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消栓肠溶胶囊对慢性脑低灌注大鼠皮层神经元损伤的影响
目的：观察消栓肠溶胶囊对慢性脑低灌注大鼠皮层神经元损伤的影响。方法采用随机数字表完全随机化将大鼠分为假手术组12只，模型组17只，消栓肠溶胶囊大、中、小剂量组各15只。采用双侧颈总动脉永久性结扎(2VO)法制备大鼠慢性脑低灌注模型。造模后2 h开始灌胃给药，消栓肠溶胶囊大、中、小剂量组分别灌胃消栓肠溶胶囊混悬液420、140、47 mg/kg，假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水。1次/d，连续给药40 d后取材。采用免疫荧光染色法检测皮层神经元特异性核蛋白(NeuN)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达。采用生化法检测皮层组织GSH-PX、SOD 及 MDA 水平。结果与模型组比较，消栓肠溶胶囊大、中剂量组大鼠皮层神经元NeuN阳性表达[(8716.86±2539.93)、(9549.31±1663.26)比(7297.05±1932.49)]增强(P＜0.05或 P＜0.01)、GSH-PX 水平[(7.37±1.08)U/mg、(7.77±3.26)U/mg比(3.67±2.52)U/mg]升高(P＜0.05)；消栓肠溶胶囊大、中、小剂量组大鼠皮层 Caspase-3阳性细胞数[(11.65±2.68)个/mm2、(14.05±4.55)个/mm2、(12.60±4.56)个/mm2比(16.80±5.41)个/mm2]减少(P＜0.05或 P＜0.01)、皮层组织 MDA 水平[(1.44±0.40)nmol/mg、(1.96±1.13)nmol/mg、(2.12±1.19)nmol/mg 比(3.19±0.98)nmol/mg]降低(P＜0.05或 P＜0.01)，SOD 水平[(555.61±92.45)U/mg、(607.90±228.45)U/mg、(515.98±184.01)U/mg比(348.12±108.84)U/mg]升高(P＜0.05或P＜0.01)。结论消栓肠溶胶囊减轻慢低脑灌注引起的神经元损伤与改善脑组织自由基代谢关系密切。
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心钠素在原代培养大鼠耳蜗螺旋神经元细胞中的表达
目的 观察心钠素(atrial natriuretic peptide,ANP)在原代培养大鼠耳蜗螺旋神经元细胞(spiral gan-glion neurons,SGN)中是否表达.方法 应用细胞培养技术原代培养SGN,并进行鉴定、纯化,应用免疫细胞化学方法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测原代培养的SGN中ANP的表达情况.结果 原代培养的SGN经免疫细胞化学检测,证实其神经元特异性核蛋白(neuron-specific nuclear protein,NeuN)表达阳性,并且发现近胞核周围的胞质存在ANP免疫反应阳性颗粒,免疫荧光染色检测证实了ANP、NeuN的共同表达,RT-PCR方法检测到ANP-mRNA的存在.结论 本实验表明原代培养的SGN具有表达与合成ANP的能力,提示ANP可能作为内耳SGN神经调节的一种递质或调质,参与其生理活动和突触传递功能的调节.
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新生大鼠丙泊酚麻醉对成年后海马特异性核蛋白表达的影响
目的 观察新生大鼠不同剂量丙泊酚麻醉对成年后认知功能及海马特异性核蛋白(NeuN)表达的影响.方法 雄性SD大鼠100只,日龄7d,体重9～18 g,随机分为对照组(C组)、丙泊酚25 mg/kg组(P1组)、丙泊酚50mg/kg组(P2组)、丙泊酚100mg/kg组(P3组)和丙泊酚200mg/kg组(P4组),每组20只.P1组和P2组单次腹腔注射丙泊酚25或50mg/kg;P3组和P4组首次注射丙泊酚50mg/kg,待大鼠有体动反应(40～60 min)后,每次再追加丙泊酚50mg/kg,直至给完总量.每组取5只大鼠,苏醒后即刻抽取动脉血样进行血气分析.其余大鼠苏醒后放回笼内继续饲养直至9周龄,Morris水迷宫测试大鼠空间学习记忆能力,定位航行实验测试第1天～第6天大鼠登上平台的时间(逃避潜伏期).免疫组化法和Western blot法检测大鼠海马神经元NeuN的表达.结果 五组苏醒后即刻pH值、PaO2、PaCO2、HCO3、BE和SaO2组间差异无统计学意义.第2天～第6天P2组、P3组和P4组大鼠逃避潜伏期随着丙泊酚剂量的增加而明显长于C组和P1组(P＜0.05)；与P2组比较,第2天～第6天P3组、P4组大鼠逃避潜伏期明显延长(P＜0.05)；与P3组比较,第2天～第6天P4组大鼠逃避潜伏期明显延长(P＜0.05).P2组、P3组和R组大鼠穿越平台分别为(4.23±1.08)次、(2.71±1.24)次和(2.83±1.05)次,明显少于C组的(8.09±2.12)次和P1组(7.67±2.56)次(P＜0.05).与C组比较,P1组、P2组、P3组和P4组海马CA1区、CA3区和齿状回NeuN阳性神经元表达逐渐减少(P＜0.05)；与P1组比较,P2组、P3组和P4组海马CA1区、CA3区和齿状回NeuN阳性神经元表达逐渐减少(P＜0.05)；与P2组比较,P3组和P4组海马CA1区、CA3区和齿状回NeuN阳性神经元表达逐渐减少(P＜0.05)；与P3组比较,P4组海马CA1区、CA3区和齿状回Ne-uN阳性神经元表达逐渐减少(P＜0.05).Western blot法海马组织C组、P1组、P2组、P3组和P4组NeuN蛋白表达量分别为(1.14±0.08)＞(0.85±0.06)＞(0.65±0.07)＞(0.52±0.07)＞(0.41±0.05)(P＜0.05).结论 新生大鼠丙泊酚麻醉对大脑发育产生深远的影响,可能通过剂量依赖性地降低神经元存活的数量、抑制NeuN的表达而损害大鼠成年后的学习记忆能力.
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脑卒中后抑郁大鼠额叶、海马、杏仁核神经元数量变化
目的 观察脑卒中后抑郁(PSD)大鼠大脑情感障碍相关脑区额叶、海马、杏仁核神经元数量变化.方法 将20只健康成年雌性SD大鼠随机分为抑郁组、卒中组、PSD组和对照组,每组5只.抑郁组采用孤养法加以慢性不可预见的中等强度应激刺激(CUMS)制作抑郁模型.卒中组用线栓法建立脑卒中模型.PSD组先用线栓法建立脑卒中模型,然后用孤养法加以CUMS制作PSD模型.对照组大鼠正常饲养.给予CUMS后第29天处死各组大鼠,取额叶、海马、杏仁核区脑组织行神经元特异性核蛋白(NeuN)免疫荧光组织染色,光镜下计数并比较各组大鼠额叶、海马、杏仁核中神经元(NeuN阳性细胞)的数量.结果 PSD组大鼠情感障碍相关脑区额叶、海马、杏仁核中神经元数量分别为(98.20±1.78) 、(43.00±7.87) 、(93.00±3.53) 个/视野,均低于其他三组(P均<0.05) .结论 PSD组大鼠情感障碍相关脑区额叶、海马和杏仁核神经元数量减少.
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康复训练对脑出血大鼠神经细胞再生的影响
目的 探讨康复训练对大鼠脑出血后神经细胞再生的影响.方法 将75只SD大鼠分为康复组、制动组和假手术组,每组25只.康复组和制动组应用胶原酶Ⅶ注射入苍白球诱导脑出血模型,假手术组用生理盐水替代胶原酶.康复组每天予以抓握、平衡、旋转等训练,制动组置于网状笼内固定.各组分成脑出血后第1,4,7,14,28天共5个时间点,每个时间点5只.对不同组大鼠进行神经功能评分,用5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记S期增殖细胞；BrdU免疫组化单标、BrdU/微管相关蛋白(MAP)和BrdU/神经元特异性核蛋白( NeuN)免疫荧光双标法检测大鼠侧脑室下区(SVZ)和齿状回颗粒下区(SGZ)细胞的增殖、迁移与分化.结果 康复组神经功能评分明显低于制动组(P＜0.05)；制动组大鼠SVZ的BrdU+细胞在各时间点上少于康复组大鼠；脑出血后第7天,康复组SVZ区BrdU+细胞表达显著增加且高于制动组(P＜0.05),14 d时SVZ区BrdU+细胞表达减少,同时在出血侧纹状体发现BrdU +/MAP+细胞,是制动组的1.8倍(P＜0.05)；脑出血后第28天,康复组出血侧纹状体神经元分化比率是制动组的2.3倍(P＜0.05).结论 康复训练可促进脑出血后神经细胞再生.
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红花黄素对骨髓间充质干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的影响
目的：通过研究红花黄素对骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植修复大鼠脊髓损伤(SCI)的影响，探讨其可能的作用机制。方法：骨髓细胞贴壁法分离、培养、扩增BMSCs，并进行腺病毒介导的绿色荧光蛋白(GFP)标记。45只SD大鼠行改良Allen法制备SCI模型后，随机分为红花黄素组、单纯BMSCs组和PBS组，红花黄素组于损伤脊髓局部注入GFP-BMSCs，腹腔注射红花黄素40mg/kg；单纯BMSCs组脊髓注入GFP-BMSCs，PBS组注入同体积0.9％氯化钠溶液。术后1、2、3、4、7 d检测损伤脊髓组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量；分别于7、14、21、28d检测损伤脊髓组织神经元特异性核蛋白(NeuN)和神经生长因子(NGF)表达，BBB评分法进行后肢运动功能评分。结果：红花黄素组BBB评分、脊髓损伤局部SOD活性及NeuN和NGF的表达均明显高于单纯BMSCs组和PBS组(P＜0.05)，而MDA含量较低(P＜0.05)。结论：红花黄素通过抑制脊髓自由基生成、减轻脂质过氧化、上调NeuN和NGF表达而增强骨髓间充质干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的效果。
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嗅觉剥夺对成年豚鼠梨状皮质NeuN和CB表达的影响
目的 观察嗅觉功能剥夺后对成年豚鼠两侧梨状皮质神经元特异性核蛋白(NeuN)、维生素D依赖性钙结合蛋白(CB)表达的影响.方法 将20只豚鼠随机分成两组,通过电烙铁损伤左侧外周鼻孔区建立嗅觉功能剥夺模型,饲养3周和6周之后灌注取材,采用尼氏染色与免疫组织化学技术观察各个时间点豚鼠自身两侧梨状皮质尼氏体、NeuN和CB的表达情况.结果 3周组与6周组嗅觉未剥夺侧梨状皮质尼氏体的密度、CB+细胞密度均显著高于剥夺侧(P＜0.05);3周组与6周组嗅觉未剥夺侧梨状皮质NeuN+细胞密度低于剥夺侧,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 嗅觉功能活动对成年豚鼠梨状皮质神经元的表达有重要作用.
