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雄芍汤含药血清对人肝星状细胞增殖和活化的影响
目的:观察雄芍汤对肝星状细胞增殖和活化的影响.方法:实验设4组:空白组、空白血清组、扶王化瘀胶囊血清组、雄芍汤血清组.采用MTT比色法测定雄芍汤含药血清对体外培养的人肝星状细胞LX-2增殖的影响；免疫组织化学染色法检测LX-2中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的含量.结果:20％和10％扶正组和雄芍组对LX-2抑制率均高于相应浓度的空白血清组(P＜0.01),5％扶正组、雄芍组和空白血清组差异不显著；雄芍各个浓度组对LX-2抑制率显著高于相应浓度的扶正组(P＜0.05或P＜0.01).雄芍各组中,20％组和10％组对LX-2的抑制率差异不显著,但均显著高于5％组(P＜0.01).雄芍组和扶正组LX-2中α-SMA的含量显著低于空白血清组(P＜0.01),扶正组α-SMA含量显著低于雄芍组(P＜0.05).雄芍血清组和扶正血清组LX-2中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原含量显著低于空白血清组(P＜0.01),雄芍血清组和扶正血清组Ⅰ型胶原差别不显著,扶正血清组Ⅲ型胶原含量显著低于雄芍血清组(P＜0.05).结论:雄芍汤能够抑制HSC的增殖和活化以及HSC中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的分泌.
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雄芍汤调节TGF-β/Smad通路有效部位的研究
目的：研究雄芍汤抗肝纤维化的药效物质基础，筛选其调节TGF-β/Smad通路的有效部位。方法：Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊组（扶正组）、雄芍汤组（雄芍组）、粗多糖组（多糖组）、总苷组、总生物碱组（总碱组），二甲基亚硝胺（DMN）腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。造模成功后，开始灌胃给药，治疗组分别给予扶正化瘀胶囊（0.105 g·mL-1）、雄芍汤粗多糖提取物（35.420 mg·mL-1）、雄芍汤总苷提取物（25.725 mg·mL-1）、雄芍汤总生物碱提取物（0.196 mg·mL-1），正常组与模型组灌服等量生理盐水，每日1次，疗程4周。4周后处死取材，实时荧光定量PCR检测肝组织TGF-β1 mRNA表达， Western blotting检测肝组织Smad3、Smad7蛋白表达。结果：与模型组比较，各治疗组TGF-β1 mRNA、Smad3蛋白表达均显著降低，Smad7蛋白表达均显著升高（P<0.05或P<0.01），总苷组Smad7、总碱组与模型组无显著性差异。结论：粗多糖部位和总苷部位为雄芍汤调节TGF-β/Smad通路的有效部位。
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雄芍汤保肝降酶及抗氧化有效部位的研究
目的：研究雄芍汤抗肝纤维化的药效物质基础，分别筛选其保肝降酶及抗氧化的有效部位。方法：Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、扶正组、雄芍组、多糖组、总碱组和总苷组，采用DMN腹腔注射法制备大鼠肝纤维化模型，造模成功后灌胃给药，治疗组分别给予扶正化瘀胶囊（0.105 g·mL-1）、雄芍汤药液（1.610 g·mL-1）、雄芍汤粗多糖提取物（35.420 mg·mL-1）、雄芍汤总苷提取物（25.725 mg·mL-1）、雄芍汤总生物碱提取物（0.196 mg·mL-1），正常组与模型组灌服等量生理盐水，每日1次，疗程4周。4周后处死取材，全自动生化分析仪检测血清肝功能指标ALT、AST、TIBL和ALB；黄嘌呤氧化酶法检测血清SOD活力；DTNB还原法检测血清GSH-PX活力；TBA法检测血清MDA含量；HE染色及Masson染色观察肝组织病理学改变。结果：与模型组比较，除总碱组无显著性差异外，其余各治疗组ALT、AST及TBIL均显著降低（P<0.05或P<0.01），ALB均显著升高（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较，扶正组、雄芍组和总碱组SOD及GSH-PX均显著升高（P<0.01），MDA均显著降低（P<0.05或P<0.01），多糖组、总苷组无显著性意义。结论：粗多糖部位和总苷部位为雄芍汤保肝降酶的有效部位，总生物碱部位为雄芍汤抗氧化的有效部位。
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雄芍汤对免疫性肝纤维化大鼠MMP-9和TIMP-1的影响
目的:研究雄芍汤对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响.方法:大鼠分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊对照组(0.525 g·kg-1)、雄芍汤预防组(7.9 g·kg-1)和高、低剂量组(15.8,7.9g·kg-1).采用猪血清腹腔注射法复制大鼠肝纤维化模型.酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清MMP-9含量,实时荧光定量PCR技术检测肝组织中TIMP-1 mRNA的表达.结果:雄芍汤7.9 g·kg-1剂量预防组MMP-9含量显著高于模型组(P＜0.01).雄芍汤15.8 g·kg-1剂量组TIMP-1 mRNA表达显著低于模型组(P＜0.01).结论:雄芍汤可以促进免疫性肝纤维化大鼠血清MMP-9生成,抑制大鼠肝组织TIMP-1 mRNA表达.调节MMP与TIMP的协调平衡可能是雄芍汤抗肝纤维化的机制之一.
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HPLC测定雄芍汤总苷提取物中芍药苷的含量
目的:建立雄芍汤总苷提取物中芍药苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法测定总苷提取物中芍药苷的含量.采用Waters XTerra RP-C8色谱柱(150 mm×3.9 mm,粒径5 μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长230 nm.结果:雄芍汤总苷提取物中芍药苷的含量为10.01%,平均回收率为98.08%,RSD 为1.46%.结论:该法灵敏度高,重现性好,可作为雄芍汤总苷提取物的质量控制方法.
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门九章温阳健脾法治疗肝纤维化经验
门九章为山西省名老中医，山西中医学院教授、博士研究生导师。门教授从事中医肝病临床及教学科研工作多年，勤求古训，博采众方，对慢性肝病，尤其是慢性肝纤维化等疑难病的诊治颇有见地。笔者有幸师从门教授，受益颇多，对门教授用自创复方制剂雄芍汤从温阳健脾的角度治疗肝纤维化经验略有体会，现简述如下。
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雄芍汤对DMN诱导肝纤维化大鼠TGF-β1和CTGF的影响
目的 观察雄芍汤对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法 采用DMN诱导制备肝纤维化大鼠模型,正常对照组注射等剂量生理盐水,将wistar大鼠随机分为4组,正常对照组:正常喂养;模型对照组:DMN诱导成模后,自然恢复;扶正治疗组:DMN诱导成模后,灌胃扶正化瘀胶囊(0.525g·kg-1);雄芍治疗组:DMN诱导成模后,灌胃雄芍汤(8.050g·kg-1).结果 雄芍治疗组肝纤维化程度及CTGF、TGF-β1表达均显著低于模型组(P＜0.01).结论 雄芍汤有促进DMN诱导肝纤维化大鼠恢复的作用,其机制可能与抑制其TGF-β1和CT-GF表达有关.
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雄芍汤通过抗氧化机制抗肝纤维化研究
目的:研究雄芍汤抗肝纤维化的作用机制.方法:84只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、扶正化瘀胶囊组、雄芍汤预防组和雄芍汤高、低剂量(生药15.8、7.9 g/kg)组.采用腹腔注射猪血清法制备大鼠肝纤维化模型,观察大鼠肝重与体重的比值及脾重与体重的比值,采用SABC免疫组织化学染色法测大鼠肝组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达,分别采用硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法测定大鼠血清MDA和SOD含量.结果:雄芍汤低剂量(7.9 g/kg)可以使肝纤维化大鼠肿大的脾脏缩小(P＜0.01),雄芍汤高剂量(15.8 g/kg)和低剂量(7.9 g/kg)均可减少肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积,显著降低其血清中MDA的含量和增加SOD的活性.结论:抗氧化为雄芍汤抗肝纤维化的机制之一.
