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不同产地附子炮制品对急性心衰大鼠心功能指标作用的比较研究＊
目的：研究不同产地四川江油附子、四川凉山附子、云南禄劝附子、陕西汉中附子对急性心衰大鼠心功能指标的影响及其作用机制。方法：用戊巴比妥钠建立大鼠急性心衰模型，各组均以给药前各项指标对照，16道生理记录仪同步记录左室内压（LVSP），左室内压大上升速率（+dp/dtmax），左室内压大下降速率（-dp/dtmin），动态观察不同产地附子醇提物（5 g·kg-1）对急性心衰大鼠心功能指标及血浆中精氨酸加压素（AVP）、内皮素-1（ET-1）、心钠素（ANP）、血管紧张素（A域）水平变化及脑钠素（BNP）基因合成与表达的影响。结果：不同产地附子均能升高急性心衰大鼠左室内压，提高左心室+dp/dtmax和-dp/dtmin；并能降低心衰大鼠血浆中AVP水平含量、抑制心室肌内BNP基因的合成和表达，与抑制缩血管因子ET-1、A域水平及ANP基因表达无关。结论：不同产地附子炮制品均能改善大鼠心功能指标，其作用机制与左室功能抑制，心室肌收缩有关；对血管收缩导致的心脏后负荷增加有抑制作用，对前负荷增加无影响。并以道地产区江油附子作用为明显，表明以功效为核心的中药质量评价模式来评价药材品质、控制药材质量的可行性。
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基于“三步”理念的附片(黑顺片)分级的思路与实践
目的:根据中药饮片相关法规质量要求和传统分级经验,结合现代检测技术,提出一种创新性的饮片分级理念,并选择附片(黑顺片)为模型进行了实践.方法:选择不同产地黑顺片样品20批按照“三步”分级理念原则进行分级.第1步以性状、检查、含量测定等药典规定指标,确定统货级;第2步以大小(片长、片宽)和颜色(外部颜色E* ab、内部颜色E* ab)等外观指标,确定一级;第3步以道地性及更高级检查项为指标,确定优级.结果:运用该分级研究思路与方法,20批样品中除去3批不符要求者,划分为3个等级:2批为优级;7批为一级;8批为统货级.结论:提出的中药饮片分级的思路与方法可划分黑顺片等级,为附子其他饮片品种分级提供科学支撑,为中药饮片分级思路、技术方法提供借鉴.
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不同主产地黑顺片的指纹图谱研究
目的:研究四川江油、陕西汉中及云南丽江等附子主产区黑顺片的高效液相色谱指纹图谱,为建立附子的行业质量标准提供依据.方法:利用HPLC方法,色谱条件Alltimate C(18)色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm),柱温35℃,流动相40mmol·L(-1)醋酸按(氨水调pH 10.00)-乙腈梯度洗脱,流速1.0 mL·min(-1),检测波长为240 nm.对不同主产地的22批黑顺片进行研究,采用药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A和聚类分析对指纹图谱进行了分析.结果:22批黑顺片有11个共有峰,江油地区(道地产区)的黑顺片之间的相似度均大于0.900,非道地产区与道地产区的相似度小于0.900.结论:该方法精密度、重复性和稳定性良好,可结合黑顺片含量测定用于全面控制附子炮制品(黑顺片)的质量.
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黑顺片炮制过程中6种酯型生物碱的变化规律研究
研究黑顺片炮制过程中6种酯型生物碱的变化规律及特征图谱,为黑顺片的炮制原理研究奠定基础.采用Phenomenex Gemini C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-40 mmol·L-1醋酸铵(浓氨调pH 10.0)梯度洗脱,流速0.8 mL·min-,检测波长235 nm,进样量10 ～ 20 μL,测定6种酯型生物碱含量的变化以及建立炮制过程的特征图谱.随着炮制过程的进行,双酯型生物碱含量降低,单酯型生物碱变化规律不明显,各炮制过程环节的7种附子“状态”特征图谱差异明显.特征图谱中共标记13个峰,除6种已知单双酯型生物碱外,其余7个峰峰面积变化趋势与双酯型生物碱的变化趋势一致.该方法准确可靠,重复性好,可为揭示黑顺片炮制过程中指标成分的变化规律以及阐明炮制原理提供参考.
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中药附片临床用药的探讨
中药附片系毛茛科乌头属多年生草本植物乌头(Aconitum crmichaeli Debx)块根上的侧生根,按<中国药典>附子项下,规定加工成盐附子.黑顺片及白附片(文中简称附片).乌头、附子与附片不得混用.附片为祖国传统医学中阳虚证以温通血脉,改善脏腑功能,助阳扶正的重要药材,具有上益心阳以通脉,中温脾阳以健运,下壮肾阳益火的功效.
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附子的炮制与传说
附子为毛茛科植物乌头的子根的加工品.主产于四川.6月下旬至8月上旬采挖,除去母根、须根及泥沙,习称“泥附子”.加工炮制为盐附子、黑附子(黑顺片)、白附片、淡附片、炮附片.属温里药.为中药中“回阳救逆第一品”.
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黑顺片血浆指纹图谱与抗心衰作用的谱效关系研究
目的 探讨ig黑顺片(附子炮制品)醇提物后大鼠血浆指纹图谱与药效指标(血压、心率)间的谱效关系,以阐明附子抗心衰作用的药效物质基础.方法 利用UPLC-QTOF/MS建立大鼠ig黑顺片醇提物的血浆指纹图谱,并连续监测心衰大鼠的血压和心率,再用偏小二乘回归(PLSR)法对黑顺片入血成分指纹峰与药效指标进行相关性分析.结果 从黑顺片血浆指纹图谱中筛选出13个入血成分,通过PLSR分析发现次乌头原碱、苯甲酰中乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和3,13-脱氧苯甲酰乌头原碱的血浆药物浓度变化与心率或血压变化呈显著正相关性,且VIP值大于1.结论 次乌头原碱、苯甲酰中乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和3,13-脱氧苯甲酰乌头原碱为黑顺片抗心衰作用的潜在药效物质.
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基于数据挖掘系统和临床随访的黑顺片安全应用研究
目的:探讨黑顺片的安全应用.方法:应用本院网络信息中心数据挖掘系统,对本院2015年10月—2017年10月服用黑顺片患者的信息进行挖掘,以肝功能和肾功能是否异常为指标,结合患者服用黑顺片的时长和剂量,探讨黑顺片的安全性.临床随访2016年2月—2017年2月在国医堂风湿科门诊就诊服用黑顺片的患者,以患者的临床症状为指标,探讨黑顺片的安全性.结果:数据挖掘系统挖掘到的服药后检测肝功能的103例患者,其中1例出现肝功能异常;挖掘到的服药后检测肾功能的104例患者肾功能未见异常;临床随访的42例患者,其中2例出现轻微口麻的症状.结论:黑顺片安全应用应注意其炮制方法、煎煮时间以及患者的个体差异和药物联合应用.
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浅谈黑顺片的合理应用
附子炮制品有盐附子、黑顺片、白附片三种,其中以盐附子的毒性较蒸煮过的黑顺片和白附片大,白附片炮制时使用硫磺熏过.所以,黑顺片在临床使用中频率高,用量大,以汤剂口服为主.加强处方调配前的干预和调配后用药指导,对临床使用中药饮片的安全性、有效性、经济性具有重要的意义.
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黑顺片不同组分对正常小鼠的急性毒性
目的 比较黑顺片不同组分对正常小鼠的急性毒性.方法 制备全组分、水提组分、醇提组分,采用经典急性毒性实验方法测定其近似小致死量(MLD)与半数致死量(LD50).结果 醇提组分组小鼠LD50、95％置信区间分别为278.0、265.5 ～291.0g/(kg·d),分别相当于临床上成人(70 kg)每1 kg体质量日用量的648.7、619.5～679.0倍;全组分组、水提组分组小鼠MLD分别为24.0、160.0 g/(kg·d),分别相当于日用量的56.0、373.3倍.小鼠急性毒性症状主要表现为给药后起初有躁动,随后怠动、呕心、流涎、抽搐、拉稀便、惊厥、休克、俯卧不动,大多发生在8h内.结论 黑顺片饮片不同组分对正常小鼠均具有一定急性毒性,其所含化学成分可能是决定毒性强弱的物质基础.
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基于电子鼻技术的附子(黑顺片)等级及产地的区分研究
目的 建立气味指纹图谱,探索区分黑顺片产地以及等级的有效方法.方法 采用电子鼻技术对20批黑顺片进行检测,获得电子鼻在传感器的响应值,并利用主成分分析(PCA)、判别因子分析(DFA)对响应值进行数据处理.结果 经PCA分析,20批黑顺片样品能明显区分开,DFA分析能区分黑顺片产地以及等级.结论 采用电子鼻技术建立了黑顺片气味识别方法,该方法可以用于产地和等级的区分,为中药的快速鉴别及气味的客观化提供借鉴.
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附子炮制及使用的体会
目的 为临床区别应用黑顺片、白附片、炮附片、淡附片等炮制品提供参考.方法 通过查找相关文献资料,拜访名老中医、老药工等途径,探究4种炮制品的特点.结果 发现4种炮制品的毒性强弱不同,临床功用侧重也有所不同.结论 临床区别应用,才能保证更安全,更有效.
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中药黑顺片与白附子不可混用
本文介绍黑顺片与白附子的外观性状、粉末特征、分光光度测定的鉴别方法.
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UHPLC-Q-TOF/MS分析黑顺片的化学成分
目的:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对黑顺片中各成分进行分析和鉴定.方法:Poroshell 120 EC-C18柱(3.0mm×100mm,2.7μm),以0.1％甲酸水溶液-乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,Dual ESI源,正离子模式下采集数据.结果:初步鉴定出黑顺片中70种化学成分,包括双酯型生物碱4种,单酯型生物碱22种,醇胺型生物碱23种,脂型生物碱4种,其他类型17种.结论:较全面地解析了黑顺片的化学成分,丰富了对黑顺片中化学物质的认识,为黑顺片药效物质研究奠定基础.
关键词： 黑顺片 化学成分 UPLC-Q-TOF/MS -
黑顺片指纹图谱及有效成分含量测定
目的:研究不同产地的黑顺片中的HPLC指纹图谱,并建立测定黑顺片中的次乌头碱、乌头碱、新乌头碱的HPLC分析方法.方法:HPLC法,以乙腈-0.3%二乙胺为流动相进行梯度洗脱.结果:在线性范围内3个组分的标准曲线呈良好的线性关系,平均加样回收率均在98%-103%,精密度和重复性的RSD均小于3%,并建立了黑顺片的HPLC指纹图谱.结论:该分析方法稳定可靠、重复性好,可同时测定黑顺片中的3个生物碱.指纹图谱特征性及专属性强,可结合含量测定来控制黑顺片的质量,为进一步控制其炮制工艺提供依据.
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附子不同炮制品的指纹图谱研究
目的 研究附子3种主要炮制品的高效液相指纹图谱,为建立附子的行业质量标准提供依据.方法 利用高效液相色谱( HPLC)方法,色谱条件为:Alltimate C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；柱温:35℃；流动相40 mmol·L-1醋酸铵(氨水调pH=10.00)-乙腈梯度洗脱；流速1.0ml·min -1；检测波长为240nm.对附子3种炮制品进行指纹图谱研究,采用指纹图谱相似度软件和聚类分析对指纹图谱进行分析.结果 附子3种炮制品之间的指纹图谱差异较大.结论 该方法的精密度、重复性和稳定性良好,可为附子炮制品的质量控制提供依据.
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对《中国药典》黑顺片薄层色谱鉴别方法的商榷
目的 探讨《中国药典》2010版黑顺片的薄层鉴别方法,并进行改进.方法 使用单因素试验方法,考察影响黑顺片生物碱薄层层析的因素.结果 以正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶乙醇(5.6∶3.4∶1∶1)为展开剂,置氨蒸气饱和20min的层析缸中,在室温下展开12 cm,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾溶液,晾干,再喷以碘化碘钾和碘化铋钾的等容混合溶液,检视,斑点清晰,分离度好.结论 改进后的薄层鉴别方法效果良好,为药典的修订提供了一定的参考.
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黑顺片总生物碱对番泻叶致小鼠腹泻及大鼠离体小肠平滑肌运动的影响
目的:考察黑顺片总生物碱对番泻叶致小鼠腹泻及大鼠离体小肠平滑肌运动的影响.方法:采用番泻叶致小鼠腹泻模型,以小肠推进率为考察指标,观察黑顺片总生物碱对小鼠腹泻的影响;采用大鼠离体小肠平滑肌实验,以小肠平滑肌收缩的振幅和张力为考察指标,观察黑顺片总生物碱对小肠平滑肌运动的影响及其作用机理;采用HPLC法,分析黑顺片总生物碱中的化学成分.结果:黑顺片总生物碱能显著减慢腹泻小鼠小肠推进运动(P＜0.05),并能剂量依赖性降低正常大鼠离体小肠平滑肌收缩的振幅和张力,对氯化乙酰胆碱、甲硫酸新斯的明所兴奋的小肠平滑肌运动均具有一定的抑制作用,但对硫酸阿托品所抑制的小肠平滑肌运动无明显影响.经HPLC分析,苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头碱及苯甲酰次乌头碱均是黑顺片总生物碱的主要化学成分.结论:黑顺片总生物碱对腹泻小鼠具有一定的止泻作用,其作用机理可能与抑制M胆碱受体有关.
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黑顺片与大黄联用对次乌头碱在大鼠体内药动学的影响
目的：研究黑顺片与大黄联用对次乌头碱在大鼠体内药动学的影响。方法：取大鼠随机分为单用（黑顺片单煎液）组和联用（黑顺片-大黄合煎液）组，每组18只，ig相应药物，给药剂量均按黑顺片计为10 g（生药）/kg。分别于给药前（0 h）和给药后0.083、0.167、0.333、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、10 h采血0.3 ml，每个时间点取6只，采用高效液相色谱-质谱法，以盐酸巴马汀为内标，测定次乌头碱的血药浓度。利用DAS2.0.1药动学软件计算药动学参数。结果：次乌头碱检测质量浓度的线性范围为0.1024～100 ng/ml（r＝0.9987），定量限为0.1 ng/ml。其在单用组和联用组大鼠体内的药动学参数tmax分别为（0.50±0.086）、（0.75±0.132）h，t1/2分别为（9.967±1.123）、（3.708±0.507）h，AUC0-10 h分别为（26.087±0.672）、（6.516±1.135）μg·h/L，cmax分别为（6.124±2.312）、（1.592±0.051）μg/L；与单用组比较，联用组大鼠体内次乌头碱的t1/2、AUC0-10 h、cmax均减小，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：大黄可以抑制次乌头碱在大鼠体内的吸收，加快其在体内的消除。
关键词： 高效液相色谱-质谱法 次乌头碱 黑顺片 大黄 药动学 -
不同产地附子炮制品抗休克、抗缓慢型心律失常作用的品质评价研究
目的:研究四川江油附子、四川凉山附子、云南禄劝附子、陕西汉中附子对小鼠抗休克及大鼠缓慢型心律失常的作用,探讨附子道地性的中药质量生物学评价方法.方法:按2010版《中国药典》一部附子项下含量测定方法检测附子黑顺片及提取物中总生物碱和酯型生物碱含量;以内毒素致小鼠死亡的保护作用观察不同产地附子水提物(7.5g/kg)的抗休克作用;用维拉帕米注射液造成大鼠心动过缓模型,观察不同产地附子醇提物(5g/kg)对该心律失常动物HR、P-R间期、P波、QRS波等指标变化.结果:不同产地附子水提物(7.5g/kg)均能明显减少内毒素攻击所致小鼠死亡数,其中以四川江油附子作用为明显;四川江油附子醇提物(5g/kg)对维拉帕米注射液所致大鼠HR降低、P-R间期延长、P波幅度降低、QRS波宽大畸形有全面的改善作用,心电图接近正常对照组;云南禄劝附子醇提物(5g/kg)有提高HR、恢复P-R间期、改善QRS波异常的作用;四川凉山附子与陕西汉中附子醇提物(5g/kg)有提高HR、恢复P-R间期的作用,但对P波、QRS波的异常作用不明显.结论:不同产地附子炮制品中,传统附子道地产区四川江油附子黑顺片对维拉帕米注射液诱发的大鼠缓慢型心律失常作用,对内毒素致小鼠死亡的保护作用强,表明以功效为核心的中药质量评价模式来评价药材品质、控制药材质量的可行性.
