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高磷对大鼠胸主动脉血管环中骨形成蛋白2表达的影响
目的:探讨骨形成蛋白-2(Bone morphogenetic protein 2,BMP-2)在高磷诱导的大鼠胸主动脉血管环钙化中的作用.方法:选取8～10周龄健康雄性SD大鼠,体外培养大鼠胸主动脉血管环,血管环按随机数字表法随机分为2组:正常对照组和高磷组.血管环培养7d和14 d后,采用von Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测大鼠胸主动脉血管环钙化情况;免疫组织化学方法检测血管环BMP-2的表达.体外采用组织块贴壁法培养原代大鼠胸主动脉平滑肌细胞,利用10 mmol/Lβ-甘油磷酸制备血管平滑肌细胞钙化模型,细胞随机分为2组:正常对照组、高磷组(10 mmol/L β-甘油磷酸).采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况,RT-PCR和Western blot方法检测细胞培养7d和14 d的BMP-2 mRNA及蛋白表达,并观察短时间内不同时间点BMP-2蛋白表达情况.结果:体外血管环培养7d、14d后,与正常对照组相比,高磷组钙含量明显增加(P＜0.05);与7d高磷组血管环钙含量相比,14 d高磷组血管环钙含量明显增加(P＜0.05).免疫组织化学结果显示,与正常对照组相比,高磷组BMP-2表达增加(P＜0.05);与7d高磷组相比,14 d高磷组血管环钙含量明显增加(P＜0.05).细胞培养7d、14 d后,与正常对照组相比,高磷组钙盐沉积及钙含量明显增高(P＜0.05);RT-PCR和Western Blot显示,与正常对照组相比,高磷组BMP-2 mRNA及蛋白表达增加.进一步动态观察BMP-2蛋白的表达变化,结果显示正常对照组及高磷组BMP-2蛋白表达随时间延长呈增强趋势(P＜0.05).结论:BMP-2可能参与了高磷诱导的血管钙化的发生发展.
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骨形成蛋白-2转染兔骨髓基质细胞修复软骨缺损的研究
目的 观察骨形成蛋白-2(BMP-2)基因转染兔骨髓基质细胞(MSCs)复合藻酸钙修复兔膝关节软骨缺损的效果.方法 取4周龄的新西兰兔骨髓细胞,体外培养得到MSCs.选用24只成年新西兰兔,在两侧股骨髁非负重区造成全层软骨缺损模型,A组(实验组)植入BMP-2转染的MSCs+藻酸钙,B组(对照组Ⅰ)植入空质粒转染的MSCs+藻酸钙,C组(对照组Ⅱ)植入不含MSCs的藻酸钙,D组(对照组Ⅲ)旷置.12周后,观察软骨缺损修复情况及组织学评价.结果 实验组修复组织基本光滑,有大量Ⅱ型胶原蛋白表达,3个对照组修复组织Ⅱ型胶原蛋白表达量少,仍有明显缺损.实验组和3个对照组组织学评分差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BMP-2转染兔MSCs修复软骨缺损效果优于其他对照组.
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脱钙冻干骨修复种植周骨缺损的扫描电镜观察
目的比较脱钙冻干骨(DFDB)、脱钙冻干骨复合人重组骨形成蛋白-2(rhBMP-2)、脱钙冻干骨联合钛膜的骨修复能力.方法3条犬股骨种植体周形成4mm×3 mm×3 mm的骨缺损,分别植入上述3种不同材料.术后4、8、12周分期处死动物,取含种植体的骨段进行扫描电镜观察,观察新骨形成情况及其与种植体之间的缝隙.结果DFDB可单独用于修复种植体周骨缺损,但成骨作用较慢;DFDB+rhBMP-2和DFDB+钛膜能较早诱导新骨形成,加速骨整合过程.结论DFDB是一种较理想的骨修复材料,复合rhBMP-2或与钛膜联用时效果更佳.
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慢病毒介导骨形成蛋白-2基因转染骨髓间质干细胞修复大鼠颅骨骨缺损
目的 观察携带人骨形成蛋白-2(hBMP-2)基因的慢病毒(lentivirus)转染骨髓间质干细胞构建的组织工程化骨对大鼠颅骨极量骨缺损的修复效果. 方法 300～350g雄性 SD大鼠取股骨骨髓体外培养扩增骨髓间质干细胞(BMSC),以lentivirus载体介导hBMP-2基因转染BMSC,诱导其向成骨细胞分化.将细胞接种于经纤维连接蛋白修饰的β-磷酸三钙(β-TCP),共同培养10d.30只大鼠均造成颅骨极量缺损(直径8mm)模型,分为Lev- BMP2转染细胞+β-TCP组(A组:n=10);BMSC +β-TCP组(B组:n=10);β-TCP组(C组:n=10)于第4、8、12、20周从影像学及组织学角度观察比较颅骨缺损修复情况.结果 无论X线摄片及组织切片均表明,A组颅骨骨缺损修复优于同期的B组和C组.在各时间点A组和B组在植骨区均有新骨形成,而C组仅见边缘区成骨.术后20周新生骨小梁相对体积(TBV,%)A组为(60.83±11.49),B组为(40.37±9.02),C组为(18.37±6.02),差异有统计学意义(P<0.01). 结论 Lev- BMP2转染BMSC复合β-TCP构建的组织工程化骨对大鼠颅骨极量骨缺损有较好的修复效果.
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颌骨牙骨质化纤维瘤中BMP-2mRNA的表达
目的:检测颌骨牙骨质化纤维瘤(cementifying fibroma,CF)中BMP-2mRNA的表达,分析其与牙骨质小体及牙骨质样物质形成的关系.方法:采用原位杂交方法检测10例CF标本中BMP-2mRNA的表达.结果:10例CF标本中9例有BMP-2mRNA表达,阳性信号位于牙骨质小体及牙骨质样物质周围环绕的短梭形细胞和瘤样增生的纤维组织中的多数纤维母细胞和部分纤维细胞胞浆中.结论:BMP-2mRNA在CF中的表达可能与牙骨质小体及牙骨质样物质的形成有关.
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骨形成蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子对人骨髓基质细胞的生物学作用
目的:探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)单独或联合作用对人骨髓基质细胞(HBMSC)增殖和分化的影响.方法:利用四唑盐比色法(MTT)、碱性磷酸酶(ALP)测定法观察不同浓度的rhBMP-2和b-FGF单独或联合作用时HBMSC的增殖和分化情况.结果:rhBMP-2对HBMSC的增殖和ALP表达均有促进作用;b-FGF促进HBMSC增殖,但抑制ALP表达;rhBMP-2和b-FGF联合作用时HBMSC 的增殖和ALP活性较单独作用有显著提高.结论:rhBMP-2和b-FGF联合应用时对HBMSC的增殖和向成骨细胞分化具有协同作用.
关键词： 人骨髓基质细胞 骨形成蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子 增殖 分化 -
重组大鼠骨形成蛋白-2成熟肽编码区cDNA克隆
目的:克隆大鼠骨形成蛋白-2成熟肽编码区基因. 方法:由大鼠成骨肉瘤细胞株(UMR106)中提取细胞总RNA,利用逆转录PCR方法, 从mRNA中扩增出大鼠骨形成蛋白-2成熟肽编码区基因cDNA片段;将获得基因片段插入pGEM-T 质粒中,转化到大肠杆菌JM109后挑选阳性克隆,利用限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定重组质粒.结果:通过质粒DNA酶切分析及序列测定,我们获得的基因片段为大鼠BMP-2成熟区cDNA序列.结论:克隆获得大鼠骨形成蛋白-2成熟肽编码区基因,为表达骨形成蛋白-2提供了前提条件.
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结缔组织生长因子增强BMP-2诱导的牙周膜细胞成骨分化
目的:探究结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)对骨形成蛋白-2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)诱导PDLCs(periodontal ligament cells,PDLCs)成骨分化能力的影响.方法:采用组织块法分离培养人PDLCs,分3组进行培养:空白组(普通培养基)、对照组(含100 ng/mL BMP-2)和实验组(含100 ng/mL BMP-2+50 ng/mL CTGF).CCK-8实验检测第1、3、5 d细胞增殖;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性实验检测第5 d ALP活性;qRT-PCR检测第5 d PDLCs中成骨相关基因Runx2、ALP、BSP的mRNA表达量.结果:第3 d实验组细胞数量高于空白组和对照组,第5 d实验组细胞数量显著高于空白组和对照组(P<0.05);实验组ALP活性显著高于对照组和空白组,qRT-PCR结果显示3个成骨相关基因表达实验组均高于空白组和对照组(P<0.05).结论:CTGF可提高BMP-2诱导PDLCs成骨能力.
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BMP-2、bFGF和Dex联合应用对犬牙牙周膜细胞成骨分化能力的影响
目的:观察骨形成蛋白(BMP-2)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和地塞米松(Dex)联合应用对犬牙周膜细胞(PDLCs)成骨分化能力的影响.方法:将第4代犬PDLCs分为5组:bFGF+Dex、BMP-2+bFGF、BMP-2+Dex、BMP-2+bFGF+Dex、对照组.检测各组碱性磷酸酶(ALP)活性,并应用RT-PCR检测各组PDLCs成骨关键基因OPN、COL-1的表达.结果:第7、14 d,各组ALP表达均较空白组显著增强(P＜0.05),其中200 μg/L BMP-2+10 μg/LbFGF+1O-8 mol/L Dex诱导组犬PDLCs的ALP活性显著高于其他各组(P＜0.05).RT-PCR显示,200 μg/L BMP-2+10 μg/L bFGF+10-8 mol/L Dex诱导组OPN、COL-1基因表达为显著.结论:3种诱导因子两两结合均能增强犬PDLCs成骨能力,但在佳浓度下3种因子联合应用诱导能力强(P＜0.05).
关键词： 牙周膜细胞 骨形成蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子 地塞米松 -
Smad8在成牙本质细胞系MDPC-23内BMP-2信号转导中的作用
目的:观察成牙本质细胞系MDPC-23内Smad8蛋白的表达,以及Smad8蛋白在骨形成蛋白-2(bonemorphogenetic protein-2,BMP-2)信号转导中的作用.方法:免疫组化法观察MDPC-23细胞内Smad8蛋白的表达,以及BMP-2和转化生长因子β1(TGF-β1)对MDPC-23细胞内Smad8分子定位的改变.结果:MDPC-23细胞的胞浆和胞核均有Smad8表达,在BMP-2刺激1 h后,Smad8从胞浆向胞核转位聚集.TGF-β1刺激后无类似现象发生.结论:成牙本质细胞系MDPC-23内存在Smad8的表达,且Smad8可特异性地将BMP-2的信号由胞浆转至胞核,但不能转导TGF-β1信号.
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腮腺多形性腺瘤中BMP-2基因的表达及意义
目的:检测腮腺多形性腺瘤中BMP-2基因的表达并探讨其病理意义.方法:分别抽提7例人腮腺多形性腺瘤组织标本的总RNA,应用人BMP-2 mRNA特异性引物和RT-PCR方法检测7例腮腺多形性腺瘤中BMP-2 mRNA的表达情况.结果:7例标本中有6例检测到人BMP-2 cDNA的特异性扩增条带.结论:BMP-2基因的表达可能参与腮腺多形性腺瘤中软骨样组织形成的病理过程.
关键词： 多形性腺瘤 骨形成蛋白-2 逆转录聚合酶链式反应 -
IGF-1对骨髓基质细胞分泌BMP-2和VEGF的影响
目的:研究不同浓度的胰岛素样生长因子1(IGF-1)对骨髓基质细胞(MSC)分泌骨形成蛋白-2(BMP-2)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响.方法:培养大鼠骨髓基质细胞,对第三代细胞分别用50 ng/ml, 25 ng/ml, 12.5 ng/ml, 6.25 ng/ml, 3.125 ng/ml的IGF-1进行培养,以正常培养的MSC为对照组,分别于1、3、5、7 d 对MSC进行VEGF或BMP-2免疫组化观察.通过图像分析观测MSC分泌BMP-2和VEGF的变化.结果:IGF-1对BMP-2的分泌有一定的促进作用.IGF-1可以明显促进MSC表达VEGF,以50 ng/ml合成作用明显,IGF-1促进MSC分泌VEGF和BMP-2具有时间及浓度依赖性.结论:IGF-1可明显地促进MSC分泌BMP-2和VEGF.
关键词： 胰岛素样生长因子-1 血管内皮生长因子 骨髓基质细胞 骨形成蛋白-2 -
骨形成蛋白-2通过JNK信号通路促进肝癌HepG2细胞凋亡
目的 观察骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及其信号通路机制. 方法用流式细胞分析和细胞凋亡ELISA法检测HepG2细胞凋亡,用Western blot法检测丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)和磷脂酰肌醇3-激酶(P13K)下游效应因子Akt的激活,采用信号通路阻断剂预处理HepG2细胞观察BMP-2影响细胞凋亡的机制. 结果 BMP-2诱导HepG2细胞凋亡,呈时间和剂量依赖性;BMP-2激活HepG2细胞JNK激酶,但不能激活ERK1/2、p38及Akt;采用JNK信号通路抑制剂SP600125可阻断BMP-2对HepG-2细胞JNK的激活,并消除BMP-2对HepG-2细胞凋亡的作用. 结论 BMP-2通过JNK信号通路途径诱导HepG2肝癌细胞凋亡.
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当归四逆汤对类风湿性关节炎患者血清Wnt-3α、β-catenin及BMP-2表达的影响
目的:观察当归四逆汤治疗类风湿性关节炎的疗效及其对患者血清Wnt3α、β-catenin及BMP-2表达的影响.方法:采用非劣效试验设计,随机、对照方法,将60例患者按就诊顺序随机分为两组.治疗组予当归四逆汤加减治疗,对照组予仙灵骨葆胶囊治疗,连续4周.记录治疗前后中医临床症状积分变化,应用Real-timePCR技术检测治疗前后血清Wnt3α、β-catenin及BMP-2变化.结果:治疗组总有效率为63.3％,对照组总有效率为43.3％.治疗组优于对照组(P＜0.05).治疗后2、4周,治疗组患者临床症状积分均低于治疗前,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后4周,对照组临床症状积分低于治疗前,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组治疗后临床症状积分均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,治疗组患者血清Wnt3α、β-catenin及BMP-2表达均低于治疗前,差异均有统计学意义(P＜0.05).对照组治疗前、后血清Wnt3α、β-catenin及BMP-2表达均未见明显变化(P＞0.05).结论:当归四逆汤可能通过下调Wnt3α、β-catenin及BMP-2表达,发挥缓解RA患者关节疼痛、改善关节功能的效用.
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骨形成蛋白2诱导肝癌细胞凋亡及其机制
目的 观察骨形成蛋白2(BMP-2)诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及机制.方法 以ELISA法检测BMP-2诱导HepG2细胞凋亡,并以Western blot法检测BMP-2处理后Bcl-2和Fas抗原的表达变化.结果 1～100ng/mL浓度BMP-2均对HepG2细胞有诱导凋亡的作用,并能下调Bcl-2的表达量,同时增加Fas抗原的表达.结论 BMP-2可诱导HepG2肝癌细胞凋亡,其机制可能是通过Fas介导的途径.
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骨形成蛋白-2对肺癌A549细胞膜型基质金属蛋白酶-1表达的影响
目的:探讨骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对人肺癌A549细胞膜型基质金属蛋白酶-1(membrane type 1-matrix metalloproteinase,MT1-MMP)表达的影响.方法:Western杂交检测MT1-MMP蛋白质表达.采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)检测细胞培养液中活性基质金属蛋白晦-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的浓度.结果:BMP-2可促进A549细胞MT1-MMP蛋白质表达,并呈剂量和时间依赖关系.ELISA进一步显示BMP-2可增加A549细胞培养液中活性型MMP-2的含量.结论:BMP-2可促进A549细胞MT1-MMP的表达及MMP-2的激活.肺癌组织中BMP-2表达的增加可通过促进肺癌细胞MT1-MMP表达及MMP-2激活而促进肺癌细胞的侵袭转移,此可能为肺癌侵袭转移的另一重要机制.
关键词： 骨形成蛋白-2 膜型基质金属蛋白酶-1 人肺癌A549细胞 -
不同诱导条件对人牙囊细胞合成非胶原蛋白的影响
目的探讨釉基质蛋白(enamelmatrix proteins,EMPs)、骨形成蛋白-2(bone morphogenetic pgotein-2,BMP-2)作用下对牙囊细胞合成非胶原蛋白的影响.方法酶消化联合组织块法获得人牙囊细胞,用100 mg/L的EMPs、100μg/L的BMP-2对人牙囊细胞进行诱导,显微镜下逐日观察细胞形态变化,并在3 d、7d两个不同时间点利用免疫组化方法和图像分析技术检测和分析细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白表达的变化.结果100 mg/L的EMPs、100μg/L的BMp-2对牙囊细胞均具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白的作用,呈时间依赖性.结论EMPs、BMP-2可使牙囊细胞表型向成骨、成牙骨质样细胞分化.
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骨形成蛋白-2基因在人骨髓基质细胞中的表达及对其成骨分化的作用
目的利用构建的人骨形成蛋白-2(BMP2)真核表达载体pcDNA3/BMP2,检测其转染人骨髓基质细胞后的表达及对其成骨分化的影响.方法酶切鉴定构建的真核表达载体pcDNA3/BMP2,利用脂质体介导的转染技术,将所构建的载体导入骨髓基质细胞中,体外单层培养.分别于转染后48h和4周采用原位杂交、免疫组化和碱性磷酸酶、钙化学染色方法检测BMP2的基因蛋白表达以及对骨髓基质细胞成骨分化的影响.结果pcDNA3/BMP2酶切片段的大小与理论相符.转染后细胞能检测到BMP2基因和BMP2蛋白表达,并促进成骨转化.结论pcDNA3/BMP2转染骨髓基质干细胞中可获得短暂和长期表达,并加强骨髓基质细胞的成骨分化能力.
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贝壳多孔羟基磷灰石基骨修复材料和骨形成蛋白-2联合应用引导犬牙周组织再生效果初步评估
目的 初步评估贝壳多孔羟基磷灰石基骨修复材料及该材料和骨形成蛋白-2联合应用引导比格犬牙周组织再生的效果.方法 选取18月龄比格犬6只,牙周基础治疗后1周,在下颌第二、三、四前磨牙,建立急性牙周骨缺损模型,依照分组情况进行不同治疗.实验组(T组)植入骨修复材料和骨形成蛋白-2;阴性对照组(NC组)植入骨修复材料；空白对照组(BC组)不植入任何材料.实验设计采取同颌同名牙对照,同一只比格犬的3对同颌同名牙分别为:空白对照组和阴性对照组,阴性对照组和实验组,空白对照组和实验组.术后12周,处死动物,Micro-CT检查并对数据进行统计学分析.结果 材料植入后,未见材料溢出,植入局部和全身都未见明显不良反应.3组缺损都有一定程度骨再生,以T组再生组织量多,BC组少.Micro-CT结果显示:T组、NC组和BC组的骨再生平均高度为(4.50±0.47) mm、(1.75±0.42) mm和(0.87±0.31) mm.NC组和BC组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).T组与NC组和BC组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05),且有临床意义.结论 贝壳多孔羟基磷灰石基骨修复材料和骨形成蛋白-2联合应用于比格犬,可以获得更好的引导组织再生效果.
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骨形成蛋白-2与碱性成纤维细胞生长因子联合应用于骨组织工程研究进展
骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)与碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)为自然骨修复中两种重要信号分子,被广泛应用于骨组织工程领域.前者可促进成骨细胞的成熟矿化,后者有显著的促细胞分裂及促血管形成作用,二者在骨形成时作用机制不同,有潜在的互补作用.相对于使用单一生长因子,在骨组织工程中联合应用剂量恰当的BMP-2与bFGF可协同促进新骨的形成,具有更好的修复效果,然而联合应用BMP-2与bFGF的适宜剂量范围还有待进一步明确;有关BMP-2与bFGF之间相互协同和拮抗的机制,及药物控释系统如何更好地模拟自然骨修复过程中生长因子释放模式仍有待研究.
