首页 > 文献资料
-
当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢致PC12细胞氧化损伤的影响
目的：观察当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢（H2 O2）致 pC12细胞氧化损伤的影响。方法 H2 O2诱导 pC12细胞构建氧化应激损伤模型；不同剂量当归红芪超滤膜提取物（0.38、0.75、1.5 g/ L）干预；MTT 法测定细胞存活率；生化法检测细胞内 MDA、LDH、SOD 含量；双氯荧光黄乙酸乙酯（DCF - DA）染色，检测细胞内 ROS 含量。结果200μmol/ L H2 O2作用6 h 成功诱导 pC12细胞氧化应激损伤；与空白对照组比较，H2 O2模型组细胞存活率下降，细胞内 LDH、MDA、ROS 含量增多， SOD 含量下降（p ＜0.05）；与 H2 O2模型组相比，当归红芪超滤膜提取物各剂量组细胞存活率明显上升，细胞内 LDH、MDA、ROS 含量降低，SOD 含量增加（p ＜0.05）。结论当归红芪超滤膜提取物可修复 H2 O2诱导的 pC12细胞氧化损伤。
关键词： 当归红芪超滤膜提取物 过氧化氢 pC12 细胞 -
大鼠GDNF基因的克隆表达及对PC12工程细胞的影响
克隆与表达大鼠胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)并观察其对PC12工程细胞的影响.从新生4天的SD大鼠海马组织中提取总RNA,通过 RT-PCR方法,扩增出GDNF cDNA.构建表达质粒pET-GDNF,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导GDNF表达并在Ni2+-NTA柱上用一步复性法纯化和复性.把PCDNA3.0-GFRα1和pcDNA3.0-RET质粒双转染入PC12细胞,G418筛选稳定克隆,构建PC12工程细胞.用GDNF刺激工程细胞,3天后观察其存活和分化.大鼠GDNF cDNA 的克隆与表达获得成功,纯化和复性的重组GDNF蛋白可显著增强PC12-GFRα1-RET工程细胞的存活和分化.初步明确GDNF诱导PC12工程细胞存活和分化是通过RET-依赖途径.
-
注射用脑蛋白水解物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞增殖与MPP+诱导的氧化损伤的影响
目的探究注射用脑蛋白水解物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞增殖与1-甲基-4-苯基吡啶（MPP+）诱导的细胞氧化损伤的影响，为建立评价脑蛋白水解物活力检测方法提供科学依据。
方法通过 MPP+损伤 PC12细胞后，采用 MTT 法测定不同厂家、不同浓度的注射用脑蛋白水解物对 PC12细胞的修复作用，通过测定其吸光度与正常细胞吸光度的比值来计算样品对 PC12细胞损伤的修复率，以此作为注射用脑蛋白水解物活力考察的指标。同时还对注射用脑蛋白水解物对于 MPP+损伤的不同亚型的 PC12细胞作用进行了研究。
结果注射用脑蛋白水解物作用时间为48 h、浓度为60μg/ml 时对 MPP+诱导的 PC12细胞的氧化损伤具有较好保护作用，并且对低分化型的 PC12细胞具有更明显的保护作用。
结论注射用脑蛋白水解物可促进低分化型 PC12细胞的增殖，并减轻 MPP+的损伤作用。研究建立的活力测定方法已经被国家标准采纳。 -
前列腺凋亡反应基因4反义寡核苷酸抑制谷氨酸诱导的PC12细胞内钙离子浓度上调及其抗凋亡意义
目的研究前列腺凋亡反应基因4(par-4)反义寡核苷酸拮抗谷氨酸对PC12细胞内游离钙离子浓度的上调作用及其抗凋亡意义.方法脂质体介导转染par-4反义寡核苷酸.谷氨酸诱导PC12细胞凋亡.Hoechest 33258/碘化丙啶荧光染色观察细胞凋亡形态,流式细胞术分析凋亡百分率.Fura-2/AM荧光染色结合激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定钙依赖性蛋白酶Calpain10的mRNA水平.Western印迹测定par-4蛋白表达量.结果与正常对照组(25.6±4.1)相比,谷氨酸诱导PC12细胞中par-4蛋白表达上调(90.0±3.2,P<0.01),par-4反义寡核苷酸拮抗其上调(52.3±5.0,P<0.01);谷氨酸诱导凋亡组凋亡百分率为53%, par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡(31%,P<0.01);谷氨酸诱导PC12细胞内游离钙离子浓度上调,par-4反义寡核苷酸拮抗其上调(荧光强度比值分别为167.9±32.4、228.8±36.8,P<0.01);谷氨酸诱导PC12细胞内钙依赖性蛋白酶Calpain10 mRNA水平上调(46.3±3.7),par-4反义寡核苷酸抑制其上调(34.8±2.1,P<0.01).结论 par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞内游离钙离子浓度上调和抑制Calpain10基因转录有关.
-
葛根多糖对PC12细胞增殖的损伤作用
目的:探讨葛根多糖 (total polysaccharide of Pueraria, TPP) 对嗜铬细胞瘤细胞 PC 12 增殖的影响.方法: 用细胞培养的方法检测 TPP 单独或与 H2O2 一起对 PC 12 细胞活力的影响; MTT 法检测细胞活力,Griess 试剂测定细胞外液中的亚硝酸盐含量; 次黄嘌呤黄嘌呤氧化酶化学发光体系测定细胞外液中的 SOD 活性. 结果: 0.01～1.0 mg*ml-1 的多糖明显地抑制细胞生长,并可增强 H2O2 导致的细胞损伤(P<0.05);细胞外液中的 SOD 活性随多糖的浓度增加而降低;其亚硝酸盐产物增多,并呈浓度依赖性.结论: TPP 对嗜铬细胞瘤细胞 PC 12 的增殖具有损伤作用.
-
V6421-APP 过度表达的 PC12 细胞凋亡的信号传导机制
目的:研究过度表达人的 V6421-APP 蛋白的 PC12 细胞在氧化应激状态下引起细胞凋亡的信号转导途径.方法:在建立稳定表达人的 APP,V6421-APP 蛋白的细胞株的基础上,使用 MTT、Hoechst33342 观察在无血清培养 24 小时后,100μmol/L H2O2 作用 24 小时对PC12 细胞的影响.使用 Western 检测引起细胞凋亡的过程中可能的相关基因 p-jnk,fasl 的表达.结果:通过 MTT 和 Hoechst33342 分别证实无血清培养 24 小时后氧化应激损伤,V642-IAPP 转染组细胞损伤数目和凋亡数目明显增加.Western 印迹法显示存凋亡过程中,过度表达 V6421-APP 组 p-JNK 和 FasL 的蛋白表达明显增多.结论:在氧化应激引起与阿尔茨海默病相关的过度表达 V642-IAPP 细胞的凋亡过程中,p-TNK,FasL 都参与细胞凋亡的过程.
-
黄酮类化合物对 Aβ25-35介导的 PC12细胞损伤的保护及机制研究
目的：探讨黄酮类化合物（CJY）对β-淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）介导的 PC12细胞（大鼠嗜铬细胞瘤细胞）氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法：对 PC12细胞采用不同浓度的 Aβ25-35进行损伤，MTT 法测定PC12细胞的损伤率和存活率；采用 SOD 试剂盒检测 Aβ25-35对 PC12细胞的氧化损伤；使用 DCFH-DA 结合活细胞高内涵成像系统检测细胞内 ROS 的水平。结果：经终浓度为10μM的 Aβ25-35对 PC12细胞损伤后，可降低细胞的存活率，而浓度为5μM，10μM，50μM的 CJY 呈浓度依赖性地提高 PC12细胞的存活率，并明显改善细胞形态。Aβ25-35可触发细胞内的氧化应激反应，造成细胞氧化损伤，提高细胞内 ROS 水平，降低细胞内 SOD 的活性；CJY 则降低细胞内 ROS 水平，升高 SOD 的活性，具有明显的抗氧化损伤作用。结论：通过离体实验证明黄酮类化合物CJY 对 Aβ25-35诱导的 PC12细胞损伤有保护作用，为进一步研究黄酮类化合物在阿尔茨海默病中的应用提供实验依据。
关键词： 黄酮类化合物 β-淀粉样蛋白25-35 pC12 细胞 -
黑逍遥散含药血清对 Aβ25～35诱导阿尔茨海默病细胞模型的影响
目的：观察黑逍遥散含药血清对由 Aβ25～35片段毒性诱导的 PC12细胞阿尔茨海默病（ AD）模型凋亡的影响。方法利用细胞计数、MTT 及流式细胞术测定观察黑逍遥散含药血清处理由 Aβ片段诱导的 PC12细胞活力、形态学及细胞凋亡的改变。结果黑逍遥散含药血清能增加 Aβ25～35导致的升高 PC12细胞的活力，降低 LDH 释放，流式细胞术分析显示，黑逍遥散含药血清能降低增加细胞凋亡率。结论黑逍遥散含药血清能升高 PC12细胞的活力，降低 LDH 释放，对 Aβ25～35诱导的 PC12细胞凋亡有明显的保护作用。
-
氧葡萄糖血清剥夺/再恢复诱导 PC12细胞凋亡模型的建立
目的：明确氧葡萄糖血清剥夺/再恢复（oxygen-glucose-serum deprivation/restoration，OGSD/R）诱导 PC12细胞凋亡的变化趋势，建立稳定的细胞凋亡模型，为体外模拟脊髓缺血再灌注损伤导致神经细胞凋亡的研究提供实验工具。方法常规培养高分化 PC12细胞，取对数生长期的细胞进行实验。以低糖不含血清的 DMEM 培养基于三气培养瓶（体积分数：95%N2+5%CO2，O2<1%）培养12 h，然后换成高糖含血清DMEM 培养基和普通培养箱继续培养，诱导PC12细胞凋亡。于复氧复糖复血清后0~6 h进行DAPI染色、CCK-8细胞活性检测及流式细胞术分析并检测相关凋亡蛋白caspase-3、caspase-12水平，比较不同时间点细胞凋亡的差异。结果DAPI染色显示，OGSD 12 h/R 1 h细胞凋亡重，凋亡细胞核固缩，形成较多颗粒光斑，凋亡严重的细胞破裂形成碎片，核解体。CCK-8活性检测表明在OGSD 12 h/R 1 h细胞活力低。流式细胞术分析表明 OGSD 12 h/R 1 h 细胞凋亡率达到大。凋亡蛋白检测结果提示在正常的PC12细胞中 caspase-3、caspase-12含量极低，而在给予 OGSD 刺激后细胞内 caspase-3、caspase-12的表达增强，复氧复糖复血清后2种凋亡蛋白表达进一步增强，caspase-12于 OGSD 12 h/R 1 h 时表达强，caspase-3于 OGSD 12 h/R 2 h 表达强。结论OGSD 可以诱导 PC12细胞凋亡，且在复氧复糖复血清后细胞凋亡进一步加重；OGSD/R 诱导 PC12细胞凋亡具有时间依赖性，能有效模拟神经细胞缺血再灌注损伤病理生理过程，为脊髓缺血再灌注损伤的进一步研究提供实验模型。
-
芡实正丁醇部位分离组分对 H2 O2诱导的 PC12细胞的神经保护作用及其机制研究
目的：研究芡实正丁醇部位的聚酰胺柱分离组分对 H2 O2损伤的 PC12细胞的神经保护作用，探讨其对阿尔茨海默病潜在的预防治疗作用及其可能的机理。方法体外培养 PC12细胞株，加入浓度为200μmol／L 的 H2 O2损伤细胞8 h，建立氧化损伤模型，将芡实不同浓度的乙醇提取物分别作用于细胞后，采用 MTT 法检测各组分对细胞存活率的影响，用试剂盒测定细胞液中 SOD 活力、MDA 含量，RT-PCR 检测细胞内 APP、BACE-1、GSK-3β的 mRNA 表达水平。结果与模型组相比，芡实正丁醇部位50％、70％、95％乙醇的洗脱物均能显著改善 H2 O2损伤的 PC12细胞的存活率（P ＜0．05），70％、95％乙醇的洗脱物均能显著增加细胞液中 SOD 酶的活力，减少 MDA 的释放（P ＜0．05），下调 GSK-3βmRNA 表达量（P ＜0．01）。结论芡实正丁醇聚酰胺柱70％、95％的乙醇洗脱物对氧化应激损伤的 PC12细胞具有显著的保护作用，其作用机制可能与增加 SOD 酶活力、减少 MDA 释放、抑制 Aβ累积相关的 GSK-3β基因表达有关。
-
HIF-1α、ROCK-2、FoxM1在醋酸铅诱导PC12细胞损伤中的表达变化
目的探讨低氧诱导因子-1α( hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)、Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶-2( Rho associated coiled coil forming protein kinase-2, ROCK-2)、叉头蛋白 M1(forkhead box protein M1, FoxM1)在醋酸铅[Pb(Ac)2]诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤中的表达和意义。方法将PC12细胞暴露于不同浓度的Pb(Ac)2(100、200、400μmol·L-1)24 h以诱导细胞发生损伤。采用噻唑蓝比色法检测细胞的存活率,倒置显微镜观察细胞形态的变化,乳酸脱氢酶漏出率检测法测定细胞损伤程度,采用试剂盒检测丙二醛( malondialdehvde, MDA)和超氧化物歧化酶( superoxide dismutase, SOD)水平, Hoechst 33342单荧光染色法观察细胞凋亡,免疫印迹法检测细胞HIF-1α、ROCK-2、FoxM1、淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia, Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)的表达。结果 MTT实验显示Pb( Ac)2对PC12细胞具有明显抑制作用并呈剂量依赖性,与对照组相比, Pb ( Ac )2可增加细胞内 LDH 漏出率,升高MDA含量,降低SOD含量,诱导细胞发生凋亡。此外,Pb( Ac)2上调细胞HIF-1α、ROCK-2的表达,下调FoxM1的表达,提高Bax/Bcl-2的表达比例。结论 Pb(Ac)2诱导PC12细胞发生凋亡可能与HIF-1α、ROCK-2、FoxM1的表达以及自由基损伤有关。
-
灵芝酯溶性提取物诱导PC12细胞分化的研究
目的研究灵芝酯溶性提取物对PC12 细胞分化的影响.方法采用PC12 细胞分散培养法,观察PC12 细胞在灵芝的酯溶性提取物及其灵芝酯溶性有效部位B2的诱导下突起生长阳性细胞的百分比,用神经元特异性标记物微管相关蛋白-2(MAP-2)单克隆抗体进行免疫荧光标记,荧光显微镜下观察MAP-2 阳性的细胞.结果灵芝酯溶性提取物的浓度为125～500 mg·L-1,均可诱导PC12 细胞突起生长,其中以500 mg·L-1的浓度作用明显.灵芝提取物与低浓度的NGF 合用时对PC12 细胞的分化有明显的促进作用.荧光显微镜下MAP-2 阳性细胞增多.结论灵芝酯溶性提取物能诱导PC12 向神经细胞分化.
-
黄芪甲苷对缺氧缺糖／复氧复糖PC12细胞TLR4通路的影响
TLR4受体已经被证明在脑缺血中发挥着关键的作用［1］。黄芪甲苷可明显减轻大鼠脑缺血／再灌注损伤中的脑梗死面积，抑制神经细胞凋亡［2］。黄芪甲苷是否通过TLR4／MyD88通路来抑制细胞凋亡？本文以PC12细胞为实验对象，研究黄芪甲苷对缺氧缺糖／复氧复糖PC12细胞TLR4通路的影响，探讨黄芪甲苷抑制细胞凋亡的作用机制。
-
如意珍宝丸新制剂及各提取部位对 PC12细胞化学损伤模型的保护作用研究
目的：研究如意珍宝丸新制剂及各提取部位对谷氨酸导致 PC12细胞（大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤）损伤的修复作用并筛选有效活性制剂或部位。方法培养 PC12细胞，MTT 法测定细胞活性。加入30 mmol·L －1谷氨酸造成 PC12细胞损伤，用酶标仪测定细胞存活率，测定细胞培养上清液中一氧化氮的含量、乳酸脱氢酶漏出量及超氧化物歧化酶活性，观察如意珍宝丸新制剂及提取样品对谷氨酸导致的 PC12细胞损伤的修复作用。结果与结论如意珍宝丸的一些新剂型及某些提取部位可以修复由谷氨酸造成的细胞损伤，提高细胞存活率，降低一氧化氨含量，减少乳酸脱氢酶漏出率，增加超氧化物歧化酶的活性。
-
NGF诱导PC12细胞分化机制的研究进展
神经生长因子诱导PC12细胞分化是一个复杂的信号调节过程,其中有诸多因子和信号传导途径参与,NGF可通过不同信号途径诱导PC12细胞分化.本文在Ras/MAPK途径、PI-3K信号途径及细胞周期等方面的研究作一综述.
-
Nogo-A 受体在早期神经元细胞分化过程中的表达
目的：探讨在早期神经元细胞生长发育过程中 Nogo-A 受体（NG-R）的表达变化。方法：体外培养 PC12细胞，实验组加入50 ng/mL 细胞生长因子（NGF）进行诱导分化1、3、5、7 d，对照组中不加入 NGF 诱导分化。于不同时间点镜下观察细胞轴突发育及细胞分化情况，免疫荧光法观察 NG-R 蛋白在 PC12细胞中的表达与定位，RT-PCR 法检测 NG-R mRNA 在 PC12细胞中的表达变化，western blot 法检测 NG-R 蛋白在 PC12细胞中的表达变化。结果：随着诱导分化时间的增加，实验组 PC12细胞轴突发育及细胞分化增加；对照组 PC12细胞未检测出 NG-R mRNA 及蛋白表达；实验组随着 NGF 诱导刺激时间延长，PC12细胞内 NG-R mRNA 及蛋白表达量逐步增加，组间差异有统计学意义，且均高于对照组（P<0.05或0.01），但实验组诱导1 d PC12细胞内 NG-R 蛋白表达量与对照组差异无统计意义（P＞0.05）。结论：在神经元发育早期 NG-R 的表达随着轴突生长逐渐升高。
-
类叶升麻苷对谷氨酸损伤 PC12细胞的保护作用
目的：研究类叶升麻苷对谷氨酸诱导的 PC12细胞损伤的影响。方法将 PC12细胞分为正常对照组、模型对照组、阳性药组和类叶升麻苷给药组。除正常对照组外,其余各组均以1.5 mmol·L-1谷氨酸处理24 h,再分别以10μmol·L-1维生素 E 和15.625,31.25,62.5,125,250μmol·L-1类叶升麻苷作用。通过倒置显微镜观察细胞形态,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,酶标法试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸(TBA)法试剂盒测定丙二醛(MDA)含量,WST[2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯基)-2氢-四唑盐,二钠盐]法试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测胞内活性氧(ROS)含量。结果与模型对照组比较,除类叶升麻苷Ⅰ组(15.625μmol·L-1 AS)以外,其余各类叶升麻苷给药组均可明显改善 PC12细胞形态,提高细胞存活率和 SOD 酶活性(P<0.01),抑制 LDH 活性及 MDA 和 ROS 生成(P<0.01或 P<0.01)。结论类叶升麻苷对谷氨酸诱导的 PC12细胞损伤具有保护作用。
-
鹿衔草对β淀粉样蛋白诱导损伤的PC12细胞的保护作用?
目的：探讨鹿衔草不同溶剂提取物及分离的单体化合物(熊果酸)对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导损伤的PC12细胞的保护作用。方法建立 Aβ25-35所致 PC12细胞损伤模型，设置空白对照组、二甲亚砜(DMSO)对照组、模型对照组和各给药组；给药组包括鹿衔草石油醚提取物部位(PE)组、乙酸乙酯提取物部位(AE)组、正丁醇提取物部位(BE)组、50％乙醇提取物部位(HEE)组、水提取物部位(WE)组和熊果酸组。采用噻唑蓝(MTT)法检测佳给药浓度，酶联免疫检测仪在490 nm 波长处测定培养液中活细胞的数量。结果提取物浓度为5.0 mg?mL－1时，PE 组、AE 组、BE 组、WE 组、HEE 组细胞存活率分别为89.3％，77.2％，79.2％，75.1％，74.0％；500μg?L－1熊果酸组细胞存活率88.9％。与模型对照组比较，各给药组细胞存活率均显著升高(均 P<0.01)，且 PE 和熊果酸保护作用更明显。结论鹿衔草的不同溶剂提取物和分离的单体化合物熊果酸对 Aβ25-35诱导损伤的 PC12细胞均具有不同程度的保护作用。
-
吗啡对 PC12细胞增殖的抑制作用及机制初探
目的：探讨吗啡对大鼠嗜铬细胞瘤 PC12细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法 PC12细胞体外培养，将吗啡加入细胞培养液中使吗啡浓度分别稀释至10、20、30μmol/L ，然后分别与 PC12细胞一同孵育，四甲基偶氮噻唑蓝法（MTT）观察吗啡对细胞增殖的抑制作用；免疫印迹法检测PC12细胞p38MAPK 表达及磷酸化水平。结果不同浓度吗啡对PC12细胞增殖有明显的抑制作用，抑制率为17．66％～31．05％；并且吗啡可以诱导PC12细胞p38MAPK 磷酸化水平升高，而p38MAPK 通路阻断剂SB203580可以抑制吗啡诱导 PC12细胞 p38MAPK 磷酸化水平升高，减轻吗啡对 PC12细胞增殖的抑制。结论吗啡可以明显抑制 PC12细胞的增殖，升高p38MAPK 的磷酸化水平可能是其重要分子机制之一。
-
川芎嗪对过氧化氢引起 PC12细胞损伤的保护作用
目的：分析川芎嗪预处理大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株 PC12细胞后过氧化氢诱导的细胞凋亡情况，探讨川芎嗪抑制脑缺血损伤中氧自由基损伤的分子机制。方法采用川芎嗪预处理 PC12细胞后，制备过氧化氢细胞损伤模型，采用 CCK‐8法活细胞检测、Hoechst‐33342染色、流式细胞术、反转录聚合酶链反应分析细胞凋亡发生机制。结果应用0．0、0．1、1．0、10．0 mmol／L 浓度川芎嗪预处理后，细胞活力分别为（51．2±4．64）％、（58．5±7．46）％、（73．8±2．94）％、（81．0±6．06）％（F＝146．9，P＜0．05），细胞未见大量凋亡小体形成，Bax／Bcl‐2比值降低（F＝2．14，P＜0．05），线粒体膜电位提高，Caspase 3、9活性降低（Caspase 3：F＝1．59，P ＜0．05；Caspase 9：F＝4．98，P＜0．05）。结论川芎嗪预处理后可降低过氧化氢诱导的 PC12细胞凋亡，抑制氧自由基损伤。
