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miR-221表达与K562/A02细胞耐药关系的探讨
目的 观察miR-221 表达与K562/A02 细胞耐药的关系.方法 常规培养K562/A02 细胞株作为对照组,选择通过反义寡核苷酸特异性抑制K562/A02 细胞中miR-221 表达细胞株作为实验组,应用实时荧光定量RT-PCR 方法检测两组细胞中miR-221 表达情况.采用MTT 法比较两组细胞对化疗药物的敏感性.结果 荧光定量RT-PCR 结果显示,实验组细胞中miR-221 表达较对照组明显降低,(P<0.05),两组比较差异倍数均值为-8.43±2.18.阿霉素对实验组细胞的IC50 为0.0375 mg·L-1,阿霉素对对照组细胞的IC50 为4.32 mg·L-1,后者的耐药倍数是实验组的115 倍.结论反义寡核苷酸能够抑制K562/A02 细胞中miR-221 的表达,这种抑制作用能够逆转K562/A02 细胞对阿霉素的耐药性.miR-221 表达与K562/A02 细胞耐药性密切相关.
关键词： miR-221 K562/A02细胞 耐药 阿霉素 -
中药拮新康复方对K562/A02细胞的增殖及膜流动性的影响
目的:利用血清药理学方法研究中药拮新康复方对K562/A02细胞的增殖及膜流动性的影响.方法:分别采用MTT法及荧光分光光度法观察经含拮新康中药血清处理后K562/A02细胞的增殖及膜流动性的改变.结果:含10%拮新康血清+ADM (50 μg/ml)组对K562/A02细胞的抑制率较10%正常大鼠血清+ADM (50 μg/ml)组明显增大(P<0.05).含10%拮新康血清+ADM组逆转K562/A02细胞的耐药倍数与含异博定(5 μg/ml)的阳性对照组的逆转耐药倍数大致相等(P>0.05).含10%拮新康血清能显著降低K562/A02细胞膜流动性(P<0.05).结论:拮新康能抑制K562/A02细胞的增殖,降低细胞膜的流动性.
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拮新康逆转K562/A02细胞多药耐药的机理研究
目的利用血清药理学方法探讨中药拮新康复方逆转K562/A02细胞多药耐药的机理,为临床应用提供理论和实验依据.方法分别采用MTT法、RT-PCR、Western印迹法观察含拮新康大鼠血清处理后K562/A02细胞的增殖及mdr-1/P-gp表达的改变.结果含10%拮新康血清+ADM组对K562/A02细胞的抑制率比10%正常大鼠血清+ADM组明显增加(P<0.05);含10%拮新康血清+ADM组K562/A02细胞的mdr-1及P-gp的表达比ADM组及10%正常大鼠血清+ADM组均降低(P<0.01). 结论拮新康能抑制K562/A02细胞的增殖,通过降低mdr-1/P-gp的表达逆转K562/A02细胞的多药耐药.
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用原子力显微镜表征K562/A02细胞Mdr1基因DNA的实验研究
目的:运用原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)表征K562/A02细胞多药耐药基因Mdr1启动子区域的DNA.材料与方法:PCR扩增K562/A02细胞Mdr1基因启动子区域769bp的DNA,产物纯化后,分别按终浓度为5ng/μl、10 ng/μ1、20 ng/μl固定在用1 ng/μl L型多聚赖氨酸预先处理过的新剥离的云母片制备成观测样本.原子力显微镜观测样本,获取扫描图像后追踪DNA分子轮廓,进行模数分析.结果:用原子力显微镜能够成功地表征K562/A02 mdr1基因启动子区域769bp的DNA片段,获得清晰的二维及三维图像.我们推测原子力显微镜观测该长度的DNA样本的佳浓度为10 ng/ul左右,在此浓度下对其三维图像进行图像处理后分析的DNA分子轮廓结果如下:DNA分子链的长度为(260.13±2.29)nm(n=50),平均宽度为(11.88±0.92)nm,双链的平均高度为1.2 nm.结论:原子力显微镜能够成功地表征K562/A02细胞Mdr1基因启动子区域的DNA,获得清晰的二维及三维图象,并且能够直观地分析DNA轮廓,为进一步在分子层面上探讨研究Mdr1基因遗传信息提供了一种新的简单、直观、可靠的方法.
关键词： 原子力显微镜 K562/A02细胞 多药耐药基因 -
5-溴汉防己甲素与汉防己甲素对K562/A02细胞多药耐药性逆转作用的比较
背景与目的: 5-溴汉防己甲素(5-bromotetrandrine, BrTet)是汉防己甲素(tetrandrine, Tet)的溴化产物,具有逆转P-糖蛋白(P-glyeoprotein, P-gp)介导的肿瘤多药耐药(muhidrug resistance, MDR)的作用.本研究旨在比较BrTet与Tet对人白血病细胞K562/A02多药耐药的逆转作用.方法:采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)法检测不同浓度BrTet对K562细胞和K562/A02细胞的增殖抑制效应;检测阿霉素(adfiamycin, ADM)对K562细胞和K562/A02细胞增殖的抑制作用,以及加用BrTet、Tet时上述抑制作用的变化,并计算半数抑制浓度(IC50)及逆转倍数.Western blot法检测各组细胞P-gp的表达,流式细胞仪检测各组细胞内ADM的蓄积.结果:K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为49.51倍.2.0 μmol/L及更低浓度的BrTet和1.5 μmol/L及更低浓度的Tet对K562细胞和K562/A02细胞抑制率均小于10%,无明显细胞毒性作用.加入1.0 μmol/L的Tet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为12.17倍.加入0.25、0.5和1.0 μmol/L的BrTet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数分别为17.88、9.97和4.24倍.1.0μmol/L的BrTet和let分别使K562/A02细胞内ADM浓度提高了69.0%和51.6%,使P-gp表达分别下调了51.1%和43.73%,其差异具有统计学意义(P<0.05).结论:BrTet及Tet均可逆转K562/A02细胞耐药,且前者较后者逆转作用更强,逆转机制与抑制P-gp的表达、增加细胞内抗肿瘤药物浓度有关.
关键词： 多药耐药 逆转剂 5-溴汉防己甲素 汉防己甲素 K562/A02细胞 -
PLK1基因沉默增强K562/A02细胞对阿霉素敏感性的实验研究
背景与目的:Polo样激酶1(polo-like kinase1,PLK1)是一种重要的细胞周期调节分子,在多种肿瘤细胞中高表达且与肿瘤发病、治疗和预后密切相关.本研究探讨PLK1基因沉默增强K562/A02细胞对阿霉素敏感性的作用.方法:构建针对PLK1 mRNA的siRNA真核质粒,将其导入经阿霉素诱导的K562/A02细胞中,通过RT-PCR和Western blot分析PLK1基因在转染前后的表达差异;MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞的半数抑制浓度;流式细胞术检测细胞内阿霉素积累量和阿霉素诱导后的细胞凋亡.结果:与对照组相比,转染pEGFP-PLK1质粒的K562/A02细胞PLK1 mRNA和蛋白水平分别下降(61.9±2.5)%和(65.3±2.4)%,对阿霉素敏感性的相对逆转率为67.8%.经阿霉素诱导96 h后,空白对照组的细胞凋亡率为11.33%,转染pEGFP-PLK1质粒组凋亡率达到54.39%.结论:PLK1基因沉默能明显增加K562/A02细胞内阿霉素的累积量,增强细胞对阿霉素的敏感性并诱导凋亡,从而逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性.
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叶酸受体在血液肿瘤细胞株的表达及叶酸-聚乙烯亚胺共聚物的制备
目的:研究叶酸受体(folate receptor,FR)在血液肿瘤细胞表达的特点,合成叶酸-聚乙烯亚胺(FA-PEI)聚合物,探讨其作为靶向性基因输送载体的可行性.方法:用实时荧光定量PCR(real time PCR)法检测α、β、γ3种FR在血液肿瘤细胞K562、K562/A02、U266细胞株上的表达;利用叶酸(FA)活性酯在微碱性条件下与聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)的支链氨基反应,合成FA-PEI共聚物;用葡聚糖凝胶柱G-25分离、纯化;用紫外分光光度计波长扫描法及氢核磁共振谱(~1H NMR)法验证交联是否成功.结果:α、β、γ3种FR在K562、K562/A02、U266 3种细胞株上均表达,其中,α-FR的表达占优势,较β-FR和γ-FR表达量高;紫外分光光度计扫描图谱在365 nm处出现叶酸的特征性吸收峰;核磁共振(~1H NMR)示:在2.5～3.2处出现PEI亚甲基质子的特征性化学位移,在6.5～9.0处出现叶酸芳香质子的特征性氢信号.结论:FR在K562、K562/A02、U266 3种细胞株上均有较高表达;FA-PEI偶联成功,为其作为血液肿瘤治疗中1种潜在的靶向性基因输送载体提供了依据.
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复方当归注射液逆转K562/A02细胞多药耐药的研究
目的:研究复方当归注射液对人红白血痛多药耐药(MDR)细胞株K562/A02MDR1、多药耐药相关蛋白(MRP)、拓扑异构酶II(TopoII)、谷光甘肽-S-转移酶-π(GST-π)基因及其相应蛋白表达的影响.方法:采用台盼蓝染色法检测复方当归注射液的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法分别检测复方当归注射液在非细胞毒浓度(IC_(10))作用下对K562/A02细胞上述基因及其表达的影响.结果:复方当归注射液作用后,K562/A02细胞中MDR1基因及P-gP表达降低(P<0.01);TopoⅡ蛋白表达增高(P<0.01),TopoⅡ基因表达无显著变化(P>0.05);MRP、GST-π基因及其蛋白的表达无明显变化(P>0.05).结论:复方当归注射液能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MDR1 mRNA的表达,导致细胞膜上P-gp的表达量减少及在蛋白水平上调K562/A02细胞TopoⅡ的表达有关.
关键词： 复方当归注射液 K562/A02细胞 多药耐药 -
解毒化瘀药对白血病K562/A02耐药细胞mdr1耐药基因、因子κB信号影响的研究
目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02细胞mdr1耐药基因、核因子κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)信号基因表达的影响.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应法检测解毒化瘀药含药血清处理后K562/A02细胞mdrl基因的表达;Western blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达.结果:解毒化瘀药含药血清能够降低K562/A02耐药细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα表达,降低mdr1耐药基因的表达.结论:解毒化瘀药对K562/A02细胞的耐药逆转作用可能是通过阻断NF-κB信号通路,影响mdr1耐药基因的表达起作用的.
关键词： 白血病 多药耐药 K562/A02细胞 核因子κB信号 解毒化瘀药 -
士的宁对K562/A02细胞经典及非经典多药耐药机制作用的实验研究
目的:研究士的宁(Stwchnine)对K562/A02细胞经典及非经典多药耐药机制的逆转作用.方法:采用噻唑蓝( MTT)法检测士的宁的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)分别检测非细胞毒浓度(IC10)的士的宁对K562/A02细胞MDR1基因、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-assoc iated protein,MRP)基因、拓扑异构酶Ⅱ(topoi-sorerasell,Topoll)基因.谷胱甘肽-s转移酶(glutathione s-transfcrose,GST-π)基因及其表达产物的影响.结果:非细胞毒浓度(IC10)的士的宁作用后,K562/A02细胞的MRP基因及其表达产物表达降低;而MDRⅠ、TopoⅡ、GST基因及其蛋白的表达无明显变化.结论:士的宁能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MRP基因及其蛋白的表达有关.
关键词： 士的宁 K562/A02细胞 多药耐药 逆转 -
当归药物血清逆转K562/A02细胞对阿霉素耐药性的初步观察
目的:以白血病多药耐药细胞系K562/A02为对象,观察当归能否逆转其对阿霉素的耐药性.方法:采用MTT法观察当归药和血清对阿霉素细胞抑制率的影响(IC50).结果:经MTT法发现当归药物血清能增加K562/A02对阿霉素的敏感性,使阿霉素半数抑制浓度(IC50)由14.9mg/L,降至9.17mg/L,部分逆转了K562/02对阿霉素耐药性,逆转倍数为1.63倍.而当归对K562/S敏感细胞系无上述作用.结论:当归能部分逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性.
关键词： 当归 K562/A02细胞 逆转 耐药性 阿霉素 -
白血病K562/A02细胞SurVivin基因表达及解毒化瘀药干预作用的研究
目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02细胞Survivin基因(生成素)表达的影响.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化瘀药含药血清处理后K562/A02细胞Survivin基因的表达,并与干扰素作对照.结果:解毒化瘀药含药血清能够降低K562/A02细胞Survivin基因的表达.结论:解毒化瘀药含药血清通过降低K562/A02细胞Survivin基因的表达,逆转白血病细胞耐药.
关键词： 白血病 多药耐药 K562/A02细胞 survivin 解毒化瘀药 -
人红白血病多药耐药细胞裸鼠移植瘤模型建立的初步研究
目的:建立耐药特性稳定的裸鼠移植瘤动物模型,为进行体内肿瘤耐药机制研究和逆转药物的筛选提供实验模型.方法:体外培养白血病细胞系k562/A02及k562细胞,建立裸鼠的皮下肿瘤,K562/A02耐药细胞接种于裸鼠右背侧皮下,而亲本K562细胞接种裸鼠左背侧皮下,接种细胞数分别为1×106、5×106、1 ×107、5×107细胞/只.观察肿瘤成瘤情况及生长特性,并比较体内耐药模型与体外细胞株耐药倍数的变化.同时利用免疫组织化学染色对裸鼠K562/A02移植瘤多药耐药蛋白Pgp进行鉴定.结果:1)K562棵鼠移植瘸的成瘤率为78.13%,K562/A02裸鼠移植瘤的成瘤率为81.25%,大约于第5-10天成瘤,两种肿瘤生长速度无明显差别;2)裸鼠K562/A02移植瘤肿瘤细胞和体外培养原代细胞对阿霉素的IC50分别为169.38ug/ml和181.69ug/ml,而K562移植瘤和体外k562细胞的IC50分别为3.47ug/ml和3.61ug/ml,耐药倍数无明显差异;3)K562/A02裸鼠移植瘤肿瘤细胞Pgp表达稳定.结论:以K562/A02细胞建立的裸鼠移植瘤模型,仍保持近似体外的耐药活性,为耐药机制和逆转研究提供了良好的体内模型.
关键词： K562/A02细胞 裸鼠 移植 动物模型 多药耐药 -
姜黄素对K562/A02细胞上P-gp的表达及其功能的影响
目的: 观察姜黄素(curcumin, Cur)对人红白血病多药耐药(mμLtidrug resistance, MDR)细胞系K562/A02细胞上P-gp蛋白表达及功能的影响.方法: 用MTT比色法测定Cur作用后K562/A02细胞对多种化疗药物敏感性的变化; 用流式细胞仪测定Cur对K562/A02细胞内柔红霉素(DNR)潴留的影响; 用RT-PCR法检测Cur作用后K562/A02细胞中mdr-1 mRNA的表达.结果: Cur能增强多种化疗药物对K562/A02细胞的毒性作用.明显提高K562/A02细胞内DNR的浓度(P<0.01).不同浓度的Cur作用后, K562/A02细胞中mdr-1 mRNA的表达逐渐降低, 其中2.5 mg/L Cur处理组与未处理组相比较差异显著(P<0.01).结论: Cur能部分逆转K562/A02细胞的耐药性, 且呈浓度依赖性.Cur的作用机制主要与下调mdr-1 mRNA的表达, 导致细胞膜P-gp的表达减少有关.
关键词： 姜黄素 多药抗药性 K562/A02细胞 mdr-1 P糖蛋白 -
三氧化二砷对白血病耐药细胞株细胞基质金属蛋白酶2、9活性的作用
目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对白血病耐药细胞株K562/A02细胞表达的基质金属蛋白酶2,9(MMP-2、9)活性的影响.方法:用MTT法检测不同浓度ATO对K562/A02细胞的增殖抑制率;用明胶酶谱法检测ATO对K562/A02细胞MMP-2、9活性的影响.结果:K562/A02细胞的MMP-2、9活性条带在对照组以MMP-2(72KD)宽,MMP-9次之,MMP-2(62KD)窄.MMP-2、9经0.05μMATO处理后在24、48小时与对照组比较无明显差异(P＞0.05),72小时差异才具有显著性(P＜0.05).MMP-2、9的活性经0.4μM和3.2μM的ATO处理后随作用时间延长而抑制作用也逐渐增强,与对照组比较差异均有显著性(P＜0.05).结论:ATO可以有效抑制K562/A02细胞的MMP-2、9的活性,但其作用的强度与剂量及作用时间有关.ATO对MMP-2、9的活性的抑制可能是其抗白血病细胞血管新生的机制之一.
关键词： 三氧化二砷 K562/A02细胞 MMPs 明胶酶谱分析
