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消栓肠溶胶囊对慢性脑低灌注大鼠皮层神经元损伤的影响
目的：观察消栓肠溶胶囊对慢性脑低灌注大鼠皮层神经元损伤的影响。方法采用随机数字表完全随机化将大鼠分为假手术组12只，模型组17只，消栓肠溶胶囊大、中、小剂量组各15只。采用双侧颈总动脉永久性结扎(2VO)法制备大鼠慢性脑低灌注模型。造模后2 h开始灌胃给药，消栓肠溶胶囊大、中、小剂量组分别灌胃消栓肠溶胶囊混悬液420、140、47 mg/kg，假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水。1次/d，连续给药40 d后取材。采用免疫荧光染色法检测皮层神经元特异性核蛋白(NeuN)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达。采用生化法检测皮层组织GSH-PX、SOD 及 MDA 水平。结果与模型组比较，消栓肠溶胶囊大、中剂量组大鼠皮层神经元NeuN阳性表达[(8716.86±2539.93)、(9549.31±1663.26)比(7297.05±1932.49)]增强(P＜0.05或 P＜0.01)、GSH-PX 水平[(7.37±1.08)U/mg、(7.77±3.26)U/mg比(3.67±2.52)U/mg]升高(P＜0.05)；消栓肠溶胶囊大、中、小剂量组大鼠皮层 Caspase-3阳性细胞数[(11.65±2.68)个/mm2、(14.05±4.55)个/mm2、(12.60±4.56)个/mm2比(16.80±5.41)个/mm2]减少(P＜0.05或 P＜0.01)、皮层组织 MDA 水平[(1.44±0.40)nmol/mg、(1.96±1.13)nmol/mg、(2.12±1.19)nmol/mg 比(3.19±0.98)nmol/mg]降低(P＜0.05或 P＜0.01)，SOD 水平[(555.61±92.45)U/mg、(607.90±228.45)U/mg、(515.98±184.01)U/mg比(348.12±108.84)U/mg]升高(P＜0.05或P＜0.01)。结论消栓肠溶胶囊减轻慢低脑灌注引起的神经元损伤与改善脑组织自由基代谢关系密切。
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地黄饮子对慢性脑低灌注大鼠学习记忆及海马AChE,ChAT的影响
目的:探讨地黄饮子对慢性脑低灌注大鼠学习记忆及海马乙酸胆碱酯酶(AChE )、乙酞胆碱转移酶(ChAT)的影响.方法:采用双侧颈总动脉结扎制作大鼠慢性脑缺血模型,通过Morris水迷宫试验测定地黄饮子对慢性脑低灌注大鼠学习记忆功能改善情况,并测定大鼠海马脑组织AChE,ChAT的含量.结果:地黄饮子组(10,20 g·kg-1)与模型对照组比较,Momis水迷宫试验逃避潜伏期缩短,跨越平台次数增加,海马AChE和ChAT含量显著升高(P<0.05).结论:地黄饮子能改善慢性脑低灌注大鼠学习记忆功能,可能与保护胆碱能系统有关.
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针刺对慢性脑低灌注模型大鼠空间学习记忆的影响
目的:以双血管阻断大鼠为研究对象,探讨针刺对血管性痴呆大鼠空间学习记忆能力的影响.方法:共选取42只Wistar雄性大鼠,采用双侧颈动脉结扎法复制大鼠血管性痴呆模型.模型制备成功的大鼠随机分为模型组、针刺组和非穴组,另设假手术组作为对照.在造模成功3d后进行针刺2周.采用Morris水迷宫评价大鼠的空间学习记忆能力.结果:在定位航行实验中,与假手术组相比,模型组大鼠游泳距离显著增加(P＜0.05).与模型组相比,针刺组游泳距离显著减少(P＜0.05),且针刺组游泳距离明显短于非穴组(P＜0.05).各组游泳速度未见显著性差异.在空间探索实验中,与假手术组相比,模型组穿越平台次数显著减少(P＜0.05),与模型组相比,针刺组穿越平台次数显著增多(P＜0.05),针刺组穿越平台次数明显多于非穴组(P＜0.05).结论:针刺百会配以足三里穴可以改善双侧颈总动脉结扎诱发的慢性脑低灌注模型大鼠空间学习记忆的获得和储存能力.
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维脑康胶囊对慢性脑低灌注大鼠脑内胆碱能系统及清除自由基能力的影响
目的:观察维脑康胶囊(WNK)对慢性脑低灌注所致大鼠认知障碍的干预作用及机制.方法:结扎大鼠双侧颈总动脉,4周后分为:假手术组,模型组,达纳康组,WNK 8.25,16.5,33.0 mg·kg-1组;同时灌胃给药,给药周期8周,测定大鼠在MORRIS水迷宫中寻找平台的持续时间,同时HPLC-ECD测定脑组织中乙酰胆碱(Ach)含量,比色法测定乙酰胆碱酯酶(AChE)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.结果:与模型组比较,给药4～8周,wNK组大鼠寻找平台时间明显缩短,脑内AChE活性明显降低(P<0.05),ACh含量明显增加(P<0.05～0.01),SOD活性明显增强(P<0.05).结论:WNK对慢性脑低灌注引起的认知障碍的改善作用可能与增强清除自由基能力以及保护胆碱能系统有关.
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雷公藤多甙对慢性脑低灌注大鼠学习记忆能力的影响
目的:观察雷公藤多甙对慢性脑低灌注大鼠学习记忆能力的影响.方法:SD大鼠随机分为正常组、假手术组、药物对照组、模型组、生理盐水组、雷公藤多甙低、高剂量组.采用永久性结扎双侧颈总动脉制成慢性脑低灌注模型,在模型组的基础上,雷公藤多甙低、高剂量组和生理盐水组分别予以雷公藤多甙10mg·kg-1·d-1、30mg·kg-1·d-1和生理盐水连续灌胃.术后1个月、2个月、3个月时采用Morris水迷宫检测各组大鼠的定位航行潜伏期和空间探索次数.结果:定位航行潜伏期和空间探索次数在术后1个月时各组间差异无显著性意义(P＞0.05);在术后2个月和3个月时模型组和生理盐水组呈进行延长和减少,与假手术组比较差异有显著性意义(P＜0.05,P＜0.01).雷公藤多甙低、高剂量组定位航行潜伏期和空间探索次数较模型组和生理盐水组明显缩短和增多(P＜0.05,P＜0.01),与假手术组比较差异无显著性意义(P＞0.05),雷公藤多甙高剂量组和低剂量组比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论:慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力随观察时间的延长而明显降低,雷公藤多甙能改善慢性脑低灌注大鼠学习记忆能力,这种作用在高剂量和低剂量间差异无显著性意义.
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慢性脑低灌注的实验研究进展
慢性脑低灌注与正常老龄化和Alzheimer病(AD)引起的认知功能障碍有关.双侧颈总动脉永久结扎(2VO)大鼠慢性期的神经病理改变与人类老龄化和AD时慢性脑低灌注很相似,被广泛用来研究慢性脑低灌注对认知功能损害和神经变性疾病的影响.对近年来有关2VO模型研究成果与人类相关疾病的关系进行客观评价,有助于更好地理解"慢性脑低灌注是神经变性疾病的原因"这一观点,有助于理解何以2VO模型为神经变性疾病以及神经保护机制研究合适的实验对象.
关键词： 慢性脑低灌注 实验研究 双侧颈总动脉永久结扎 -
慢性脑低灌注诱导血管内皮细胞生长因子的表达
一、材料与方法1.动物分组:选用SD大鼠随机分为假手术组;模型组动物按动静脉分流术后不同时间点分组.
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慢性脑低灌注对海马区缝隙连接超微结构和缝隙连接蛋白的影响
目的 观察慢性脑低灌注导致的认知功能受损的大鼠海马区缝隙连接超微结构的变化以及缝隙连接蛋白亚单位的表达变化.方法 通过永久性双侧颈总动脉结扎模型(2-VO)诱导大鼠慢性脑低灌注状态.实验动物分为对照组、2-VO 3周组、8周组和12周组.Morris水迷宫检测空间学习和记忆能力,透射电镜观察大鼠的海马CAI区缝隙连接,逆转录-多聚酶联反应和Western印迹技术检测海马中缝隙连接蛋白(Cx)Cx36、Cx32和Cx26的表达.结果 在水迷宫训练期的3～5 d,手术组大鼠找到平台的潜伏期均显著长于对照组.空间探索实验中对照组在目标象限游泳时间显著长于手术组.所有手术组动物的缝隙连接超微结构都发生了变化.与对照组相比,Cx36转录和翻译水平在手术后3周、8周和12周组均显著降低,mBNA表达量分别为1.533±0.138、0.466±0.086、0.495±0.104、0.626±0.089,蛋白表达量分别是0.982±0.089、0.351±0.056、0.557±0.072、0.595±0.039(均P<0.01).与对照组相比,Cx32的转录和翻译水平在术后3周、8周和12周组均显著降低,mRNA表达量分别为1.215±0.128、0.237±0.079、0.471±0.083、0.556±0.105,蛋白表达量分别为1.089±0.050、0.401±0.055、0.712±0.074、0.837±0.048(均P<0.05或P<0.01).Cx26的转录水平在手术组无显著性改变,蛋白水平较对照组上调,蛋白表达量分别为0.435±0.047、0.635±0.047、1.396±0.056、0.797±0.051(均P<0.05或P<0.01).结论 这些实验结果提示缝隙连接的变化参与了慢性脑低灌注导致的认知功能损伤.
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基于慢性脑低灌注性脑损伤机制的血管性认知功能损害的防治新策略
随着生活水平提高与生活方式的改变,以及老龄人口的增多,痴呆与认知功能损害的发病率有增高的趋势,给患者、家庭及社会造成严重的影响与负担.阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)与血管性痴呆(vascular dementia,VaD)是老年期认知功能损害的两个主要临床类型.目前在临床上针对AD与VaD的有效防治手段十分有限,需要对认知功能损害的发病机制进行更加深入细致的研究,以期找到更有效的措施.近年来大量研究发现,不论是AD还是VaD患者,其影像学都表现出脑组织低灌注[1-3].实验研究也证实慢性脑低灌注(chronic cerebral hypoperfusion)可以导致认知功能损害[3-4].
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大鼠脑长期慢性低灌注诱导的内质网应激损伤及雌激素干预
目的 观察大鼠长期脑慢性低灌注后海马神经元内质网应激相关因子的蛋白表达,以及持续给予低剂量雌激素的干预作用,旨在为临床治疗血管性痴呆提供理论依据.方法 3月龄SD大鼠行双侧卵巢切除,并随机分成假手术组(sham 3m)、BCCAO 3m组、及17β-雌二醇(E2)组.通过永久性结扎双侧颈总动脉建立大鼠慢性脑低灌注及血管性痴呆模型;采用Western blot技术检测海马CA1区内质网应激蛋白GRP78、ATF4、促凋亡转录因子CHOP和促死亡激酶JNK的磷酸化水平;用免疫荧光染色观察海马CA1区CHOP及JNK磷酸化免疫表达的变化.结果 与sham 3m组相比,BCCAO后3m海马神经元内GRP78的表达无明显差异,但ATF4蛋白表达显著增加;CHOP和p-JNK蛋白水平较sham对照组显著增加;长期给予低剂量E2可显著逆转此变化;免疫荧光染色验证了以上CHOP和p-JNK的Western blot结果.结论 BCCAO可导致海马CA1区神经元长期内质网应激,从而激活促凋亡的CHOP-JNK信号通路;持续低剂量E2替代治疗可有效降低内质网应激损伤.雌激素替代治疗可能成为降低或阻断慢性脑低灌注和血管性痴呆的潜在治疗方法.
关键词： 慢性脑低灌注 内质网应激 c-Jun氨基末端激酶 血管性痴呆 17β-雌二醇 -
紫草素对慢性脑低灌注损伤大鼠认知功能的保护作用
目的 观察紫草素对慢性脑低灌注损伤大鼠所致认知损害的保护作用.方法 雄性SD大鼠经双侧颈动脉结扎建立慢性脑低灌注损伤大鼠模型,将SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血模型组和紫草素(SK)治疗组.以Morris水迷宫检测其空间学习记忆能力;取大鼠海马组织测定其丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、乙酰胆碱酯酶(AChE)的活力、乙酰胆碱转移酶(ChAT)含量.结果 SK高剂量组0.7mg·100g-1·d-1)、低剂量组0.35mg·100g-1·d-1均可明显改善慢性脑低灌注损伤大鼠学习记忆障碍,可增加海马组织中SOD活性、抑制MDA的形成(P<0.01);降低TChE含量、提高ChAT活性(P<0.01).结论 SK可明显改善慢性脑低灌注损伤大鼠模型的学习记忆能力,减轻氧化应激损伤、增强中枢胆碱能系统功能.
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淫羊藿次苷Ⅱ抗慢性脑低灌注诱导的大鼠学习记忆减退及机制研究
目的:观察淫羊藿次苷Ⅱ(IcarisidⅡ,ICSⅡ)对慢性脑低灌注诱导的大鼠学习记忆减退模型的作用,并探索其可能的作用机制.方法:成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为6组:假手术组、假手术给ICS II高剂量组、模型组、ICSⅡ低剂量组、ICSⅡ中剂量组、ICSⅡ高剂量组,每组13只.模型组大鼠经双侧颈总动脉结扎诱导慢性脑低灌注,制备大鼠学习记忆减退模型,假手术组同法操作,但不结扎双侧颈总动脉.手术后第十天开始给药,ICSⅡ低、中、高剂量组每日分别灌胃ICSⅡ4、8、16 mg·kg-1,假手术组和模型组灌胃等体积生理盐水,连续给药28 d.制模后第33 d Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能,连续5 d.水迷宫检测结束后,取材,HE、Nissl染色观察海马神经元的形态及存活情况;ELISA检测海马磷酸二酯酶抑制剂4(phosphodiesteras 4,PDEG4)、PDE 5蛋白水平;Western blot检测海马Aβ1-40、Aβ1-42蛋白水平,APP、BACE1、ADAM10、IDE、TGF-β1、PPAR-α、PPAR-β、PPAR-γ、BDNF、TrkB蛋白表达,Smad2、Akt、CREB磷酸化水平.结果:模型组较假手术组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长,目标象限停留时间百分比和目标象距离百分比明显降低;海马区神经元排列紊乱,细胞变性,尼氏体数量明显减少;海马PDE 4、PDE 5、Aβ1-40、Aβ1-42蛋白水平及APP、BACE1、TGF-β1蛋白表达明显增高,ADAM10、IDE、PPAR-α、PPAR-γ、BDNF、TrkB蛋白表达明显降低,PPAR-β无明显变化,Smad2磷酸化水平明显增加,Akt、CREB磷酸化水平明显减少.然而,ICSⅡ中、高剂量组较模型组大鼠的平均逃避潜伏期明显缩短,目标象限停留时间百分比和目标象距离百分比明显增高;海马神经元排列较整齐,细胞少有变性,尼氏体数量增加;海马PDE 4、PDE 5、Aβ1-40、Aβ1-42蛋白水平及APP、BACE1、TGF-β1蛋白表达明显降低,ADAM10、IDE、PPAR-α、PPAR-γ、BDNF、TrkB蛋白表达明显增高,PPAR-β无明显变化,Smad2磷酸化水平明显减少,Akt、CREB磷酸化水平明显增加.假手术给ICSⅡ高剂量组较假手术组大鼠上述指标没有明显差异.结论:ICSⅡ明显减轻慢性脑低灌注大鼠模型的空间学习记忆减退及海马神经元的形态学损伤,其机制可能与下调APP、BACE1的蛋白表达和上调ADAM10、IDE的蛋白表达从而抑制Aβ产生和促进Aβ代谢,阻遏TGF-β1的过度表达和Smad2磷酸化,激活PPAR-α和PPAR-γ,上调BDNF、TrkB蛋白表达和抑制Akt、CREB磷酸化有关.
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绿茶多酚对血管性认知功能障碍影响的相关机制探讨
目的 研究两种剂量的绿茶多酚对慢性脑低灌注后病理生理变化的影响,以探讨绿茶多酚改善血管性认知功能障碍的相关机制.方法 健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、双侧颈总动脉结扎(2VO)+生理盐水组、2VO+GTP100组[绿茶多酚100 mg/(kg·d)]、2VO+GTP400组[绿茶多酚400 mg/(kg·d)].采用大鼠2VO制备慢性脑低灌注模型,结扎后从第4周开始给药,给药4周后通过Morris水迷宫观察大鼠的空间学习及记忆功能,采用生化方法检测大鼠海马组织的MDA含量、超氧化物歧化酶(SOD)和乙酰胆碱酯酶(AchE)的活性,并采用实时定量PCR方法检测海马组织Nrf2 mRNA的表达.结果 绿茶多酚缩短慢性脑低灌注大鼠的逃逸潜伏期,使大鼠在平台区的停留时间延长.绿茶多酚减少海马组织的MDA含量,增强SOD活性,但对AchE的活性没有显著影响,400 mg/(kg·d)剂量的绿茶多酚增强海马组织Nrf2 mRNA的表达.结论 绿茶多酚改善慢性脑低灌注后的认知功能损害,减轻海马组织的脂质过氧化反应及抗氧化能力,尤其是400 mg/(kg·d)的剂量,但对胆碱能系统没有显著影响.
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慢性脑低灌注致模型大鼠学习记忆受损及海马α-突触核蛋白变化
背景:前期研究发现,慢性脑低灌注模型大鼠认知功能受损与海马区沉默突触增加有关,而 α-突触核蛋白可介导线粒体功能紊乱、认知损伤.目的:探讨慢性脑低灌注模型大鼠学习记忆能力改变及相关海马α-突触核蛋白变化特点.方法:运用永久性双侧颈总动脉结扎术制备慢性脑低灌注大鼠模型(CCH组),并设立不结扎颈总动脉的对照组,在造模后1,3个月,通过旷场及水迷宫实验检测模型大鼠认知功能;行为学实验后取材,运用Western blot法检测海马区线粒体α-突触核蛋白表达,使用免疫荧光法检测海马区α-突触核蛋白变化.结果与结论:CCH组大鼠较对照组有更明显的旷场实验移动距离增加,水迷宫实验潜伏期延长(P<0.05);Western blot法发现CCH组大鼠海马线粒体α-突触核蛋白增多较对照组明显(P<0.05);免疫荧光法检测CCH组大鼠海马区α-突触核蛋白增多明显(P<0.05).结果提示慢性脑低灌注大鼠海马α-突触核蛋白增多,在慢性脑低灌注所致认知受损中可能有重要作用.
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慢性脑低灌注大鼠海马CA1区VEGF和磷酸化tau蛋白的表达及意义
目的 观察慢性脑低灌注大鼠海马CA1区血管内皮生长因子(VEGF)和磷酸化tau蛋白的表达及意义.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组(对照组)、假手术组和模型组.采用永久性结扎双侧颈总动脉建立慢性脑低灌注模型(2VO);实验开始后1、2、3月,应用免疫组织化学染色法检测海马CA1区VEGF和磷酸化tau蛋白的表达.结果 与对照组和假手术组比较,模型组海马CA1区VEGF表达在1、2月时明显增高(P＜0.05),3月时各组间表达差异无显著性(P＞0.05).磷酸化tau蛋白表达在1月时各组间差异无显著性(P＞0.05);2和3月时,模型组表达较对照组和假手术组明显增高(P＜0.05).结论 慢性脑低灌注时VEGF表达增高可能是一种自身保护机制,磷酸化tau蛋白参与了慢性脑低灌注认知功能损伤过程.
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雷公藤多甙对慢性脑低灌注大鼠海马CA1区环氧化酶-2表达的影响
目的 观察雷公藤多甙(TWP)对慢性脑低灌注大鼠海马CA1区环氧化酶-2(COX-2)表达的影响.方法 采用永久性结扎双侧颈总动脉制成大鼠慢性脑低灌注模型,在模型组的基础上,TWP低剂量组和高剂量组及生理盐水组分别予以TWP10 mg·kg-1·d-1和30 mg·kg-1·d-1及生理盐水连续灌胃,造模后1月、2月及3月应用免疫组织化学染色观察大鼠海马CA1区COX-2的表达.结果 1月时,各组间COX-2的表达差异无显著性(P>0.05);2月及3月,与正常对照组比较,模型组和生理盐水组COX-2表达显著增加(P<0.01);与模型组和生理盐水组比较,TWP高剂量组和低剂量组COX-2表达显著降低(P<0.01),但高剂量组和低剂量组间比较差异无显著性(P>0.05),结论 慢性脑低灌注大鼠海马CA1区COX-2表达在造模后2月明显增高,TWP能下调海马CA1区COX-2的表达,这种作用在高剂量和低剂量组间差异无显著性.
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慢性低灌注大鼠血清及脑组织中ICAM-1、NF-κBp65、TNF-α及IL-1β的表达
目的 观察慢性低灌注大鼠脑组织中细胞间粘附因子-1(ICAM-1)、核因子κB p65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)的表达,探讨炎性细胞因子在慢性低灌注致血管性痴呆发病中的可能机制.方法 Wistar大鼠180只,随机分为正常对照组、假手术对照组和模型组,通过永久性结扎大鼠的双侧颈总动脉导致前脑缺血建立慢性低灌注动物模型,在术后1d、3d、7d、14d、1m、2m、3m 、4m的时间点,采用免疫组化、RT-PCR、ELISA的方法,观察大鼠的血清及脑组织中ICAM-1、NF-κBp65、TNF-α、IL-1β的病理演变及表达水平.结果 模型组大鼠学习记忆能力随缺血时间的延长减退越明显.缺血1m后,白质髓鞘脱失、间质疏松呈空泡样改变逐渐明显,以胼胝体及脑室周围白质明显.免疫组化染色证实ICAM-1、NF-κBp65、TNF-d及IL-1β高表达,缺血早期以皮质及海马等部位多见,后期以白质的表达为显著,见于脑室周围白质、胼胝体等区域.NF-(K)Bp65 mRNA在缺血后7d时高；ICAM-1 mRNA在缺血后3d高,随后逐渐下降,在缺血3m时表达再次升高.ELISA显示TNF-α在大鼠脑组织及血清中均出现两次高表达,且脑组织中的表达滞后于血清中的表达,但组织中蛋白的表达量远高于血清中的表达.结论 (1)慢性持续性脑低灌注可导致大鼠出现进行性认知功能障碍.(2)炎性细胞因子ICAM-1、NF-κBp65、TNF-α及IL-1β的慢性持续性高表达可能在慢性缺血致血管性痴呆病理损伤过程中起了一定的作用.
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米诺环素对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力及海马BACE-1和Aβ表达的影响
目的 观察米诺环素对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力及海马BACE-1和Aβ表达的影响,为慢性脑低灌注认知功能障碍的治疗提供依据.方法 72只SD大鼠随机分为假手术组、慢性脑低灌注组、米诺环素治疗组.结扎双侧颈总动脉建立大鼠慢性脑低灌注模型,米诺环素治疗组在慢性脑低灌注模型的基础上连续给予50mg/kg/d的米诺环素灌胃.观察时间点分别为造模后1个月、2个月和3个月.采用Morris水迷宫对大鼠进行定位航行潜伏期和空间探索时间检测后,断头取脑,采用免疫组织化学法检测海马区脑组织BACE-1和Aβ.结果 在造模后1个月、2个月和3个月时间点,模型组定位航行潜伏期较假手术组明显延长(P ＜0.05,P＜0.01),空间探索时间明显减少(P＜0.01)；治疗组潜伏期较模型组明显缩短(P＜0.05,P＜0.01),空间探索时间明显增加(P＜0.05,P＜0.01).模型组BACE-1和Aβ的表达较假手术组明显增加(P＜0.01),治疗组BACE-1和Aβ的表达较模型组显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 米诺环素能改善慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力,其作用机制可能与其抑制慢性脑低灌注大鼠BACE-1的表达,减少Aβ的产生有关.
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芸香苷对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍和脑损伤的神经保护作用
目的:研究芸香苷对慢性脑低灌注导致大鼠认知功能障碍和脑损伤的影响.方法:采用双侧颈总动脉结扎法(bilateral common carotid artery occlusion,BCCAO)建立慢性脑低灌注大鼠模型,随机分为4组(n=10):生理盐水治疗模型组、芸香苷治疗模型组、生理盐水治疗假手术组、芸香苷治疗假手术组;连续腹腔注射芸香苷和生理盐水共12周.采用Moms水迷宫评定大鼠学习和记忆能力.采用分光光度法检测脑组织中枢胆碱能相关指标和氧化应激指标.应用免疫组织化学和ElIUSA方法检测脑组织炎症反应.采用Nissl染色法检测脑组织神经元缺失.结果:芸香苷治疗模型组大鼠的逃脱潜伏期较生理盐水治疗模型组明显减少(P＜0.01).与生理盐水治疗模型组相比,芸香苷治疗后显著提高了BCCAO大鼠脑组织中ACh水平(P＜0.01)和ChAT活性(P＜0.01),并降低了AChE活性(P＜0.01).与生理盐水治疗模型组相比,芸香苷治疗模型组显著增加了大鼠脑组织中SOD活性(P＜0.01)和GPX活性(P＜0.01),降低了MDA水平(P＜0.01)和蛋白质羰基化合物水平(P＜0.01).芸香苷治疗模型组大鼠海马区GFAP-免疫阳性星型胶质细胞(P＜0.01)和Iba1-免疫阳性小胶质细胞(P＜0.01)面积百分比较生理盐水治疗模型组显著减少.芸香苷治疗模型组大鼠海马区正常神经元的数量较生理盐水治疗模型组大鼠显著增加(P＜0.01).结论:芸香苷可改善慢性脑低灌注引起的大鼠认知功能障碍和脑损伤.
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慢性脑低灌注所致认知障碍大鼠海马区自噬机制的初步研究
目的 探索在不同慢性脑低灌注(CCH)时间点时,认知功能障碍大鼠海马区自噬水平的变化.方法 SD大鼠24只,随机分成4组(均n=6):4周假手术组;4周CCH组;8周假手术组;8周CCH组.用改良后两步双侧颈总动脉结扎法构建CCH模型大鼠;采用Morris水迷宫测试各组大鼠空间学习记忆能力;激光散斑血流仪(LSCI)监测各组脑血流(CBF);苏木精-伊红染色观察海马CA1区形态;蛋白印迹法和免疫组化学方法检测海马区自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B、P62表达水平;透射电镜观察海马CA1区自噬泡形成情况.结果 与4周假手术组比较,4周CCH组空间学习能力无明显下降;与8周假手术组比较,8周CCH组逃避潜伏期从第2天开始明显延长(均P＜0.05),目标象限游泳百分比(35.30±9.83 vs 47.57±13.94,P＜0.05)及平台穿越次数(4.29±1.79 vs 6.50±1.73,P＜0.05)明显减少;4周CCH组脑血流降低为4周假手术组的(73.87±5.30)％(P＜0.001),8周CCH组与8周假手术组脑血流差异无显著性;8周CCH组海马CA1区神经元凋亡数量较4周CCH组增多;CCH组Beclin-1、LC3B、P62表达水平均高于相应假手术组(均P＜0.05),尤其8周CCH组的Beclin-1和P62相对表达量较4周CCH组显著增加(P＜0.05);8周CCH组Beclin-1及LC3B阳性细胞数量较4周CCH组显著增加(均P＜0.05);4周及8周CCH组自噬囊泡样物质均增多,以8周CCH组为显著.结论 CCH大鼠随时间延长空间学习记忆能力下降,大脑海马区自噬激活伴随自噬降解功能障碍,且自噬功能改变早于认知功能的明显下降.
