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电针对SAMP8小鼠额叶皮层Aβ和胰岛素降解酶表达的影响
观察电针“百会”、“肾俞”、“太溪”穴对快速老化SAMP8小鼠学习记忆、脑组织Aβ蛋白及胰岛素降解酶(IDE)表达的影响.方法 8月龄SAMRI和SAMP8小鼠电针“百会”、“肾俞”、“太溪”穴,连续8周,采用Morris水迷宫实验观测学习记忆功能,免疫组织化学法和Western blot法观察小鼠额叶皮层脑组织内Aβ和IDE的分布和表达.结果 与正常老化SAMR1小鼠相比,模型组SAMP8小鼠额叶皮层脑组织内Aβ蛋白含量水平明显增高[(179.02± 15.11)％],IDE的蛋白含量明显降低[(51.35±14.94)％],行为学检测模型组SAMP8小鼠逃避潜伏期明显延长(P＜0.05);与模型组相比,给予电针和美金刚治疗后SAMP8小鼠额叶皮层脑组织Aβ水平有所下降,分别降低[(119.72±9.21)％]和[(116.84±12.09)％],而IDE蛋白表达有所上升,分别增高[(92.06±8.05)％]和[(83.84±15.28)％],两组小鼠逃避潜伏期缩短(P＜0.05).结论 电针“百会”、“肾俞”、“太溪”穴可抑制SAMP8小鼠脑内Aβ水平,增加IDE的表达,从而提高SAMP8小鼠学习记忆功能.
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SAMP8小鼠脑源性生长因子基因启动子组蛋白H3的乙酰化水平
目的 探讨脑源性生长因子(BDNF)组蛋白H3乙酰化修饰在阿尔茨海默病(AD)发病机制中的作用.方法 选用2月龄和8月龄SAMP8小鼠作为AD动物模型,同月龄SAMR1小鼠作为对照组.应用水迷宫模型探索记忆损伤,同时使用蛋白印迹(Western blot)和染色质免疫共沉淀(CHIP)探索不同月龄小鼠的BDNF蛋白水平及组蛋白H3乙酰化调节变化.结果 水迷宫测试显示,8月龄SAMP8小鼠穿越目标平台的次数[(0.9±0.4)次]显著低于2月龄SAMP8小鼠[(3.7±0.9)次]和8月龄SAMR1小鼠[(3.3±0.6)次],差异有统计学意义(P＜0.05);与2月龄SAMP8小鼠[(23.9±4.0)s]和8月龄SAMR1小鼠[(21.5±2.3)s]相比,8月龄SAMP8小鼠在目标象限停留时间[(11.7±2.8)s]显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示,8月龄SAMP8小鼠海马BDNF蛋白表达水平与2月龄SAMP8小鼠和8月龄SAMR1小鼠相比显著降低(P＜0.05);CHIP实验发现,与2月龄SAMP8小鼠和8月龄SAMR1小鼠相比,8月龄SAMP8小鼠海马BDNF基因外显子Ⅳ和Ⅵ的启动子区域组蛋白H3乙酰化结合水平显著下调(P＜0.05);各组小鼠海马脑区BDNF基因外显子Ⅰ和Ⅲ启动子区域组蛋白H3乙酰化的结合水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AD发病过程中海马脑区BDNF基因Ⅳ和Ⅵ启动子区域组蛋白H3乙酰化修饰水平降低,这一异常的表观遗传学修饰过程可能是导致AD记忆损伤的机制之一.
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齐墩果酸对快速老化小鼠学习记忆能力突触形态及环磷腺苷效应元件结合蛋白表达的影响
目的 观察齐墩果酸对9月龄快速老化动物模型SMAP8小鼠行为学、突触结构完整性以及皮质及海马环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)表达的影响.方法 30只9月龄健康雄性SMAP8小鼠随机分为模型组、齐墩果酸组、安理申组,每组10只,10只同龄同源健康雄性正常小鼠作为正常对照组.齐墩果酸组、安理申组给予相应的药物灌胃治疗,正常组、模型组给予等量生理盐水灌胃.4周后进行Morris水迷宫实验观察行为学变化,电镜观察各组小鼠海马神经元突触形态学变化,采用Western Blot法检测CREB蛋白的表达.结果 (1)Morris水迷宫结果显示:在隐蔽平台实验中,与正常组相比,模型组小鼠潜伏时间[(83.33±4.96)s,(75.13±6.01)s,(71.75±7.77)s,(63.40±8.93)s,(60.97±8.38)s]较长;与模型组相比,齐墩果酸组[(75.97±4.49)s,(64.98±4.93)s,(64.16±6.23)s,(53.47±5.99)s,(47.91±7.64)s]及安理申组[(71.30±7.65)s,(63.32±7.57)s,(59.82±4.69)s,(52.28±5.90)s,(46.22±7.27)s]小鼠潜伏时间明显缩短(P＜0.05).空间探索实验中,与正常组相比,模型组穿越次数减少;与模型组相比,齐墩果酸组及安理申组小鼠穿越次数增多(P＜0.05).(2)模型组与正常组相比突触数量少,突触间隙发生融合现象,突触前高度水肿,突触小泡不均一,线粒体数量极少,不能看出清晰的线粒体轮廓,而经齐墩果酸和安理申干预后突触轮廓清晰,突触前轻度水肿,小泡密集均一,不易见到清晰的线粒体膜和嵴结构.(3) Western Blot结果发现,与正常组比较,模型组不论海马还是皮质中的CREB蛋白表达量均下降,与模型组相比,齐墩果酸组与安理申组CREB蛋白表达量均上调(P＜ 0.05).结论 齐墩果酸具有改善模型小鼠的学习记忆能力的作用,这一作用可能与保护模型小鼠突触形态、提高CREB蛋白表达量有关.
关键词： 齐墩果酸 阿尔茨海默病 SAMP8小鼠 突触电镜 环磷腺苷效应元件结合蛋白 -
年龄相关的MPTP-SAMP8小鼠黑质纹状体系统急性损害
目的 探讨1-甲基4-苯基-1、2、3、6-四氧吡啶(1-Methyl-4-Phenyl-1,2,3,6-etrahydropyridine,MPTP)对不同年龄快速老化小鼠SAMP8(senescence-accelerated mouse prone 8)黑质纹状体系统的急性损害,揭示衰老在帕金森病(Parkinson's disease,PD)发病中的作用.方法 雄性12、24周龄SAMP8小鼠,各随机分为盐水组和MPTP组,于第1次给药后6 h、24 h、3 d和8 d处死小鼠.背部皮下注射MPTP 20 nag·kg-1,每2 h 1次,注射4次;观察各时间点小鼠的自主活动.黑质TH+神经元数量,纹状体TH免疫反应性,纹状体DA含量的变化.结果 12周龄小鼠自主活动减少于第1次给药后48 h恢复近正常水平;24周龄小鼠至7 d时日仍没有恢复近正常水平.12周龄小鼠黑质TH+神经元数目于第1次注射后6 h、24 h、3 d、8 d分别减少7.06%.12..79%,22.49%,42.39%;24周龄小鼠分别减少14.23%,23.85%,36.77%,45.9%.纹状体TH免疫反应性COD值,24周龄小鼠在MPTP后24 h,3d较12周龄小鼠明显降低(JP＜0.05).12周龄小鼠纹状体多巴胺含量各时间点分别降低79.09%,80.33%,83.86%,80.14%;24周龄小鼠分别降低79.70%,86.64%,75.20%,92.32%,但两个周龄之间无统计学差异.结论 证实MPTP可导致SAMP8小鼠黑质纹状体系统损害,老龄鼠黑质纹状体的损伤更严重.
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SAMP8小鼠记忆能力与海马CA1区神经元脱失相关性研究
目的 探讨快速老化小鼠(SAMP8)学习记忆能力改变与海马CA1区神经元脱失间的关系.方法 随机选取6月龄雄性P8和R1小鼠各15只,使用水迷宫实验分别检测两组小鼠的逃避潜伏期和跨越平台次数,尼氏染色观测两组小鼠海马CA1区神经元形态和数量变化.结果 与R1小鼠比较,P8小鼠水迷宫实验逃避潜伏期明显较长,空间探索实验跨越平台次数P8小鼠明显减少,且P8小鼠游泳轨迹呈现无目的性环游,而R1小鼠游泳轨迹多集中于原隐匿平台象限;海马CA1区神经元层次排列紊乱,数量减少;逃避潜伏期与海马CA1区神经元数量呈负相关,跨越平台次数与海马CA1区神经元神经元数量呈正相关.结论 快速老化P8小鼠的学习记忆能力明显下降,且与海马CA1区神经元的结构和数量变化有密切关系,该品系小鼠为阿尔茨海默病的研究提供了较为理想的动物模型.
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隔离应激加速SAMP8小鼠记忆功能减退
目的 采用非转基因的早老小鼠(senescence-accelerated prone mice,SAMPS)模型以观察隔离应激是否影响该模型小鼠脑内Amyloid-β(Aβ)水平及记忆功能.方法 将SAMP8小鼠从断奶开始单独隔离饲养至6个月,空白对照组每3只一笼不给予隔离处理.于实验第3个月和6个月,采用条件恐惧实验、空间逆向学习法测定小鼠的学习记忆能力.行为学检测结束后,检测血浆皮质酮水平、测定海马体积、脑组织Aβ含量、观察Aβ斑块及蛋白羰基水平.结果 3个月时,应激小鼠关联和暗示记忆能力严重受损;6个月时,应激小鼠空间逆向学习能力下降明显.与空白对照组小鼠相比,血浆皮质酮水平在应激小鼠组明显升高,海马体积显著缩小.然而,隔离应激6个月后并不能明显增加脑组织内可溶性AB水平,也无Aβ斑块沉积,但脑组织蛋白羰基水平显著提高.结论 隔离应激可加速SAMP8小鼠记忆功能减退,可能与脑内氧化应激损伤相关.
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MPTP处理的SAMP8小鼠黑质纹状体损伤中血红素加氧酶-1的表达变化
目的:研究1-甲基-4-苯基-1、2、3、6-四氢吡啶(MPTP)诱导6月龄快速老化小鼠(SAMP8)黑质纹状体急性损伤,以及血红素加氧酶-1(HO-1)的表达变化,探讨其与MPTP导致的SAMP8小鼠黑质纹状体系统损害的关系.方法:给6月龄健康雄性SAMP8小鼠背部皮下注射MPTP 20mg/(kg·次),连续注射4次,每次间隔2h；对照组注射等量生理盐水.在注射后6h、24h、3d和8d处死小鼠留取脑组织标本,用免疫组织化学技术检测小鼠黑质、纹状体的酪氨酸羟化酶(TH)和HO-1,以计数黑质多巴胺能神经元数量及其投射纤维的改变,及HO-1阳性细胞的变化；用Western blot方法检测TH和HO-1蛋白表达的变化.结果:MPTP致6月龄SAMP8小鼠各时间点TH阳性神经元分别减少14.23％(P＜0.05),23.85％ (P＜0.01),36.77％ (P ＜0.01),45.9％(P＜O.01),24 h与3d比较有显著性差异(P＜0.05),神经元的丢失以24 h至3d为显著；MPTP组随时间延长纹状体区酪氨酸羟化酶免疫反应阳性染色逐渐变浅淡,不均匀,于注射后24h明显,第8天为浅淡；同时TH蛋白表达具有相同变化.但仅在注射后3d小鼠纹状体区见到大量HO-1阳性细胞,同时HO-1蛋白表达增高,具有统计学意义,其余各时间点及对照组未见HO-1阳性细胞.中脑区HO-1阳性细胞及蛋白表达在各时间点均未见显著变化.结论:MPTP导致6月龄SAMP8小鼠黑质纹状体系统急性损伤,产生多巴胺能神经元数量减少及蛋白表达降低；其黑质纹状体HO-1的高表达是一过性短暂的,它在PD中的作用是有限的.
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MPP~+对原代培养SAMP8小鼠中脑神经元的毒性作用
目的:建立MPP~+(1-甲基-4-苯基吡啶离子)干预SAMP8(快速老化小鼠P8)小鼠中脑神经元的体外细胞模型.方法:SAMP8新生1 d小鼠的中脑神经元原代混合培养6 d,加入100μmol/L浓度的MPP~+,再培养6、9、12 h和24 h后分别对各时间点的中脑原代培养神经元免疫荧光染色或提取蛋白测定TH水平.结果:MPP~+导致原代培养的SAMP8小鼠中脑神经元形态学改变.正常对照组神经元形态完整,免疫反应性强,胞体大呈椭圆形,突起多而长且粗壮;MPP~+组神经元随时间逐渐出现形态变化,MPP~+后6 h即可见突起不完整断续,9 h突起数目减少,缩短;12 h神经元胞体明显变小,24 h突起多消失,神经元胞体小且免疫反应性弱.MPP~+导致原代培养的SAMP8小鼠中脑神经元数量在MPP~+后9 h开始有显著减少,同时TH蛋白的表达也开始有显著减少,24 h低.结论:MPP~+对原代培养的SAMP8小鼠中脑神经元具有毒性作用.MPP~+导致SAMP8小鼠中脑神经元原代混合培养体系的神经元数量下降,同时TH蛋白表达降低,提示MPP~+导致其中脑DA能神经元损伤死亡.
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快速老化小鼠海马中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的年龄相关性变化
目的:观察细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,CD147)在快速老化小鼠(senescence-accelerated-prone mouse 8,SAMP8)海马中随年龄变化的趋势.方法:应用免疫组织化学和Western blot的方法,观察CD147在SAMP8小鼠海马中的年龄相关性变化.结果:免疫组织化学结果显示SAMP8小鼠海马区CD147免疫反应呈阳性,且随年龄增加无明显的细胞分布变化.Western blot分析数据表明随年龄增加CD147蛋白水平逐渐下降；相对于3月龄小鼠,12月龄小鼠的CD147蛋白水平下降了约53％(P＜0.05).结论:随年龄的增加,海马区CD147蛋白水平逐渐下降,推测其与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)相关.
关键词： 细胞外基质金属蛋白酶诱导因子 海马 SAMP8小鼠 -
针刺对阿尔茨海默氏病SAMP8小鼠学习记忆能力及海马区胰岛素受体mRNA表达的影响
目的 观察针刺足三里、百会穴对阿尔茨海默氏病(AD)转基因快速老化SAMP8小鼠的学习记忆能力及海马区胰岛素受体(InsR) mRNA表达的影响,并探讨其作用机制.方法 用Morris水迷宫进行筛选,将符合AD模型标准的SAMP8小鼠随机分为模型组、针刺治疗组(简称为针刺组),每组10只,并随机选取同源、同龄的10只SAMR1小鼠作为正常对照组.针刺组针刺小鼠足三里、百会穴,留针30 min,每日1次,10d为1个疗程,疗程之间间隔2d,连续治疗3个疗程.通过水迷宫隐蔽平台试验、空间探索试验判断小鼠的学习记忆能力,并通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测左侧海马区InsR mRNA的相对表达量.结果 隐蔽平台试验中,模型组平均逃避潜伏期(PLL)较正常对照组显著延长,有效区停留时间显著缩短(P＜0.05);针刺组PLL较模型组显著缩短,有效区停留时间显著延长(P＜0.05);平台停留次数3组间比较差异无统计意义(P＞0.05).空间探索试验中,模型组原平台象限百分比较正常对照组显著降低(P＜0.01),跨越次数显著增高(P＜0.05);针刺组原平台象限百分比较模型组显著升高(P＜0.01),跨越次数显著减少(P＜0.05).模型组左侧海马区InsR mRNA相对表达量较正常对照组显著降低(P＜0.05),针刺组较模型组显著升高(P＜0.05).结论 针刺足三里、百会穴可通过上调海马区InsR mRNA的表达,从而提高ADSAMP8小鼠的学习记忆能力.
