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针刺联合栀子苷对糖尿病复合脑缺血大鼠脑内小胶质细胞激活及核转录因子-κB表达的影响
目的:探讨针刺联合栀子苷的脑保护机制.方法:雄性Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、药物组、针刺组、针药结合组,每组12只.链脲佐菌素腹腔注射制作糖尿病模型,双侧颈总动脉阻断法制造脑缺血再灌注模型.药物组大鼠予以栀子苷(25 mg/kg)生理盐水溶液灌胃,每日1次,连续治疗1周;电针组大鼠选取“百会”和“大椎”两穴,每次电针20 min,隔日1次,共10次;针药结合组大鼠接受栀子苷治疗的同时,也接受电针治疗.Morris水迷宫行为实验测试大鼠学习记忆状况;免疫组化法检测海马及杏仁核内小胶质细胞标志物OX-42和核转录因子-κB(NF-κB)免疫活性的变化.结果:电针、药物以及针药结合3个治疗组治疗后,动物在撤台后于靶象限游泳路程的百分比和游泳时间的百分比较模型组明显增加(P＜0.05).模型组大鼠海马与杏仁核OX-42阳性标记小胶质细胞数量与吸光度明显高于正常组(P＜0.01),治疗后明显降低(P＜0.05),3个治疗组间差异无统计学意义(P＞0.05).模型组大鼠海马和杏仁核NF-κB阳性标记细胞数量与吸光度显著高于正常组(P＜0.05),治疗后明显降低(P＜0.05),3个治疗组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:针刺和栀子苷均通过NF-κB-小胶质细胞信号通路,抑制糖尿病复合脑缺血模型大鼠脑内小胶质细胞的活性,从而缓解糖尿病复合脑缺血模型大鼠的学习记忆障碍.针刺加栀子苷复合治疗与单纯针刺或药物治疗效果相同.
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介入给予左旋精氨酸及硝酸甘油对大鼠急性局部脑缺血模型的作用
目的 通过介入手段局部给予一氧化氮(NO)前体L-精氨酸(L-ARG)、NO供体硝酸甘油(NG),观察对大鼠局灶性脑缺血的疗效.方法 采用线栓法阻塞右侧大脑中动脉,制作缺血-再灌注大鼠模型(MCAO),42只雄性SD大鼠随机分为4组:MCAO模型组(n=12),SHAM假手术组(n=6),NG组(n=12),L-ARG组(n=12),于再灌注即刻患侧颈内动脉内分别给予NS、NS、NG以及ARG,再灌3、24 h各分为2个亚组,分别检测各组不同时间点Longs评分,血清NO氧化产物,以及脑组织苏木素-伊红(HE)染色,免疫组织化学染色.结果 脑皮层和海马CA3区OX-42阳性细胞数:MCAO组再灌3 h OX-42染色加深,细胞形态基本清楚.24 h细胞明显深染,数量明显增加(P<0.001).NG组3和24 h,细胞数量少(P<0.05).L-ARG组3和24 h细胞数量亦减少(P<0.05).结论 NO前体L-ARG、供体NG介入给药对大鼠急性局灶性脑缺血具有保护作用.
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外周N-甲基-D-天门冬氨酸受体在福尔马林外周注射引起长时程痛敏中的作用
目的 观察外周N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体对福尔马林外周注射所致长时程痛敏的作用.方法 雄性SD大鼠脚掌注射福尔马林,之前注射或不注射MK-801.免疫组化方法检测脊髓背角小胶质细胞OX-42表达,测定热辐射痛行为.结果 注射MK-801侧脊髓背角Ⅰ、Ⅱ层小胶质细胞OX-42阳性表达水平较对侧(仅注入福尔马林侧)明显降低.单独注入福尔马林后第3天发生热痛敏,第7天达高峰,第10天仍未完全恢复至正常值;外周应用MK-801后,热痛敏反射潜伏期延长.结论 NM-DA受体参与长时程痛敏的产生和维持.
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慢性高眼压大鼠视神经中小胶质细胞/巨噬细胞的激活研究
目的 探讨慢性高眼压大鼠视神经中小胶质细胞/巨噬细胞的激活分布情况.方法 结扎两条巩膜上静脉建立慢性高眼压大鼠模型,应用OX-42单克隆抗体行免疫组化检测视神经中小胶质细胞/巨噬细胞的激活分布情况.结果 对照眼视神经中小胶质细胞/巨噬细胞呈圆状、柱状,无明显树突样突起;慢性高眼压眼视神经中小胶质细胞/巨噬细胞呈阿米巴状、柱状,有树突样突起,细胞数量增加,术后第1周,视神经中小胶质细胞/巨噬细胞数量为49.61±8.04/3个400倍视野.此后视神经中小胶质细胞/巨噬细胞数量逐渐减少.术后第1周至第8周视神经中小胶质细胞/巨噬细胞的数量与同期对照眼相比差异有显著性(P＜0.05).术后第12周,视神经中小胶质细胞/巨噬细胞的数量与同期对照眼相比差异无显著性(P＞0.05).结论 慢性高眼压可致视神经中小胶质细胞/巨噬细胞激活,细胞数量增加,但随时间延长逐渐降低.
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HS014对吗啡耐受大鼠脊髓组织 OX-42、TNF-α表达的影响及意义
目的：探讨黑皮质素受体拮抗剂（HS014）对吗啡耐受大鼠脊髓组织OX-42及肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达的影响及意义。方法健康雄性SD大鼠30只，随机分为5组，每组6只，分别为吗啡耐受组（ M组）、生理盐水组（ N组）、HS014＋吗啡组（ HM组）、生理盐水＋吗啡组（ NM组）和HS014＋生理盐水组（ HN组），各组连续给药5 d。于第5天实验结束后，取各组大鼠L4～6段脊髓组织，采用免疫组织化学法检测脊髓组织OX-42、TNF-α。结果与N 组比较，M、HM、NM 组大鼠脊髓组织OX-42、TNF-α表达均增加，P 均＜0．01；与M 组比较，HM 组大鼠脊髓组织OX-42、TNF-α表达下降，P 均＜0．01；其余组间比较差异均无统计学意义（P 均＞0．05）。结论吗啡耐受大鼠脊髓小胶质细胞被激活，表现为OX-42表达增加，并释放大量TNF-α；HS014能够减轻吗啡耐受，机制可能与其抑制吗啡引起的小胶质细胞激活及TNF-α释放有关。
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大鼠脑创伤后小胶质细胞激活的时程及形态变化研究
目的探讨大鼠脑创伤后小胶质细胞激活的时程及形态变化.方法采用改良的Feeney等人的方法造成大鼠颅脑损伤模型,21只SD大鼠随机分为对照组和创伤组,后者根据伤后处死时间点不同,再分为伤后1 h,6 h,12 h,24 h,48 h和72 h组,每组动物3只,在伤后不同时间点处死动物,取伤区脑组织行抗OX-42免疫组织化学染色.结果正常大鼠脑内小胶质细胞一般为静息状态,OX-42为阴性,在切片上不易发现或细胞形态不清晰;伤后1 h,小胶质细胞为轻度反应,OX-42浅染,细胞形态隐约可见,不规则;伤后6 h,小胶质细胞反应明显,由静息状态变为早期反应状态,OX-42深染,细胞形态清楚;伤后12 h,小胶质细胞反应达高峰,细胞形态更清楚,突起上可见到小棘;24 h以后,反应减弱,OX-42浅染,细胞数量减少.结论大鼠脑创伤后小胶质细胞被激活,细胞形态发生改变,海马区亦有激活改变;反应的时程变化是伤后1 h出现激活,6 h反应明显,12 h达高峰,以后逐渐减弱.
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脊髓CX3CR1在骨癌痛大鼠吗啡耐受形成中的作用
目的 观察骨癌痛-吗啡耐受大鼠脊髓背角CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)蛋白表达的变化,探讨CX3CR1在骨癌痛大鼠吗啡耐受形成中的作用及其与小胶质细胞之间的关系.方法 成年雌性SD大鼠48只,随机分为4组(n=12):对照组(C组)、假手术组(S组)、骨癌痛-吗啡耐受组(BM组)、BM+米诺环素组(BM+m组).C组不作任何处理;S组大鼠仅手术暴露右侧胫骨上段;BM组大鼠右侧胫骨上段骨髓腔注入Walker 256乳腺癌细胞10 μL(4×105个细胞/mL)制作骨癌痛模型,第9天开始鞘内给予20 μg/kg吗啡,2次/d,连续7 d;BM+m组在BM组处理方法的基础上,手术后第16天再连续3 d鞘内注射米诺环素250 μg /kg.分别于术前,术后第3、6、9、12、15、18天测定大鼠机械缩足阈值(MWT)和机械缩足持续时间(MWD),各组于术后18 d处死大鼠,取脊髓L4～6节段组织,采用Western blot法测定CX3CR1蛋白表达,免疫组化法检测小胶质细胞标记物OX-42水平.结果 BM组大鼠在鞘内给予吗啡第7天(即术后第15天)形成较稳定的吗啡耐受,表现为MWT值下降,明显低于C组和S组(均P＜0.01),而MWD上升,明显高于C组和S组(均P＜0.01),术后第18天两指标与BM+m组比较差异也有统计学意义(均P＜0.05).BM组大鼠吗啡耐受形成后脊髓背角CX3CR1蛋白和OX-42表达明显高于C组和S组(均P＜0.01),而BM+m组注射米诺环素后脊髓CX3CR1蛋白和OX-42表达低于BM组(均P＜0.05).结论 脊髓CX3CR1可能在骨癌痛大鼠慢性吗啡耐受的形成中发挥重要作用,小胶质细胞活化使脊髓CX3CR1蛋白表达上调.
关键词： 骨癌痛 吗啡耐受 CX3C趋化因子受体1 OX-42 -
丁苯酞对Wistar大鼠血管性痴呆模型中海马区OX-42的影响
目的：通过检测Wistar大鼠血管性痴呆模型中小胶质细胞表面补体III型受体OX-42在脑海马组织中的动态变化，探讨丁苯酞在血管性痴呆中的作用。方法：双侧颈总动脉永久结扎术（2-VO）建立Wistar大鼠血管性痴呆模型。设立正常对照组、假手术组、VD模型组、药物干预组。水迷宫试验对大鼠进行学习和记忆成绩测试。应用免疫组织化学法方法检测OX-42的表达。结果：模型组大鼠学习和记忆成绩下降，海马区OX-42的表达较正常对照组、假手术组均明显增加；药物干预组大鼠学习记忆能力明显改善，海马区OX-42的表达下降，与模型组比较差异有统计学意义。结论：慢性脑缺血血管性痴呆大鼠海马区OX-42表达升高；丁苯酞可能通过抑制了血管性痴呆大鼠海马区OX-42的表达，从而改善大鼠的学习记忆能力。
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鞘内注射硫酸镁对胫骨骨癌痛大鼠脊髓小胶质细胞活化的影响
目的 探讨鞘内注射硫酸镁对胫骨骨癌痛大鼠机械痛行为及脊髓小胶质细胞活化的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠72只,220 ～ 250 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=24):对照组(C组)、骨癌痛组(B组)和硫酸镁组(M组).B组和M组采用胫骨骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞制备胫骨骨癌痛大鼠模型.于造模后第14天进行鞘内给药,M组注入硫酸镁375 μg,B组和C组注入等容量人工脑脊液.分别于造模前(T0),给药前1h及给药后1、2、4、8、12、24 h(T1 ～T7)记录大鼠机械痛行为学改变,并于T7时行为学测试结束后处死大鼠,测定脊髓背角OX-42表达,并计数小胶质细胞.结果 与C组比较,B组机械刺激缩足阈值(PWMT)降低,热刺激缩足潜伏期(PWTL)缩短,脊髓背角OX-42表达及小胶质细胞计数增加(P＜0.05);与B组比较,M组PWMT升高,PWTL延长,脊髓背角OX-42表达及小胶质细胞计数减少(P＜0.05).结论 鞘内注射硫酸镁可减轻大鼠胫骨骨癌痛,其机制可能与抑制脊髓小胶质细胞活化有关.
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脊髓刺激术对神经病理性痛模型大鼠痛行为和脊髓背角内小胶质细胞激活的影响
目的:探讨脊髓刺激术(spinalcordstimulation,SCS)对神经病理性痛(neuropathicpain,NP)模型大鼠痛行为及脊髓背角内小胶质细胞激活的影响.方法:成年大鼠20只,随机分为4组:(1)正常对照组(control组)；(2)SCS组:正常大鼠给予SCS刺激；(3)脊神经结扎spinalnerveligation,SNL)假刺激组(SNL+shamSCS组):SNL且植入SCS装置,但不刺激；(4)SNL+SCS组:SNL且给予SCS刺激.术前连续3d、术后第5d检测各组大鼠足底机械痛敏阈值(mechanicalwithdrawalthreshold,MWT).SCS组和SNL+SCS组术后第2-5d给予SCS刺激,每d持续8h;且在每次给予SCS8h刺激前进行90min行为学测试,即SCS刺激30min,以及刺激结束后的60min内(共90min),每15min测量一次MWT.在第5d给予SCS8h刺激结束后处死动物,利用免疫组织化学染色结合平均光密度(averageopticaldensity,AOD)分析的方法检测各组大鼠腰5节段脊髓背角内小胶质细胞特异性标志物OX-42的表达情况.结果:(1)行为学结果显示:术后第5d,SNL+shamSCS组和SNL+SCS组大鼠手术侧后爪的MWT由术前26.00±0.0g分别降至5.50±0.96g和6.40±0.40g(P＜0.05)；SNL+SCS组给予SCS刺激30min后大鼠手术侧后爪的MWT明显有所提高,达16.20±2.60g,与刺激前(6.40±0.40g)相比有显著性差异(P＜0.05)；但停止SCS刺激60min后,大鼠的MWT明显有所下降,与刺激前几乎没有明显差别.(2)免疫组化染色结果显示:术后第5d,SNL+SCS组脊髓背角内OX-42的表达明显弱于SNL+shamSCS组,但二者都强于control组和SCS组；AOD结果也证实:SNL+SCS组大鼠脊髓背角内OX-42的AOD(1.29±0.28)明显低于SNL+shamSCS组(2.66±0.38),但仍高于control组(0.14±0.21)和SCS组(0.24±0.08).结论:SCS对SNL模型大鼠的神经病理性痛有较好的镇痛效果；该作用可能与SCS刺激显著抑制脊髓背角内小胶质细胞的激活密切相关.
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在戊四氮致痫大鼠早期前脑中OX-42和FoS蛋白的表达变化
研究大鼠在戊四氮导致癫痫发作早期前脑内小胶质细胞的变化及其与神经元的关系,本研究应用免疫组织化学法分别显示前脑内OX-42和Fos蛋白表达的时程变化,并用双重标记显示OX-42和Fos阳性细胞酌相互关系.结果发现:在戊四氮导致大鼠癫痫发作早期(从15 min到360 min),前脑的小胶质细胞OX-42表达阳性,随着存活时间的变化,OX-42的阳性反应经历逐渐升高又降低的过程;Fos蛋白在神经元和小胶质细胞中有表达,也呈现逐渐升高又降低的变化;Fos在小胶质细胞表达高峰的时间早于在神经元的表达;另外OX-42阳性小胶质细胞和Fos阳性神经元在前脑分布基本相同,主要分布在大脑皮层、海马、杏仁核等部位.以上结果表明,前脑的小胶质细胞和神经元一样在戊四氮所致癫痫发作的早期表现明显的反应,但小胶质细胞反应的意义有待进一步研究.
