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基于iTRAQ技术的中医实热"上火"血清蛋白质组学特征分析
目的:筛选实热"上火"血清差异表达蛋白,为实热"上火"机制的深入研究提供科学依据.方法:采用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)对血清蛋白质进行检测,结合生物信息学分析(GO、STRING)筛选实热"上火"与正常非"上火"人群差异显著的蛋白质.结果:与正常对照组比较,实热上火组血清筛选出49个差异蛋白质,其中上调的22个,下调的27个.载脂蛋白C3(Apo C3)、乳酸脱氢酶(LDH)和维生素K依赖蛋白S(PROS1)等显著上调,而载脂蛋白A4(Apo A4)、超氧化物歧化酶3(SOD3)和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)等显著下调.结论:观察组脂质代谢、糖酵解异常与氧化应激、炎性反应的发生密切相关,且凝血功能下降,易造成出血,筛选的差异蛋白可为实热"上火"的生物学基础研究提供依据.
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乙肝后肝硬化证候特点的蛋白质组学研究
目的:探讨血清蛋白质组学对肝硬化中医病机研究的价值.方法:结合纳米金属螯合磁珠纯化技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,检测103例肝硬化患者、29例健康人群及29例慢乙肝患者的血清标本,探讨肝硬化的病程进展过程中及典型肝硬化中医证候群血清蛋白质组的差异.结果:建立慢乙肝和肝硬化各中医证候血清蛋白质诊断模型.结论:血清蛋白质组学有助于中医证候的研究.
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肝硬化正虚血瘀证候与血清蛋白质组学所见
目的 从肝硬化患者证候和血清蛋白质组学两方面,探讨肝硬化中医正虚血瘀的病机.方法 采集到肝硬化男性患者44例和健康男性志愿者17名的四诊信息和血清标本.对肝硬化患者的四诊信息进行辨证和证候频率分析,归纳为不同证候群.运用Cu螯合磁珠与基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术检测患者和健康者血清蛋白质组,运用Bruker公司统计学分析软件分析,找出不同证候患者之间及与健康对照组之间有显著差异的蛋白质峰,运用QC算法建立肝硬化不同证候的分类预测模型.结果 肝硬化证候出现频率超过30%、由高到低依次排列的是:乏力、精神萎靡、蜘蛛痣、肝掌、纳差、齿龈鼻肌衄、脘腹胀满、动则气促、面晦黯、胁肋刺痛、腰膝疲软、胁肋隐痛、五心烦热或低热、潮热盗汗.脾气虚弱证候组17例,其中属Child-Pugh A级的例数占64.7%;肝肾阴虚证候组12例,其中属Child-Pugh C级的例数占66.7%;血瘀证候组15例,在child-Pugh A级和C级中所占比例相似,均>40%.在Child-Pugh A级出现的蜘蛛痣、肝掌、动则气促、五心烦热或低热、潮热盗汗、腹壁脉络曲张、下肢水肿等证候,在Child-Pugh C级出现的频率增加,差异有统计学意义(均P＜0.05).选择峰值明显质荷比为4 642.81、4 963.91、5 247.8、5 805.95、6 305.27和12 447.7的蛋白质峰构成脾气虚弱证候诊断模型中的特征蛋白质峰,前5个峰在Child-Pugh A级和C级的蛋白质峰谱中都能找到;9 290.3蛋白质峰为肝肾阴虚证候诊断模型的特征蛋白质峰,该峰与7 768.29蛋白质峰是肝肾阴虚证候组与其他2证候组比较均下调的蛋白质峰,均包括在乙肝肝硬化的诊断模型中,但未出现在Child-Pugh A级的蛋白质峰谱中,而在Child-Pugh B级和C级的蛋白质峰谱中表达逐级下调.另外17个在肝肾阴虚证候患者表达有明显变化的蛋白质峰中,8个在Child-Pugh A级中均有表达;在Child-Pugh A级和C级中均表达的4 964.55和5 806.83蛋白质峰构成乙肝肝硬化血瘀证候诊断模型中的特征性蛋白质峰.建立的乙肝肝硬化脾气虚弱证候诊断模型,敏感度为100%,特异度为82.35%;建立的肝肾阴虚证候诊断模型,敏感度为100%,特异度为94.12%;建立的血瘀证候诊断模型,敏感度为100%,特异度为100%.结论 正虚血瘀是肝硬化全程均有的基本病机,"正虚"包括了脾气虚弱和肝肾阴虚.肝肾阴虚虽在肝硬化失代偿期明显,但在代偿期已有表现,需尽早顾护.
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固相配体文库降低血清高低丰度蛋白浓度差异
目的 探讨固相配体文库技术富集血清低丰度蛋白及提高质谱鉴定低丰度蛋白敏感性.方法 3组混合血清标本采用蛋白富集珠(ProteoMiner)处理,一维或二维电泳图谱分析比较处理前后血清图谱中的差异条带或蛋白质斑点,并于处理后血清的二维电泳图谱中显著增加的蛋白质斑点进行高效液相色谱法电喷雾串联质谱鉴定.结果 一维及二维电泳图谱表明,固相配体文库技术能显示更多的蛋白条带或蛋白质斑点;显著富集的蛋白质点进行质谱鉴定结果表明,固相配体文库技术能够提高血清低丰度蛋白质谱鉴定,如簇集蛋白、玻连蛋白、C4b结合蛋白α链、补体C4-A等.结论 固相配体文库技术能有效地富集血清中低丰度蛋白,同时稀释高丰度蛋白,表明该技术有助于血清中低丰度蛋白的分离、富集与鉴定.
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原发免疫性血小板减少症血清标志物的筛选
目的:利用弱阳离子磁珠联合MALDI-TOF-MS分析ITP患者和健康对照血清蛋白质表达谱,鉴定差异表达蛋白,建立ITP的诊断模型,探索ITP的发病机制.方法:选择ITP患者40例和健康对照40例,应用美国布鲁克.道尔顿(Bruker Daltonics)公司生产的WCX-MB(Weak cation exchange nanometer magnetic beads)捕获血清蛋白质组分,用AutoflexⅡ基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪MALDI-TOF-MS检测各样品的蛋白质质谱,再利用Bruker Daltonics公司的CliprotoolsTM2.2软件进行数据分析,筛选差异蛋白质分子并建立ITP诊断模型,并选取20例ITP血清和20例健康对照血清对产生的模型进行分类验证和交叉验证.结果:40例ITP建模血清标本与40例健康对照建模血清标本经Clinprot系统检测蛋白质质谱,应用CliprotoolsTM2.2软件进行数据分析,在分子量700-10 000 Da范围内,可检测到55个差异蛋白质表达峰,其中有统计学意义的差异蛋白质峰19个(P＜0.05),在ITP组表达上调的蛋白质有5个,下调的蛋白质有14个.软件自动将区分疾病组与对照组能力强的10个质谱峰建成了一个基于SNN(Supervised Neural Network Algorithm)算法的诊断模型,建模组判断ITP的预期敏感性为100％,预期特异性为100％.应用建立的SNN诊断模型对验证组进行分类验证,20例ITP病例及20例健康对照均被全部正确识别;交叉验证对ITP患者和健康对照检出的正确率为100％.结论:应用具有高通量及良好重复性ClinProt系统建立的ITP SNN模型由10个显著差异蛋白质峰构成,能有效区分ITP患者与正常对照,而且敏感性和特异性较高.
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蛋白质指纹谱在胰腺癌诊断中的意义
尽管胰腺癌影像学诊断水平明显提高,但是早期患者往往缺乏临床症状而没有进行影像学检查.目前常用的肿瘤标志物CA19-9在胰腺癌的筛查中敏感性和特异性不高,尤其对于早期胰腺癌诊断价值不大[1-2],所以胰腺癌的早期诊断仍然是个难题.随着分子牛物学技术迅猛发展,蛋白质组学应运而生.本文应用SELDI-TOF-MS技术探测胰腺癌患者血清蛋白质组学的变化,以期发现特异的蛋白类肿瘤标志物,从而实现胰腺癌的早期诊断.
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对怀有Turner综合征的胎儿进行羊水的蛋白质组学分析
根据2008年第7卷第5期1862-1866页蛋白质组学研究杂志报道,血清蛋白质组学在怀有Turner综合症和正常胎儿的孕妇间存在差异.
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新疆哈萨克族食管癌患者放化疗前后血清蛋白质组学特征差异分析
目的 通过对新疆哈萨克族健康人群和食管癌患者放化疗前后血清蛋白质组特征的研究,探讨放化疗对食管癌患者相关蛋白质表达谱的影响.方法 收集、制备哈萨克族食管癌治疗前后患者组(10例)和健康对照组(10例)血清样品,采用蛋白质二维液相色谱系统(Proteome LabTM PF-2D)对治疗前后组和正常人群组三组血清样品进行分离与数据比较分析.结果 哈萨克族食管癌患者放化疗前后相比存在21个显著差异的表达蛋白位点峰值;而患者治疗前和健康对照组对比有10个存在显著差异的表达蛋白位点峰值,患者治疗后和健康对照组有4个存在显著差异的表达蛋白位点峰值.结论 血清中可以筛选到对新疆哈萨克族食管癌患者诊断及判断放化疗有意义的特异性蛋白表达位点.
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血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白去除方法的建立
目的 建立血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白的去除方法并评价其去除效果.方法 应用Sigma公司2006年新推出的血清白蛋白和IgG去除试剂盒(ProteoPrep Immunoaffinity Albumin and IgG Depletion Kit)去除血清中高丰度的白蛋白和IgG等,再用双向凝胶电泳(2-DE)分析去除的效果.结果 本实验建立的血清中高丰度蛋白的去除方法,约95%的白蛋白和IgG能够被去除,2-DE图谱中蛋白质点更加清楚,部分低丰度蛋白得以显现.结论 成功建立血清中高丰度蛋白的去除方法.可为今后的血清蛋白质组学研究奠定基础.
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基于“同病异治”的大肠癌不同证候血清蛋白组学探索研究
目的 利用双向凝胶电泳和质谱分析对辅助治疗期大肠癌脾气虚证、胃阴虚证、平和证型患者血清蛋白质组进行分析,探索同一疾病不同证候的血清蛋白质表达差异.方法 选取辅助治疗期大肠癌脾气虚证、胃阴虚证患者各8例,以大肠癌平和证型患者6例作为对照组,采集清晨空腹血清标本,通过亲和层析法去除血清高丰度白蛋白和免疫球蛋白,运用CyDye荧光染料进行标记,并设立内标,上样于同一胶中进行双向凝胶电泳分离,电泳结束后分别用488 nm、530 nm、633 nm波长激光激发扫描获得不同样品的蛋白质组图谱,所得蛋白质图谱应用DeCyder6.5软件进行分析,选择蛋白质表达水平上升或下降120％以上的差异蛋白质进行质谱鉴定及生物信息学分析.结果 在大肠癌辅助治疗期不同证候中筛选出13个表达有显著差异的蛋白质,其中7个蛋白质被确定:血红素前体、α-1-B-糖蛋白、色氨酸羟化酶-1、结合珠蛋白在胃阴虚证、脾气虚证患者血清中表达均上调,而富含亮氨酸的α-2-糖蛋白-1表达均下调.胰蛋白酶抑制剂HI30、转甲状腺素蛋白在胃阴虚证患者中表达上调,但在脾气虚证患者中表达无显著差异.结论 大肠癌辅助治疗期脾气虚证、胃阴虚证形成存在不同的分子基础,可以作为辨证论治的潜在客观指标,胃阴虚证的产生可能与胰蛋白酶抑制剂HI30、转甲状腺素蛋白上调有关.
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血清蛋白质组学在重症肌无力诊断中的应用
目的 应用血清蛋白质图谱分析,寻找有意义蛋白峰,建立重症肌无力(MG)的诊断模型,用于MG的诊断.方法 利用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)技术对56份MG患者术前血液标本和16份正常对照组血液标本进行蛋白质图谱分析,找寻出有差异蛋白峰.建立MG诊断模型并初步验证.结果 56例MG患者和16名正常对照蛋白质图谱分析中,能找到38个特异性差异蛋白峰.系统优化出M4168.94、M1122.57两个蛋白峰构建的MG诊断模型可将56例MG患者和16名正常对照进行正确分组.结论 用血清蛋白质图谱可筛选出与MG发病相关的蛋白峰,初步建立MG诊断模型,有望成为诊断MG的一种新方法.
关键词： 表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术 血清蛋白质组学 重症肌无力 诊断 -
血清蛋白质组学技术及其在肿瘤标志物研究中的应用进展
血清蛋白质组学从新的角度研究肿瘤,寻找肿瘤标志蛋白,进而阐明其表达水平的变化及其与肿瘤发生、发展的相互关系,对肿瘤的早期诊断、治疗、药物研发等方面具有重要意义.本文就血清蛋白质组学的相关技术、策略及其在筛选血清肿瘤标志物方面的应用进展作一综述.
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肺癌血清蛋白质双向电泳图谱的建立
目的：建立肺癌血清蛋白质双向凝胶电泳（2-DE）图谱。方法：对肺癌血清蛋白质2-DE的IPG胶条选择、上样量、聚焦参数、样品缓冲液、沉淀处理等各方面进行调整、优化。结果：获得了稳定的肺癌血清蛋白质2-DE图谱。结论：已建立的肺癌血清蛋白质2-DE图谱，可以为进一步开展肺癌的血清蛋白质组学研究奠定基础。
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英夫利西单抗治疗对类风湿关节炎患者血清蛋白质组学的影响
尽管英夫利西单抗(infliximab)治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的临床疗效得到了广泛肯定,但是这种干预治疗的生物学效应仍有待于进一步论证.
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冠心病不同阶段血清的差异蛋白质组学研究
目的 通过比较冠心病4个不同阶段的血清蛋白质表达的差异,寻找与冠心病的发生发展相关的特异蛋白质.方法 采用蛋白质组学双向凝胶电泳联合质谱的技术方法对正常健康人、冠心病中高危人群、冠心病急性期患者及冠心病稳定期患者蛋白质组学比较研究.结果 通过鉴定得到了7种差异蛋白质:视黄醇结合蛋白4( RBP4)、载脂蛋白E(ApoE)、载脂蛋白A1( ApoA1)、CD5抗原样蛋白(CD5L)、结合珠蛋白(Hp)、血清白蛋白(ALB)、簇连蛋白(CLU).结论 这些与冠心病相关的差异蛋白质主要通过参与脂质代谢、炎症反应以及氧化损伤等过程而导致动脉粥样硬化的发生.
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中医证本质研究中的血清蛋白质组学应用探讨
中医的证候问存在不同证候标志物,表现为差异蛋白质的表达.血清蛋白质组学是系统生物学的重要组成部分.通过对以往运用血清蛋白质组学技术研究中医证候的本质的探讨,提出了自己的看法,认为在中医证候动物模型、中医临床证候、方证结合的应用方面进行血清蛋白质组学研究,可以找到证候标志物,探明中医的证本质.
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基于iTRAQ技术的血清蛋白质组学研究进展
随着分子生物学的快速发展,血清蛋白质组学成为研究的热点.相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术没有出现之前大部分研究主要在双向凝胶电泳技术的支持下完成,但是该技术具有费时、费力、重复性差等缺点,不能完全避免和消除,人们就注入了新的研究方法—iTRAQ技术,该技术具有灵敏度高、分辨率高、重复性好、易自动化和检测范围广等诸多优点,使该技术在医学和生物制药领域受到高度关注和广泛应用.该文就近几年基于iTRAQ技术的血清蛋白质组学研究进展、标志物的探索等相关问题进行综述.
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血清蛋白质组学在肝细胞癌的应用进展
蛋白质组学是以基因组编码全部蛋白质为研究对象,采用高分辨率的蛋白质分离手段,结合高通量的蛋白质鉴定技术,全面研究在特定情况下蛋白质表达谱[1],从细胞水平和整体水平研究蛋白质的组成及其变化规律,深入认识机体的各种生理和病理过程,因而具有发掘和寻找潜在肿瘤标志物的能力,倍受肿瘤研究者的高度重视.
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应用血清蛋白组学技术筛选鼻咽癌肿瘤抗原
目的: 应用血清蛋白组学技术优化肿瘤抗原筛选方法,筛选鼻咽癌肿瘤抗原.方法: 以免疫印迹技术筛选出含有特异性抗体的鼻咽癌患者血清,运用免疫沉淀技术对血清与鼻咽癌细胞株(CNE1)的裂解物进行处理以富集肿瘤抗原,正常人血清做对照,经凝胶电泳找出差异条带,通过质谱分析、数据库搜索和信息学分析鉴定差异蛋白.结果: 应用此方法找出存在于鼻咽癌样本中的明显差异条带1条,重复性较好,经鉴定该条带为膜结合IgM.结论: 采用上述方法筛选肿瘤抗原行之有效,可能成为肿瘤抗原筛选的一种简单、便捷、灵敏的有效方法,得到鼻咽癌候选抗原膜结合IgM.
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液相色谱技术在血清蛋白质组学研究中的应用
蛋白质组(proteome)是指细胞在指定的时间和空间下表达的所有蛋白质、蛋白质亚型以及翻译后修饰的蛋白质形式.通过转录、翻译、修饰(水解、糖基化、磷酸化等),基因可以产生不同的蛋白质,而且在健康和疾病状态下细胞或组织表达的蛋白质不同[1].
