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“夹脊”电针对兔退变腰椎间盘组织中基质金属蛋白酶13和基质金属蛋白酶组织抑制因子1表达的影响
目的:研究“夹脊”电针对兔退变的腰椎间盘中基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响,探讨夹脊电针治疗腰椎间盘退行性病变的作用机制.方法:36只清洁级成年新西兰大白兔随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组,每组9只.采用克氏针横穿椎体后椎体间加压法复制椎间盘退变模型.电针组针刺L4、L5“夹脊”穴28 d.各组于第1、28、56天应用Western blot方法检测椎间盘组织中MMP 13蛋白的表达,免疫荧光技术检测椎间盘组织中TIMP 1蛋白的表达.结果:建立模型后,MMP-13蛋白表达增强(P＜0.01);电针进行干预后可降低MMP-13的表达(P＜0.01).TIMP-1在荧光激发下,胞质清晰,可见红色荧光,其中各组第1天和正常组、假手术组的第28、56天均呈现强阳性,模型组第56天阳性细胞少、红色荧光弱(P＜0.01),而电针组在第56天阳性细胞升高(P＜0.01).结论:电针“夹脊”穴可以通过降低椎间盘组织中MMP-13和增强TIMP-1的表达,纠正基质合成与分解代谢失衡,达到防治椎间盘退变的效果.
关键词： 椎间盘退变 电针 夹脊穴 基质金属蛋白酶13 基质金属蛋白酶组织抑制因子1 -
短刺加电针法对膝骨关节炎兔膝关节软骨修复的影响
目的:观察短刺加电针法对膝骨关节炎兔软骨γ-谷氨酰基羧化酶(GGCX)、基质金属蛋白酶(MMP)13及血清非羧化基质GLA蛋白(ucMGP)的影响,探讨短刺加电针法对软骨组织的修复作用.方法:新西兰大白兔随机分为正常组10只和造模组30只,造模组动物采用Huhh-Telhag法手术复制膝关节炎模型,将造模成功的动物随机分为模型组、短刺组、普通针刺组,每组10只.短刺组取左侧“内膝眼”“外膝眼”“阴陵泉”“足三里”“梁丘”,采用短刺法加用电针,普通针刺组常规针刺以上穴位加甩电针,均每日治疗1次,每次20 min,5d为一疗程,共4个疗程.采用蛋白免疫印迹法检测软骨细胞中GGCX、MMP 13的蛋白表达;免疫组化法检测GGCX的活性;酶联免疫吸附测定法检测血清ucMGP的含量.结果:与正常组相比,模型组膝关节软骨中MMP 13、血清ucMGP表达明显提高(P＜0.01,P＜0.05),而GGCX表达量下降(P＜0.01);与模型组相比,短刺组和普通针刺组MMP 13、ucMGP表达明显降低(P＜0.01,P＜0.05),而GGCX表达升高(P＜0.01);与普通针刺组相比,短刺组MMP 13、ucMGP表达明显降低(P＜0.01,P＜0.05),而GGCX表达升高(P＜0.01).结论:普通电针法与短刺加电针法均可促进膝关节软骨细胞修复,且短刺法有一定的优势,其治疗作用可能与上调GGCX表达,促进MGP羧基化,抑制MMP 13表达有关.
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膈下逐瘀汤逆转猪血清诱导大鼠肝纤维化的作用及机制研究
目的:通过观察膈下逐瘀汤对实验性肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)及金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响,探讨其抗肝纤维化的可能机制.方法:大鼠随机分为空白对照组、膈下逐瘀汤组、猪血清组、猪血清+膈下逐瘀汤组.猪血清2.0 mL·kg-1腹腔注射,每周2次共12周诱导大鼠免疫性肝纤维化模型,同时膈下逐瘀汤每天按7.37 g·kg-1灌胃给药12周.Masson染色法观察肝组织病理学改变,ELISA检测肝组织MMP-13和TIMP-1含量,实时定量Rt-PCR检测肝组织MMP-13和TIMP-1 mRNA表达.结果:猪血清组肝组织胶原面积为(10.38±2.01)％；MMP-13蛋白(14.05 ±2.64) ng·g-1;MMP-13 mRNA(1.91 ±0.73)倍；TIMP-1蛋白(14.91 ±1.07)ng·g-1；TIMP1 mRNA(18.40 ±2.84)倍.与猪血清组比较,膈下逐瘀汤给药可显著降低肝组织胶原面积(6.66±1.04)％(P＜0.05),增加肝组织MMP-13蛋白(20.03 ±2.14)ng·g-1和MMP-13mRNA(4.12 ±0.59)倍(P＜0.05),降低肝组织TIMP-1蛋白(13.47±1.22)ng·g-1和TIMP-1mRNA(4.89±0.74)倍(P＜0.05).结论:膈下逐瘀汤可有效地逆转实验性肝纤维化大鼠肝组织胶原纤维含量,其机制可能与调节MMP-13和TIMP-1的表达有关.
关键词： 肝纤维化 膈下逐瘀汤 基质金属蛋白酶13 金属蛋白酶组织抑制因子1 -
壮骨健膝方对IL-1 β诱导后软骨细胞表达Caveolin-1、p-p38、MMP-3、MMP-13及TNF-α的影响
目的:观察壮骨健膝方对IL-1 β诱导后软骨细胞中Caveolin-1、p-p38及其培养液中MMP-3、MMP-13和TNF-α表达的影响,探讨该方保护关节软骨的机制.方法:制备兔含药血清;取新西兰大白兔膝关节第二代软骨细胞,以10ng/mL IL-1β进行诱导,48h后随机分为空白血清组、含药血清组、阻滞剂A组、阻滞剂B组,并设未诱导的细胞为正常对照组,分别用不同方法干预6h后,检测软骨细胞及其培养液中上述5个指标的表达.结果:空白血清组5个指标的表达均高于其它各组(P＜0.05),而3个干预组均能降低其表达(P＜0.05),其中含药血清与SB203580联用的阻滞剂B组效果明显.结论:壮骨健膝方对关节软骨的保护作用可能与其抑制Caveolinp38MAPK信号通路的激活,进而降低软骨细胞表达MMP-3、MMP-13及TNF-α有关.
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浸润性乳腺癌中基质金属蛋白酶-13蛋白的表达及其与其他相关因子和预后的关系
目的 探讨浸润性乳腺癌中基质金属蛋白酶(MMP)-13蛋白在肿瘤细胞和间质细胞中的表达及其与肿瘤临床病理、生物学指标以及预后的相关性.方法 采用组织芯片免疫组织化学染色sP法检测263例浸润性乳腺癌组织中MMP-13、ER、PR、HER2、MMP-2、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1、TIMP-2蛋白的表达及表达间的相关性.结果 MMP-13在肿瘤细胞及间质纤维母细胞中均表达,肿瘤细胞中MMP-13过表达与淋巴结受累和高组织学分级相关(均P<0.01),且与HER2表达(P=0.015)和肿瘤细胞TIMP-1蛋白表达相关(P<0.01).MMP-13过表达与患者总生存期缩短相关,分层分析显示MMP-13的过表达分别与淋巴结阳性患者总生存期和HER2阳性和阴性表达状态下的患者总生存期有关.间质纤维母细胞表达MMP-13尽管与肿瘤细胞表达者有相关性,且与淋巴结状态和HER2表达也相关,但评估预后的价值较弱.经单因素分析,肿瘤直径、组织学分级、淋巴结和PR、HER2表达状态及肿瘤表达的TIMP-1和MMP-13均是有意义的预后指标;但多因素分析显示仅肿瘤直径、组织学分级、淋巴结状态、HER2表达、肿瘤中TIMP-1和MMP-13表达是独立预后因素.结论 MMP-13蛋白与浸润性乳腺癌的侵袭和转移相关,有可能作为预后不良的指标.
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基质金属蛋白酶13在骨关节炎中的研究进展
骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是常见的关节炎形式,通常以关节疼痛和功能障碍为主要表现,严重影响患者的生活质量.OA主要是退行性病变,多发于60岁以上的老年人,随着我国逐步进入老龄化社会,骨关节炎越来越受到关注.已有大量实验证明基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)可以强有力的降解软骨基质的主要成分一Ⅱ型胶原,除此之外,MMP-13还可降解软骨基质中的蛋白多糖、Ⅳ型和Ⅸ型胶原蛋白、骨粘连蛋白及软骨基底膜聚糖,在OA的发生发展中起到重要作用,近几年许多关于MMP-13抑制剂的研究给OA的治疗带来了新希望.本综述将近几年MMP-13及其在骨关节炎方面的研究进展进行总结,希望能对此方面的研究人员起到参考作用.
关键词： 骨关节炎 基质金属蛋白酶13 基质金属蛋白酶13抑制剂 -
IL-32、MMP-13及IL-10在类风湿关节炎中的表达及意义研究
目的：探讨白细胞介素-32（IL-32）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、白细胞介素-10（IL-10）在类风湿关节炎（RA）发生、病程发展中的意义。方法采用ELISA法，检测115例RA、76例对照组血清中IL-32、MMP-13及IL-10的水平，并与抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、类风湿因子（RF）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、红细胞沉降率（ESR）等指标进行相关性分析。结果 RA组与对照组比较，IL-32、MMP-13、IL-10水平升高，有统计学意义（P＜0.05），RA重度活动期组IL-32、MMP-13显著高于稳定期组（P＜0.05）， IL-32、MMP-13水平与抗CCP抗体、ESR、hs-CRP、RF、DAS28、关节肿胀数和关节压痛数呈显著正相关（P＜0.01），IL-10与ESR、hs-CRP呈正相关（P＜0.05或P＜0.01）。结论 IL-32、MMP-13及IL-10与RA的形成、病程发展有密切关系，可作为观察RA病情活动、疗效判断及预后的新依据。
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替米沙坦对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝纤维化基质金属蛋白酶-13及其抑制因子-1的表达和胰岛素抵抗的影响
目的 观察替米沙坦对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝纤维化的疗效和对基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及其抑制因子-1(TIMP-1)的表达和胰岛素抵抗的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和替米沙坦干预组.模型组和干预组给予高脂饲料喂养16周诱发脂肪性肝炎,其中干预组于高脂喂养12周后,给予替米沙坦[5mg/(kg.d)]灌胃治疗4周.16周末处死所有动物.检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FPG),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),RT-PCR和Western blot法检测肝组织TIMP-1、MMP-13 mRNA和蛋白的表达水平.病理切片观察组织学改变,免疫组织化学法检测a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达情况.结果 模型组血清ALT,AST,FPG,FINS及HOMA-IR较正常组均显著升高(均P＜0.01).与模型组相比,干预组血清ALT,FPG,FINS及HOMA-IR均明显下降,差异具有统计学意义(均P＜ 0.01).AST与干预组相比存在下降趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组相比,替米沙坦可显著改善肝脏炎症活动度及肝纤维化程度(均P＜ 0.01).干预组HOMA-IR较模型组明显降低[(3.59±0.29)vs(6.23±0.19),P＜ 0.01].干预组肝组织a-SMA的表达明显减少,肝组织MMP-13 mRNA和蛋白的表达均增加,TIMP-1 mRNA和蛋白的表达均降低(均P＜0.01).结论 替米沙坦对NASH大鼠具有改善胰岛素抵抗和抗肝纤维化的作用.
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基质金属蛋白酶-13在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌预后的影响
目的 探讨基质金属蛋白酶-13(MMP-13)与乳腺癌临床病理特征的关系及其对乳腺癌总体生存率的影响.方法 选取包含生存资料的159点乳腺癌组织芯片MMP-13(126例病例),免疫组织化学方法测定组织芯片中MMP-13的表达.统计分析MMP-13在乳腺癌组织、癌组织与癌旁组织中的表达差异；MMP-13表达与乳腺癌肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移、ER表达、PR表达、HER2表达的相关性；高MMP-13表达组与低MMP-13表达组的乳腺癌总体生存率的差异.结果 MMP-13在乳腺癌组织(54.4％)中的表达明显高于癌旁组织(27.5％)(P=0.003);MMP-13表达与淋巴结转移(r=0.257,P=0.006)、临床TNM分期(r=0.310,P =0.001)、HER2表达(r=0.192,P=0.041)呈正相关,而与肿瘤大小(r=0.143,P=0.128)、肿瘤组织学分级(r=0.010,P=0.915)、ER/PR表达的相关性差异均无统计学意义.MMP-13高表达组乳腺癌病例总体生存率较低表达组明显降低.结论 MMP-13高表达是乳腺癌淋巴结转移的高危因素和独立的小良预后因素.
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补肾固齿丸对大鼠牙周组织表达基质金属蛋白酶13的影响
目的 研究补肾固齿丸对大鼠牙周组织表达骨胶原酶基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)的影响,探讨补肾固齿丸治疗牙周炎的机制.方法 将成功建立牙周炎模型的64只大鼠按照随机数字表法分为4组:牙周炎模型组、补肾同齿丸低剂量组(0.8 g·k-1·d-1)、中剂量组(2 g·kg-1·d-1)和高剂量组(4 g·kg-1·d-1),各组大鼠均为16只.16只正常大鼠作为正常对照组.采用免疫组化染色法,以积分吸光度值作为参数进行半定量测定MMP-13在大鼠牙周组织的表达是否具有差异.结果 建模成功后牙周炎建模大鼠牙周组织的MMP-13呈阳性表达,而正常大鼠牙周组织中未见表达.相埘于牙周炎模型组(积分吸光度值为5.3233±0.7993),经过高、中、低剂量补.肾同齿丸治疗30 d后,牙周组织中MMP-13积分吸光度值均下降(分别为2.9103±0.5534、3.6588±0.4330、4.4550±0.4255,P<0.05),给药60 d后,补肾同齿丸高、中、低剂量组MMP-13的积分吸光度值(分别为2.1855±0.5381、2.8558±0.4759、3.8980±0.5885)较牙周炎模型组(6.2693±0.4538)下降更明显(P<0.05).结论 补肾固齿丸可以下调骨胶原酶MMP-13的表达,且补肾固齿丸高剂量组(4g·kg-1·d-1)的效果更佳.
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软骨中硫化氢含量及其对白介素1β诱导的软骨细胞基质金属蛋白酶13表达的抑制作用
目的：研究关节液及关节软骨中硫化氢（hydrogen sulfide，H2 S）及其合成酶的含量和变化，以及H2 S对白介素1β（interlukin-1β，IL-1β）诱导的软骨细胞人基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase 13，MMP-13）表达的影响。方法：收集在北京大学第一医院行膝关节手术（关节镜手术或膝关节置换术）患者的关节液及废弃的关节软骨，用亚甲基蓝法检测关节液H2 S的含量；从废弃的关节软骨中分离出相对正常的软骨细胞，用H2 S分子探针方法检测软骨细胞中的内源性H2 S，用免疫细胞化学方法检测软骨细胞中H2 S 合成酶胱硫醚-β-合成酶（cystathionine beta-synthase，CBS）、胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine gamma-lyase，CSE）、巯基丙酮酸硫转移酶（3-mercaptopyruvate sulfurtransferase，MPST）；用Western blot法检测H2 S合成酶CBS、CSE、MPST在不同退变程度的软骨组织中的含量。培养相对正常的人软骨细胞至第三代，分为4组：（1）对照组：不加任何药物；（2）IL-β组：单加5μg／L的IL-1β；（3）IL-1β＋H2S组：提前0．5 h 加200μmol／L 的 NaHS，再加5μg／L 的 IL-1β；（4）H2S 组：单加200μmol／L 的NaHS。Western blot法检测各组细胞MMP-13蛋白、总核因子κB p65（nuclear factor κB p65，NF-κB p65）及磷酸化NF-κB p65蛋白的含量，Real-time PCR检测各组细胞MMP-13基因的转录情况。结果：退变膝关节的关节液中H2 S含量为（14．3±3．3）μmol／L，Outerbridge分级3级软骨组织中CSE表达量显著高于Outerbridge分级1级软骨组织中的表达量（1．67±0．09 vs．1．26±0．11，P＜0．01），而CBS与MPST的表达量差异无统计学意义（P＞0．05）。IL-1β组MMP-13的表达较正常对照组明显升高，且差异具有统计学意义（1．87±0．67 vs．0．22±0．10，P＜0．05），IL-1β＋H2S组MMP-13的表达较IL-1β组明显降低，且差异具有统计学意义（0．55±0．11 vs．1．87±0．67，P＜0．05）， H2 S组MMP-13的表达较正常对照组差异无统计学意义。Real-time PCR方法测量了药物干预实验中各组细胞MMP-13基因转录情况，结果显示 IL-1β组 MMP-13基因转录较正常对照组明显升高，且差异具有统计学意义（31．40±0．31 vs．1．00±0．00，P＜0．05），IL-1β＋H2S组MMP-13基因转录较IL-1β组明显降低，且差异具有统计学意义（24．41±1．28 vs．31．40±0．31，P＜0．05），H2S组MMP-13基因转录较正常对照组无显著性变化。IL-1β组总p65含量较正常对照组明显升高，且差异具有统计学意义（2．13±0．08 vs．0．73±0．08，P＜0．05），IL-1β＋H2S组总p65含量较IL-1β组明显降低，且差异具有统计学意义（1．24±0．13 vs．2．13±0．08，P＜0．05），H2S组总p65含量较正常对照组无显著性变化；IL-1β组磷酸化p65含量较正常对照组明显升高，且差异具有统计学意义（1．30±0．13 vs．0．19±0．04，P＜0．05），IL-1β＋H2S组磷酸化p65含量较IL-1β组明显降低，且差异具有统计学意义（0．92±0．26 vs．1．30±0．13，P＜0．05），H2S组磷酸化p65含量较正常对照组无显著性变化。结论：H2S参与了软骨退变，起到部分抑制细胞外基质降解酶MMP-13的作用，从而实现对软骨细胞外基质的保护。
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SLRPs在骨性关节炎发病中的作用
骨性关节炎(OA)是一种以关节软骨进行性退化为主要特征的关节疾患,其具体发病机制仍不十分明确.Ⅱ型胶原为软骨细胞外基质(ECM)的重要组分,可被基质金属蛋白酶特异性降解,终导致软骨退变.富含亮氨酸重复序列的小分子蛋白多糖(SLRPs)为 ECM 的另一重要组分,能结合于胶原纤维表面阻止MMPs进入胶原纤维的通道,以保护胶原纤维免受破坏.此外,它还能通过影响信号转导通路来维持基质的稳定.因此,SLRPs的异常改变能影响软骨的代谢平衡,使软骨发生退行性变进而导致OA的发生.
关键词： 骨性关节炎 Ⅱ型胶原 富亮氨酸小分子蛋白多糖 基质金属蛋白酶13 -
调控转录因子NF-κB信号通路对体外自然退变终板软骨细胞的影响
目的 探讨终板软骨细胞体外自然退变模型中转录因子(NF)-κB信号通路表达变化及意义.方法 分离获取大鼠终板软骨细胞,体外培养建立终板软骨细胞自然退变模型.根据细胞传代次数分P2代细胞(空白对照组),P5代细胞(体外自然退变组)及NF-κB信号通路抑制组(细胞传代中加入Bay11-7082的P5代细胞).观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色鉴定细胞表型,阿新蓝染色观察细胞外基质变化.实时聚合酶链反应检测各组细胞中SOX-9基因,Ⅱ型胶原,蛋白聚糖,人基质金属蛋白酶(MMP) 13的表达情况,核质分离及免疫印迹检测胞核与胞质中NF-κB信号通路相关蛋白P65、p-P65、IκBα、p-IκBα表达变化.结果 随着体外传代的进行终板软骨细胞表型逐渐丢失,阿新蓝染色可见细胞外基质减少,P5代细胞(体外自然退变组)较P2代细胞(空白对照组)SOX-9(P5/P2=0.488,P＜0.01)、蛋白聚糖(P5/P2=0.287,P＜0.01)、Ⅱ型胶原(P5/P2=0.182,P＜0.01)表达明显降低,NF-κB信号通路相关基因P65入核增加,胞质中p-IκBα增高,NF-κB信号通路相关基因MMP13 (P5/P2=1.324,P＜0.05)表达明显上升,NF-κB信号通路抑制组较P5代细胞(体外自然传代组)核内p-P65减少,胞内p-IκBα降低,NF-κB信号通路相关基因MMP13(Bay11-7082/P5=0.611,P＜0.05)表达降低,信号通路抑制组中Ⅱ型胶原(Bay11-7082/P5 =4.173,P＜0.01)、蛋白多糖(Bay11-7082/P5=2.732,P＜0.05)、SOX-9(Bay11-7082/P5=1.567,P＜0.05)等基因表达明显回升.结论 NF-κB信号通路在终板软骨细胞体外退变中发挥重要的调节作用,调控NF-κB信号通路可能会改善椎间盘退变.
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血清基质金属蛋白酶13及其抑制因子在绝经后妇女骨代谢中的浓度变化
目的 测定绝经后妇女血清基质金属蛋白酶-13 (MMP-13)和组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)浓度,并探讨其与骨密度数值和骨代谢指标的关系.方法 选取武汉地区120名48 ～ 65岁绝经后女性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清MMP-13、TIMP-1以及雌二醇(E2)、骨保护蛋白(OPG)、骨保护蛋白配体(OPGL),Ⅰ型原胶原N端前肽(PINP)和Ⅰ型胶原交联C末端肽(CTX)的浓度,计算MMP-13/TIMP-1比值,用双能X线吸收法(DEXA)测定腰椎正位、股骨颈、华氏区和大粗隆的骨密度(BMD).同时,按照WHO标准将入选女性分为骨密度正常组(n=28)、低骨量组(n=36)和骨质疏松组(n=56).结果 骨密度正常组、低骨量组和骨质疏松组MMP-13浓度比较差异有统计学意义[(27.08±1.41) μg/L、(45.64±1.62)μg/L及(44.25±1.21) μg/L;F=110.314,P=0.000],且低骨量组、骨质疏松组血清MMP-13均高于正常组(P均＜0.05),低骨量组MMP-13略高于骨质疏松组,但差异无统计学意义(P＞0.05)；而TIMP-1在3组间差异无统计学意义(F=10.721,P=0.801).MMP-13/IIMP-1比值分别为0.185±0.062,0.311±0.053,0.332±0.063,3组差异有统计学意义(F=137.771,P =0.000),且低骨量组与骨质疏松组均高于骨密度正常组(P均＜0.05),但两组间差异无统计学意义(P＞0.05).骨质疏松组中血清MMP-13与骨密度(腰椎正位、股骨颈、华氏区)、血清E2、OPGL数值存在明显负相关性(r值分别为-0.296、-0.198、-0.301、-0.298、-0.233,P均＜0.05),和OPG、PINP和CTX存在明显正相关性(r值分别为0.228、0.315、0.312,P均＜0.05).低骨量组MMP-13与骨密度(腰椎正位、华氏区)和E2、CTX存在明显相关性(r值分别为-0.188、-0.196、-0.235、0.289,P均＜0.05).结论 血清MMP-13和MMP-13/TIMP-1比值与绝经后骨质疏松症妇女和绝经后低骨量组妇女骨代谢指标具有关联性.血清MMP-13浓度升高和MMP-13/TIMP-1比值升高可能为绝经后骨质疏松症和绝经后妇女早期骨代谢转换过程增快的表现.
关键词： 基质金属蛋白酶13 组织金属蛋白酶抑制因子1 骨代谢 骨质疏松 绝经后 -
青蒿琥酯及神经酰胺对肝星状细胞增殖、胶原生成及MMP13表达的影响
目的:探讨青蒿琥酯及神经酰胺对大鼠原代肝星状细胞(HSCs)增殖以及胶原生成/分泌的影响,从诱导基质金属蛋白酶13(MMP13)表达这一环节探讨其抗肝纤维化的机制.方法:分离大鼠原代HSCs,传代培养活化后,将其分为实验组和对照组,实验组以青蒿琥酯(终浓度为125、150、175、200、225 μmol/L)、神经酰胺(终浓度为10 μmol/L)作用24、48、72 h.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率,酶消化法测定羟脯氨酸(Hyp)含量,Western blot法测定MMP13的表达.结果:与细胞对照组相比,青蒿琥酯各浓度组及神经酰胺组作用24、48、72 h的吸光度值均降低(P＜0.01),且对HSCs的抑制作用呈剂量-效应和时间-效应关系；均能有效降低HSCs上清液中Hyp含量(P＜0.01),且呈剂量-效应关系；均可促进MMP13的表达(P＜0.01),且呈剂量-效应关系.结论:青蒿琥酯及神经酰胺抗肝纤维化的可能机制是抑制肝星状细胞的增殖,减少胶原的生成/分泌,促进MMP13的表达,从而促进胶原的降解,使细胞外基质减少,抑制纤维化发生.
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Wnt/β-Catenin信号通路与骨关节炎发病机制的研究
目的:观察骨关节炎(OA)行膝关节置换术的患者软骨组织中Wnt/β-catenin信号传导通路相关蛋白及基因的表达情况.方法:关节软骨组织根据改良的Mankin关节软骨病理评分标准分为对照组、轻度病变组和中度病变组.应用免疫组织化学的方法检测软骨细胞中β-catenin及基质金属蛋白酶(MMP)-13的表达情况.提取OA行膝关节置换术42例患者的关节软骨总RNA,应用Real Time RT-PCR的方法,选用β2微球蛋白作为内参,检测软骨组织中骨形态发生蛋白(bmp)-2,X型胶原(col-10)及mmp-13基因的表达情况.结果:病理评分对照组8例均正常;研究组轻度病变组15例,中度病变组27例.β-catenin免疫组化结果显示对照组全部为阴性;轻度病变组9例阳性,中度病变组7例阳性.MMP-13免疫组化结果显示对照组1例阳性;轻度病变组14例阳性,中度病变组21例阳性.RealTime RT-PCR结果显示轻度病变组bmp-2、col-10和mmp-13的表达水平分别为中度病变组的3.01、2.89和4.04倍,差异有统计学意义(均P<0.01).结论:β-catenin在关节软骨细胞中高表达可能是关节软骨破坏并导致OA发展的重要原因.
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白细胞介素-1β对大鼠软骨细胞MMP-13表达的影响及miR-27b的调控作用
目的：观察白细胞介素（IL）-1β对大鼠软骨细胞基质金属蛋白酶（MMP）-13表达的影响及miR-27b的调控作用。方法雄性Wistar大鼠7只提取软骨细胞。Western blot检测IL-1β刺激软骨细胞0 h、24 h、48 h各时间点MMP-13表达变化；miRNAs微阵列分析48 h内软骨细胞差异表达的miRNAs；Real-time PCR定量分析筛选出下调为明显的miRNAs；荧光素酶报告基因实验验证miR-27b与MMP-13的靶定调控关系。结果 IL-1β刺激软骨细胞后，MMP-13蛋白在0 h、24 h、48 h各时间点表达逐渐增加（P<0.05）；miRNAs微阵列分析发现48 h内软骨细胞有36个miRNAs出现表达变化，变化为明显的有6个，分别为miR-27b、miR-31、miR-26a、miR-26b、miR-23、miR-204；Real-time PCR显示miR-27b下调为明显；miR-27b拟似物和荧光素酶表达质粒共转染软骨细胞后，荧光素酶活性受到明显抑制（P<0.05）。结论 IL-1β刺激软骨细胞后，出现miR-27b的表达下调和MMP-13蛋白的表达上调，miR-27b与MMP-13存在靶定调控关系。
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运动手法配合疏肝补肾中药对膝关节骨性关节炎患者关节功能及关节液中基质金属蛋白酶13的影响
目的 观察运动手法配合疏肝补肾中药对膝关节骨性关节炎患者关节功能及关节液中基质金属蛋白酶13(MMP-13)的影响.方法 将88例膝关节骨性关节炎患者随机分为2组,试验组44例给予运动手法+疏肝补肾中药治疗,对照组44例给予运动手法+复方七叶皂苷钠凝胶治疗,2组均以2周为1个疗程,观察2组治疗前后KOOS评分、膝关节屈伸角度和关节液中MMP-13水平变化情况.结果 2组治疗后KOOS评分、膝关节屈伸角度、关节液中MMP-13水平均明显改善(P均＜0.05),且试验组上述指标改善情况均明显优于对照组(P均＜0.05).结论 运动手法配合疏肝补肾中药能够明显改善膝关节骨性关节炎患者的关节功能,降低关节液中MMP-13水平,保护关节软骨,值得推广应用.
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黄连素抑制兔骨关节炎软骨基质金属蛋白酶-13及血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-5表达保护软骨基质的实验研究
目的 观察关节腔内注射黄连素对兔OA关节软骨的保护作用以及软骨中MMP-13及血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-5(ADAMTS-5)表达的影响,并探讨其作用机制.方法 30只雄性新西兰大白兔行双侧前膝交叉韧带切除术(ACLT),术后4周,根据随机化原则于每只兔一侧膝关节腔内注射100 μmol/L黄连素溶液(实验组)0.3 ml,另一侧关节腔内注射相同剂量的0.9％氯化钠注射液(安慰剂组),每周1次,共注射5周.术后9周处死兔子,获取膝关节股骨内髁标本.取其中10只兔子膝关节采用实时定量(RT)-PCR方法检测各组关节软骨中MMP-13、ADAMTS-5、蛋白聚糖(Aggrecan)和Ⅱ型胶原的mRNA表达.另取10只兔子膝关节行番红素O染色并行Mankin评分定量评估软骨组织退变情况,用免疫组织化学方法定性观察关节软骨中MMP-13及ADAMTS-5的表达量.取剩余的10只兔子膝关节标本行软骨组织羟脯氨酸(Hyp)及糖胺聚糖(GAG)含量测定.组织学评分及mRNA表达量的比较采用两独立样本均数t检验.结果 组织病理学Mankin评分显示实验组(6.9±1.9)软骨病变程度轻于安慰剂组(9.3±1.2),差异具有统计学意义(t=3.394,P＜0.01).与安慰剂组相比,黄连素处理后软骨组织内MMP-13(160±54)及ADAMTS-5(166±47)的mRNA较安慰剂组(233±45;234±67)表达降低(t=3.311,P＜0.01;t=2.651,P＜0.05),而蛋白聚糖(261±50)、Ⅱ型胶原(335±64)的mRNA表达较安慰剂组(186±64和254±69)升高(t=2.941,P＜0.01;t=2.743,P＜0.05),差异具有统计学意义.组织生物化学检测显示,实验组软骨羟脯氨酸[(23.5±2.8) μg/mg]和糖胺聚糖[(30±3) μg/mg]含量均高于安慰剂组[(19.9±2.8) μg/mg和(27.4±2.9)μg/mg],差异具有统计学意义(t=2.923,P＜0.01;t=2.111,p＜0.05).结论 黄连素对OA关节软骨基质降解因子MMP-13及ADAMTS-5的表达有抑制作用,对OA软骨结构具有一定的改善作用.
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仙灵骨葆预防卵巢切除大鼠的腰椎间盘退变
背景:仙灵骨葆主要成分为黔岭淫羊藿、补骨脂、断续等组成,临床上常被用于治疗骨质疏松症.目的:验证仙灵骨葆对去卵巢大鼠椎间盘退变预防作用并探讨其作用机制.方法:3月龄雌性SD大鼠被随机均分为3组.双侧卵巢切除+仙灵骨葆组切除双侧卵巢后,250 mg/(kg·d)仙灵骨葆灌胃,1次,d,连续用药12周.假手术组暴露卵巢但不切除:双侧卵巢切除+盐水组切除双侧卵巢后给予等量生理盐水.以上3组均于术后3个月处死,并于处死前10 d和4 d分别给予四环素和钙黄绿素双荧光标记.取L_2椎体进行骨形态计量学分析,L_4～L_5腰椎及椎间盘进行VG特殊染色及采用免疫组织化学检测椎间盘基质金属蛋白酶13的表达,观察椎间盘的病理学改变并根据组织学评分系统对腰椎间盘的退变程度(LVD)进行评分.结果与结论:①腰椎骨量:双侧卵巢切除+盐水组显著低于假手术组及双侧卵巢切除+仙灵骨葆组(P<0.05).②腰椎间盘评分:双侧卵巢切除+盐水组组显著高于假手术组及双侧卵巢切除+仙灵骨葆组(P<0.05).③免疫组织化学:双侧卵巢切除+盐水组与双侧卵巢切除+仙灵骨葆组、假手术组比较大鼠椎间盘中基质金属蛋白酶13表达显著升高(P<0.05).结果表明,仙灵骨葆可预防去卵巢大鼠腰椎间盘的退变,其作用机制可能包括维持椎体骨量及微观结构、抑制终板退变从而改善椎间盘的生物力学环境和营养供应,同时降低椎间盘中基质金属蛋白酶13的表达,抑制基质的降解.
