬病疫苗Vero细胞DNA残留量方法的建立及初步验证
目的 建立一种阈值法(threshold method)检测人用狂犬病疫苗Vero细胞DNA残留量的方法.方法 取人用狂犬病疫苗进行DNA抽提后,与内控品经高温变性、冰浴后,37℃水浴1h,加入生物素标记的单链DNA结合蛋白(single stranded binding protein,SSB)和尿素酶标记的抗单链DNA(single stranded DNA,ssDNA)的单抗,与变性的宿主细胞DNA结合形成复合物,经过滤、洗涤后,将复合物吸附于硝酸纤维素膜上,置Threshold仪器样品检测池中,检测DNA含量.对建立的阈值法测定人用狂犬病疫苗Vero细胞DNA残留量的方法进行线性范围、准确性及精密度验证.结果 该方法的低检测限为3 pg/500μl,线性范围为3～ 200 pg/500μl,DNA内控品浓度的对数与相应的检测信号值的对数呈良好的线性关系(R2=0.98);该方法检测不同企业疫苗样品的回收率为99％～ 124％,变异系数为8.5％,加入内控品后再抽提,不同企业疫苗样品的回收率为48％～128％,变异系数为32.9％;同1批疫苗重复10次的检测结果的CV值为7.8％,同1批疫苗不同时间检测结果的CV值为11.8％.结论 阈值法可检测人用狂犬病疫苗Vero细胞宿主DNA残留量,该方法操作简便,灵敏度好,准确性及精密度高,对人用狂犬病疫苗生产和质量控制具有较好的指导意义.
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气相色谱法检测灭活狂犬病病毒浓缩液中β-丙内酯的含量
目的 建立气相色谱法检测狂犬病病毒浓缩液中β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)含量,分析BPL在灭活和水解过程中含量的变化.方法 气相色谱条件:初始温度80℃,保持1 min,以20℃/min的速率升温至200℃,保持5 min;检测器温度为250℃;进样口温度为150℃;载气为氮气,流速为1 ml/min;进样量为1μl.验证该方法的专属性、重复性和耐用性,绘制标准曲线并确定检测限和定量限.利用该方法检测BPL以1∶2000、1∶4000、1∶8 000进行灭活和水解过程中含量的变化.结果 气相色谱法检测狂犬病病毒浓缩液中BPL含量具有良好的专属性、重复性和耐用性,线性范围在572.86 ～ 8.95 μg/ml,定量限为1.145 μg/ml,检测限为0.229μg/ml.以不同比例的BPL对狂犬病病毒浓缩液进行灭活,72 h后其含量均高于定量限,水解1h后BPL含量均低于检测限.结论 建立了BPL含量气相色谱检测方法,该方法准确可靠,可用于狂犬病疫苗生产过程中BPL含量的检测,为病毒灭活工艺验证提供了数据支持.
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CpG对狂犬病疫苗免疫效果的影响
目的研究寡脱氧核苷酸(简称CPG)对狂犬病疫苗免疫效果的影响.方法用狂犬病疫苗原液+Al (OH)3、狂犬病疫苗原液+CPG、狂犬病疫苗原液+Ak(OH)3+CpG3种配伍方式分别免疫地鼠,同时用狂犬病疫苗原液作对照;免疫途径分为腹腔、皮下和肌肉,全程免疫结束后2周采血,进行小白鼠中和试验.同时用NIH法对不同配伍的疫苗进行效力检测.结果3种免疫途径以皮下和肌肉免疫效果较腹腔为好;3种配伍方式中以狂犬病疫苗原液+Al(OH)3+CpG的免疫效果好;狂犬病疫苗原液+C一较狂犬病疫苗原液对照免疫效果好.结论 CpG对狂犬病疫苗免疫效果有明显的增强作用.
